Material de Estudio Microbiología
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TÉCNICAS DE CONTEO
BACTERIANO
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Conteo bacteriano
CARACTERÍSTICASSeñala la magnitud
de la población totalde microorganismos.
Los númerosobtenidos deben ser
calificados por latécnica.
Cada uno de losmétodos esdiferente.
Bacterias psicrófilas obacterias anaerobiasestrictas técnicas
especiales
Ocasionalmente constituyentes
químicos BIOMASA
Colonias rojo violeta típicas del crecimiento de Enterobacterias
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PROCESOS
Definir los microorganismos a ser cuantificados
No se debe aplicar un método universal a cualquiermicroorganismo o hábitat
Dividir las tres fases: muestreo, procesado de muestras, y
el proceso de recuento.
Considerar el conteo para la interpretación de losresultados
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Recuento de células totales
Recuento
Microscópico
directo
En
muestrassecas
Deben teñirse
En muestraslíquidas
Cámaras derecuento
(Petroff-Hausser)
Citómetro de flujo
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Métodos directos
Métodos directos
FiltraciónCuando la cantidadde bacterias es muy
baja
NMP Los organismospor contar no
crecen en unmedio sólido.
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PEtroff Hauser
Imagen 1
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VENTAJAS:• No requiere un tiempo de incubación.
• Válida para los contadores electrónicos de células.
DESVENTAJAS:• Bacterias móviles son difíciles de contar.
• Células muertas presentan un aspecto similar al de
las vivas.• Concentración bastante elevada de células.
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Recuento de células viables
• La célula viable es aquellacapaz de dividirse y formar unacolonia en el medio de cultivo.
• Se basa en que cada colonia
surge de una simple célula.• Posee dos enfoques
(Métodos) básicos
Imagen 2
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1) Recuento en placa
método determinael número decélulas de la
muestra
formar colonias
sobre un mediosólido
mide el número decélulas viables
Procedimientopostula
cada célula viablepuede crecer y
dividirseformar una colonia
Desventajarequieren bastantetiempo lapso de 24
h
observación decolonias visibles
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2)Vertido en placa
• Esta técnica se usa generalmente para bacterias aerobiasobligatorias.
Imagen 3
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Imagen 4
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Métodos indirectos
• BASADOS EN POBLACIONES BACTERIANAS YACTIVIDAD DE LAS MISMAS
M. Turbidez
Imagen 5
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Turbidimetría
• “Turbidez” medida pormedio de unespectrofotómetro ocolorímetro
• Cantidad de luz quealcanza una célulafotoeléctrica
• No es un método útil paramedir la contaminación
en un líquido
Imagen 6
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Actividad Metabólica
• La cantidad de ciertoproducto metabólico (Ej.CO2) es directamente
proporcional a lacantidad de bacteriaspresentes.
Imagen 7
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Peso en seco
• Se extraen los hongos filamentosos o bacterias
• Se filtran de materiales extraños
• Se secan en un desecador
•
Se procede a pesar
Imagen 8
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TEMPERATURA Y CRECIMIENTO
L t t f t l l id d d
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La temperatura afecta a la velocidad decrecimiento
Cada bacteria muestra una curvacaracterística de tasa de crecimiento enfunción de la temperatura.
Donde podemos distinguir tres puntoscaracterísticos llamados temperaturascardinales
La temperatura ejerce dostipos de efectos opuestossobre los organismos vivos.
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CLASES DE MICROORGANISMOS SEGÚN LA TEMPERATURA
Cada especie bacteriana tiene temperaturas cardinales distintas. Según elrango de temperaturas al que pueden crecer las distintas bacterias, se puedenestablecer 4 tipos principales:
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Microorganismos psicrófilos
•Crecen a partir deentre -5 a 5ºC.•Temperaturas bajasóptimas.•Enzimas resistentes al
frío.•Gran cantidad deácidos grasosinsaturados en lamembrana plasmática
Existen colonias creciendo a los 0°c perono crecen bien a esa temperatura.
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Psicrófilasobligadas
Tienen unatemperatura
óptima de 0-18ºC
Flavobacterium,Tiene un crecimiento
óptimo 13°C
Psicrófilasfacultativas o
psicrotolerantes OPSICRÓTROFAS
Tienen unatemperatura óptima
en torno a los 20-30ºC y máximas a los 35ºC.
