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PO-24
La inhibición de la autofagia previene la
replicación del VIH, la depleción celular y
la transmisión del virus célula-célula en
tejido linfoide humano cultivado ex vivo
Sònia Pedreño LópezInstitut de Recerca de la Sida IrsiCaixa
GeSIDA 2019
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INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS
- La autofagia es una vía esencial de defensa del huésped contra infecciones virales, que se encargade la degradación de patógenos, señalización inmune innata e inmunidad adaptativa.
- Aunque sigue habiendo controversia sobre el papel que juega la autofagia durante la infección porVIH, ya que se han descrito diferentes resultados en cuanto a la respuesta autofágica que seproduce durante dicha infección dependiendo del modelo celular utilizado.
- Sin embargo, los mecanismos por los que la autofagia restringe la infección por VIH siguen sinconocerse.
Phagophore
3-METILADENINA
Fleming, A. et al. Nat Chem Biol. 2011.
GeSIDA 2019
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HIPOTESIS: El VIH es capaz de alterar el proceso de autofagia, por lo tanto, una modulación deeste proceso celular podría tener un impacto en el ciclo replicativo del virus.
OBJETIVO: Evaluar el potencial terapéutico de la inhibición de la autofagia en la infección por VIHutilizando un modelo ex vivo de tejido linfoide humano.
INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS
- La autofagia es una vía esencial de defensa del huésped contra infecciones virales, que se encargade la degradación de patógenos, señalización inmune innata e inmunidad adaptativa.
- Aunque sigue habiendo controversia sobre el papel que juega la autofagia durante la infección porVIH, ya que se han descrito diferentes resultados en cuanto a la respuesta autofágica que seproduce durante dicha infección dependiendo del modelo celular utilizado.
- Sin embargo, los mecanismos por los que la autofagia restringe la infección por VIH siguen sinconocerse.
Fleming, A. et al. Nat Chem Biol. 2011.
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MÉTODOS
Histocultivo
Tejido linfoide disgregado (HLAC)
Fármacos p24 Sobrenadante
Depleción T CD4
p24 Intracelular
10 díasFármacos
DNA Proviral
Cocultivo3 díasDepleción T CD4
p24 Intracelular
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RESULTADOS
0.5 1.0 1.5 2.00
20
40
60
80
100
Bafilomycin
% V
iab
ilit
y
0.5 1.0 1.5 2.00
20
40
60
80
100
Chloroquine
% V
iab
ilit
y
0.0 0.5 1.0 1.50
20
40
60
80
100
3-Methyladenine
% V
iab
ilit
y
Log Concentration (mM) Log Concentration (µM) Log Concentration (nM)
Se escogieron concentraciones notóxicas de cada uno de los fármacospara realizar los distintos ensayos.
- VIABILIDAD CELULARGeSIDA 2019
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RESULTADOS
- HISTOCULTIVOS HUMANOS
3 10
0
5.0×104
1.0×105
1.5×105
2.0×105
2.5×105
C +
CQ3-MA
Baf
JM-2987
Su
pe
rna
tan
t p
24
Days Post-infection
C - C + JM-2987 3-MA CQ Baf
0
25
50
75
100
125
% C
D4
+/C
D8
+ R
ati
o
0.0011ns
ns
C - C + JM-2987 3-MA CQ Baf0
25
50
75
100
125
% I
ntr
ac
ellu
lar
p24
0.00030.0095
0.0007
Los inhibidores de autofagia producen:
- Una fuerte inhibición de la replicación viral (72% 3-MA, 52% CQ y 87% Baf).
- Una reducción en la depleción de células T CD4+ (77%, 56% y 60% con 3-MA, CQ y Baf respectivamente), aunque solo 3-MA dio significancia.
- Una disminución en el contenido de p24 intracelular (72% 3-MA, 46% CQ y 43% Baf).
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- CULTIVO DE TEJIDO LINFOIDE HUMANO DISGREGADO (HLAC)
C + JM-2987 3-MA CQ Baf
0
25
50
75
100
% P
rovir
al D
NA
HL
AC
<0.0001
<0.0001
<0.0001
C- C+ JM-2987 3-MA CQ Baf
0
25
50
75
100
% C
D4
+/C
D8
+ R
ati
o C
oc
ult
ure
0.0046
0.0136
0.0011
C - C + JM-2987 3-MA CQ Baf0
25
50
75
100
% I
ntr
ac
ell
ula
r p
24
Co
cu
ltu
re
<0.0001
0.0085
<0.0001
- El bloqueo de la autofagia condujo a una reducción significativa de >90% en los niveles de DNA proviral.
- Utilizando un sistema de cocultivo, la inhibición de la autofagia fue también capaz de disminuir ladepleción celular (23% 3-MA, 22% CQ y 41% Baf) y prevenir la transmisión célula-célula del VIH (72%,44% y 63% con 3-MA, CQ y Baf respectivamente).
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CONCLUSIONES
- En Histocultivos:
• Los inhibidores de autofagia reducen la replicación viral.• El fármaco 3-MA protege contra la depleción de células T CD4.• Disminuyen los niveles de p24 intracelular.
- En células Disgregadas:
• Reducen la infección por VIH a partir de la disminución de los niveles de DNA proviral.• Disminuyen la transferencia del virus entre las células no infectadas y las infectadas.
Nuestros resultados sugieren que modular la vía de la autofagia podría ser un nuevo enfoque terapéutico válido contra el VIH-1
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AGRADECIMIENTOS
Grupo de Virología Tisular
Cecilia CabreraElisabet GarcíaJordi Senserrich
GeSIDA 2019