Manual Para Laboratorio

iMANUAL PARAANLISIS BSICOS DE

CALIDAD DEL AGUA DE BEBIDA

Biloga Margarita Aurazo de Zumaeta

Lima, 2004

OPS/CEPIS/PUB/02.93Original: espaol

ii MANUAL PARA ANLISIS BSICOS DE CALIDAD DE AGUA DE BEBIDA

DE LA AUTORA

Margarita Aurazo de Zumaeta

Biloga graduada en la Universidad Nacional Mayor de San Marcos y con estudios de maestra enecologa. Con experiencia profesional en proyectos de investigacin relacionados con el ambiente,con nfasis en aspectos biolgicos del tratamiento de aguas por medio de lagunas de estabilizacin,reso de aguas en agricultura y acuicultura, diseo de programas de control de calidad de aguas resi-duales, evaluacin sanitaria de agua potable, superficial y residual y estudios de impacto ambiental.

Entre las instituciones en las que ha laborado estn la Universidad Nacional Mayor de San Marcos,el Centro Panamericano de Ingeniera Sanitaria y Ciencias del Ambiente y la Direccin General deSalud Ambiental. Ha participado en proyectos ambientales apoyando a entidades nacionales einternacionales. Actualmente se desempea como consultora independiente.

Centro Panamericano de Ingeniera Sanitaria y Ciencias del Ambiente, 2004

El Centro Panamericano de Ingeniera Sanitaria y Ciencias del Ambiente (CEPIS/OPS) se reservatodos los derechos. El contenido de este documento puede ser reseado, reproducido o traducido,total o parcialmente, sin autorizacin previa, a condicin de que se especifique la fuente y de que nose use para fines comerciales.

El CEPIS/OPS es una agencia especializada de la Organizacin Panamericana de la Salud(OPS/OMS).

Los Pinos 259, Urb. Camacho, Lima, PerCasilla de correo 4337, Lima 100, PerTelfono: (511) 437 1077Fax: (511) 437 [email protected]://www.cepis.ops-oms.org

IlustracionesMarisol Zumaeta AurazoIvn Moratillo Andrade

iii

Presentacin

Es de pblico conocimiento que las enfermedades de transmisin hdrica(diarreas, parasitosis, disenteras) mantienen desde hace demasiado tiempo en AmricaLatina y el Caribe tasas de morbimortalidad inaceptables en las sociedades modernas.

Existen tecnologas de tratamiento de agua que podran reducir a valores nfi-mos tales enfermedades y, de hecho, en los pases desarrollados esto es lo que ocurre.

En la Reunin Cumbre de Gobiernos, realizada en Santa Cruz de la Sierra en1996, a partir de la declaracin denominada Iniciativa 47, los jefes de Estado de lospases de la Regin de Amrica Latina y el Caribe solicitaron a la Organizacin Paname-ricana de la Salud/Organizacin Mundial de la Salud (OPS/OMS) el apoyo para quelos pases del rea pudieran hacer frente al problema de las enfermedades hdricas.

As, a partir de 1998, la OPS/OMS genera una serie de acciones, entre lascuales destacan un Plan Regional de Mejoramiento de la Calidad del Agua y, a partir dela actividad del rea de Calidad del Agua del Centro Panamericano de Ingeniera Sani-taria y Ciencias del Ambiente (CEPIS/OPS), la produccin de una serie de herramien-tas de gestin guas, manuales, metodologas, etc., que pretenden aportar las nue-vas visiones y mtodos para dar batalla al problema de las aguas no seguras para lasalud.

Entre esas herramientas figuran las directrices para elaborar normas de calidaddel agua y guas para desarrollar programas de vigilancia y control de la calidad del aguapara consumo humano. En ese marco, la presente obra, Manual para anlisis bsicos decalidad del agua de bebida, aporta la cuota necesaria en una de las reas fundamentalesrelacionadas con todo programa de vigilancia y control.

El documento se concentra en la realizacin de anlisis en los niveles bsicosdentro de los programas de monitoreo, que son los niveles que cualquier pas deberaaprobar para iniciar sus proyectos y acciones.

iv MANUAL PARA ANLISIS BSICOS DE CALIDAD DE AGUA DE BEBIDA

El presente documento servir sin duda a los pases y a las instituciones relacio-nadas con el agua de bebida para mejorar su control y propender a una mejor calidaddel agua y a una mejor salud de la poblacin.

Se destaca y agradece el importante aporte en la redaccin de esta obra de laBiloga Margarita Aurazo de Zumaeta, experta laboratorista y funcionaria delCEPIS/OPS durante una larga y exitosa carrera, as como las sugerencias y aportes delos siguientes funcionarios del Centro: Qum. Mara Luisa Esparza, Qum. Vilma Mori,Biloga Carmen Vargas e Ing. Ricardo Rojas.

Ing. Felipe SolsonaAsesor Regional en Calidad del Agua

CEPIS/OPS

vCONTENIDO

Presentacin ...................................................................................................................... iii

PRIMERA PARTE

PROGRAMAS DE VIGILANCIA DE LACALIDAD DEL AGUA DE NIVEL BSICO

Introduccin .................................................................................................................... 3

CAPTULO 1EL NIVEL BSICO

1. La problemtica de la calidad del agua en el medio rural ........................... 52. Los programas de vigilancia y control de la calidad del agua .................... 63. Alcance del nivel bsico dentro de los niveles programticos .................... 7

3.1 Evaluacin fisicoqumica y microbiolgica ......................................... 83.2 Inspeccin sanitaria .................................................................................. 9

4. Realidades, requerimientos y estrategias .......................................................... 9

CAPTULO 2DETERMINACIN DE LOS PARMETROS DE NIVEL BSICO

1. El concepto de anlisis bsico ........................................................................... 132. El personal y el grado de capacitacin requeridos ........................................ 143. Dnde realizar las determinaciones ................................................................. 15

vi MANUAL PARA ANLISIS BSICOS DE CALIDAD DE AGUA DE BEBIDA

4. Equipos y material mnimo de laboratorio .................................................... 154.1 Equipos y materiales mnimos para un laboratorio bsico .............. 15

5. Medios de cultivo y reactivos qumicos .......................................................... 176. Control de calidad analtica ................................................................................ 18

6.1 Plan de aseguramiento de la calidad .................................................... 18

CAPTULO 3ADMINISTRACIN DE UN LABORATORIO DE NIVEL BSICO

1. Organizacin, orden y medidas de higiene ..................................................... 211.1 Buenas prcticas de laboratorio ............................................................ 22

2. Adquisicin, disponibilidad y reposicin del material, reactivos y equipos 233. Costos por anlisis ............................................................................................... 244. Sostenibilidad econmica de un laboratorio de nivel bsico ...................... 245. Produccin y manejo de la informacin analtica ......................................... 24

CAPTULO 4TOMA DE MUESTRAS

1. Tcnicas de muestreo .......................................................................................... 271.1 Recoleccin de muestras de una corriente de agua, aguas con es-

caso o nulo movimiento o almacenada en depsitos ....................... 291.2 Recoleccin de muestras de pozos excavados y fuentes similares . 291.3 Muestreo de un grifo o de la salida de una bomba .......................... 31

