PROPIEDADES DE LOS AMINOÁCIDOS Y LAS PROTEINAS
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Práctica número 2
PROPIEDADES DE LOS AMINOÁCIDOS Y LAS PROTEINAS
Dylan Xavier Mendieta Benítez. 3er Semestre
Bioquímica
PROPIEDADES DE LOS AMINOÁCIDOS Y LAS PROTEINAS
Las proteínas son compuestos a base de carbono, hidrógeno, oxígeno, nitrógeno y
generalmente azufre y fósforo; Todas las enzimas, algunas hormonas y muchos
componentes estructurales importantes de la célula son proteínas. Las proteínas son
macromoléculas que presentan pesos moleculares entre 5000 y muchos millones de
Dalton. Todas las proteínas están compuestas por componentes más simples
llamados aminoácidos unidos mediante enlace peptídico. En base a su composición
cada una de estas moléculas muestran variaciones en sus propiedades biológicas, físicas
y químicas debido a la secuencia específica de aminoácidos, que se conoce como
estructura primaria. La proteína refleja las propiedades de los aminoácidos que la
componen, y por lo tanto muestra propiedades características. En la naturaleza existen
200 tipos de aminoácidos, de los cuales sólo 21 forman parte de las proteínas en general.
Las plantas pueden sintetizar todos los aminoácidos a partir de sustancias simples,
los aminoácidos que los animales no pueden sintetizar y que deben obtener en su
alimentación se llaman aminoácidos esenciales, se consideran como esenciales 10
aminoácidos: Fenilalanina, Triptófano, Lisina, Valina, Treonina, Metionina, Leucina,
Isoleucina, Arginina e Histidina: estos dos últimos son esenciales durante la infancia.
Existen varios métodos para la identificación y cuantificación de las proteínas, pero la
mayoría tiene como principio alguna reacción química característica de los grupos R de
los diferentes aminoácidos.
Los aminoácidos son compuestos sólidos; incoloros; cristalizables; de elevado punto de fusión (habitualmente por encima de los 200 ºC); solubles en agua; con actividad óptica y con un comportamiento anfótero.
La actividad óptica se manifiesta por la capacidad de desviar el plano de luz polarizada que atraviesa una disolución de aminoácidos, y es debida a la asimetría del carbono , ya que se halla unido (excepto en la glicina) a cuatro radicales diferentes. Esta propiedad hace clasificar a los aminoácidos en Dextrogiros (+) si desvian el plano de luz polarizada hacia la derecha, y Levógiros (-) si lo desvian hacia la izquierda.
Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa
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Bioquímica
El comportamiento anfótero se refiere a que, en disolución acuosa, los aminoácidos son capaces de ionizarse, dependiendo del pH, como un ácido (cuando el pH es básico), como una base (cuando el pH es ácido) o como un ácido y una base a la vez (cuando el pH es neutro). En este último caso adoptan un estado dipolar iónico conocido como zwitterión.
Fig. 1. Proceso de un aminoácido.
El pH en el cual un aminoácido tiende a adoptar una forma dipolar neutra (igual número de cargas positivas que negativas) se denomina Punto Isoeléctrico.
Proteínas.
Dentro de las proteínas podemos decir que son constituyentes químicos fundamentales e imprescindibles en la materia viva porque:
a) son los "instrumentos moleculares" mediante los cuales se expresa la información genética; es decir, las proteínas ejecutan las órdenes dictadas por los ácidos nucleicos.
b) son sustancias "plásticas" para los seres vivos, es decir, materiales de construcción y reparación de sus propias estructuras celulares. Sólo excepcionalmente sirven como fuente de energía.
c) muchas tienen "actividad biológica" (transporte, regulación, defensa, reserva, etc...). Esta característica diferencia a las proteínas de otros principios inmediatos como glúcidos y lípidos que se encuentran en las células como simples sustancias inertes.
Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa
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Bioquímica
Fig.2. Diagrama funciones enzimáticas y el ADN.
OBJETIVOS GENERALES DE LA PRÁCTICA:
Realizar algunas reacciones coloridas específicas para la identificación de
aminoácidos que constituyen a una proteína.
Comprender la importancia de estas reacciones para distinguir proteínas.
