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PREPARACIN DE MEDIOS:La preparacin de medios para el desarrollo de procesos de fermentacin es una etapa fundamental para asegurar la productividad de los mismos.Los componentes de los medios constituyen los efectores externos de naturaleza qumica que desempean un rol esencial en los procesos ya que deben cumplir con los requerimientos del crecimiento y de formacin de productos y adems suministrar energa para la sntesis de metabolitos y para el mantenimiento celular.

Condiciones de AsepsiaCuando se trabaja con cultivos microbianos, la tcnica asptica se utiliza para prevenir la introduccin de organismos adicionales al cultivo. Diagrama 01.1. Preparacin del medio de mantencin, segn la TABLA 01 para el cultivo de Pichia stipitis NRRL Y-7124.Se inicia teniendo en cuenta la referencia de composicin de medios de cultivo de mantencin para Pichia stipitis NRRL Y-7124. Diagrama 02 Diagrama 01

Matraz -Nombre de cepa. -Fecha. Nombre del grupo.ROTULARMatraz -Nombre de cepa. -Fecha. Nombre del grupo.ROTULAR

Previamente desinfectado el rea de trabajo con alcohol de 96

Mechero bunsenENCENDERPreviamente desinfectado el rea de trabajo con alcohol de 96

Mechero bunsenENCENDER

Los Matraces

Si los matraces tienen un tapn de algodn, aflojar un poco de manera que no est muy apretadoSOSTENER

La boca de ambos matraces para matar cualquier microorganismo presente en el aire y que pueda contaminar en la prctica.FLAMEAR

Tapar con el meiqueRETIRAR

La Boca de ambos matracesFLAMEAR

Posicin inclinada (riesgo de contaminacin sea mnimo)MANTENER

Matraz estrilInculoSEMBRAR

Boca de los matraces taparlos de nuevoFLAMEAR

Matraces en el caldo sembradoInculoMEZCLAR

Los tapones antes que los coloques en los matraces.FLAMEAR

En una matraz de 250 ml.Agua destiladaDiagrama 02

MEDIR

Cantidades de cada compuesto.PESAR

Agua destilada

Hasta llegar a los 50 ml que se requiere.MEDIR

En un Mechero Bunsen (lograr una coloracin celeste), CALENTAR

Constantemente con un varilla por un minuto (aparicin de la primera burbuja).AGITAR

5 tubos de ensayo con tapa.PREPARAR

6-7 ml de la mezcla en caliente a cada tubo de ensayo, con pipeta de 10 ml.AGREGAR

Una vez tapados los tubos de ensayos, por 1 hora.ENFRIAR

COLOCARCALENTAR

COLOCAR

En un vaso precipitado, y llevarlos a la olla a presin (auto clave).

121 C / 20 min

A posicin inclinada a Temp. Ambiente.

1. Preparacin del medio de activacin, segn la TABLA 02 para el cultivo de Pichia stipitis NRRL Y-7124.

Por separado los componentes.MEZCLAR

121C 15 min.ESTERELIZAREL pH a 7 de la solucin que contiene glucosa y xilosa.AJUSTARSales mineralesAl matraz que contiene el extracto de levadura, con la ayuda de la micro pipeta.

AGREGAREl volumen de las sales minerales.ALISTARDISOLVERPor separado.Extracto de levadura en una matraz.Glucosa en un matraz de 125 ml.Las sales en un tubo de ensayo.

ESTERELIZARComponentes para el medio de la tabla N02PESAR

1. Preparacin del medio de fermentacin, segn la TABLA 03 para el cultivo de Pichia stipitis NRRL Y-7124Componentes para el medio de la tabla N03

PESAR

Cada compuesto en agua destilada:Glucosa en un matraz de 1 L con agua destilada.(NH4)2SO4 en un matraz con agua destiladaSolucin de sales, KH2 PO4, (MgSO4).7H2O en un matraz con agua destilada.

DISOLVER

ESTERELIZARLas disoluciones por separado.

ENFRIAR

contaminacin.ambiente asptico, para evitar la Con los dems componentes en un