2. Preservacin de las muestras ............................................................................. 333. Transporte de las muestras: embalaje y envo ................................................ 34

SEGUNDA PARTE

PROCEDIMIENTOS ANALTICOS DE LOSPARMETROS DE NIVEL BSICO

Introduccin ..................................................................................................................... 37

CAPTULO 5PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO

1. Determinacin de indicadores de calidad sanitaria del agua: coliformestotales y termotolerantes .................................................................................... 39

vii

1.1 Introduccin ............................................................................................. 392. Anlisis bacteriolgicos de los parmetros de la calidad sanitaria del agua

de bebida: coliformes totales y termotolerantes ........................................... 402.1 Mtodo de filtro de membrana. Mtodo tradicional ....................... 41

2.1.1 Introduccin .................................................................................. 412.1.2 Equipos y material ....................................................................... 422.1.3 Soluciones y medios de cultivo ................................................. 432.1.4 Procedimiento analtico .............................................................. 442.1.5 Lectura y verificacin .................................................................. 502.1.6 Presentacin de resultados ......................................................... 51

2.2 Mtodo del Nmero Ms Probable por tubos mltiples. Mtodotradicional .................................................................................................. 522.2.1 Introduccin .................................................................................. 522.2.2 Equipos y material ....................................................................... 532.2.3 Soluciones y medios de cultivo ................................................. 542.2.4 Preparacin de material .............................................................. 542.2.5 Procedimiento analtico .............................................................. 552.2.6 Pruebas confirmativas ................................................................. 572.2.7 Siembra de 10, 1 y 0,1 mL de muestra ................................... 592.2.8 Clculo del Nmero Ms Probable ......................................... 612.2.9 Casos que pueden presentarse ................................................... 642.2.10 Presentacin de resultados ......................................................... 64

2.3 Mtodo de presencia-ausencia .............................................................. 652.3.1 Introduccin .................................................................................. 652.3.2 Equipos y material ....................................................................... 652.3.3 Soluciones y medios de cultivo ................................................. 662.3.4 Procedimiento analtico .............................................................. 662.3.5 Lectura ........................................................................................... 702.3.6 Presentacin de resultados ......................................................... 70

2.4 Mtodo de presencia-ausencia con sustrato enzimtico ................... 702.4.1 Introduccin .................................................................................. 702.4.2 Equipos y material ....................................................................... 712.4.3 Soluciones y medios de cultivo ................................................. 722.4.4 Procedimiento analtico .............................................................. 722.4.5 Lectura ........................................................................................... 742.4.6 Presentacin de resultados ......................................................... 75

2.5 Mtodo rpido. Tcnica de filtro de membrana con agar m-7 ho-ras FC......................................................................................................... 752.5.1 Introduccin .................................................................................. 752.5.2 Equipos y material ....................................................................... 752.5.3 Soluciones y medios de cultivo ................................................. 772.5.4 Procedimiento analtico .............................................................. 77

CONTENIDO

viii MANUAL PARA ANLISIS BSICOS DE CALIDAD DE AGUA DE BEBIDA

2.5.5 Lectura ........................................................................................... 822.5.6 Presentacin de resultados ......................................................... 82

3. Determinacin de los parmetros fisicoqumicos bsicos ........................... 833.1 Determinacin de cloro residual. Mtodo de titulacin con DPD 84

3.1.1 Introduccin .................................................................................. 843.1.2 Equipos, materiales e insumos ................................................... 843.1.3 Reactivos y soluciones ................................................................. 853.1.4 Procedimiento analtico .............................................................. 863.1.5 Presentacin de resultados ......................................................... 87

3.2 Determinacin de cloro libre residual y combinado. Mtodo co-lorimtrico con ortotolidina-arsenito (OTA) por comparacin vi-sual .............................................................................................................. 883.2.1 Introduccin .................................................................................. 883.2.2 Equipos, materiales e insumos ................................................... 893.2.3 Reactivos y soluciones ................................................................. 893.2.4 Procedimiento analtico .............................................................. 913.2.5 Presentacin de resultados ......................................................... 92

3.3 Determinacin de pH. Mtodo electromtrico ................................ 933.3.1 Introduccin .................................................................................. 933.3.2 Equipos, materiales e insumos ................................................... 933.3.3 Reactivos y soluciones ................................................................. 943.3.4 Procedimiento analtico .............................................................. 943.3.5 Presentacin de resultados ......................................................... 95

3.4 Determinacin de la turbiedad. Mtodo nefelomtrico .................. 963.4.1 Introduccin .................................................................................. 963.4.2 Equipos, materiales e insumos ................................................... 963.4.3 Reactivos y soluciones ................................................................. 973.4.4 Procedimiento analtico .............................................................. 983.4.5 Presentacin de resultados ......................................................... 99

CAPTULO 6MEDICIONES DE CAMPO

1. Determinacin de indicadores de calidad sanitaria del agua: coliformestotales y termotolerantes .................................................................................... 1011.1 Introduccin ............................................................................................. 1011.2 Mediciones de campo ............................................................................ 101

1.2.1 Tcnica de filtro de membrana ................................................. 1021.2.2 Tcnica de Nmero Ms Probable por tubos mltiples ...... 1051.2.3 Tcnica de presencia-ausencia .................................................... 106

ix

1.3 Procedimiento analtico con equipos de campo para la determina-cin de coliformes termotolerantes por la tcnica de filtro de mem-brana. Medicin de campo .................................................................... 108

1.4 Procedimiento analtico con equipos de campo para la determina-cin de coliformes termotolerantes por la tcnica de NMP portubos mltiples. Medicin de campo ................................................... 113

1.5 Procedimiento analtico con equipos de campo para la determina-cin de coliformes termotolerantes por la tcnica de presencia-ausencia. Medicin de campo ............................................................... 113

2. Determinacin de parmetros fisicoqumicos bsicos. Cloro residual,pH y turbiedad .................................................................................................... 1132.1 Introduccin ............................................................................................. 1132.2 Mediciones de campo ............................................................................ 114

2.2.1 Determinacin del cloro libre residual .................................... 1142.2.2 Determinacin del pH ................................................................ 1192.2.3 Determinacin de la turbiedad ................................................. 120

BIBLIOGRAFA................................................................................ 123

APNDICES

Apndice A. Preparacin de soluciones y medios de cultivo ................................. 127A.1 Agua de dilucin .......................................................................... 127A.2 Caldo lauril triptosa o lauril sulfato de sodio ......................... 128A.3 Caldo verde brillante lactosa bilis 2% ...................................... 129A.4 Caldo EC ...................................................................................... 129A.5 Agar Endo LES ........................................................................... 130A.6 Medio m-Endo ............................................................................ 130A.7 Medio m-FC (agar) ..................................................................... 131A.8 Agar m-7 horas FC ..................................................................... 132A.9 Medio presencia-ausencia ........................................................... 132

Apndice B. Formularios de toma de muestras ........................................................ 135B.1 Cadena de custodia ..................................................................... 137B.2 Formulario para la toma de muestras de agua y evaluacin

de la calidad del servicio para un programa de vigilanciade la calidad del agua de nivel bsico ...................................... 138

CONTENIDO

1PRIMERA PARTE

PROGRAMAS DE VIGILANCIA DE LACALIDAD DEL AGUA DE NIVEL BSICO

3INTRODUCCIN

En la primera parte de este manual se abordan aspectos generales de la vigilanciade la calidad del agua a fin de introducir al lector en el tema y presentar la relacin entreeste y la transmisin de enfermedades hdricas. Asimismo, se brinda informacin sobreel alcance de la vigilancia de nivel bsico y se detalla en qu casos es recomendable suaplicacin.

