PRACTICAS ADECUADAS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

CAPITULO 1117, 1051 (USP 40)

Farmacopea Nacional de los Estados Unidos Mexicanos (FEUM)

Norma Oficial Mexicana NOM-059-SSA1-2015

INSTALACIONES

El laboratorio de microbiología debe contar con áreasseparadas:

Ø Área separada para poder realizarpruebas de esterilidad• Cuenta con diferenciales de presión que

ayuden al control de la contaminación através de barreras de entrada de aire(presión positiva).

• Área para análisis generales (microcuenta,valoración, efectividad antimicrobiana, etc.)

INSTALACIONES

Áreas

Limpia

Cepario

Autoclaves, Lavado de material

Incubación

Ø Área separada para poder realizar elmanejo de los microorganismos (presiónnegativa).

PREPARACION Y ALMACENAMIENTO DE MEDIOS DE CULTIVO

PREPARACION Y ALMACENAMIENTO DE MEDIOS DE CULTIVO.

- Medios de cultivo: son la base de la mayoría delas pruebas microbiológicas.

- Elegir los medios o los componentes adecuados,según la bibliografía o la metodología indicada.

- Seguir al pie de la letra la preparación de losmedios de cultivo para tener medios de calidad.

- Utilizar utensilios y espátulas limpias para evitarque sustancias extrañas, alteren la composición delos medios.

c) Fotografías de los modelos validados donde seindiquen la posición y cantidad de contenedoresdentro de la cámara del modelo validado.

PREPARACION Y ALMACENAMIENTO DE MEDIOS DE CULTIVO.

- No almacenar un agar a temperaturas iguales opor debajo de 0°C, ya que se daña la estructura delgel

- Proteger a los medios de la exposición de la luz(si aplica) y de las temperaturas excesivas

- Si se van a almacenar el agar por un tiempoprolongado, se deben colocar en un envasehermético que evite la pérdida de humedad.

PREPARACION Y ALMACENAMIENTO DE MEDIOS DE CULTIVO.

- Realizar un estudio de caducidad de medios decultivo preparados en el laboratorio, para podersustentar su viabilidad a su fecha de expiración

PREPARACION Y ALMACENAMIENTO DE MEDIOS DE CULTIVO.

- Prueba de esterilidad a los medios de cultivo:

Todos los medios de cultivo (preparados en ellaboratorio o comprados con un proveedor) debencumplir con la prueba de esterilidad, para lo cual sedeben colocar en la incubadora un porcentaje dellote (4% de acuerdo a la FEUM), en las mismascondiciones de incubación que las usadas en losanálisis de rutina.

PREPARACION Y ALMACENAMIENTO DE MEDIOS DE CULTIVO.

- Promoción de crecimiento de medios de cultivo:

Procedimiento donde se describa como mínimo lasiguiente información:

a) Lista de microorganismos a utilizar para realizarla promoción a cada medio de cultivob) Cantidad de microorganismo a inocular (mL)c)Tiempo y temperatura de incubación,interpretación de los resultados obtenidos

MEDIOS DE CULTIVO- PROMOCIÓN DE CRECIMIENTO.

PREGUNTA

Cuando debe realizarse la prueba de promoción decrecimiento de los medios de cultivo?

a) Antes de utilizarlos en cualquier prueba en ellaboratoriob) Se realiza cuando se tenga tiempoc) No es necesario realizar esta pruebad) Se puede realizar al mismo tiempo que se incuba laprueba microbiológica donde se utilizaron, sin embargosi los resultados de la promoción no cumplen con loslímites, la prueba de laboratorio se invalida.e) Las opciones a y d son correctas

MANEJO DEL CEPARIO

MANEJO DEL CEPARIO

Los microorganismos a utilizar serán losautorizados en la FEUM/USP o cualquier otrocompendio autorizado, tomar en cuenta el ATCC(American type culture collection) indicado.

Una vez abiertos y antes de utilizarlos losmicroorganismos deben ser identificados hastagenero y especie para asegurar que la cepa estapura y no esta contaminada

El agua es la sustancia más utilizada en laindustria farmacéutica, ya sea como:

- Disolvente o ingrediente de preparadosfarmacéuticos

- En el lavado de envases

- En las operaciones de limpieza de áreas yequipos

INTRODUCCIÓN

ESPECIFICACIONES DE LOS TIPOS DE AGUAMÁS UTILIZADOS

PRUEBAAGUA

PURIFICADAAGUA PARA

INYECTABLESpH 5.0 – 7.0 5.0 – 7.0

Conductividad ≤ 2.1 µS / cm2 ≤ 2.1 µS / cm2

TOC 0.5 ppm (mg / L) 0.5 ppm (mg / L)Endotoxina NA < 0.25 UE / ml

MUESTREO Y ANÁLISIS DE AGUA DE PLANTA

Fuente de información: FEUM

1. Pruebas de Esterilidad.

¿PARA QUÉ ESTA PRUEBA?