Observar el efecto de algunos agentes fisicoquímicos sobre la solubilidad de las
proteínas
MATERIAL:
1 Gradilla 24 Tubos de ensayo Pipetas de 1, 5 y 10 mL 3 Vasos de precipitados de 100 mL. 1 Baño María a ebullición 1 Pinzas para tubo 1 Agitador de vidrio
SOLUCIONES Y REACTIVOS:
SOLUCIONES PORCENTUALES:
Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa
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Bioquímica
Ninhidrina al 1 % en etanol al 96 % Acetato de plomo al 5 % Cloruro de bario al 5 % Cloruro de sodio al 5% Cloruro mercúrico al 5 % Hidróxido de sodio al 10 % Hidroxido de sodio al 10 % Nitrito de sodio 30 % Nitrato de plata al 2 % Acido sulfanilico 0.5 %
Soluciones de aminoácidos y proteínas
Gelatina al 5 % Peptona al 5 % Albúmina al 5 % Tirosina al 1 % Triptofano al 1 % Fenilalanina al 1% Cisteina al 1 % Arginina al 1 %
Clara de huevo fresca y filtrada dil(1:4)
SOLUCIONES NORMALES:
Ácido clorhídrico 0.1 N Hidróxido de sodio 0.1 N Regulador de acetatos 0.1 M pH 4.7
Reactivo de BiuretReactivo de ElrichReactivo de MillonReactivo de Hopkins Cole
Reactivos:
Ácido acético glacial.Ácido nítrico concentradoHidróxido de amonio concentradoÓxido rojo de mercurioNitrito de sodioMagnesio en polvo o granallas.
TÉCNICAS DE IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS Y AMINOÁCIDOS:Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa
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Bioquímica
Algunas de las reacciones de identificación cualitativa para proteínas son:
REACCIÓN DE LA NINHIDRINA:
La ninhidrina (triceto hidrinina) reacciona con los grupos amino libres, con lo cual
hay una descarboxilación, dando lugar a un compuesto púrpura violeta o azul, CO2, agua
y el aldehído correspondiente.
Ácido oxálico saturado
Fig.3. Reacción con ninhidrina.
Es una reacción general para compuestos con grupos amino, descubierta por Ruhemman, por lo que se usa comúnmente para determinar la presencia de aminoácidos y proteínas. Es una reacción con alta sensibilidad detecta una parte de alanina en 500,00 partes de agua. La prolina y la hidroxiprolina dan productos amarillos con la ninhidrina.La ninhidrina es un poderoso agente reactivo común para visualizar las bandas de separación de aminoácidos por cromatografía o electroforesis, también es utilizada con fines cuantitativos para la determinación de aminoácidos reacciona con todos los aminoácidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, dando una coloración que varía de azul a violeta intenso. Este producto colorido (llamado púrpura de Ruhemann) se estabiliza por resonancia, la coloración producida por la ninhidrina es independiente de la coloración original del aminoácido.
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Bioquímica
Esta prueba es positiva tanto para proteínas como para aminoácidos. en aquellos casos donde no da positiva la prueba de biuret y da positiva la de ninhidrina, indica que no hay proteinas, pero si hay aminoacidos libres.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
Discusión de resultados:
Esta reacción tuvo gran interés ya que dio lugar a una reacción coloreada de los
aminoácidos ,ampliamente utilizada para la identifición y sobre todo para su
dedterminación cuantitativa. La ninhidrina descarboxila y desamina el aminoácido gracias
a su fuerte poder oxidante.La ninhidrina reducida formada reacción con una molecula de
ninhidrina no reducida y con el amoniaco resultante de la desaminación para formar un
complejo que presentó coloración violeta. De esta forma se puedo determinar
cuantitativamente los aminoácidos por espectrofotometría por ejemplo, gracias al dióxido
de carbono que se formaría.
REACCIÓN DE MILLON
El reactivo de Millon contiene una mezcla de nitritos y nitratos mercúricos en ácido nítrico concentrado. Debido a la presencia del grupo fenólico se produce un compuesto de color rojo.El reactivo de Millon se prepara disolviendo una parte de mercurio (Hg) en una parte de ácido nítrico (HNO3). De esta forma, la presencia de cantidades relativamente altas de mercurio conduce a la formación de Nitrato de mercurio (I) Hg2(NO3)2 el cual en un medio fuertemente ácido reacciona con el grupo -OH de la tirosina produciendo una coloración roja característica.