En esta parte del libro se abordan los siguientes aspectos:

La problemtica de la calidad de agua en el medio rural, donde las enfermedadesde transmisin hdrica son frecuentes. Dificultades que se presentan en la implantacin de un programa de vigilancia dela calidad del agua en el medio rural. Parmetros fisicoqumicos y microbiolgicos considerados en un programa devigilancia de nivel bsico. Capacidad analtica de los laboratorios requeridos para este tipo de programas. Metodologas de muestreo, preservacin, transporte, embalaje y envo, referidasa los parmetros propuestos para el nivel bsico de vigilancia.

5CAPTULO 1

EL NIVEL BSICO

1. LA PROBLEMTICA DE LA CALIDAD DEL AGUAEN EL MEDIO RURAL

Se estima que en Amrica Latina y el Caribe 43% de la poblacin rural no tieneacceso al abastecimiento de agua con una calidad apropiada para el consumo humanoy para usos domsticos como la higiene personal (Mora, 1996).

Por otro lado, se ha demostrado que las enfermedades hidrotransmisibles comola gastroenteritis, la fiebre tifoidea, la hepatitis A y el clera, entre otras, estn entre lasprincipales causas de muerte en los pases de Amrica Latina. Hay una relacin directaentre la mortalidad infantil y la cobertura y calidad del agua de consumo humanodebido a que los nios son especialmente propensos a enfermarse con diarrea.

Se considera que la diarrea es la primera causa de muerte entre los nios de entre1 y 4 aos de edad, con dos millones de defunciones al ao en todo el mundo (Piza,1996). Los nios menores de 5 aos an no tienen completo el sistema inmunolgico yen los pases en vas de desarrollo, la mayor parte de ellos estn afectados por ladesnutricin. En general, la diarrea es transitoria en las personas bien alimentadas ypersistente en las mal nutridas. La infeccin repetitiva puede aumentar la desnutricin,que, a su vez, incrementa la vulnerabilidad ante nuevas infecciones.

Las comunidades rurales se encuentran en permanente riesgo de contraerenfermedades hdricas porque comnmente viven sin acceso a agua segura y a serviciosde saneamiento. Las poblaciones que se abastecen directamente de aguas de origensuperficial (ros, lagunas, lagos) se encuentran aun en mayor riesgo debido a que lafuente de agua est expuesta a la contaminacin fecal. Las razones para ello incluyen lacarencia de una apropiada disposicin de excretas y factores como la defecacin a

6 MANUAL PARA ANLISIS BSICOS DE CALIDAD DEL AGUA DE BEBIDA

campo abierto, las letrinas mal diseadas y la presencia de animales domsticos y silvestresque actan como reservorios de agentes patgenos.

Una pequea parte de la poblacin rural cuenta con servicios de abastecimientoy, en muchos casos, el servicio de agua es discontinuo. Por este motivo, los pobladoresla suelen almacenar en recipientes. La constante manipulacin de estos recipientesincrementa las posibilidades de que el agua se vuelva a contaminar y, por consiguiente,que aumente el riesgo de transmisin de enfermedades gastrointestinales.

El tratamiento y la desinfeccin efectiva del agua de consumo humano mejoranla calidad del agua. Pero en las reas rurales se presenta una serie de factores que dificultansu ejecucin. Estos factores estn relacionados con aspectos polticos, econmicos,sociales y culturales. Entre ellos estn la ubicacin geogrfica; las dificultades en las vasde comunicacin; una limitada inversin en infraestructura sanitaria y programas dedesinfeccin, en personal de operacin y mantenimiento de los sistemas de servicios deagua; los problemas de logstica; un marco institucional no definido y la falta de lderesen las comunidades.

En las zonas rurales los factores mencionados tambin dificultan la aplicacineficiente de los programas de vigilancia y control de la calidad del agua de consumohumano. Se requiere, entonces, identificar la forma de efectuar un monitoreo bsico dela calidad del agua, lo que permitir tomar decisiones en forma oportuna y evitar latransmisin de enfermedades hdricas.

2. LOS PROGRAMAS DE VIGILANCIA YCONTROL DE LA CALIDAD DEL AGUA

Los programas de vigilancia y control de la calidad del agua para consumo hu-mano tienen como objetivo proteger la salud del consumidor aportando datos sobre dichacalidad y alertas sobre la necesidad de aplicar medidas de control para evitar que el aguasea portadora de agentes patgenos, sustancias qumicas txicas u otros elementos nocivos.

La implementacin de un programa de vigilancia y control de la calidad del aguaaporta un sinnmero de beneficios. Aparte del principal, que es la disminucin de la tasade enfermedades hidrotransmisibles, permite obtener informacin sobre la real situacindel abastecimiento de agua, priorizar las inversiones y mejorar la calidad del servicio deabastecimiento de agua.

Generalmente, la vigilancia de la calidad del agua es efectuada por las autoridadesde salud, que son responsables de evaluar el riesgo al que est expuesta la poblacin eneste terreno.

7El control de la calidad del agua es responsabilidad de la entidad abastecedora,encargada de verificar si el agua que se est suministrando cumple con los valores lmiteque sealan las normas de cada pas y ejecutar las acciones correctivas que sean necesarias,as como el mantenimiento y las supervisiones.

Aparte de los organismos responsables de la vigilancia y control de la calidad delagua, es importante el rol que desempean las entidades reguladoras, instituciones quecumplen la funcin de fiscalizar a las empresas y cuentan con las herramientas necesariaspara sancionar a los abastecedores (Solsona, 2002).

Establecer un programa de vigilancia y control de la calidad del agua en las zonasrurales es una tarea muy compleja, debido a que un elevado porcentaje de comunidadesasentadas en ellas se abastece directamente de la fuente y las localidades que cuentan conuna pequea planta de tratamiento no tienen un abastecedor responsable. Adems, lasautoridades ejercen escasa o nula supervisin de los servicios de abastecimiento.

Es necesario que en las zonas rurales el control de la calidad del agua tenga unalcance mayor que en las zonas urbanas e involucre varios aspectos que en las ciudadesson asumidos por las autoridades responsables (Rojas, 2002). Por ejemplo, los siguientes:

calidad del agua para consumo humano; nivel de servicio de abastecimiento de agua a la comunidad; deficiencias de los componentes del sistema de abastecimiento que influyen en eldeterioro de la calidad del agua; estado de la gestin del sistema de abastecimiento de agua; grado de sostenibilidad del servicio de abastecimiento; caractersticas de la conducta sanitaria de los usuarios; programas de educacin sanitaria; seguimiento epidemiolgico de la incidencia de enfermedades transmisibles porva hdrica; impacto econmico.3. ALCANCE DEL NIVEL BSICO

DENTRO DE LOS NIVELES PROGRAMTICOS

Los programas de vigilancia y control de la calidad de agua en las zonas ruralestienen como elementos bsicos la evaluacin de la calidad fisicoqumica y microbiolgicay la inspeccin sanitaria (Rojas, 2002).

