8/18/2019 Preparación de 5X tampón TBE electroforesis

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Preparación de 5X tampón TBE electroforesis

Visión de conjunto

 TBE es uno pf los tampones de electroforesis muy comunes, que se utiliza parael análisis en gel de agarosa de !"#

$ontiene Tris, ácido %órico y E!T#

 Tris&%orato proporciona conducti'idad el(ctrica, as) como mantiene el p*#

E!T in+i%e nucleasas dependientes metálicos por quelación de los cationesdi'alentes $a- ., /g- .0, por lo tanto

proteger el !" de las nucleasas durante la carrera#

 Tampón TBE tiene mejor capacidad tampón TE a continuación, por lo tanto, se

puede utilizar para e1tendida y

electroforesis repetido#

Borato de tampón TBE se informó de interactuar con el !", lo que puedecausar pro%lemas en posteriores

modi2cación enzimática de fragmento de !" eluido de gel# En tales casos, eluso de tampón TBE de%e ser

e'itado# TE es tampón adecuado para este propósito#

Preparación de 5X Tris&glicina 3!3 Tampón de electroforesis 4 Preparación de

colorante de carga X !" 4

3alina tamponada con fosfato 4 TE Vs tampón TBE 4 Electroforesis en gel deagarosa de !" 4 Preparación

de gel de agarosa para análisis de !" 4 Preparación de 56X Tampón deelectroforesis TE

Preparación de 0,5 M cloruro de rubidio solución (RbCl)

Preparación de cloruro de calcio 1 M solución (CaCl2)Preparación de solución 1 M MOPS

Preparación de 50x TA elec!ro"oresis bu""er#$!%

Re&uisi!o

reac!i'os

Tris base (C11*O+, Peso %olecular 121,1)

l -cido bórico (+.O+, Peso %olecular /1#+)

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Solución de TA de s!oc 0,5 M (p ,0)

esioni3ada 4 aua Milli67

&uipos 8 %a!erial desec$able

Cilindro de %edición

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Ma!ra3 cónico 4 9aso

ai!ador %an:!ico

Co%posición de 5; !a%pón T. elec!ro"oresis

.ora!o 0,5 M Tris

0,01 M TA

 p #2 a # (a 25 < C)

Co%posición de 1; T. Ta%pón de elec!ro"oresis

.ora!o = %M Tris

TA 2 %M p #2 a # (a 25 < C)

Ob>e!i'o

Preparación de 1000 %l de !a%pón de elec!ro"oresis T. 5;, p ,+#

Preparación

Para preparar 1000 %l de !a%pón T. 5;, pesar 5 de base Tris 8 2?,5 de

-cido bórico# !rans"erirlos

a 2 @ 'aso de precipi!ados 4 %a!ra3 cónico# Aadir 00 %l de aua desioni3ada 4Milli67# Aadir 20 %l de TA 0,5 M

solución# Me3clar $as!a &ue !odos los inredien!es se disuel'en por co%ple!o#

Conse>os)

1# Bno puede usar ai!ación %anual u!ili3ando una pipe!a de 'idrio para %e3clar

los inredien!es# Ai!ador %an:!ico $ace

el proceso de disolución "-cil 8 con'enien!e#

2# Reco%enda%os aadir solución 0,5 M TA despu:s de aadir aua#

Precaución (s)

 *o se disuel'en en =0 %l de aua 4 Milli67 desioni3ada# n la %a8ora de los

casos, au%en!a el 'olu%en de solucióncuando la ran can!idad de solu!o se disuel'e en disol'en!e# 'er preparación de la

solución

A>us!ar el p ,+ si es necesario#

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Precaución s0

Co%o el p depende de la !e%pera!ura, se reco%ienda a>us!ar el p de la

solución en la salala !e%pera!ura (25 < C)#

A>us!ar el 'olu%en de la solución a 1000 %l con aua desioni3ada 4 Milli6

7# Me3clar de nue'o#

Opcional se puede "il!rar la solución para eli%inar cual&uier %a!erial no

disuel!o#

Trans"erir la solución a la bo!ella en au!ocla'e#

Conse>os)

ependiendo del consu%o, se puede $acer pe&ueas alcuo!as de la solución#

s!erili3ar la solución por au!oca'in (20 %inu!os a 15 lb 4 sin# (Psi) a par!ir de

121612 < C en el ciclo de l&uido)# *o!a (s)

Se puede es!erili3ar la solución pasando a !ra':s de 0,22 D unidad de

"il!ro# S!rili3a!ion "il!ro eli%ina !odo

 par!culas en suspensión con un !a%ao de %-s de 0,22 D, &ue inclu8e la %a8ora

de las bac!erias, pero no sus esporas

%icoplas%a# Cabe arear, &ue no inac!i'a las ac!i'idades en3i%-!icas (por

e>e%plo, *asas)# l !ra!a%ien!o en au!ocla'e

inac!i'a la %a8ora de las en3i%as, excep!o alunos (por e>e%plo, R*asas) 8

%a!a a la %a8ora, los %icrooranis%os incluidos

%icoplas%a#

lmacenamiento 7a solución se puede almacenar a 85 & -5 9 $ temperaturaam%iente0 durante 'arios meses

aplicaciones Electroforesis en gel de agarosa de !" Electroforesis nodesnaturalizante en gel de agarosa de :" tampón /;P3 se utiliza para gelesdesnaturalizantes0 Electroforesis en gel de poliacrilamida de ácido nucleicotanto no desnaturalización o desnaturalización0 !" gel de secuenciaciónautomatizada $am%io de mo'ilidad electrofor(tica de ensayo E/3

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