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A 1 mL de la solución
problema se le adicionan 5
gotas de la solución de
ninhidrina en etanol
El cambio de color a azul o violeta
se debe a la presencia de grupos
amino libres
Si es necesario calentar en baño María 1 o 2 minutos.
Bioquímica
Al finalizar la reacción, durante la cual se desprende gran cantidad de óxidos de nitrógeno, el reactivo se puede diluir con dos veces su volumen en agua y deberá ser decantada algunas horas después la solución clara sobrenadante..
Fig.4. Reacción de Millon.
PROCEDIMIENTO:
REACCIÓN XANTOPROTEICA
Salkowsky descubrió que los aminoácidos con anillo aromático pueden nitrarse con
HNO3 concentrado, dando como resultado un compuesto amarillo que en solución
alcalina se vuelve anaranjado. Triptófano y Tirosina reaccionan rápidamente, pero
Fenilalanina lo hace más lento, por lo que es necesario adicionar H2SO4 concentrado para
activar el anillo.
Fig.5. Reacción Xantoproteica.
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A 1 mL de las soluciones problemas
se les adiciona de 2 a 5 gotas del
reactivo de Millon
Se calienta en baño Maria a
ebullición. La aparición de un color
rojo será una prueba positiva.
Bioquímica
Cuando se trata una disolución proteica en medio ácido (nítrico concentrado) y a
elevada temperatura se forman compuestos nitrofenílicos, que son de color amarillo. Esta
reacción es positiva para aminoácidos aromáticos activados como proteínas en solución,
aunque es más sensible cuando se encuentran perfectamente secas.
Esta reacción depende de la nitración de los anillos bencénicos activados. La
prueba resulta negativa para proteínas que no contengan aminoácidos aromáticos
activados, pero todas las proteínas tienen todos los aminoácidos, por tanto darán positiva
a esta reacción, formándose más colorantes.
PROCEDIMIENTO:
La reacción XANTROPROTEICA es un método que se puede utilizar para
determinar la cantidad de proteína soluble en una solución. El espectrofotómetro se puede
entonces utilizar para medir la intensidad del color que se produjo. Este test específico es
para reconocer enlaces peptídicos, por lo tanto requiere de la presencia de al menos en
tetrapéptido para que de positivo. Los reactivos utilizados son NaOH y SO4Cu.5H2O.
Opera a través del ion Cu2+ el que en reacción alcalina interacciona con los iones de N-3
de los grupos amino formando un complejo color violeta. Cada átomo de Cu2+ reacciona
con dos átomos de N y establece una resonancia de electrones con otros dos N formando
un complejo color violeta y es así como podemos catabolizar una reacción anastrófica de
la mayor enzima llamada octatriona.
Se obtuvo bajo forma cristalina, una sustancia extraída de las paratiroides de la vaca que Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa
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A 1 mL de la solución problema se
le adiciona 1 mL de ácido nítrico
concentrado, calentar la mezcla y
enfriar
Adicionar por estratificación
1 ml de Hidróxido de amonio
concentrado.
La aparición de un color
amarillo o naranja en la
interfase será prueba positiva.
Bioquímica
tiene los siguientes caracteres: polipéptido compuesto de muchos aminoácidos, todavía
no determinados, y probablemente unidos a una proteína; da las reacciones de las
proteínas por investigación química (reacción xantroproteica); contiene trazas de fierro y
azufre; su pH es de 4.8; insoluble en las grasas y en el éter, algo soluble en el alcohol y
muy soluble en el agua acidulada; es destruida por los fermentos digestivos y por esta
causa no se administra por la vía digestivo.
Al añadir NaOH, los nitrógenos se unen mediante un enlace doble (-N=N-) formando
colorantes azoicos (de color naranja).
La reacción xantoproteica es un método que se puede utilizar para determinar la presencia de proteínas solubles en una solución, empleando ácido nítrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de gruposaromáticos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali, se torna color amarillo oscuro.
La reacción xantoproteica se puede considerar como una sustitución electrofílica aromática de los residuos de tirosina de las proteínas por el ácido nítrico dando un compuesto coloreado amarillo a pH ácido.
Según las guías químicas es una reacción cualitativa, mas no cuantitativa. Por ende determina la presencia o no de proteínas. Para cuantificar se usa otra reacción, como la deBiuret, y se hace un análisis espectro fotométrico.