EL NIVEL BSICO


3.1 Evaluacin fisicoqumica y microbiolgica

Mediante la evaluacin fisicoqumica y microbiolgica del agua se obtienen datossobre la calidad del agua. En las zonas rurales, si bien los anlisis debieran ser exhaustivosy completos, si los recursos no lo permitieran, se recomienda aplicar una evaluacin denivel bsico, que deber considerar como mnimo los niveles de turbiedad, pH, clororesidual (total, combinado, libre), coliformes totales y coliformes termotolerantes. Losvalores mximos permisibles de los parmetros de calificacin de la calidad del aguaestarn establecidos en las normas de cada pas (Solsona, 2002).

En las reas rurales, la evaluacin fisicoqumica y microbiolgica se efectuar enmuestras colectadas en la zona o punto de abastecimiento. En el caso de que la comunidadcuente con una planta de tratamiento, se considerar un muestreo a la salida de la planta,la red de distribucin y las conexiones domiciliarias.

Si en determinada comunidad la desinfeccin se realiza in situ, es convenienteefectuar un muestreo dentro de los hogares, con el objetivo de evaluar el impacto de ladesinfeccin, el almacenamiento o la manipulacin intradomiciliaria del agua.

La frecuencia del muestreo est relacionada con el tamao de la poblacin y lacategora de la zona (urbana, urbano-marginal o rural). Para zonas rurales, se sugiere losiguiente (Rojas, 2002):

Cuadro 1.1Frecuencia de muestreo en sistemas rurales

Parmetros Poblacin Nmero de Frecuencia deabastecida muestras muestreo

En planta de tratamiento y Una muestra por Agua de origenfuentes de agua subterrnea: fuente superficial: cada 2 aosanlisis fisicoqumicos* Agua de origen

subterrneo: cada 5 aosEn reservorios de servicio*: Una muestra por Tres por aopH componenteturbiedadcoliformes termotolerantesEn red de distribucin*:pH < de 1.000 3 Anualturbiedad 1.001 a 2.000 4 Anualcoliformes termotolerantes 2.001 a 5.000 6 Anual

* Si hay cloracin, se deben efectuar tantas determinaciones de cloro residual como sean posibles. En lossistemas de abastecimiento se medir el cloro en la salida de la planta de tratamiento y en el grifo delconsumidor ms alejado de la planta (Solsona y Mndez, 2002).

9De acuerdo con las caractersticas geogrficas y la realidad de las localidadesrurales (Rojas, 2002), los puntos de muestreo sern los siguientes:

salidas de manantiales; salidas de pozos de agua.Y en el caso de que la comunidad cuente con una planta de tratamiento:

salidas de las plantas de tratamiento; salidas de componentes; lneas de impulsin y aduccin; red de distribucin; en casos excepcionales, se har un muestreo de nivel intradomiciliario.3.2 Inspeccin sanitaria

En la inspeccin sanitaria se identifican los riesgos de contaminacin que se podranpresentar en la fuente de agua y si la comunidad cuenta con una planta de tratamiento,servir para detectar las deficiencias que puedan presentarse.

La inspeccin sanitaria permite identificar condiciones que aumentan el riesgo decontaminacin del agua y que muchas veces no se observan con los anlisis. Estainspeccin se efecta mediante la observacin y deteccin de los posibles factorescontaminantes.

En las zonas rurales se observar si se presenta algn factor que podra alterar lacalidad del agua; por ejemplo, en el caso de un pozo, si hay acumulacin de basura enlos alrededores, si el pozo est desprotegido, etctera. Si la comunidad se abastece deagua de origen superficial, en la fuente se observar presencia de basura, crecimientoexcesivo de algas, cambios de color del agua, etctera. Si la comunidad cuenta con unaplanta de tratamiento, se tomar en cuenta el nivel de higiene en las instalaciones y losalrededores. Se sugiere efectuar dos inspecciones sanitarias al ao tanto en la plantacomo en sus componentes (Rojas, 2002).

4. REALIDADES, REQUERIMIENTOS Y ESTRATEGIAS

Un programa de vigilancia de la calidad del agua ser viable y efectivo si seconcibe dentro de un marco que considere los factores que determinarn su viabilidad.Entre estos factores estn la disponibilidad de recursos humanos, materiales y econmicos.Tambin es importante la capacidad ejecutiva de la institucin responsable de la vigilancia.

EL NIVEL BSICO


Asimismo, un programa de vigilancia de la calidad del agua requiere un marcolegal que permita la oportuna intervencin poltica, una legislacin clara que identifiquey defina las entidades de vigilancia y control y que contemple la preservacin de lacalidad de las fuentes de agua, as como una normatividad respaldada por reglamentos,normas y cdigos.

Para lograr la implementacin de la vigilancia de la calidad del agua en zonasrurales, se requiere lo siguiente:

Conocer el nmero y caractersticas de las comunidades rurales mediante unaencuesta y un inventario a escala nacional. Esto permitir identificar las fuentesde agua que estn en uso y sus limitaciones, as como las reas prioritarias ge-neralmente ubicadas en zonas endmicas, que no tienen agua de calidad apro-piada para el consumo humano. Contar con un marco legal, conocer las normas y reglamentos de la calidad delagua para consumo humano e identificar los criterios de calidad del agua que seemplearn en el programa. Identificar las fuentes de financiamiento del programa. Establecer la metodologa de trabajo, que considerar los procedimientos parala vigilancia de los servicios rurales. Se contar con manuales de procedimiento afin de unificar los criterios y normalizar los procedimientos de ejecucin delprograma. Identificar las entidades que participarn y definir sus responsabilidades. Ubicar un centro regional de operaciones, un laboratorio central y laboratoriosperifricos debidamente equipados. Se requiere un laboratorio bsico para atenderuna red de vigilancia de la calidad del agua; es decir, con el equipamiento necesariopara analizar los parmetros fundamentales. Identificar la red dentro de la cual se sostendr el sistema. Establecer un sistema de informacin que, en forma oportuna y eficiente, permitaatender los requerimientos de las autoridades involucradas y al pblico usuario. Contar con personal capacitado en cada una de las responsabilidades asignadas. Desarrollar encuestas domiciliarias sobre las condiciones de almacenamiento delagua en los hogares. Vigilancia epidemiolgica con el objetivo de identificar las reas de alto riesgo detransmisin de enfermedades hdricas.Frente a las dificultades que se presentan en un programa de vigilancia de la

calidad del agua en las zonas rurales, no es aconsejable ni prctico iniciar la vigilancia conun nivel avanzado. Las entidades reguladoras o autoridades de salud responsables de la

11

vigilancia y control podran considerar un nivel bsico, si se tiene en cuenta la capacidadinstalada de los laboratorios. El programa de vigilancia diseado para las zonas ruralesdebe ser prctico y aplicable a cada realidad.

Entre las estrategias que favorecen la implementacin de un programa de vigilanciade la calidad del agua para consumo humano est la reduccin del costo al mnimo,principalmente en los rubros de laboratorio, personal y transporte, que normalmenteson los que ocasionan la mayor parte de gastos. Para reducir estos costos, se puedenaprovechar las redes existentes, ya sean de la comunidad o de las entidades de salud.

