Presentaciónmedios cultivo y pb.pdf

8/11/2019 Presentacinmedios cultivo y pb.pdf

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Medios complejos,se clasifican as porque

contienen compuestos

orgnicos complejos obien extractos vegetalesanimales o delevaduras, por lo que nose conoce con exactitud

la estructura de todoslos componentes delmedio;

Medios sintticoscuando se conoce laestructura qumica decada uno de loscomponentes


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Extracto de carne Extracto acuoso de carne magra de res concentrado en pasta.Contiene

las sustancias solubles de tejidos animales entre ellas carbohidratos,aminocidos, vitaminas, solubles en agua y sales.

Peptona de Casena Carne GelatinaEs un hidrolizado con enzimas y/o cidos que da por

resultado peptonas y aminocidos. Se comercializa en polvo.Fuenterica de nitrgeno orgnico, en algunos casos contiene vitaminas ycarbohidratos, depende del origen de la peptona.

Melaza de caa o de Remolacha. Es un residuo lquido, de color caf, con consistencia de almbar que

contiene 50% de sacarosa, y otros elementos, la textura y composicinest determinada por la tecnologa de extraccin de los azucares.Esrica en azucares como, sacarosa, glucosa, fructosa, rafinosa; adems decontener biotina, pantotenato de calcio, tiamina y algunos minerales.

Extracto de levadura Esun extracto en solucin acuosa de levaduras, se obtiene

comercialmente en polvoEs una fuente rica en vitamina B, tambincontiene nitrgeno orgnico y compuestos de carbono.


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. Glucosa K2HPO4 MgSO4.7H2O FeSO4.7H2O CaCl2

NH4Cl Elementos traza : Mn, Mo, Cu, Co, Zn. Nota: Los elementos traza se adicionan en

pequeas cantidades (0.02-0.5 mg en 1l desolucin).


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El aislamiento de bacterias especificasentre una poblacin microbiana mixta, sele conoce como Tcnica deenriquecimiento,.

Para seleccionar bacterias patgenas

como Salmonella y Shigella. Se utilizanmedios de enriquecimiento, ya que estasbacterias se encuentran en una poblacinmixta.

Los medios ms usados para incrementarel crecimiento de estos microorganismos

es caldo selenitoy caldo para gramnegativos (GN).El caldo selenito esinhibidor del crecimiento de Escherichiacoli y otros bacilos entricos quecontienen los medios mencionados.


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Medio de cultivo. Agar Salmonella y

Shigella (SS)

Extracto de carne Peptona Lactosa Salesbiliares

Citrato de sodio Tiosulfatode sodio Citrato frrico AgarRojo neutro Verde brillante Agua destilada
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Las especies de Salmonella y Shigellason no

fermentadoras de la lactosa y forman coloniasincoloras .

Las especies de Salmonella que son

productoras de sulfuro de hidrgeno desarrollan

colonias con centro obscuro.

Los colIformesson parcialmente inhibidos. E.coli produce colonias de color rosa a rojoy

pueden presentar una zona de precipitado.

Las colonias de Enterobacter aerogenes son

cremosas de color rosa.

Citrobacter y Proteus spp. Pueden crecer

produciendo colonias con centros de color gris onegro debido a la produccin de H2 S.

Enterobacter faecalis es parcialmente inhibido

presentando colonias incoloras


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http://universitas.usal.es/web/fundacion/universitas/es/sistemas/microacua/Demo1/fotos/entrenamientoplacas_g/ejemplo1.jpg


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Morfologia de los microrganismos que sedesarrollan en este medios de cultivo

Forma Tamao

Apariencia

Bordes Color del medio


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El Agar XLD (por sus siglas Xilosa, Lisina,Desoxicolato) es utilizado para el aislamiento y

diferenciacin de bacilos entricos Gram negativos,especialmente del gnero Shigella y Providencia


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En este medio el extracto delevadura provee la fuente denitrgeno, carbono, vitaminas ycofactores.

La xilosa, lactosa y sacarosa sonlos carbohidratos fermentables.

El tiosulfato de sodio y el citratofrrico son adicionados para verla produccin de H2S.

El rojo de fenol acta comoindicador.

El cloruro de sodio mantiene elbalance osmtico y el agar esadicionado como agentesolidificante.

El inhibidor de bacterias grampositivas es desoxicolato desodio

Extracto de Levadura 3.0 Xilosa 3.5 Lactosa 7.5 Sacarosa 7.5 L- Lisina 5.0

Rojo de Fenol 0.08 Desoxicolato de Sodio 2.5 Tiosulfato de Sodio 6.8 Citrato Frrico de Amonio 0.8 Cloruro de Sodio 5.0 Agar Bacteriolgico 13.5

pH 7.4 0.2


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La degradacin de la xilosa, lactosa y sacarosa genera la produccin de

cido cambiando el color delmedio de rojo a amarillo.


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Cepa de Salmonella spp en agarXLD tras 24 horas deincubacin a 37C.

Las colonias presentan colornegro en su interior debido a laproduccin de H2S.

La produccin de H2S bajocondiciones alcalinas, dacolonias con el centro negro.Esta reaccin es inhibida encondiciones cidas.