DEMOSTRAR LA ESTERILIDAD ENSUSTANCIAS, PREPARACIONESFARMACÉUTICAS O DISPOSITIVOSMÉDICOS

PRUEBA DE ESTERILIDAD

INTRODUCCIÓN.

La prueba tiene como finalidad investigar lapresencia de Microorganismos viables ensustancias, preparaciones o dispositivos médicosque requieren ser estériles, usando los medios decultivo adecuados.

PRUEBA DE ESTERILIDAD

Se debe de llevar a cabo en condicionesasépticas, usando campanas o módulos de flujolaminar localizados en cuartos limpios, o bien unaislador.

Se deben tener las precauciones necesarias paraevitar contaminar la muestra y para no afectar alos microorganismos que pudieran estar presentes

PRUEBA DE ESTERILIDAD

AISLADOR CAMPANA DE FLUJO LAMINAR

Existen dos métodos para efectuar la prueba deesterilidad:

- Método de filtración por membrana

- Método Directo

PRUEBA DE ESTERILIDAD

PRUEBA DE ESTERILIDAD

Identificación

• Lote• Fecha• Analista

Prueba

• Método de filtración

• Método directo

Incubación

• Medio Líquido de Tioglicolato

• Soya Tripricaseína

Revisión

• 14 días• MT 30° a

35°C• MST 20° a

25°C

Resultado

• Crecimiento = Turbidez

• No crecimiento = Estéril

CUANDO INVALIDAR LA PRUEBA DE ESTERILIDAD

CausasØ Datos del control microbiológico del área de prueba

presentan desviaciones.Ø La revisión del procedimiento de pruebas demuestra

fallas.Ø Los controles negativos presentan crecimiento

microbiano.Ø La identificación de los microorganismos aislados revela

errores relacionados con personal, material y/o latécnica.

Prueba inválidaØ Repetir prueba con el mismo número de muestras.

CUANDO INVALIDAR LA PRUEBA DE ESTERILIDAD

Resultados de la segunda pruebaØ Si en la nueva prueba NO se observa crecimiento

microbiano el producto cumple con la prueba deesterilidad.

Ø Si en la nueva prueba se observa crecimientomicrobiano, el producto no cumple con la prueba deesterilidad.

Prueba de Límites microbianos

INTRODUCCIÓN

Se le denomina así al conjunto de pruebas cuyoobjetivo es evaluar la calidad sanitaria deproductos farmacéuticos (materias primas,productos intermedios y terminados), mediante elrecuento de microorganismos mesófilosaeróbios, hongos filamentosos y levaduras; asícomo la investigación de microorganismosobjetables en dichos productos.

PRUEBA DE LIMITES MICROBIANOS

PRUEBA DE ENDOTOXINA

INTRODUCCIÓN

Las endotoxinas bacterianas Gram negativas, sonla causa más común de reacciones tóxicasasociadas a la contaminación de productosfarmacéuticos y artículos médicos estériles.

Las endotoxinas son lipopolisacáridos de paredesbacterianas gram negativas cuya actividad paragenerar una respuesta negativa en el ser humano(temperatura) es mayor que la de otras sustanciaspirogénicas de estructura diferente.

La prueba para determinar o cuantificarendotoxinas utiliza el lisado de amebocitos deLimulus polyphemus o Tachypleus tridentatusya que este lisado es la sustancia más sensiblecuando reacciona con endotoxinas bacterianaspresentando gelificación

Existen dos métodos para esta determinación:

Método A: Formación de un gel (Gel-Clot)

Método B: Fotométrico, que dependiéndode la forma de cuantificación puede ser:

Turbidimétrico ( cinético y de punto final),basado en el desarrollo de turbiedaddespués de la ruptura de un sustratoendógeno.

Cromogénico (cinético y de punto final),basado en el desarrollo de color despuésde la ruptura del complejo sintéticopéptido-cromógeno.

- La temperatura de incubación se debemantener estable 37 °C +/- 1 °C, durantelos 60 minutos +/- 2 minutos que dura laprueba.

- Las muestras positivas deben presentaruna gelificación integra al ser invertido eltubo.

- Equipos con calibración, mantenimiento ylimpieza de los equipos utilizados paraincubar las muestras (baño seco)