Otra estrategia interesante es demostrar a la poblacin y a las autoridades losbeneficios de un programa de vigilancia y control mediante la medicin del impactoepidemiolgico. Al enlazar la vigilancia epidemiolgica y los programas de monitoreodel agua, se puede medir el impacto del progreso y su posible aceptabilidad socio-econmica.

Asimismo, la educacin sanitaria de la poblacin involucrada en el programaasegura su apoyo, inters y participacin voluntaria. En las comunidades rurales, laparticipacin de la comunidad en las acciones de vigilancia de la calidad del agua esdecisiva, pues los propios pobladores podran ayudar a identificar los problemas. Laeducacin sanitaria favorecer el aprendizaje de las buenas prcticas de higiene personaly domstica, el manejo del agua dentro de la vivienda y la comprensin y asimilacindel concepto de agua segura. En las zonas rurales, la forma de recoleccin, almacena-miento y manipulacin del agua en los hogares tiene especial importancia para laconservacin de la calidad del agua.

Se ha demostrado que cuando se logra emplear con xito la herramienta de laeducacin sanitaria en las comunidades rurales, es posible que la poblacin participeactivamente en los programas de vigilancia de la calidad del agua en las siguientes acciones(Rojas, 2002):

colaborar con la obtencin de la informacin; ayudar al personal de vigilancia en la recoleccin de muestras de agua; controlar la cantidad y calidad del agua de consumo humano; informar peridicamente los resultados al organismo de vigilancia sanitaria; velar por el uso adecuado del suministro de agua; fijar prioridades en la implementacin de las medidas correctivas; asumir el mantenimiento del sistema de abastecimiento de agua y las reparacionessencillas; solicitar personal calificado para afrontar los problemas que requieren particularatencin.

EL NIVEL BSICO

13

CAPTULO 2

DETERMINACIN DE LOSPARMETROS DE NIVEL BSICO

1. EL CONCEPTO DE ANLISIS BSICO

En un programa de vigilancia, la seleccin de los parmetros estar en funcinde lo que estipulen las normas de cada pas y del nivel de riesgo para la salud. Por ellotienen particular importancia los parmetros bacteriolgicos y los relacionados con ladesinfeccin del agua. En los programas de vigilancia de la calidad del agua de nivelbsico se consideran los siguientes parmetros: coliformes totales y termotolerantes,cloro residual, pH y turbiedad.

Con respecto a los coliformes totales y termotolerantes, las Guas para la Calidaddel Agua Potable de la Organizacin Mundial de la Salud indican que en un programade vigilancia y control no es prctico monitorear cada uno de los agentes patgenosdebido a que para su deteccin se requieren procedimientos complejos y un tiempolargo para la obtencin de resultados (OPS, 1988). Es suficiente la identificacin de ungrupo determinado de microorganismos con significado higinico y sanitario. Laenumeracin de estos microorganismos es importante porque nos dar una idea delnivel de contaminacin y las cifras resultantes se podrn comparar con los valorespropuestos en las normas de calidad del agua. A estos grupos de microorganismos selos considera como indicadores bacterianos de contaminacin. En el caso del aguapara consumo humano, comnmente se utiliza a los coliformes como indicadores decontaminacin por heces de seres humanos y animales de sangre caliente.

Con respecto a las determinaciones fisicoqumicas bsicas, se sabe que en lasreas rurales el problema principal para la calidad del agua de bebida es la contaminacinde tipo biolgico y, en especial, la contaminacin bacteriana. Sin embargo, tambin es


necesario efectuar un monitoreo de tres aspectos fisicoqumicos de importancia prctica:el cloro residual, la turbiedad y el pH.

En el caso de que el agua haya sido desinfectada con cloro, la medicin del clororesidual indica la presencia de un remanente del desinfectante capaz de asegurar lainhibicin o muerte de las bacterias patgenas.

Adems de cloro residual, en un programa de vigilancia y control de la calidaddel agua de nivel bsico tambin es prctico medir la turbiedad y el pH. Ambosparmetros constituyen una gua muy til para evaluar aspectos generales de la calidaddel agua.

El pH y la temperatura del agua influyen en la desinfeccin. La turbiedad estrelacionada con la cantidad de partculas. Se ha demostrado que al menor incrementode la turbiedad en el agua tratada, aumenta el riesgo de transportar partculas de untamao semejante al de los quistes de protozoarios parsitos como la Giardia y elCryptosporidium. Por otro lado, las partculas pueden enmascarar a los virus y bacteriasy, por consiguiente, dificultar su inhibicin por accin del desinfectante. Asimismo, elincremento de la turbiedad en el agua tratada aumenta la posibilidad de transmisin deenfermedades hdricas (Le Chevallier, 1992).

2. EL PERSONAL Y EL GRADO DECAPACITACIN REQUERIDOS

El xito de un programa de vigilancia se sustenta en la calidad de la informacinque recibe. Dicha calidad solo estar garantizada si el personal est capacitado para eldesempeo de sus funciones. De este modo, en toda la red de vigilancia se debenemplear en forma correcta los mismos procedimientos y esto facilitar la recoleccinde datos, el tratamiento estadstico de ellos y la interpretacin de los resultados.

El personal responsable de ejecutar los anlisis bsicos requiere capacitacin enlos siguientes aspectos:

Procedimientos de muestreo, preservacin, embalaje y transporte de la muestra. Procedimientos para cada una de las actividades de laboratorio. Las principalesson las siguientes:Y preparacin del material para el muestreo;Y limpieza del material;Y esterilizacin del material;

15

Y preparacin de medios de cultivo y reactivos;Y almacenamiento del material y de los reactivos;Y eliminacin de residuos de laboratorio, tanto central como perifricos;Y procedimientos analticos;Y uso de equipos de campo.

Buenas prcticas de laboratorio. Aseguramiento de la calidad analtica para garantizar los datos reportados.3. DNDE REALIZAR LAS DETERMINACIONES

Para atender los requerimientos analticos de un programa de vigilancia de lacalidad del agua de bebida en las zonas rurales, se requiere contar con una red delaboratorios conformada por un laboratorio central y un nmero suficiente de laboratoriosperifricos. Los resultados de los anlisis sern oportunamente reportados y procesadospor la red de informacin del programa.

Si la muestra de agua de bebida, para un anlisis bacteriolgico, se colecta en zonasalejadas de un laboratorio perifrico y el tiempo de transporte de la muestra es mayor de 30horas, se recomienda que los anlisis se efecten en el campo con equipos porttiles. Paraello, el tcnico responsable de los anlisis deber estar capacitado en el manejo de losequipos y accesorios, tcnicas analticas, y siempre mantendr las condiciones apropiadaspara garantizar la calidad analtica.

4. EQUIPOS Y MATERIAL MNIMO DE LABORATORIO

En un laboratorio de nivel bsico se requiere un ambiente fsico con servicios deagua y luz, mesas de trabajo y gabinetes para almacenar el material. En general, para losanlisis bsicos, se requieren los instrumentos y materiales mencionados a continuacin.Los requerimientos especficos se presentan en la descripcin de cada metodologaanaltica.