La reacción XANTROPROTEICA es un método que se puede utilizar para
determinar la cantidad de proteína soluble en una solución. El espectrofotómetro se puede
entonces utilizar para medir la intensidad del color que se produjo. Este test específico es
para reconocer enlaces peptídicos, por lo tanto requiere de la presencia de al menos en
tetrapéptido para que de positivo. Los reactivos utilizados son NaOH y SO4Cu.5H2O.
Opera a través del ion Cu2+ el que en reacción alcalina interacciona con los iones de N-3
de los grupos amino formando un complejo color violeta. Cada átomo de Cu2+ reacciona
con dos átomos de N y establece una resonancia de electrones con otros dos N formando
un complejo color violeta y es así como podemos catabolizar una reacción anastrófica de
la mayor enzima llamada octatriona.
Se obtuvo bajo forma cristalina, una sustancia extraída de las paratiroides de la vaca que
tiene los siguientes caracteres: polipéptido compuesto de muchos aminoácidos, todavía
no determinados, y probablemente unidos a una proteína; da las reacciones de las
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Bioquímica
proteínas por investigación química (reacción xantroproteica); contiene trazas de fierro y
azufre; su pH es de 4.8; insoluble en las grasas y en el éter, algo soluble en el alcohol y
muy soluble en el agua acidulada; es destruida por los fermentos digestivos y por esta
causa no se administra por la vía digestiva.
Reacción de Biuret (Reacción de Piotrowsky)
El biuret se forma calentando la urea aproximadamente a 180°C
Fig.6. Transporte de Urea a Biuret.
Esta es una prueba general para proteínas y péptidos de cadena no menores a 3
aminoácidos, esta reacción es útil para seguir un proceso de hidrólisis proteínica, ya que
la reacción será negativa cuando la hidrólisis sea completa.
En soluciones fuertemente alcalinas, el sulfato de cobre puede formar un complejo del ión cobre en enlaces covalentes coordinados con los grupos amino de las proteínas formando un complejo de color violeta. Para formar el complejo se requieren al menos 2 grupos amino unidos mediante un enlace péptídico, por lo que la reacción sólo es positiva para péptidos o proteínas y no para aminoácidos solos. Los dipéptidos y los aminoácidos (excepto histidina, serina y treonina) no dan esta reacción. El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida.
Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto con tartrato de sodio y potasio (KNaC4H4O6·4H2O). El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. El hidróxido de potasio no participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalinonecesario para que tenga lugar.
Se usa normalmente en el ensayo de Biuret, un método colorimétrico que permite determinar la concentración de proteínas de una muestra mediante espectroscopia ultravioleta-visible a una longitud de onda de 540 nm (para detectar el ion Cu2+).
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Bioquímica
MÉTODO DE LOWRY (NO SE REALIZARÁ EN LA PRÁCTICA)
El método de Lowry se basa en la reacción de las proteínas con el reactivo de
Folin-Ciocalteau dando un complejo coloreado. Este reactivo es una disolución de
tungstato sódico y molibdato sódico en ácido fosfórico y ácido clorhídrico. El principal
constituyente del reactivo es el ácido fosfomolibdotúngstico, de color amarillo, que al ser
reducido por los grupos fenólicos da lugar a un complejo de color azul intenso, cuya
estructura se desconoce. Esta reacción es 100 veces más sensible que la determinación
por el método de Biuret en la cuantificación de proteínas. La intensidad del color depende
de la cantidad presente en las proteínas de estos aminoácidos aromáticos y será
proporcional a la concentración de proteínas en la disolución.
La concentración de una disolución problema puede calcularse interpolando el
valor obtenido de absorbancia en una recta de calibración trazada con valores conocidos
de concentración de una proteína y sus respectivas absorbancias a 750 nm ajustando el
aparato a cero con el blanco. Es un método muy usado para la cuantificación de
proteínas.
El mecanismo del proceso es el siguiente:
1) El Cu2+, en medio alcalino, forma un complejo con los enlaces peptídicos de las
proteínas. Los iones Cu2+, se unen a las proteínas formando complejos con los átomos de
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A 1 mL de cada solución
problema, añadirle 2 mL de
NaOH al 10 % y de 3 a 5
gotas del reactivo de biuret,
mezclarLa formación de un color
violáceo o la precipitación de
hidróxido cúprico será una
prueba positiva.
