INTRODUCCIÓN

Al ser las proteínas biomoléculas orgánicas que en cuya composición presentan carbono, hidrógeno, oxígeno, nitrógeno y otros elementos(S, P, Fe, etc.) Su unidad monomérica es el aminoácido y estos se unen mediante enlaces peptídicos.

Básicamente sus propiedades físicas(1) son:

SOLUBILIDAD.- Dependerá de la configuración de la proteína. Siendo solubles en agua al ser globulares e insolubles en agua al adoptar una forma fibrilar. En este último caso, forman soluciones coloideas capaces de precipitar con formación de coágulos.

ESPECIFICIDAD.- Hace referencia a que la única molécula que puede unirse fuertemente con una proteína es aquella cuya geometría complementaria le permite adaptarse exactamente a la superficie activa. Esta especificidad se basa en el plegamiento particular de cada proteína que en última instancia depende de su estructura primaria (secuencia de aminoácidos). Entonces, cualquier cambio en la secuencia de aminoácidos de una proteína puede ocasionar una modificación de la estructura (2°, 3°, 4°) causando la alteración de la geometría de su superficie activa y, en consecuencia la disminución o pérdida de la funcionalidad biológica.

DESNATURALIZACIÓN: Ruptura de los enlaces que mantienen fijas a las estructuras (4°, 3°, 2°) por un cambio brusco de pH, concentración salina, temperatura dando a lugar a proteínas filamentosas que lo único que mantiene es su estructura primaria.

Para reconocer a las proteínas se emplean algunos métodos como el M. de Biuret que en una solución alcalina el Cu +2 reacciona con el enlace peptídico de las proteínas dando un color purpúreo que se cuantifica espectrofotométricamente (540nm)

Y los métodos de separación de proteínas (1) más conocidos son:

DIÁLISIS.- Permite separar las proteínas de los solutos moleculares o iónicos de menor tamaño.

CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA.- Se reconocen a las proteínas mediante una reacción con ninhidrina. Los grupos amino de los aminoácidos reaccionan cuantitativamente con la ninhidrina para dar un compuesto de color púrpura( cuantificable por calorimetría)

FILTRACIÓN POR GEL O TAMIZADO MOLECULAR.- Es una especie de filtración o diálisis al revés en la cual las partículas mayores pasan rápidamente y las menores lentamente.

ELECTROFORESIS.- Separa mezclas de proteínas que difieren por su velocidad de desplazamiento.

ULTRACENTRIFUGACIÓN.- Permite separar mezclas de proteínas según su velocidad de sedimentación en un campo gravitacional artificialmente potenciado con la ultracentrífuga.

Finalmente, el objetivo de estos experimentos es determinar el PUNTO ISOELÉCTRICO de la caseína ya que si el pH es cercano al PI de la caseína se comprobara la formación del precipitado y también el reconocimiento de las proteínas(globulinas y albúminas) en el suero que se verificara mediante la intensidad del color.

CUESTIONARIO

¿Qué es el punto isoeléctrico? (2)

Es el pH en el que la proteína presenta su mínima solubilidad y la molécula proteica carece de carga eléctrica neta por lo tanto no se mueve en el campo eléctrico esto quiere decir que no hay repulsión electrostática entre dichas moléculas por lo que tienden a agruparse y precipitar. Entendiéndose que cuando los valores del pH estén por encima o por debajo del punto isoeléctrico, las moléculas proteicas presentará una carga neta del mismo signo y por lo que se repelerán formando así agregados insolubles.

¿Qué es el salting out o Fraccionamiento salino? (3)

Es uno de los métodos usados para la purificación de proteínas que consiste en elevar excesivamente la concentración de iones de tal modo que disminuye la solubilidad de las proteínas y precipitan debido al incremento de interacciones hidrofóbicas.

BIBLIOGRAFIA:

(1)José M. Macarulla, Felix M. Goñi. Bioquímica Humana

(2)Marino Villavicencio Nuñez. Bioquímica. Vol I

(3) David L. Nelson, Michael M. Cox. Principios de bioquímica, 4ta edición