4.1 Equipos y materiales mnimos para un laboratorio bsico

Equipos de esterilizacina) Una estufa para esterilizacin y secado, con una temperatura de entre 170

y 180 C, con termostato y termmetro.

DETERMINACIN DE LOS PARMETROS DE NIVEL BSICO


b) Un autoclave a 15 libras de presin y una temperatura de 121 C a niveldel mar, con vlvula de seguridad, un manmetro y un termmetro.

Incubadorasa) Una incubadora, con una temperatura de incubacin de 35 0,5 C, con

termostato y termmetro.

b) Un equipo de bao Mara, con una temperatura de incubacin de 44,5 0,2 C, con termostato y termmetro.

DestiladorUn destilador de agua no txica libre de sustancias que interfieran con la

multiplicacin bacteriana.

PotencimetroUn potencimetro con una precisin de 0,1 unidades de pH. Tampones para

calibrar pH: 4,0; pH: 6.86; 9,18 y solucin buffer.

Turbidmetro y comparador de cloro, con sus respectivos accesorios y reactivos,mencionados en el tem correspondiente a dichos parmetros. Equipo para pesar

Una balanza simple con pesas de hasta 500 gramos con una exactitud de 0,1gramos o una balanza digital con igual exactitud.

RefrigeradoraUna refrigeradora para guardar los medios de cultivo preparados.

Equipo para filtracinUna fuente de vaco; es decir, una bomba de vaco u otro dispositivo que produzca

una presin diferencial en el portafiltros.

CristaleraEl material de la cristalera debe ser resistente al calor. En algunas pruebas se

pueden usar frascos o vasos de polietileno.

17

Frascos de muestreo Matraces Pipetas tipo Mohr de 1 y 10 mL con graduacin 1/10, volumtricas tipo clnicoy graduadas Tubos de ensayo de vidrio borosilicato de 12 mm x 120 mm y de 16 mm x150 mm Tubos Durham Placas de petri de vidrio o de plstico no txico de 48 mm de dimetro x 8,5mm de altura Probetas graduadas.

Otros

Membranas filtrantes de 47 mm de dimetro y con una porosidad de 0,45 m Pinzas de acero inoxidable con extremidades redondeadas Lupa Esptulas de plstico Pinzas de extremos redondeados para transportar las membranas de filtracin Asas de inoculacin de platino, platino iridio o nquel y cromo con un aro de 3mm de dimetro Guantes para la manipulacin de material caliente Lpices con tinta indeleble a prueba de agua Mecheros de Bunsen Caja trmica para el transporte de muestras Hielo o gel refrigerante.5. MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS QUMICOS

Para la preparacin de los medios de cultivo de los anlisis bacteriolgicos, serecomienda utilizar medios deshidratados y que ofrezcan garanta de calidad. Los mediosde cultivo y los reactivos requeridos para cada tipo de anlisis propuesto en el presentemanual figuran en la descripcin de cada tcnica y en el apndice A.



6. CONTROL DE CALIDAD ANALTICA

La obtencin de resultados precisos y confiables en los exmenes rutinarios de lacalidad del agua contribuir al xito de un programa de vigilancia. Se requiere que laspruebas, tanto las de campo como las de laboratorio, se desarrollen bajo un control decalidad analtica. Este control se realiza mediante la aplicacin rutinaria de procedimientosque se siguen en forma paralela al desarrollo de los ensayos y que tienen como objetivoel aportar datos para monitorear la fiabilidad y/o exactitud de los resultados obtenidosen las pruebas.

El control de calidad interno en un laboratorio o en un anlisis de campo seejecuta mediante procedimientos que monitorean la forma en que se llevan a cabo laspruebas, las condiciones de los equipos, los medios de cultivo, los reactivos y el desarrollode los procedimientos analticos. El control de la calidad analtica de los parmetrosbsicos incluye el uso de blancos, controles positivos, controles negativos, rplicas deanlisis de las muestras y, en determinados casos, el uso de cartas de control, especfica-mente en algunos de los parmetros considerados en los programas intermedios yavanzados de los programas de vigilancia de la calidad del agua.

Para asegurar la calidad de los resultados, es necesario que adems de considerarlas acciones de control de calidad antes mencionadas, se lleve a cabo un plan sistematizadode aseguramiento de la calidad cuyo objetivo sea lograr la confiabilidad de los resultadosanalticos (Castro, 1996).

6.1 Plan de aseguramiento de la calidad

El plan de aseguramiento de la calidad abarca el muestreo, la manipulacin, eltransporte, el almacenamiento, las metodologas analticas, la calibracin y elmantenimiento de instrumentos y equipos, la preparacin del material que ser usadoen los ensayos, la correcta aplicacin de los clculos y la emisin de resultados en formaapropiada y oportuna. En este plan est incluido el sistema de control de calidad internoy externo.

Para que un laboratorio genere datos seguros y confiables, se requiere atender,como mnimo, los siguientes aspectos:

Infraestructura fsica apropiada, fuentes de energa, agua, ventilacin y demsservicios bsicos, a fin de lograr el cumplimiento de las tareas con seguridad,efectividad y comodidad. Se requiere un laboratorio con reas separadas de re-cepcin de muestras, de examen de muestras, preparacin de medios de cultivoy reactivos, de esterilizacin y lavado de materiales, as como de almacenamientoy refrigeracin.

19

Instrumentos y equipos con las caractersticas exigidas por el mtodo analtico ybajo un programa de mantenimiento. Materiales, medios de cultivo y reactivos en buen estado. Utilizar procedimientos analticos estandarizados. Personal del laboratorio capacitado segn sus funciones. Mantenimiento y calibracin de equipos e instrumentos. Desarrollo de un sistema de almacenamiento de datos. Un programa de control de calidad interno y externo, con un procedimiento decorreccin de problemas cuando se observa un resultado dudoso. El laboratoriocontar con un programa sistemtico de control de calidad para monitorear lafiabilidad o exactitud de sus resultados. Cumplimiento de las buenas prcticas de laboratorio.


21

CAPTULO 3

ADMINISTRACIN DE UNLABORATORIO DE NIVEL BSICO

1. ORGANIZACIN, ORDEN Y MEDIDAS DE HIGIENE

Las funciones del personal de los laboratorios perifricos y central deben estarclaramente definidas porque eso facilita el orden, el buen cumplimiento de actividades,la capacitacin especfica segn las funciones y el deslinde de responsabilidades.

La red conformada por el laboratorio central y los laboratorios perifricos esresponsable de los siguientes aspectos:

Programar la toma de muestras segn los lineamientos del programa de vigilancia. Preparar el material para el muestreo y anlisis, tanto en el laboratorio como enel campo. Ejecutar los anlisis. Mantener un programa de control de calidad de los anlisis de laboratorio y decampo (blancos, controles positivos, controles negativos y rplicas). Capacitar al personal responsable de la toma de muestras y de los anlisis.Como mnimo, se requiere que los laboratorios estn dirigidos por un profesional

capacitado en los procedimientos analticos de los parmetros seleccionados para elprograma de vigilancia; que conozca las buenas prcticas de laboratorio, control de calidady aseguramiento de la calidad de las pruebas analticas. Se debe contar con un equipo detcnicos capacitados en procedimientos relacionados con el muestreo, anlisis (delaboratorio y de campo) y reporte de resultados. Es indispensable que la red de laboratoriostenga un eficiente y oportuno sistema de informacin de resultados al laboratorio regionalo al central, segn lo disponga la entidad responsable del programa de vigilancia.