La descarboxilacin de lalisina en ausencia defermentacin de lactosa osacarosa, ocasiona la reversindel medio a alcalino y el colordel medio regresa a rojo.


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Digerido Pptico deTejido Animal 5.0

Cloruro de Sodio 75.0 Digerido Pancretico de

Casena 5.0 D-Manitol 10.0 Extracto de Carne 1.0 Rojo de Fenol 0.025 Agar Bacteriolgico

15.0 pH 7.4 0.2

El Agar Sal y Manitol fue formuladopara obtener el aislamiento deStaphylococcus , inhibiendo elcrecimiento de otras bacterias alsoportar una alta concentracin desal.

En este medio las peptonas y elextracto de carne proporcionan lafuente de carbono, nitrgeno,vitaminas y minerales.

El D.manitol es el carbohidratofermentable.

El rojo de fenol acta comoindicador de pH.

El agar es adicionado como agentesolidificante.


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Colonias y halos

amarillosa diferenciade las cepas no

patgenas que dancolonias pequeas decolor rojo y sin cambioen el color del medio.


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Selectivo y diferenecial para

enterobacterias yfermentadoras de lactosa,debido a los indicadores de pHque contiene el medio.

Se utiliza en el aislamiento deenterobacterias a partir deheces , orina, y alimentoscontaminados.

Agar MacConkey contienecristal violeta y sales biliarescomo inhibidores deorganismos Gram positivos.

Contenido del mediopreparado, por litro aguadestilada:

Agar > 13,5 g Cloruro de sodio > 5,0 g Cristal violeta> 0,001 g Lactosa> 10,0 g Peptona de gelatina1 > 17,0 g

Peptona de caseina2 > 1,5 g Peptona de carne3 > 1,5 g Rojo neutro> 0,03 g Sales biliares> 1,5 g


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Las colonias aisladas debacterias que fermentanla lactosa son rosadas ypueden estar rodeadas deuna zona de precipitadode sales biliares el cual esdebido a una cada en elpH por la fermentacin dela Lactosa. Las coloniasque no fermentan la

lactosa (como las de S.typhi, S. paratyphi y S.disentery)

permanecen incoloras.


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Las colonias aisladas debacterias que fermentanla lactosa son rosadas ypueden estar rodeadasde una zona deprecipitado de salesbiliaresel cual es debidoa una cada en el pH porla fermentacin de laLactosa. Las colonias que

no fermentan la lactosa(como las de S. typhi, S.paratyphi y S. disentery)

permanecen incoloras


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Permite la diferenciacin de las colonias fermentadoras de lactosa de las nofermentadoras.

La sacarosa est incluida en el medio para detectar a los miembros delgrupo coliforme que fermentan ms rpidamente la sacarosa que lalactosa. y permite una diferenciacin mas temprana entre las colonias

fermentadoras y no fermentadoras de lactosa. .

Este medio permite diferenciar al grupo Salmonella y otros organismoslactosa negativos de organismos coliformes. , la eosina y el azul demetileno son colorantes que se combinan para formar un precipitado apH cido.

Los colorantes actan como inhibidores e indicadores.

Las carbohidratos proporcionan la fuente de energa, las fosfatos actancomo buffer y el agar como agente solidificante


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Digerido Pancretico de Gelatina 10.0 Lactosa 5.0

Sacarosa 5.0 Fosfato Dipotsico 2.0 EosinaY 0.4 Azul de Metileno 0.065 Agar Bacteriolgico 15.0 pH 7.2 0.2


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Superficies de placas de agar EBM que ilustran elcultivo mixto de E. coli (colonias con brillo verde) y

especies de Shigella, estas no fermentan lactosa ypor ende producen colonias semitranslucidas y nopigmentadas


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Placas de agar EMB que ilustra el brillo verde producido

por la fermentacin de lactosa


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En este medio se puedenevaluar variascaractersticas de lasbacterias, como son:

Produccin de H2S, Laproduccin de gas deglucosa y produccin decido de lactosa y sacarosa.

Extracto de carne 3,0 g Extracto de levadura 3,0 g Peptona 15,0 g Proteosa-peptona 5,0 g

Lactosa 10,0 g Sacarosa 10,0 g Glucosa 1,0 g Sulfato ferroso 0,2 g Cloruro de sodio 5,0 g

Tiosulfato de sodio 0,3 g Agar 12,0 g Rojo fenol 0,024 g Agua destilada 1000,000


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En el medio de cultivo, el extracto de carne y lapluripeptona, aportan los nutrientes adecuadospara el desarrollo bacteriano.

La lactosa, sacarosa y glucosason los hidratos decarbono fermentables.

El tiosulfato de sodioes el sustrato necesario parala produccin de cido sulfhdrico, el sulfato dehierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+, loscuales se combinan con el cido sulfhdrico yproducen sulfuro de hierro, de color negro.

El rojo de fenol es el indicador de pH, y el clorurode sodio mantiene el balance osmtico.


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Gracias a su composicin es uno de los medios decultivo ms empleados para la diferenciacin de

enterobacterias segn: Fermenten o no glucosa. Fermenten o no lactosa y/o sacarosa. Produzcan o no cido sulfhdrico. Produzcan o no gas.


