Metodología de La Investigación Seminario
3
METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA BIOLÓGICA Los especímenes serán anestesiados por vía intra-peritoneal con Ketamina 120mg/kg. Después serán decapitados: Se colocara la cabeza en papel toalla doblada y utilizando el bisturí #11, se hará una incisión en el medio, cerca del hueso nasal y corriendo en dirección caudal hasta el hueso occipital. Asegurándonos de cortar por completo a través del musculo cutáneo, y exponer los puntos de sutura en la superficie dorsal del cráneo. Se cortara a través de las placas de cráneo con tijeras de estuche de disección y sosteniendo firmemente la cabeza con las manos sobre la mesa se ingresara la parte baja de la tijera en el agujero occipital y se cortara a través de la placa occipital, y luego a lo largo de la línea media de la sutura de las placas parietales hasta la parte frontal. Se retirara con una espátula y con ayuda de una cuchara de plástico el cerebro y serán colocados en solución líquido cefalorraquídeo helado. Los cerebros se pesarán y se conservaran a -70°C hasta su análisis PREPARACION DE LA MUESTRA NEURAL La muestra neuronal será homogenizada en 8ml de Buffer 20mM de tampón fosfato de potasio helado (pH7.4) Centrifugar a 4000 rpm por 10 minutos. Recoger el sobrenadante (3ml).
-
Upload
sally-lopez-r -
Category
Documents
-
view
213 -
download
1
Transcript of Metodología de La Investigación Seminario
METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN
RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA BIOLÓGICA
Los especímenes serán anestesiados por vía intra-peritoneal con Ketamina 120mg/kg.
Después serán decapitados:
Se colocara la cabeza en papel toalla doblada y utilizando el bisturí #11, se hará una
incisión en el medio, cerca del hueso nasal y corriendo en dirección caudal hasta el
hueso occipital. Asegurándonos de cortar por completo a través del musculo cutáneo, y
exponer los puntos de sutura en la superficie dorsal del cráneo.
Se cortara a través de las placas de cráneo con tijeras de estuche de disección y
sosteniendo firmemente la cabeza con las manos sobre la mesa se ingresara la parte
baja de la tijera en el agujero occipital y se cortara a través de la placa occipital, y luego
a lo largo de la línea media de la sutura de las placas parietales hasta la parte frontal.
Se retirara con una espátula y con ayuda de una cuchara de plástico el cerebro y serán
colocados en solución líquido cefalorraquídeo helado.
Los cerebros se pesarán y se conservaran a -70°C hasta su análisis
PREPARACION DE LA MUESTRA NEURAL
La muestra neuronal será homogenizada en 8ml de Buffer 20mM de tampón fosfato de
potasio helado (pH7.4)
Centrifugar a 4000 rpm por 10 minutos.
Recoger el sobrenadante (3ml).
Llevar a Baño María por 1 hora a 37°C en oscuridad.
Luego añadir 0.02 ml de ATC al 10%
Centrifugar a 2400 rpm por 10 minutos.
DETERMINACION DE LA LIPOPEROXIDACION EN MEMBRANAS NEURONALES
Colocar en 1 ml de fracción soluble en cada tubo y mezclar con 2ml de TBA al 0.67%
Llevar a ebullición por 1 hora a 05-100°C.
Enfriar las muestras en hielo por 15 minutos.
Añadir 2.5ml de n-butanol piridina (15:1) y 0.5ml de agua.
Centrifugar a 24000 rpm por 10 minutos.
Separar la fase orgánica y realizar la lectura de las absorbancias a 532nm.
RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA BIOLÓGICA
Ketamina 120mg/kg.
papel toalla doblada bisturí #11
estuche de disección
Balanza analítica
PREPARACION DE LA MUESTRA NEURAL
Buffer 20mM de tampón fosfato de potasio helado (pH7.4)
Centrifuga
Tubos de ensayo
Papel aluminio
Baño María.
ATC al 10%
DETERMINACION DE LA LIPOPEROXIDACION EN MEMBRANAS NEURONALES
TBA al 0.67%
Llevar a ebullición por 1 hora a 05-100°C.
hielo
n-butanol piridina (15:1)
agua destilada
Espectrofotómetro