Por otro lado, es conveniente que el laboratorio cuente con instalaciones quepermitan a los trabajadores laborar en un ambiente sin riesgos para la salud, amparadospor un programa de bioseguridad, y que todo el personal asuma el cumplimiento de lasbuenas prcticas de laboratorio, tanto en el trabajo efectuado en el laboratorio como enel campo.

1.1 Buenas prcticas de laboratorio

En un laboratorio de microbiologa el personal est expuesto a la contaminacincon microorganismos que pueden ser ingeridos por la accin de absorber y expulsarlas muestras de agua con la pipeta usando directamente la boca. El analista tambin sepuede contaminar con los diferentes artculos que se manipulan en un laboratorio y queaccidentalmente pueden llevarse a la boca. Estos artculos, que podran estar contaminadoscon microorganismos, incluyen alimentos, bebidas, lapiceros, cigarros. Tambinconstituyen un riesgo las manos contaminadas. Otras formas de que ingresen los micro-organismos al cuerpo son la inhalacin por ejemplo, de los aerosoles que se producenen el laboratorio, la absorcin a travs de la piel y la contaminacin accidental de losojos.

El cumplimiento de las buenas prcticas de laboratorio contribuir a la proteccinde las personas que directa o indirectamente estn relacionadas con las actividades dellaboratorio. Entre las buenas prcticas de laboratorio ms importantes tenemos lassiguientes:

Bajo ninguna circunstancia se pueden pipetear con la boca las muestras de agua,los medios ni los reactivos. No se deben consumir ni almacenar alimentos ni bebidas en el laboratorio. No se deben llevar a la boca los lpices ni las etiquetas. Las pipetas y varillas de vidrio rotas o astilladas deben ser reemplazadasinmediatamente. Dentro del laboratorio, se debe usar obligatoriamente mandil o delantal, quedebe estar correctamente abotonado. El material contaminado debe ser esterilizado y los residuos de los medios decultivo, membranas, almohadillas (pads), etctera, se deben colocar, despus deesterilizados, dentro de bolsas seguras, antes de ser eliminados. Durante los anlisis y manejo de materiales que despidan partculas al ambiente,es necesario colocarse mascarillas, ya que las bacterias y partculas pueden serinhaladas a travs de los aerosoles producidos en las operaciones rutinarias.

23

2. ADQUISICIN, DISPONIBILIDAD Y REPOSICIN DELMATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPOS

Para optimizar la disponibilidad y la reposicin de los equipos, materiales yreactivos usados en los ensayos, conviene que el laboratorio cuente con un programade trabajo en el cual se tome en cuenta el nmero de muestras analizadas en un determi-nado tiempo, as como el gasto de materiales, reactivos y equipos que representa elvolumen de muestras por procesar.

Para garantizar la disponibilidad y reposicin de equipos y materiales, es imprescin-dible que el laboratorio cuente con un inventario actualizado y con procedimientosdocumentados para la compra, recepcin y almacenamiento de equipos, materiales yreactivos. Asimismo, se requiere un registro de entidades responsables del mantenimientoy la calibracin de equipos y otro de distribuidores de equipos, materiales, reactivos ymedios de cultivo.

Los equipos que ingresen al laboratorio sern registrados en el inventario y en surespectiva ficha de identificacin. Se considerarn los siguientes datos:

descripcin del equipo; nombre del fabricante; una copia de las instrucciones del fabricante; entidad responsable del mantenimiento y fechas de mantenimiento; entidad responsable de la calibracin y fechas de calibracin; registro de tipo y fecha de las reparaciones efectuadas.Para asegurar el manejo apropiado, la disponibilidad y reposicin de los reactivos

y materiales, se requiere contar con un procedimiento escrito que considere los siguientesaspectos:

especificaciones de los reactivos y materiales; seleccin de caractersticas que servirn para verificar los productos en el momentode su aceptacin; condiciones de almacenamiento; manejo de materiales con vida til definida; disposicin de reactivos y medios de cultivo no usados o vencidos.

ADMINISTRACIN DE UN LABORATORIO DE NIVEL BSICO


3. COSTOS POR ANLISIS

La determinacin del costo del anlisis por muestra se efecta sobre la base delas siguientes variables:

remuneracin del analista segn el tiempo empleado en el anlisis; cantidad de reactivos y medios de cultivo usados por muestra; cantidad de materiales especficos por anlisis como filtros de membrana; depreciacin de los materiales de laboratorio y de los equipos; gastos por servicios bsicos: agua, luz y gas; agregar gastos de transporte si el personal de laboratorio efecta el muestreo.En el captulo 5, cuadro 5.1, se presenta una tabla con los costos aproximados

de los anlisis bacteriolgicos.

4. SOSTENIBILIDAD ECONMICA DE UNLABORATORIO DE NIVEL BSICO

Es prioritario que en un programa de vigilancia de la calidad del agua de bebidase establezcan los procedimientos econmicos y los costos con claridad y que se cuentecon un financiamiento asegurado para los gastos que generen el muestreo, el anlisis delas muestras y el envo de resultados. Adems, se deben establecer los nexos entre lasautoridades de salud y la comunidad a fin de involucrarlas con los objetivos del programade vigilancia. El programa CALCOS-PVA, desarrollado por el CEPIS/OPS, es unaherramienta recomendada para la evaluacin de tales costos.

En los planes estratgicos de sostenibilidad econmica de estos laboratorios, esconveniente que el programa de vigilancia logre establecer mecanismos que permitan elflujo de los fondos, a fin de que los laboratorios cuenten con ellos en forma oportuna.Por otro lado, tambin es prioritario el control del uso adecuado de los fondos, de lasactividades y de los logros funcionales y operativos.

5. PRODUCCIN Y MANEJO DE LAINFORMACIN ANALTICA

El laboratorio central y los laboratorios perifricos contarn con un sistema deregistro de resultados, manual o computarizado. Este sistema proporcionar informacinsuficiente para rastrear la muestra desde su recepcin hasta la emisin del informe porel laboratorio. El archivo de datos, los datos originales, las estimaciones y los clculos se

25

deben mantener en el laboratorio por un tiempo razonable, que ser establecido por elprograma.

Antes de que los resultados sean emitidos por los laboratorios, deben ser revisadosy aprobados por las personas autorizadas. Asimismo, sern reportados con exactitud,claridad, de manera objetiva, sin ambigedad y en forma oportuna, a fin de que laautoridad responsable pueda tomar una accin inmediata.

La produccin y el manejo sistematizado de la informacin obtenida tanto en lainspeccin sanitaria como en las pruebas analticas contribuirn al xito de un programade vigilancia de la calidad del agua de bebida.

ADMINISTRACIN DE UN LABORATORIO DE NIVEL BSICO

27

CAPTULO 4

TOMA DE MUESTRAS

1. TCNICAS DE MUESTREO

La recoleccin de la muestra es un punto crtico en el procedimiento de laevaluacin de la calidad del agua. La seleccin del punto de muestreo tendr comorequisito principal que la muestra sea representativa del sistema, del componente, de lasfuentes de agua, del reservorio, etctera.