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AGAR TRIPLE-AZUCAR-HIERRO

Inoculacion : picadura y estria.

Shigellada la siguientereaccin sobre TSI:

- Alcalina (rojo) en lasuperficie inclinada.No fermenta lactosa.

-.- Sin produccin de SH2 (sinennegrecimiento del fondo deltubo). cida (amarillo) en el fondo


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Los microorganismos que descarboxilan la lisinaprovocan una fuerte alcalinizacin del medio, quese traduce en un viraje a azul-prpura.

Los que no, hacen virar el fondo a amarillo, poracidificacin. E. coli, Shigella, Salmonella,provocan viraje del pico a azul.

. Shigella, Salmonella paratyphi viran el fondo aamarillo.

Salmonella typhi viran el fondo a azul.


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Inoculacion: doblepicadura y estria.

Shigellada la siguiente

reaccin sobre LIA:- Alcalina (color prpura)en la superficie inclinada.- cida (amarillo) en elfondo.

- Sin Produccin de SH2(ennegrecimiento delfondo del tubo).


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Estas dos pruebas permiten la diferenciacindentro de las enterobacterias del grupo coliyaergenes.

Las enterobacterias son anaerobios facultativosque utilizarn la glucosa en dos fases: primero lametabolizarn aerobiamente consumiendo

rpidamente el oxgeno del medio, para, ensegundo lugar, continuar metabolizndola por vaanaerobia (fermentacin).


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Fermentacin cidomixta:La realizan lasbacterias del grupo deE.coliy los productosfinales son cidos

orgnicos (cidosfrmico, actico, lctico ysuccnico) que provocanun fuerte descenso del pHinicial del medio. Puededetectarse por el virajedel indicador de rojo demetilo que permaneceamarillo por encima depH 5,1 y rojo por debajode 4,4.


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Fermentacin butiln gliclica: La realizanlas bacterias del grupo Klebsiella-Enterobacter

La produccin de acetona comointermediario que podr ser detectadaaadiendo al medio KOH (reactivo A de Voges-Proskauer) y alfa-naftol (reactivo B de Voges-

Proskauer) que reaccionarn con estecompuesto produciendo un color rojocaracterstico.


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Es un medio semislido destinado a verificarla movilidad, produccin de indol y de sulfuro

de hidrgeno en un mismo tubo.Es til para diferenciar miembros de la familiaEnterobacteriaceae.


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El triptfano es un aminocido constituyentede muchas peptonas, que puede ser oxidado

por algunas bacterias para formar indol. En el proceso interviene un conjunto de

enzimas llamadas triptofanasa. El indol

producido se combina con el aldehido delreactivo de Kovacs o de Erlich, para originarun compuesto de color rojo.


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Las cepas mviles puedenapreciarse en este medio,por la turbidez queproducen alrededor de lapuncin de siembra,mientras que aquellascepas productoras desulfhdrico se distinguenpor la formacin de unprecipitado negro de

sulfuro de hierro a partirdel tiosulfato siempre queel medio se mantenga aun pH mayor a 7.2.


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Introduccin La utilizacin de citrato como nica fuente de

carbono es una prueba til en la identificacin deenterobacterias.

Principio La utilizacin de citrato como nica fuente de

carbono se detecta en un medio de cultivo concitrato como nica fuente de carbono mediante el

crecimiento y la alcalinizacin del medio. Esteaumento de pH se visualiza con el indicador azulde bromotimol que vira al alcalino a pH7,6.


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Interpretacin

El ensayo es positivo cuando se observa

crecimiento a lo largo de la estra, acompaadoo no de un viraje del indicador al azul.

Controles Positivo: Klebsiella spp. Negativo: E.coli


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Medio usado para la identificacin deEnterobacteriaceae en base a su movilidad,actividad de ornitina decarboxilasa y produccinde indol.

Por su composicin, es posible detectar 3

reacciones en un mismo tubo: movilidad,presencia de ornitina decarboxilasa e indol


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Medio de cultivo semislido, altamente nutritivodebido a la presencia de extracto de levadura,peptona y triptena.

La triptena aporta grandes cantidades de

triptofano, sustrato de la enzima triptofanasa,para la realizacin de la prueba del indol. La dextrosa es el hidrato de carbono fermentable, La ornitina es el sustrato para la deteccin de la

enzima ornitina decarboxilasa, el prpura debromocresol es el indicador de pH, que en medioalcalino es de color prpura y en medio cido esamarillo.


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La reaccin positiva a la ornitina est dada por uncolor prpura del medio. La presencia de acidez,otorga condiciones ptimas para la actividad de laenzima ornitina decarboxilasa, la cual decarboxila la

ornitina presente. Por decarboxilacin, se alcaliniza el medio, con el

consecuente viraje del indicador hacia el colorprpura.

El indol, es producido a partir del triptofano por losmicroorganismos que contienen la enzimatriptofanasa. El desarrollo de un color rojo luego deagregar unas gotas de reactivo de Kovacs o de Erlich,indica un resultado positivo


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