DIAGNOSTICO INTEGRAL DE PADECIMIENTOS INFECCIOSOS

ANTECEDENTES EPIDEMIOLOGICOS SIGNOS Y SINTOMASEXPLORACION FISICA

DIAGNOSTICO PRESUNCIONAL

METODOS DE LABORATORIO

TOMA DE PRODUCTO BIOLOGICO

DIAGNOSTICO DE LABORATORIO

DIAGNOSTICO ETIOLOGICO

TOMA Y MANEJO DE MUESTRA

1. LA MUESTRA BIOLOGICA DEBE SER TOMADA SIN TRATAMIENTO CON ANTIMICROBIANO

2. LA MUESTRA TIENE QUE TENER DATOS DEL PACIENTE Y DIAGNOSTICO PRESUNTIVO.

3. EL PACIENTE DEBE TENER INDICACIONES PRECISAS PARA LA TOMA DE MUESTRA

4. LA MUESTRA DEBE SER TRANSPORTADA O PROCESADA LO ANTES POSIBLE

5. LA MUESTRA DEBE SER REPRESENTATIVA Y DE CANTIDAD ADECUADA.

INDICACIONES PARA TOMA DE MUESTRA

Debe de ser representativaCantidad adecuada para asegurar el examenContenedores estériles para disminuir al máximo la contaminación Trasportarla adecuadamente lo antes posible al laboratorioEtiquetar correctamente la muestra para su identificación

ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA

Si las muestras no se pueden procesar en cuanto se reciban deberán almacenarse a 4 ºC, a temperatura ambiente (22 ºC) o congelar (a - 20 o

-70 ºC), según el tipo de transporte o de los agentes etiológicos

Anaerobios Nunca se debe de congelarLCR Temperatura ambienteOrinaMateria fecal 4 °CCatéteresSueros -20 °CTejidos -70 °C

PRODUCTOS BIOLOGICOS.

Exudado FaríngeoAspirado NasofaríngeoExpectoraciónSangreOrinaLíquido PleuralMédula ÓseaLíquido CefalorraquídeoMateria FecalPunción TraquealSecreción ConjuntivalSecreción ÓpticaLíquido AmnióticoExudado vaginal

Importancia del exudado faríngeo.

• El empleo del laboratorio de Microbiología por la clínica, debe tener como objetivo, distinguir con claridad entre la búsqueda de estreptococos y el realizar un cultivo de rutina de garganta, para determinar la etiología de infecciones del tracto respiratorio superior.

En la interpretación de los resultados de un cultivo de EF

• Se debe tomar en cuenta: 1. Los principales agentes etiológicos de

infecciones de vías respiratorias altas.2. Los agentes etiológicos presentes en

pacientes inmunocomprometidos.3. Los que conforman con regularidad la flora

habitual de faringe y amígdalas.

Bacterias potencialmente asociadas con infecciones detectables por EF.

• Streptococcus beta hemolíticos del grupo A.• Streptococcus beta hemolíticos del grupo B.• Streptococcus pneumoniae*.• Staphylococcus aureus*.• Haemophilus influenzae.• Corynebacterium diphtheriae.• Neisseria gonorrhoeae• Bordetella pertussis.* Especies consideradas parte de la flora habitual.

Bacterias que conforman con regularidad la flora habitual de farínge y amígdalas.

• Estreptococos alfa hemolíticos• Estafilococos coagulasa negativos.• Neisseria sp.• Moraxella catarrhalis.• Veillonella sp.• Corynebacterium xerosis.• Haemophilus haemolyticus.• Enterobactereaceae (miembros)

Indicaciones para el exudado feríngeo.

•Colectar la muestra en ayuno.

•Sin previo aseo de la boca.

•Remitirlo para la detección principalmente de Streptococcus pyogenes.

Colocar el hisopo en un tubo con solución salina isotónica´estéril.

Entregar las muestras al laboratorio en un lapso no mayor a 24 hrs

Mantenerlas a temperatura ambiente

Toma de muestra.

• Pedir al paciente que abra la boca.• Descender suavemente la lengua con el

abatelenguas.• Introducir el hisopo estéril hacia la faringe

posterior.• Pasar suave y rapidamente el hisopo arriba y

abajo, por detrás de la úvula y entre los pilares tonsilares.

1. Con un lápiz graso marcar tres sectores por detrás de la caja que contiene el medio de cultivo.

2. Con un hisopo, tomar un producto (exudado, raspado, secreción) de la región anatómica seleccionada.3. Con la mano izquierda levantar parcialmente la tapa de la caja de Petri, y sembrar trazando una serie de líneas en zigzag muy cerradas a todo lo ancho del sector 1. Después de descargar la muestra, quemar el hisopo y desecharlo.

4. Esterilizar el asa en el mechero y enfriarla.

5. Girar la caja 90⁰, hasta que el sector 1 quede a la izquierda y el sector 2 hacia arriba.6. Con el asa trazar un zigzag, en el sector 2.

