Practica 1

UNIVERSIDAD AUTNOMA BENITO JUREZ DE OAXACA

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO

LICENCIATURA PLAN DE ESTUDIOS CLAVE DE LA

ASIGNATURA NOMBRE DE LA ASIGNATURA

QUIMICO

FARMACUTICO

BILOGO

2009 Biologa Molecular

PRCTICA

NMERO NOMBRE DE LA PRCTICA FECHA Y

DURACIN

1 y 2

EXTRACCIN DE DNA

(Tejido animal y tejido vegetal).

28- Feb-2015.

2 Horas

1 INTRODUCCIN

El material gentico es la forma de almacenamiento de la informacin gentica de una forma de vida, en las clulas eucariotas se almacena en el ncleo de la clula. En cada organismo se identifica con ADN y en algunos como las bacterias se encuentra en el ARN. El ADN forma hebras que tienen la capacidad de replicarse y ser traducida para expresar informacin especfica.

El material gentico corresponde a una molcula que debe cumplir tres propiedades:

Capacidad de auto duplicacin.

Capacidad de almacenamiento de informacin

Capacidad de variar la informacin.

2 OBJETIVO

*Conocer los diferentes mecanismos de extraccin de DNA.

*El DNA contiene la informacin hereditaria que se transmite de generacin en generacin de este modo que el alumno reconozca la importancia del DNA en el desarrollo de las ciencias biolgicas.




3 FUNDAMENTO

De las molculas orgnicas que forman parte de los seres vivos (protenas, glcidos, lpidos y los cidos nucleicos) la nica que cumple las propiedades son los cidos nucleicos. El material gentico para las clulas procariotas es el ADN/ARN, para las clulas eucariotas es el ADN y para los Virus es el ADN como ARN. El ADN (cido desoxirribonucleico) es una molcula polimrica formada por unidades bsicas llamadas nucletidos. El ADN contiene la informacin hereditaria que se transmite de generacin en generacin.

El ADN es un cido nucleico que permite codificar la informacin de los organismos y, gracias a los mecanismos de divisin celular, posibilita la transmisin de esa informacin de una generacin a otra. El ADN se organiza en unidades de informacin llamadas genes, que corresponden a secuencias de ADN que codifican para un producto (ARN o protenas). El lugar especfico que ocupa un gen en el cromosoma se denomina loci o locus. Tcnicas de mapeo permiten determinar la ubicacin de diferentes genes a lo largo de un cromosoma en distintas especies.

Para optimizar el almacenamiento de esta gran cantidad de informacin en cada clula, el ADN se empaqueta junto a unas protenas estructurales llamadas histonas, formando la cromatina

Los nucleosomas son parte de la cromatina, complejo de ADN e histonas que durante la interfase del ciclo celular se encuentra descondensada. Cuando en la clula se inicia el proceso de divisin, el material gentico experimenta un empaquetamiento y los cromosomas se hacen visibles.

4 PROCEDIMIENTO

A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO

Tubo falcn 15ml y 50ml

Tubos Eppendorf de 1,5 ml.

Puntas estriles.

Pipetas automticas.

6 Vasos de precipitado 100ml (para desecho).

EtBr.

SDS, NaCl, EDTA(solucin lisis)

Fenol/cloroformo

Vortex

*Saliva de algn integrante del

equipo.

* 5g Hgado de pollo ( por

equipo)

* Chicharos (15g por equipo)

* Ejotes con semillas (15g por

equipo)

* Tela para filtrar (por ejemplo, varias capas de gasa sanitaria).

*1 hielo por grupo.




Isopropanol

Etanol al 70%

Mortero con pistilo

Varillas de vidrio

B DESARROLLO DE LA PRCTICA

a) Obtener muestra

1.-salivar por 10 min. Y colocar 5ml de saliva en un tubo de 15 ml, agregar 9 ml de PBS 1X

2.-centrifugar 5 min a 12000rpm y eliminar sobrenadante

b) Lisar

1.-agragar al tubo de 15ml (con paquete celular) 500 de solucin lisis (SDS, NaCl, EDTA) mezclar y pasar a un tubo de 1.5ml

2.-agregar 2ml de protena k colocar en bao mara a 60C por 45 minutos

c) purificacin de ADN genmico

1.-agregar 1 volumen de fenol/cloroformo proporcional al volumen de la

Muestra, vortex por un minuto y centrifugar a 13,000rpm

2.-recuperar fase acuosa (superior) y pasar a otro tubo, agragar un volumen

Proporcional de muestra, vortex por un minuto y centrifugar a 13,000rpm

3.-recuperar fase acuosa y pasar a otro tubo, agregar 0.6 volumen de

Isopropanol (60% del volumen de la muestra)

4.-obtener hebra de ADN

5.-pasar hebra a tubo nuevo y lavar con EtOH 70%.

Segunda parte: Hgado de pollo

1.- Triturar 10 g de hgado de pollo en 50 ml de agua milli Q. Con ello, se consigue homogeneizar la

muestra: las clulas se rompen y los ncleos quedan sueltos.

