Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades...
-
Upload
herminia-blancas -
Category
Documents
-
view
283 -
download
0
Transcript of Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades...
![Page 1: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/1.jpg)
Métodos de esterilización y desinfección.
Medios de cultivo.
Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales
27 de mayo de 2011
Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp
![Page 2: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/2.jpg)
Objetivo
• Que el estudiante se familiarice con los procesos de desinfección y esterilización comúnmente utilizados en un Laboratorio de Fitopatología.
• Conocer los medios de cultivo más usados.
![Page 3: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/3.jpg)
DefinicionesEsterilización = proceso mediante el cual se
matan o eliminan todas las formas de vida microbiana.
estéril o no estéril.
Desinfección = eliminar microorganismos patógenos total o parcialmente
niveles de desinfección.
Asepsia = exclusión continuada de microorganismos contaminantes.
![Page 4: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/4.jpg)
Métodos de esterilización
• FISICOS:– Calor
• seco (llama, horno)
• húmedo (autoclave)
– Radiaciones
• MECÁNICOS– Filtración
• QUIMICOS– Gaseosos
– No gaseosos
![Page 5: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/5.jpg)
Calor seco
• Esterilización directa en la llama
![Page 6: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/6.jpg)
Calor seco
alcohol 96% + mechero
![Page 7: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/7.jpg)
Calor seco
alcohol 96% + mechero
![Page 8: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/8.jpg)
Calor seco
Horno
![Page 9: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/9.jpg)
Calor seco - Horno
• Se utiliza para: vidrio seco instrumentos quirúrgicos objetos metálicos aceites, vaselinas y polvos
• Temperaturas:180 ºC ---------- 30 - 60 min.170 ºC ---------- 60 - 120 min
T ºC
horas
![Page 10: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/10.jpg)
Calor seco
• Recipientes de metal o envolver en papel (usar temp. menor en este caso)
• Dejar que vuelva a temp. ambiente antes de abrir
![Page 11: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/11.jpg)
Calor húmedo
• Con presión: autoclave, olla presión
• Para sustancias estables al calor – ¿combinaciones reactivos a temp altas?
• Temperatura – presión – tiempo
Temp. 100 110 115 121 125 130
Tiempo 20 h 2,5 h 51 min. 15 min. 6,4 min. 2,4 min.
![Page 12: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/12.jpg)
Autoclave
![Page 13: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/13.jpg)
Autoclave
Presión
(lb/in.)
Temperatura interna (ºC) según % aire eliminado
100% 66% 50% 33% 0%
5 109 100 94 90 72
10 115 109 105 100 100
15 121 115 112 109 100
25 130 126 124 121 115
30 135 130 128 126 121
![Page 14: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/14.jpg)
Calor húmedo - Autoclave
• ¿cómo optimizar eficacia? – eliminar aire,– contenidos similares, – no apretados, dejar espacios verticales,
• Precauciones: – tapas sueltas, – recipientes con hasta 1/3 de volumen, – vuelta a presión normal lenta.
![Page 15: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/15.jpg)
Controles de esterilización
a. Físicos
b. Químicosc. Biológicos
![Page 16: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/16.jpg)
Controles de esterilización
a. Físicos
b. Químicos
c. Biológicos
![Page 17: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/17.jpg)
Esterilización química
• Ventajas: no requiere altas temperaturas ni aparatos costosos
• Desventajas: mayor tiempo, sustancias inflamables y muy tóxicos y alto costo
• Ejemplos: óxido de etileno, formaldehído
![Page 18: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/18.jpg)
Esterilización por filtrado
• Elimina microorganismos >virus• Ventaja: no modifica composición• Para: cantidades pequeñas• Para: vitaminas, hormonas, antibióticos, etc.• Requiere bomba de vacío• Ejemplo membranas de ésteres de celulosa: 1 uso,
“poros” de 0,22 µm
![Page 19: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/19.jpg)
CAMPANAS DE FLUJO LAMINAR
![Page 20: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/20.jpg)
Radiaciones UV
![Page 21: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/21.jpg)
Desinfección superficial
![Page 22: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/22.jpg)
Desinfección superficial
Técnicas comunes en Fitopatología:
• Lavado previo en agua corriente – detergente? cepillo?
• Agua corriente 2 o más horas
• Alcohol 70%
• Hipoclorito de sodio: – 1% Cloro activo, 2 %, 0,35% etc.– minutos– enjuague posterior
![Page 23: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/23.jpg)
Desinfección superficial
Selección de técnica(s) según:
• tejido: grosor, consistencia
• hongo a aislar: ej. Oomycetes,
Rhizoctonia
• dónde pensamos que está el patógeno
![Page 24: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/24.jpg)
Medios de cultivo
• Componentes básicos
• ¿Sólido o líquido?
• Ajuste de pH
• Inhibidores de “contaminantes”:– bacterias – hongos no deseados
![Page 25: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/25.jpg)
Clasificación de medios de cultivo
• Sintéticos – más complicados para elaborar, muchos componentes
• Naturales – raíces y frutos aportan lo necesario para hongos, ¿bacterias necesitan más?
• Semi-sintéticos
![Page 26: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/26.jpg)
¿Qué aportan los medios?
• Soporte - Agentes solidificantes:– gelatina: fusión a 37ºC, solidifica 25-30ºC, se
descompone a 121ºC– agar: fusión a 80-100ºC, solidifica a 35-50ºC
• Carbono orgánico– Azúcares inducen crecimiento micelio, pueden inhibir
esporulación temporal- o permanentemente.
• Vitaminas y otros factores de crecimiento• Inhibidores• Sustancias que permiten diferenciar spp. o biotipos• Indicadores
![Page 27: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/27.jpg)
Medios comunes:
• Agar papa dextrosa
• Agar agua
• Agar malta
• Agar harina de maíz
• Agar V8
• Nutriente agar dextrosa
• Extracto de levadura dextrosa con carbonato de calcio (Yeast Dextrose CaC03)
• B de King
![Page 28: Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp.](https://reader033.fdocuments.mx/reader033/viewer/2022061517/5665b4441a28abb57c908e21/html5/thumbnails/28.jpg)
Dispensado de medios
• Temperatura: 45-50ºC– mayor: condensa H2O– menor: solidificación prematura
• Placas de Petri: aprox. 20 ml c/u
• Tubos de ensayo: vertical o pico de flauta