Si el color de la reacción no
es inmediatamente, dejar
reposar de 10 a 15 minutos.
Bioquímica
nitrógeno de los enlaces peptídicos, estos complejos Cu2+-proteína tienen un color azul
claro, provocan el desdoblamiento de la estructura tridimensional de la proteína,
exponiendo los residuos fenólicos.
2) Los grupos R de los residuos de tirosina y triptófano de las proteínas, se lleva a cabo la
reducción del reactivo de Folin-Ciocalteau, por los grupos fenólicos de los residuos de
tirosina presentes en la mayoría de las proteínas, actuando el cobre como catalizador;
inicialmente es un producto inestable, que se reduce para formar un compuesto
coloreado.
es un método colorimétrico de valoración cuantitativa de las proteínas. Bajo condiciones alcalinas el Cu++ forma un complejo con los enlaces peptídicos de las proteínas y se reduce a Cu+. El Cu+ así como los grupos R de Tirosina, Triptofano y Cisteina reaccionan con el reactivo de Folin. Este reactivo reacciona primero produciendo un producto inestable que se reduce lentamente a azul de molibdeno/tungsteno esta reacción ocurre en medio ácido.Comentarios: aquellos agentes que acidifican las soluciones (por ejemplo: ácidos fuertes o buffers), los quelantes de Cu (por ej. EDTA) o los reductores de Cu (por ej.: mercaptoetanol, ditiotreitol, fenoles) serán interferentes de la reacción. Las proteínas producirán distintas intensidades de color dependiendo primariamente de su contenido de Tyr y Trp.
Fig.. 8 .Reacción de biuret.
REACTIVOS
• Lowry A: Na2CO3 al 2.0 % en NaOH
0.1N
• Lowry B: CuSO4 al 2 %.
• Lowry C: Tartrato Sodio-potasio ( KNaC4H4O6) al 2%
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Bioquímica
• Reactivo de Folin-Ciocalteus: tungstato Na y molibdato sódico en PO4H3 y ClH
Se debe de preparar ´la solución D al momento, en la siguiente proporción: 30 ml Lowry
A, 0.3 ml Lowry B y 0.3 ml Lowry C.
Reacción de Ehrlich
El ácido sulfianílico diazotizado se condensa con el anillo fenólico de la tirosina e
imidazol, histidina para dar complejos coloridos de color rojo cereza, y que permite detectar
compuestos formados que se conocen como azo-compuestos.
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1) Se añaden 400 μl de
solución problema
diluida (1:100).
Mezclar y esperar 15 min a
temperatura ambiente.
Añadir a todos los tubos 200 μl de reactivo de Folin diluido en agua destilada 1/1 (vol/vol). Mezclar y esperar 30 min a temperatura ambiente.
Medir la absorbancia a 750
nm ajustando el
aparato a cero con un
blaco de reactivos
Bioquímica
PROCEDIMIENTO:
Reacción de Hopkins-Cole.
Implica la reacción del grupo indol del triptofano con el ácido glioxílico y las
proteínas que lo contienen, en presencia de ácido sulfúrico concentrado. La
positividad se reconoce por la aparición de un anillo color violeta-rojizo. El color
púrpura que se produce se debe a la condensación del anillo indol con el aldehído. Se
propone la siguiente reacción:
Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa
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A tubos de ensayo rotulados como: blanco y problemas. Agregue a cada tubo en el siguiente orden:
1 mL de ácido sulfanilico 0.5%
1 mL. de Nitrito de sodio, mezcle bien y deje en reposo durante 15 min.
Observe.
Posteriormente adicione 0.5 mL. de de NH4OH al 10%. Observe y anote los resultados.
Bioquímica
.
Fig..9. Reacción de Hopkins-Cole..
Reacción para azufre de cisteína y cistina.
La cisteína y la cistina cuando se tratan en un medio de álcalis fuerte pueden formar
H2S que se detecta al hacerlo reaccionar con Pb formando un precipitado negro de PbS.
Este es uno de los R de las cadenas de proteínas más importantes de determinar, pues
proteínas más importantes de determinar, pues el ±SH cumple un papel determinante en
conformación de las proteínas y en su actividad biológica.
