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Obtencion de Cultivos Puros
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OBTENCION DE CULTIVOS PUROS TRABAJO PRÁCTICO No. 11 Al estudiar la microbiota del cuerpo, suelo o cualquier otro ambiente, descubrimos que los microorganismos existen en poblaciones mixtas; en raras ocasiones como especies aisladas. Para estudiar las características culturales, morfológicas y fisiológicas de una especie, es necesario separarla de otros microorganismos que comparten su hábitat, en otras palabras, debemos obtener un cultivo puro. Entre los métodos frecuentemente utilizados para la obtención de un cultivo puro se encuentran las técnicas de rayado y vaciado; ambas involucran la disminución en concentración de los microorganismos para seleccionar la especie de interés. MÉTODOS o MÉTODO POR VACIADO Consiste en diluir la cantidad de bacterias contenidas en un volumen determinado. Colocando un mililitro de la suspensión de bacterias en una caja de Petri y posteriormente agregando agar nutritivo fundido y enfriado a 45°C. Con la finalidad de obtener colonias aisladas para purificarse posteriormente. o MÉTODO DE RAYADO Este método es útil cuando se desea economizar tiempo y materiales, requiere de cierta habilidad y destreza, las que se adquieren con la experiencia
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Informacion sobre cultivos puros
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OBTENCION DE CULTIVOS PUROS
TRABAJO PRÁCTICO No. 11
Al estudiar la microbiota del cuerpo, suelo o cualquier otro ambiente, descubrimos que los
microorganismos existen en poblaciones mixtas; en raras ocasiones como especies aisladas.
Para estudiar las características culturales, morfológicas y fisiológicas de una especie, es
necesario separarla de otros microorganismos que comparten su hábitat, en otras palabras,
debemos obtener un cultivo puro.
Entre los métodos frecuentemente utilizados para la obtención de un cultivo puro se
encuentran las técnicas de rayado y vaciado; ambas involucran la disminución en
concentración de los microorganismos para seleccionar la especie de interés.
MÉTODOS
o MÉTODO POR VACIADO
Consiste en diluir la cantidad de bacterias contenidas en un volumen determinado.
Colocando un mililitro de la suspensión de bacterias en una caja de Petri y
posteriormente agregando agar nutritivo fundido y enfriado a 45°C. Con la finalidad de
obtener colonias aisladas para purificarse posteriormente.
o MÉTODO DE RAYADO
Este método es útil cuando se desea economizar tiempo y materiales, requiere de
cierta habilidad y destreza, las que se adquieren con la experiencia
Punto de inoculación.
Sentido del rayado.
Otro factor importante para la obtención de cultivos puros es emplear diversos medios de
cultivo, con la finalidad de aislar, almacenar e identificar microorganismos. Entre estos
medios podemos mencionar:
o Medios de cultivo enriquecido: cuya función es ayudar al crecimiento de los
microorganismos, entre los que se encuentran agar nutritivo, agar tipticasa soya y caldo
BHI.
o Medios de cultivo selectivos: permiten el crecimiento de ciertas las bacterias, basándose
en condiciones en las cuales las demás no pueden crecer, como agar manitol sal y agar
Mc Conkey; en el primero se obtiene el crecimiento de microorganismos Gram positivo
como Staphylococcus aureus y en el segundo se obtiene crecimiento de microorganismos
Gram negativo, además en este medio de cultivo permite diferenciar las bacterias Gram
negativo que utilizan o no la lactosa como Escherichea coli que presenta una colonia de
color rosado o fucsia.
o Medios de cultivo de identificación: se utilizan para la determinación de la presencia de
ciertas enzimas, o la utilización de algunos compuestos, permitiendo con ello determinar
cual es la característica que presenta la bacteria al unir varios de ellos.
MATERIALES
Soporte
Cajas de Petri estériles
Asas bacteriológicas
Marcador o crayón graso
Agar nutritivo
Agar sangre
Agar Manitol sal
Agar Mc Conkey
Tubos con 20ml de agar nutritivo fundido
Cultivo mixto de 24 horas de incubación en caldo tripticasa soya de:
o Staphylococcus aureus
o Escherichia coli
o Chromobacterium violaceum
Como complemento de la práctica y para interpretar los resultados de la misma, investigar:
a) Composición b) Interpretación c) Aplicación de cada uno de los medios de cultivo
inoculados y presentarlos en cuadro, se recomienda investigar imágenes a color.
PROCEDIMIENTO
1. Preparar la mesa de trabajo, desinfectando la superficie
2. Etiquetar la superficie del fondo de una caja de Petri estéril con nombre, fecha y
material sembrado, etc.
o METODO DE VACIADO
1. Tomar 1.0ml de la muestra y agregarlo a la caja de Petri
2. Licuar un tubo de Agar nutritivo y enfriar dentro de 40 a 45C (que no queme el dorso
de la mano o la mejilla). Verter en una caja de Petri estéril en forma aséptica, rotando
luego la caja para que quede homogéneamente distribuida. Dejar reposar hasta que
el Agar endurezca e invertir la caja de Petri e incubar a 37oC por 24-48 horas. Es
necesario esperar que el Agar enfríe (45°C) para evitar la formación de vapor de
condensación en la tapadero debido a que este puede caer sobre la superficie del
medio provocando contaminación.
o METODO RAYADO
1. Tomar una azada de la muestra.
2. Tomar una caja de agar nutritivo y rayar cerca del mechero, siguiendo uno de los
métodos detallados por su instructor.
3. Incubar la caja en posición invertida a 37C por 24-48 horas.
4. Siguiendo los pasos anteriores, sembrando una caja de agar sangre, agar manitol sal,
agar Mc Conkey.
RESULTADOS
A. MÉTODO DE RAYADO
AGAR SANGRE DE CARNERO
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INTERPRETACIÓN:_____________________________________________________
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AGAR NUTRITIVO
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AGAR MANITOL SAL
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AGAR Mc Conkey
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DIFERENTES TECNICAS DE RAYADO