Bacterias y hongospsicrotrofos
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Microorganismos
mesófilos
• Temperaturas óptimas a los 25-40ºC y máximas entre 35 y 47ºC.•
Microorganismos que viven en ambientestemplados y tropicales.• Los simbiontes y parásitos, pertenecen a estacategoría.
Escherichia coli, Tieneuna temperatura
mínima es de 8°C,óptima de 39°C ymáxima de 48°C.
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MicroorganismosTermófilos
• Únicas capaces de vivir por encima de 65ºCson todas procariotas.• Presentan temperaturas óptimas a 50-75ºC y
máximos entre 80 y 113ºC.
•Hipertermófilas.•Pueden presentar óptimoscercanos a los 100ºC.•Taxonómicamente pertenecenal dominio de las Archaea.
Termófilas
extremas
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Microorganismoshipertermófilos
•Especies Quimioorganótrofas yQuimiolitótrofas.
• Velocidades de crecimiento rápidas y
tiempo de generación cortos (1h).• Archaeas > 100 o C→ cámaraspresurizadas
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OXÍGENO Y CRECINIENTOBACTERIANO
• Formas de vida
• Hábitats microbianos anóxicos como:
-Fangos
-Pantanos-Suelos forestales inundados
-Vertidos de aguas negras
-Zonas profundas de la corteza terrestreEn estos hábitats anóxicos proliferanmicroorganismos, particularmente procariotas.
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TIPOS DE
MICROORGANISMOS CONRELACIÓN AL OXIGENO
Microorganismos son muy variados encuanto a la necesidad o tolerancia deloxígeno.
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DEPENDIENDO DEL EFECTO DEL
OXÍGENOAEROBIOS
• Son especies capaces de crecer a tensiones normales deoxígeno
• Respiran oxígeno en su metabolismo• Muchos aerobios pueden tolerar concentraciones mas elevadas
de oxigeno (oxígeno hiperbárico)
Clasificación
-Microaerofilos-Obligados o estrictos-Facultativos
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AEROBIOS MICROAEROFILOS
Usan el oxígeno a niveles mas bajos que en el aire(requieren alrededor de 12%)
Causas-Limitada capacidad para respirar
-Portan alguna molécula sensible al oxígeno
Fig.1
Fig.2
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AEROBIOS FACULTATIVOS
A condiciones apropiadas nutritivas y de cultivopueden crecer en condiciones:
-óxicas
-anóxicas
Fig.3 Fig.4
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AEROBIOS OBLIGADOS O
ESTRICTOS
Microorganismos que necesariamente requierenoxígeno para su crecimiento.
Fig.5
Fig.6
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ANAEROBIOSMicroorganismos que no pueden respiraroxígeno
Clasificación
-Aerotolerantes
-Obligados o estrictos
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ANAEROBIOS AEROTOLERANTES
• Aquellos microorganismos que toleran eloxígeno
•
Pueden crecer en presencia de oxígeno• No pueden usarlo
Fig.7
Fig.8
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ANAEROBIOS OBLIGADOS O
ESTRICTOSMueren en presencia de oxígeno
Hipótesis de su mortalidad:
•
Puede deberse a que son capases de eliminar algunosproductos que se originan en el metabolismo del oxígeno
Fig.9
Fig.10
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CRECIMIENTO DE MICROORGANISMOS SEGÚN SU NECESIDADDE OXÍGENO
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CRECIMIENTO MICROBIANO Y PH
• El ph es una funciónlogarítmica: cambio de 10
veces en la concentración dehidrogeniones.
• Ph neutro: =7
• Ph ácido: <7
•
Ph básico o alcalino: >7
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Cada microorganismo tiene unrango de ph óptimo bien definidopara su crecimiento. Los ambientes naturales: ph 4-9
Pocas especies crecen por debajode 3 o por encima de 9 en ph.
Clasificación de bacterias según su ph:
Ácidófilos
Alcalófilos
Neutrófilos
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ACIDÓFILOS
Organismos que crecen en ph bajo,generalmente hongos: ph 5 o inferior.