7. Girar nuevamente la placa 90⁰, ahora el sector 2 estará a la izquierda y sector 3 a la derecha.

8. Hacer un nuevo zigzag en el sector 3, invadiendo el sector 2. Este paso puede repetirse, sembrando un cuarto sector

9. Incubar las cajas a 37⁰ C durante 24 h.

ESTRIACION EN PLACA

1. TAMAÑO: DIAMETRO DE LA COLONIA EN mm.

2. FORMA: PUNTIFORMES, CIRCULARES, FILAMENTOSA, IRREGULAR, RIZOIDE, FUSIFORME.

3. ELEVACION: COLONIA PLANA, ELEVACION, CONVEXA, MONTICULAR, UMBILICADA.

4. MARGEN (BORDE DE LA COLONIA) ENTERO, ONDULADO, LOBULADO, ASERRADO FILAMENTOSO, RIZADO.

5. COLOR DE COLONIA: BLANCO, AMARILLO, NEGRO, ANTE, NARANJA.

MORFOLOGIA DE LAS COLONIAS DE LAS BACTERIAS

6. SUPERFICIE (LUZ REFLEJADA): BRILLANTE MATE.

7. DENSIDAD (LUZ TRANSMITIDA): OPACA, TRASLUCIDA, TRANSPARENTE.

8. CONSISTENCIA DE LA COLONIA: BUTIROSA, VISCOSA, MEMBRANOSA, QUEBRADIZA.

FORMA DE LAS BACTERIAS

COCO BACILO

ESPIRILOS

A) BORRELIA B) TREPONEMA

C) LEPTOSPIRA

AGRUPAMIENTO DE LAS BACTERIAS COCOS

DIPLOCOCO ESTREPTOCOCO TETRADA

SARCINA ESTAFILOCOCO

BACILOS

DIPLOBACILO ESTREPTO BACILO EMPALIZADA

PARED BACTERIANA

GRAM+ GRAM –

-ACIDOS TEITOICOS + -(EJEM. ACIDO MURAMICO)

-LIPIDOS

-AMINOACIDOS

PROCEDIMIENTO

1. Cubrir los frotes con cristal violeta, durante un minuto.

2. Lavar con agua corriente, ligeramente.

3. Cubrir con lugol, durante un minuto.

4. Lavar con agua corriente, ligeramente.

5. Decolorar con la mezcla alcohol-acetona (5 a 6 gotas).

6. Lavar con agua corriente, ligeramente.

7. Cubrir con safranina (colorante de contraste), durante treinta segundos.

8. Lavar con agua corriente.

9. Secar al aire libre.

10. Observar al microscopio con objetivo de 100 X

.

TINCION DE GRAM

Cultivo de exudado faríngeo.Cultivo Faríngeo

Streptococcus pyogenesStreptococcus grupo AStreptococcus pneumoniaeStaphylococcus aureus metl resist

Haemophilus influenzae

Neisseria meningitidis

Branhamella catarrhalis

Staphylococcus aureus

Morfología- cocos- bacilos

Agrupación- Cadenas-En pares

-En racimos-Palizadas

Tinción

Gram

positivo

negativo

Agar sangre

Agar chocolate

Agar Sal manitol

Medios de cultivo

Incubación a 35°CMicroaerof ilia y aerobiosispor 24 a 48 horas

Morfología colonial

Hemolisis

Satelitismo

Pruebas Bioquímicas y serológicas

Oxid

asa, C

ata

lasa, Co

ag

ula

sa

Pruebas de susceptibilidad

Ba

citr

acin

a, o

pto

quin

a. C

AM

P

MEDIOS DE TRANSPORTE

GELOSA SANGRE GELOSA CHOCOLATE(ENRIQUECIDO)

BIGGY CANDIDA SP.COLONIAS CAFÉ OSCURO Y NEGRAS

INOCULAR CON EL HISOPOSEMBRAR POR ESTRIAS PARAAISLAMIENTO Y HACER PICADURA EN EL MEDIOCON EL ASA. INCUBAR A37 ⁰C 24 HORAS.

IDENTIFICACION DE NEISSERIA SP.MORFOLOGIA COLONIALGRAM, PRUEBA DE OXIDASAS

IDENTIFICACION DE STREPTOCOCCUS POR SU MORFO-LOGIA COLONIAL, FORMA Y AGRUPAMIENTO. GRAM YTIPO DE HEMOLISIS.

STREPTOCOCCUS BETA HEMOLITICO

GELOSA MANITOL

INOCULAR CON ELHISOPO, ESTRIASPARA AISLAMIENTO;INCUBAR A 37 ⁰C 24 HORAS

IDENTIFICCION DE STAPTHYLOCOCCUSOBSERVACION DE LA MORFOLOGIACOLONIA, TINCION DE GRAM Y FERMENTACION DE MANITOL.REALIZAR LA PRUEBA DE COAGULACION

COAGULASA + COAGULASA –MANITOL + MANITOL –

S. AUREUS S. EPIDERMIDIS

COAGLUTINACIONPRUEBA BACITRACINA

HALO DE INHIBICION; BACITRACINASENSIBLE STREPTOCOCCUS GRUPO A

SIN HALO DE INHIBICION;BACITRACINA RESISTENTESTREPTOCOCCUS NO GRUPO A

Agar Sal Manitol (rojo de fenol)

• Medio selectivo para la demostración de Estafilococos patógenos

• La concentración alta de sales permite solamente el crecimiento de microorganismos como Staphylococcus sp.

