Presentación Bruchpilot
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Bruchpilot
Jomaris Centeno Ernest Monahan
Función'Molecular'De'Bruchpilot'
• BRP' es' una' proteína' de' la' zona'sináp:ca' ac:va,' la' región' del' terminal'
presináp:co' donde' las' vesículas'
sináp:cas'se'agrupan.'
• BRP' es' crí:ca' para' la' integridad'estructural' y' funcionalidad' de' la' zona'
sináp:ca'ac:va'y'su'función'se'basa'en'
la'ac:vidad'de'los'canales'de'calcio.''
• Facilita' la' liberación' eficiente' de' vesículas' par:cularmente' a' bajas'
frecuencias'de'es:mulación.'
• Homóloga'a' la'familia'de'proteínas'de' la'zona'synap:ca'ac:va'ELKS/
CAST.'
• BRP'es'un'componente'estructural'de'de'la'zona'sináp:ca'ac:va'
'(Knapek et al., 2011, Giagtzoglou et al., 2009, Kittel, 2006)
• BRP' es' un' componente' estructural' esencial' de' los' cuerpos' densos'
presináp:cos'(“TPBars”)'cerca'de'las'cuales'las'vesículas'se'aglomeran'y'
se'localizan'los'canales'de'calcio'(Ca2+)'necesarios'para'la'liberación'de'
neurotransmisores,' se' reprime' la' liberación'de'vesículas'y' se'altera' la'
plas:cidad'a'corto'plazo.'
• Se' ha' demostrado' que' al' mutar' BRP' los' “TPBars”son' eliminados' y' el'
aglomeramiento'de'los'canales'de'calcio'se'impiden.'
(Knapek et al., 2011, Giagtzoglou et al., 2009, Kittel, 2006)
Procesos biológicos afectados por BRP
• Comportamiento'locomotor'adulto.'
• Memoria'anestesioPresistente.'
• Organización'de'la'matriz'citoesqueletal'en'la'zona'ac:va.'
• Mantenimiento'de'la'estructura'de'la'zona'presináp:ca'ac:va.'
• Transmisión'sináp:ca'neuromuscular.'
• Regulación'de'la'plas:cidad'sináp:ca.'
• Memoria'a'corto'plazo.'
• Transmisión'sináp:ca.'
FlyBase
Relación Entre Bruchpilot Y El Sueño '
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• Estudios' han' reflejado' que' la' deprivación' de' sueño' en' moscas'
aumenta'los'niveles'de'expresión'de'BRP'y'éste'aumenta'a'su'vez'
con' la'can:dad'de'horas'de' la'deprivación' (6'horas'versus'12P24'
horas).'
• El'aumento'en'los'niveles'de'la'proteína'BPR'es'observado'a'través'
de' todo' centro' del' cerebro' central' de' las'moscas' deprivadas' de'
sueño'comparadas'con'los'controles.'
• Mientras' más' efec:va' la' deprivación' de' sueño,' más' altos' los'
niveles' de' expresión' de' BRP,' afectando' la' ac:vidad' sináp:ca' en'
muchas'regiones'del'cerebro.'
'(Gilestro et al., 2009)
• Los' niveles' de' BRP' disminuyeron' luego' de' que' las' moscas'
durmieron,'los'niveles'más'bajos'fueron'al'final'de'la'noche.'
• Cuando'mitad'de'las'moscas'ya'deprivadas'de'sueño'con:nuaron'
despiertas' y' las' demás' se' dejaron' dormir,' las' que' durmieron'
tuvieron'una'disminución'de'20P40%'en'niveles'de'BRP'rela:vo'a'
las'despiertas.'Demuestra'que'la'disminución'de'los'niveles'de'BRP'
está'ligado'a'dormir'y'no'al':empo'transcurrido.'
• Dormir' es' necesario' para' la' regulación' de' la' expresión' de' BRP,'
volviendo' a' la' la' can:dad' normal' de' BRP' en' el' cerebro' de' las'
moscas.'
Relación Entre Bruchpilot Y El Sueño
(Gilestro et al., 2009)
Relación Entre Ih, Sueño Y La Memoria
La pérdida de Ih afecta a la consolidación del
sueño: • Fragmentación del sueño
• Altos niveles de dopamina en la noche
• Reducción del tiempo de sueño diario
(Gonzalo, 2012, Chen y Wang, 2011)
RNAi
Hipótesis'
Hipote:zamos'que'habrá'una'mayor'expresión'en'del'
gen'bruchpilot' tanto'en'moscas'deprivadas'de' sueño,''
como'moscas'con'Ih'RNAi.'La'expresión'será'mayor'en'
las'moscas'del'gen'bruchpilot'en' 'deprivadas'de'sueño'
y'con'Ih'RNAi.'
• Estudios' evidencian' una' sobrePexpresión' de'
bruchpilot'debido'a'la'deprivación'de'sueño.'
• El' rol' importante' de' Ih' en' procesos' de'
consolidación' del' sueño,' memoria' y' aprendizaje'
(disminuyen'en'ausencia'de'Ih).'
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Resultados
Número Muestras Iniciales
Número Muestras Finales
% Posibles fuentes de error
Real Time PCR 84 67 80
Uso incorrecto de micropipetas
Data Análisis 27 24 89 Falta de data
Tabla descriptiva del Real-time PCR y su análisis.
N= 24 P values: Interacción = 0.0167 Ih RNAi = 0.8785 S.D. = 0.8874
Interacción
Ih RNAi
Sleep Depravation
Tabla de valores estadísticos obtenidos por medio de ANOVA.
Conclusiones • No fue significativo el cambio en niveles de expresión de BRP en las
moscas deprivadas de sueño.
• No fue significativo el cambio en niveles de expresión de BRP en las moscas con Ih RNAi.
• Al comparar las diferencias entre las variables se encuentra una diferencia significativa demostrando una posible interacción entre ellas.
• Repetir el experimento con un mayor número de muestras puede confirmar si la falta de significancia estadística se debe al número de muestras o si realmente no existe una relación entre las variables.
• Se podría hacer un Western Blot para verificar que el RNAi está afectando específicamente el Ih.
Referencias • Chen, Z, & Wang, Z.. (2011) . Functional study of hyperpolarization
activated channel (Ih ) in Drosophila behavior. SCIENCE CHINA Life Sciences, 2-7.
• Gene Dmelbrp. (n.d.). Retrieved November 19, 2014, from http://flybase.org/reports/FBgn0259246.html
• Giagtzoglou, N., Mahoney, T., Yao, C., & Bellen, H. (2009). Rab3 GTPase Lands Bruchpilot. Neuron, 595-597.
• Gilestro, G., Tononi, G., & Cirelli, C. (2009). Widespread Changes in Synaptic Markers as a Function of Sleep and Wakefulness in Drosophila. Science, 109-112.
• Gonzalo-Gomez, A., Turiegano, E., León, Y., Molina, I., Torroja, L., Canal, I., & Zhuang, X. (2012). Ih Current Is Necessary to Maintain Normal Dopamine Fluctuations and Sleep Consolidation in Drosophila. PLoS ONE, E36477-E36477.
• Kittel, R. (2006). Bruchpilot Promotes Active Zone Assembly, Ca2 Channel Clustering, and Vesicle Release. Science, 1051-1054.
• Knapek, S., Sigrist, S., & Tanimoto, H. (2011). Bruchpilot, A Synaptic Active Zone Protein for Anesthesia-Resistant Memory. Journal of Neuroscience, 3453-3458.
Preguntas