Acidófilos obligados: incapaces de creceren ph neutro.
Algunas especies:
Archaea: Sulfolobus, Thermoplasma yFerroplasma
Procariota+Acidófilo: Picrophilus oshimae(Ph 0.7)
Picrophilus oshimae
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características
Lactobacillus acidophilus (probiótico).
La acidez y la solubilidad del metal que producen las bacteriasacidófilas desempeñan una función benéfica en minería.
Las bacterias Lactobacillus acidophilus tienen un crecimiento óptimo
en niveles bajos de pH, causando infecciones vaginales. Producen caries.
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ALCALÓFILOS
Ph óptimo de crecimiento elevado: ph 10
Se encuentran en hábitats como: lagos
sódicos, suelos ricos en carbonatos. Alcalófilos mejor estudiados: Bacillus
firmus
Amplio rango de crecimiento: 7.5-11 ph
Son también alófilos (amantes de la sal) Bacillus firmus
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APLICACIONES
• Enzimas Microbianas
• Proteasas y Lipasas
• Tienen aplicación industrial: Aditivos de detergentesdomésticos.
• Bacillus licheniformis
• Catalasas:
• Industria alimentaria: fermentación
• Industria textil: proceso de secado
• Vibrio cholerae causa el cólera en los seres humanos.
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NEUTRÓFILOS
El citoplasma permanece neutroo próximo a la neutralidad. pH óptimo: 6-8
Intercambian potasio porprotones mediante un sistematransportador del tipo antiporte. Incluyen la mayoría de las
especies de microalgas y otrosorganismos que forman elfitoplancton , así como algunas
bacterias y levaduras que vivenen el suelo.
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tampones
Sustancias amortiguadoras quemantienen el ph relativamenteconstante.
Se usan diferentes tampones paramantener diferentes valores de ph.
Por ejemplo: Fosfato potásico(KH2PO4), Carbonato Cálcico (CaCO3).
Péptidos y Aminoácidos de los medioscomplejos también tienen un fuerte
efecto amortiguador de pH.
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EFECTO OSMÓTICOS SOBRE EL CRECIMIENTO BACTERIANO
Agua determina crecimiento de microorganismos.
Depende concentración de solutos.
Disponibilidad del agua se expresa como actividad de agua.
Agua se difunde desde regiones de alta a baja concentración de agua.
Balance de agua positivo.
Actividad hídrica y osmosis
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Halófilos y organismos relacionados
Microorganismos tienen generalmente dependencia por NaCl.
Hálófilos: Necesitan NaCl.
Discretos y moderados.
Mayoria de microorganismos no prosperan en ambientes Halófilos.
Halotolerantes: Crecen mejor en ausencia de solutos.
Organismos con baja actividad hídrica son importantes para industriaalimenticia.
Halófilos extremos: ambientes salinos.
Osmófilos: alta concentración de azucares. Xerófilos: ambientes muy secos.
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Solutos compatibles
Organismos en un medio con baja actividad hídrica obtienen aguaaumentando su concentración de solutos
Son sustancias orgánicas de bajo peso molecular utilizados pararegular el equilibrio osmótico que no deben inhibir procesos
bioquímicos Azúcares, alcoholes derivados de azúcares, aminoácidos y derivados
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VIROLOGÍA
GENERALIDADES
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Un virus es un conjunto de genes,compuestos de ADN o ARN. Unamembrana de lípidos de doble capaexterna al recubrimiento a la se llamaenvoltura. Los virus más pequeños, lostamaño virión (parvovirus) tienen cerca de20nm de diámetro, mientras que los virushumanos de mayor tamaño (poxvirus)tienen un diámetro aproximado de 300nm.
La partícula viral completa resultantese denomina virión. Los virus sehacen parásitos intracelulares
obligados los virus no tienen núcleo,citoplasma, mitocondria u organeloscelulares solo se reproducen en elinterior de células vivas
Su organización simple y acelularLa presencia de ADN o ARN perono ambos en la mayoría deviriones con algunas excepciones.
Su capacidad para reproducirse deforma independiente de lascélulas.
Fig 1 Fig2 2
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Fig# 1
Fig# 2 6
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