• El empleo del manitol y la producción de ácido, sirven como indicadores de identificación de S. aureus

FERMENTACION DEL MANITOL

Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis

+ -

COLONIAS AMARILLAS COLONIAS BLANCAS

No fermenta manitol Si fermenta manitol

Fermentación de manitol

La prueba de la coagulasa es usada específicamente para diferenciar las especies del genero

Staphylococccus:

TECNICA EN TUBO

En un tubo de 13 x 100 estéril mezclar 0.5 ml  de plasma humano o de conejo y una

asada grande de la bacteria aprobar. Rotar suavemente el

tubo sin sacudir.

Incubar a 35 grados C de 4-6 horas, observe cada 30 minutos

Agar chocolate.

• Su empleo permite el aislamientos adecuado de cocos Gram positivos, Haemophilus influenzae y neiserias.

Sensibilidad a bacitracina.

• Uso: identifica a estreptococos del grupo A de Lancefield.

• En colonias que presente β hemólisis.• Se emplea un disco impregnado con 0.02-

0.04U.• Usar agar sangre de carnero.• Incubación a 35°C, durante 18 a 24 horas.

Prueba de sensibilidad a bacitracina. Las bacterias de la izquierda se identifican como presuntos estreptococos del grupo A por la inhibición por el antibiótico bacitracina. Las bacterias de la derecha (Enterococcus faecalis) son resistente a la bacitracina.

Estreptococo del grupo B (reacción positiva):

Estreptococo del grupo A (reacción negativa)

IDENTIFICACION DE ESTREPTOCOCO DE GRUPO B Identificación: Reacción de CAMP (Christie, Atkins, Munch-Petersen) con Estreptococo del grupo B (Streptococcus agalactiae). Los estreptococos del grupo B producen una proteína difusible y termoestable (factor CAMP) que incrementa la Beta-hemólisis de Staphylococcus aureus. La cepa hemolítica de S. aureus produce un esfingomielinasa C (Beta lisina) que se une a las membranas de los eritrocitos. Cuando son expuestas al factor CAMP del grupo B, se observa un incremento en la hemólisis en forma de punta de flecha en dirección al cultivo de S. aureus.

PRUEBA DE CAMP

COAGLUTINACION

-METODO SIMPLE Y RAPIDO-AGLUTINACION DE ESTREPTOCOCO DE GRUPO A CON AC ESPESIFICOS UNIDOS A ESTAFILOCOCO

-EL ACOPLAMIENTO SE LLEVA A CABO ENTRE LA PROTEINA - A - DEL ESTAPILOCOCO Y LA FRACCION FC DEL AC -COLONIAS AISLADAS DEL ESTREPTOCOCO BETA HEMOLITICO DEL PACIENTE SON EL ANTIGENO Y SE LE AGREGA EL ESTAFILOCOCO. -FORMACION DE GRUMOS INDICA +

SOLUBILIDAD EN BILIS

COLONIAα HEMOLIS + SAL

BILIARDESINTEGRACIONDE LA COLONIA

• Sensibilidad a la bilis del neumococo. El tubo de la izquierda y el del centro contienen cultivos de neumococo (Streptococcus pneumoniae). El tubo de la derecha contiene estreptococos del grupo A (resistentes en bilis). Se añadió 0.1 mL de desoxicolato a los tubos del centro y de la derecha, y 0.1 mL de agua destilada al tubo de la izquierda. Los neumococos del centro son sensibles a la acción de la bilis en desoxicolato, como indica la suspensión transparente. Las bacterias de la ' derecha no son sesibles a la bilis, y ello se demuestra por la turbidez.

Sensibilidad a la optoquina. Un disco de optoquina sobre agar sangre inhibe específicamente a los neumococos. La prueba de la optoquina para Streptococcus pneumoniae se basa en producción de la zona de inhibición.

Prueba de Quellung

Bacteria + suero anti polisacárido

hinchamiento de la capsula

En una caja Petri colocar una tira de papel filtro.

Agregar una gota del reactivo de oxidasa.

Tomar una asada del cultivo con aplicador de madera y colocar sobre la superficie húmeda.

Esperar 1 minuto como máximo para observar la coloración "morada o verde oscuro" de la zona

PRUEBA DE LA OXIDASA

PRUEBA DE LA CATALASA

H ₂ 0 ₂ CATALASA

PEROXIDO DE HIDROGENO

2 H ₂ 0 + 0 ₂ GAS LIBERADO

El peróxido de hidrogeno se forma como un producto terminal de la descomposición aeróbica de los azúcares

La enzima catalasa se encuentra en la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativasque contienen citocromo

• BIBLIOGRAFIA

PRUEBAS BIOQUIMICAS PARA LAIDENTIFICACION DE BACTERIAS

DEIMPORTANCIA CLINICA

JEAN F. MAC FADDINED. PANAMERICANA