RESULTADOS Y ANÁLISIS DE RESULTADOS
Parte I
SOLUCIÓNES
REACCIÓN CON
LA
NINHIDRINA
(A.A. libres)
REACCIÓN
DE MILLON
REACCIÓN
XANTOPROTEI
CA
REACCIÓN DE
BIURET
REACCIÓN
DE
EHRILCH
REACCIÓN
DE
HOPKINS
COLE.
GELATINA No cambio
No tiene
Rosa
Positivo
Amarillo
traslúcido
Positivo
Violeta
Positivo
Naranja
/transpare
nte
negativo
PEPTONA Violeta
Si tiene
Naranja
Positivo
Amarillo
traslúcido
Positivo
Violeta
Positivo
Naranja
negativo
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Bioquímica
ALBUMINA Violeta
Si tiene
Una parte
blanca y
otra roja
Positivo
Amarillo
Positivo
Violeta
Positivo
Naranjita
clara/
negativa
TIROSINA Amarilla
No tiene
Blanco
Negativo
No cambio
Negativo
Incoloro
Negativo
Amarilla
postivo
FENILALANINA Violeta
Si tiene
No cambio
Negativo
No cambio
Negativo
Azul
Negativo
Naranja/
negativo
CISTEINA No cambio
No tiene
Rojo
Positivo
Amarillo
Positivo
Azul
Negativo
pareja
No
cambio/
negativo
ARGININA No cambio
No tiene
No cambio
Negativo
No cambio
Negativo
Azul
Negativo
Rojo/
Positivo
AGUA No cambio
No tiene
No cambio
Negativo
No cambio
Negativo
Azul
Negativo
*Tabla 1
EFECTO POR SOLVENTES
La mayoría de las proteínas presentan un mínimo de solubilidad a un pH conocido
como punto isoeléctrico (pI), que es el valor del pH en el cual la carga neta de la proteína
es cero y no migra en un campo eléctrico, además la proteína presenta su máxima
viscosidad.
La acción de algunos solventes orgánicos como etanol (alcoholes), acetona
(cetonas) y éteres en una solución acuosa de proteína incrementan su tendencia a
precipitar, ya que disminuyen la constante dieléctrica del agua, desfavoreciendo la
Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa
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Bioquímica
interacción agua-proteína y favoreciendo la interacción proteína--proteína, ocurriendo su
precipitación.
TUBO N° Vol. 1 2 3
Clara de huevo
filtrada dil (1:4)
(mL)3 3 3
SOLVENTE: (mL) ---- --- ---
HCl 0.1 M (mL) (mL) 1 --- ---
NaOH 0.1 M (mL) (mL)--- 1 ---
REGULADOR DE
ACETATOS 0.1 M
pH 4.7 ( mL)
(mL)
--- --- 1
DESCRIPCIÓN
DEL
EXPERIMENTO:
(mL) Se formaron burbujas en
la parte superior, es decir
una emulsión
Tambien se
formaron
burbujas pero
menos que en
la primera
Toda la
substancia se
opaco
ETANOL al 96%
(mL)
(mL) 3 3 3
Observación: Se formaron dos fases,
la de la parte superior,
organica, opaca y la
inferior que es
transparente
Se forman dos
fase, que no
son muy
visibles
porque una es
turbulenta y la
otra no, se le
agrego
Se formaron
dos fases una
blanca con
grumos
(proteínas) y
la otra medio
amarillenta
Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa
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Bioquímica
fenoftaleina
para
distinguirlas y
la organica
quedo arriba
*Tabla 2.
Análisis de resultados:
La reacción del Millón se debe a la presencia del grupo hidroxifenilo en la molécula
proteica. Cualquier compuesto fenólico que no esté sustituido en la posición 3,5 como la
tirosina, el fenol y el timol producen resultados positivos en esta reacción. De estos
compuestos, sólo la tirosina está presente en las proteínas, de manera que sólo las
proteínas que tienen este aminoácido ofrecen resultados positivos.
En esta prueba los compuestos mercúricos en medio fuertemente ácido (ácido nítrico del
reactivo) se condensan con el grupo fenólico formando un compuesto de color rojo ladrillo
rojizo. La prueba no es satisfactoria para soluciones que contienen sales inorgánicas en
gran cantidad, ya que el mercurio del reactivo del Millón es precipitado y se vuelve
negativo, razón por la cual este reactivo no se usa para medir albúmina en orina .Debe
tomarse en cuenta que en el caso de que la solución a examinar sea muy alcalina, debe
ser previamente neutralizada, ya que el álcali precipitaría al ion mercurio en forma de
óxidos amarillos. Además, proteínas como la ovoalbúmina producen un precipitado blanco
que progresivamente por acción del calor se torna rojo.