2.- Filtrar varias veces sobre una tela para separar los restos de tejidos que hayan quedado sin romper.




3.- Aadir al filtrado un volumen igual de NaCl . Este medio es hipertnico y se produce el estallido de los

ncleos quedando libres las fibras de cromatina. Aadir 1 ml de SDS u otro detergente. La accin del

detergente es formar un complejo con las protenas y separarlas del ADN.

4.- Aadir 50 ml de alcohol de 70, hay que hacerlo de forma que el alcohol resbale por las paredes del

vaso y se formen dos capas. En la interfase precipita el ADN. Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo

en la misma direccin. Sobre la varilla se irn adhiriendo unas unas fibras blancas, visibles a simple vista,

que son el resultado de la agrupacin de muchas fibras de ADN. Observarlas a simple vista, con lupa y

con microscopio.

Tercera parte: chicharos y ejotes

Nota: Investigar si hay alguna variacin

C CLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOS

Detallar cada uno de los pasos de la metodologa con una breve resea acerca de la funcin que tienen

cada uno de los reactivos as como cada uno de los equipos utilizados para esta prctica. Discutir

5 INTERPRETACIN Y CONCLUSIONES

De cada uno de los resultados obtenidos discutir acerca de las semejanzas y diferencias con el

resto de los equipos, fundamentar sus conclusiones con una breve discusin acerca de lo que

tenemos actualmente en la bibliografa.

6 ANEXOS

Investigar acerca de las diferentes metodologas que tenemos actualmente para la extraccin de

DNA, su purificacin as como su identificacin con nuevas tcnicas de Biologa Molecular.




7 REFERENCIAS

1.- Lewin, B. Genes IX, Pearson Education, 2007. [Genes VII, Marbn, 2001 (2000)].

2.- Luque, J., y Herrez, . Texto ilustrado de Biologa Molecular e Ingeniera Gentica. Ed. Harcourt, 2001.

3.- Lodish, H., et al. Molecular Cell Biology, 5th ed., W. H. Freeman, 2004. [Biologa celular y molecular (5

ed.). Editorial mdica panamericana, 2005 (2004)].

4.- Alberts, B., et al. Molecular Biology of the Cell, 5th ed., Garland Pub., 2007. [Biologa molecular de la clula

(4 ed.). Omega, 2004 (2002)].

5.- Watson, J.D., et al. Molecular Biology of the Gene, 6th ed., Benjamin Cummings and Cold Spring Harbor

Laboratory Press, 2008. [Biologa molecular del gen (5 ed.) Edit. Mdica Panamericana, 2005 (2004)].

8 MECANISMO DE EVALUACIN

Puntualidad y asistencia 30 %

Bitcora 20%

Reporte 30%

Conocimientos previos 20%

9 MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

1.- Considerando que algunas sustancias qumicas son irritantes (slido, lquido y gas) a la piel y

mucosa, los alumnos deben portar correctamente su bata de laboratorio, zapatos antiderrapantes,

cubrebocas, googles as como cumplir con las medidas de seguridad dentro del laboratorio.

2.- Al pesar o medir reactivos evite tirarlo o derramarlos en el sitio donde se encuentre, en caso de

hacerlo limpiar perfectamente el lugar.

3.- No deber regresar a los envases originales, los remanentes de reactivos utilizados, as como

deber tener precaucin de utilizar pipetas o esptulas limpias y secas para manejarlas.

4.- Cuando se transfiera un lquido con pipeta, deber utilizarse perilla de seguridad. Nunca

succionar con la boca.

5.- Tener cuidado cuando se efecta una reaccin qumica en tubo de ensaye, que la boca de este

no se dirija hacia el compaero o hacia s mismo, ya que puede haber proyecciones.




6.-En caso de accidente (por pequeo que este sea) debe comunicarse de inmediato al maestro

responsable del laboratorio.

7.- La gran mayora de los disolventes orgnicos son voltiles e inflamables, al trabajar con ellos

deber hacerse en lugares ventilados nunca cerca de la flama. Los recipientes que las contienen

deben mantenerse cerrados y en lugares frescos y secos.

8.- Cualquier quemadura con cido, base o fuego poner la parte afectada mnimo 15 minutos bajo

el chorro de agua fra, neutralizar y acudir al botiqun si persisten molestias.

10 DISPOSICIN DE DESECHOS QUMICOS, FSICOS Y BIOLGICOS.

1. Los recipientes que tengan residuos de naturaleza lipdica, se limpiarn con papel absorbente antes de lavarlos en la tarja y estos papeles se tirarn en el bote de basura del laboratorio.

2. Los residuos de origen orgnico se tiraran en el bote de basura del laboratorio. 3. Los residuos de origen biolgico se desecharn en los contenedores especiales. 4. El material de cristalera de lavar con sanitizante alcalino y enjuagarse perfectamente.

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