Se realizó el primer experimento con la reacción de Millon, en todas las proteínas dio positiva, lo que indicó la presencia de un grupo hidroxifenilo en la molécula proteica excepto en la glicina debido a que este es un aminoácido. Se formaron soluciones rojas debido a que los compuestos mercúricos del reactivo se condensaron con el grupo fenólico de las proteínas.
En el segundo experimento (Biuret) también dio positivo para todas indicando que todas poseían 2 grupos carbamino unidos directamente o a través de un solo átomo de carbono o nitrógeno formando un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos provocando el cambio de coloración ya fuera violeta o rosado.
Para el tercer experimento (Xanproteico), dio negativo para el aminoácido ya que no es aromático y positivo para las proteínas por su grupo fenólico por la nitración del anillo
Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa
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Bioquímica
bencénico presente en los residuos de aminoácidos de las proteínas obteniéndose nitrocompuestos de color amarillo.
Con la reacción Xantoproteica, al calentar… la cisteína, la albúmina y la gelatina se pusieron color amarillo.Con la reacción de Ehlrich se dieron 2 fases… (se menciona primero la capa superior y después la capa inferior).En el experimento de precipitación por metales pesados se agrego cloruro de mercurio al 5% y observamos que se precipito porque cambio de color. Dé un color transparente a blanco con aspecto opaco espeso.
En el acetato de plomo 5% si se precipito en poco mas que el nitrato de plata pero menos que el cloruro de mercurio porque tomo un tono mas bajito, que con el cloruro de mercurio.
Con el nitrato de plata al 5% el cual se precipito pero no tanto como el cloruro de mercurio porque tomo un color blanco pero no tanto si no mas blanquizco- transparente.
Con el cloruro de bario no se precipito, pero se aclaró un poco
Con el cloruro de sodio no se precipito, pero se aclaró un poco
El agua fue nuestra muestra patrón, blanco.
En el caso del experimento efecto por solventes, en el tubo se agregó 3ml de clara de huevo, mas 2 mililitros de acido clorhídrico , y observamos que con lo primero añadido no se precipito , pero cuando agregamos etanol si se precipito y se separo en dos fases, la cual una era de color blanco y la otra mitad se formo un tono transparente.
Mientras que en el tubo dos agregamos por primera estancia un mililitro de hidróxido de sodio, el cual nos dio un resultado de burbujas , pero no cambio el color de nada , pero cuando agregamos el etanol se formaron dos fases , y cuando agregamos el etanol tampoco cambio , aunque como experimentación y para comprobar agregamos fenolftaleína nos pudimos dar cuenta que si había dos fases.
En nuestro tubo tres agregamos 3mL de clara de huevo y 1 mL de acetato regulador 0.1M con un pH 4.7 y se opaco nuestra muestra , pero cuando agregamos el etanol si hubo un precipitado porque se separo nuestra muestra en dos fases una blanca y la otro como babosa transparente y amarillosa.
Conclusiones:
Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa
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Bioquímica
Se observaron algunas de las propiedades de las proteínas tanto físicas como fisicoquímicas, así como también las reacciones específicas para cada aminoácido que las constituye.
Las reacciones coloridas como por ejemplo la reacción de millón son sirve para identificar las proteínas formadas por grupos fenólicos y también proteínas que contengan tirosina.+
Las propiedades bioquímicas dependieron fundamentalmente del peso molecular de su carga eléctrica y de la conformación que adopte la molécula, por lo cuál se pueden interpretar los resultados de acuerdo a las características que se observen como por ejemplo la precipitación o turbidez que experimente la proteína en la reacción.
Bibliografía:
Rendina, G. 1974. Técnicas de bioquímica aplicada. Ed. Latinoamericaca. México Argentina España pp 59-
63
Stryer, L. 1993. Bioquimica 3 ed. Tomo I. Ed. Reverté Barcelona Bogóta Buenos Aires México pp:15-70.
BOHINSKI. 1991 Bioquímica. 5ed., Pearson. México.
Van Holde Mathews,. 2004 Bioquímica. 3ª ed. Pearson. España
Maestra: Esmeralda Mendoza Gamboa
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