El envase para la toma de muestras tendr las caractersticas apropiadas para eltipo de anlisis que se efectuar. Para el anlisis microbiolgico, la muestra se tomar enun envase de 250 mililitros de capacidad, de vidrio o plstico autoclavable, de bocaancha y con tapa rosca. Se deber cubrir la tapa del frasco con papel kraft y fijarlo conun cordel. Los anlisis fisicoqumicos bsicos (cloro residual, pH y turbiedad) deben serpreferentemente evaluados en el campo. En caso de que no se cuente con los equiposde campo requeridos para la evaluacin de los parmetros fisicoqumicos bsicos, lamuestra se tomar en frascos de vidrio o de polietileno, en un volumen de 500 mililitros;no se requieren preservantes. No se debe exponer la muestra a la luz ni tampocoagitarla. La muestra debe ser analizada en forma inmediata.

Las muestras de agua para consumo humano tratada y sometida a un procesode desinfeccin con cloro se deben colectar en un frasco esterilizado al cual, antes de laesterilizacin, se le hayan adicionado 0,1 mililitros de solucin de tiosulfato de sodio al1,8% para cada 100 mililitros. Con este reactivo se neutraliza el cloro residual. Estacantidad de tiosulfato de sodio es suficiente para neutralizar concentraciones de hasta 5mg/L de cloro residual y es adecuada para una muestra de rutina. En situacionesespeciales, como emergencias, en que el cloro residual puede ser mayor de 5 mg/L, serequiere una mayor cantidad de tiosulfato; en estos casos, pueden utilizarse volmenesde 0,1 mililitros de solucin de tiosulfato de sodio al 10% para cada 100 mililitros de


muestra. Esta cantidad es suficiente para neutralizar concentraciones de hasta 15 mg/Lde cloro residual.

Para la recoleccin de muestras de aguas sospechosas de contener concentracionessuperiores a 0,01 mg/L de metales pesados tales como cobre, cinc, etctera, se debernadicionar en el frasco de recoleccin, antes de su esterilizacin, 0,3 mililitros de unasolucin de cido etilenodiaminotetractico-EDTA al 15% para cada 100 mililitros demuestra. Cuando se requiera, tambin se agregar una solucin de tiosulfato de sodio(volumen de 0,1 mililitros de una solucin al 10% para cada 100 mililitros de muestra).La solucin de EDTA puede ser adicionada a un frasco de recoleccin sola o combinadacon una solucin de tiosulfato de sodio. El EDTA acta como agente quelante y reducela accin txica de los metales.

Otro punto importante en el muestreo es la correcta y clara identificacin de lamuestra. En la etiqueta o ficha de muestreo debe figurar toda la informacin requerida.Los datos bsicos son los siguientes:

Cuadro 4.1Datos bsicos de la etiqueta de muestreo

Nmero de muestra. Punto de muestreo. Localidad. pH. Temperatura. Cloro residual (en el caso de agua potable). Turbiedad.Y si el programa de vigilancia lo requiere, se deben considerar otros datos que

permitan interpretar los resultados en forma correcta. En el apndice B se presenta unapropuesta de formatos que deben ser adaptados segn las caractersticas del programade vigilancia. El formato B.1, denominado cadena de custodia, se usa en el caso de quese requiera enviar la muestra a un laboratorio para su anlisis, y el formato B.2 para latoma de muestras en un programa de nivel bsico en lugares que cuenten con unaplanta de tratamiento y sistema de distribucin de agua. Tambin se presenta una guapara llenar este formato.

Para los propsitos del muestreo del agua, pueden considerarse tres tipos deagua (OMS, 1988):

1. Agua de una corriente de agua (ros), aguas con escaso o nulo movimiento(reservorios, lagunas, lago) o agua de un depsito (tanque).

29

2. Agua de un pozo excavado o algo semejante, donde el acceso presenta unamayor dificultad.

3. Agua de un grifo en un sistema de distribucin o de una bomba de mano fija,etctera, en el caso de que la comunidad cuente con un sistema de distribucin.

1.1 Recoleccin de muestras de una corriente de agua, aguas con escasoo nulo movimiento o almacenada en depsitos

Para llenar el frasco con la mues-tra, se debe sostener el frasco por la parteinferior y sumergirlo hasta una profun-didad de aproximadamente 20 centme-tros, con la boca del frasco ligeramentehacia arriba. Si se trata de una corriente,colocar la boca del frasco en sentidocontrario a la corriente del agua.

1.2 Recoleccin de muestras de pozos excavados y fuentes similares

1. Preparar el frasco o el vaso de muestreo para el anlisis bacteriolgico; ambosdeben estar esterilizados. Con un pedazo de cordn, amarrar una piedra detamao apropiado al frasco de muestra. Antes lavar la piedra a fin de evitar laincorporacin de microorganismos al agua del pozo.

TOMA DE MUESTRAS


2. Amarrar el frasco al cordn. Conun cordn limpio, de una longitudnecesaria para el muestreo segnla profundidad del pozo, atar elfrasco y luego destaparlo.

3. Ubicar el frasco o el vaso demuestreo en un punto alejado delas paredes del pozo y lentamentedejar descender el frasco dentrodel pozo. El peso de la piedrafacilitar su descenso.

4. Llenar el frasco. Sumergirlo com-pletamente hasta una profundi-dad de 30 centmetros aproxima-damente.

31

5. Elevar el frasco. Una vez que seconsidere que el frasco est lleno,enrollar la cuerda alrededor de laestaca para subirlo. Si el frascoestuviera completamente lleno,deseche parte del agua hasta queaproximadamente un tercio delfrasco quede vaco. Colocar latapa del frasco como se describianteriormente.

Si se trata de reservorios de almacenamiento de agua potable, analice inme-diatamente el cloro.

1.3 Muestreo de un grifo o de la salida de una bomba

En primer lugar, tener la precaucin de que el grifo est conectado directamentea la red de distribucin y sin accesorios (coladores, anexos de mangueras, etctera). Deotro modo, remover cualquier dispositivo ajeno al grifo. Verificar que no se presentenfugas a travs de los sellos o empaquetaduras del cao. Si hay fugas, seleccionar otropunto de muestreo o reparar los puntos de fuga antes de tomar la muestra.

1. Con la ayuda de una tela, limpiary retirar del grifo cualquier tipode materia extraa adherida a laboca de salida. Abrir el grifo, hastaque alcance su flujo mximo ydejar correr el agua durante dosminutos. Este procedimientolimpia la salida y descarga el aguaque ha estado almacenada en latubera.

TOMA DE MUESTRAS


2. Abrir el frasco de muestreo.Desamarrar el cordn que ajustala cubierta protectora de papelkraft y destapar.

3. Llenar el frasco. Mantener la tapay la cubierta protectora hacia abajo(para evitar la entrada de polvoportador de microorganismos).Poner inmediatamente el frascodebajo del chorro de agua y lle-narlo como se indica en la figura.

4. Dejar un espacio de aire(aproximadamente un tercio delfrasco) para facilitar la agitacinde la muestra antes del anlisisbacteriolgico.

33

5. Colocar el tapn al frasco.Enroscar la tapa y fijar con elcordn la cubierta protectora depapel kraft.

Para las mediciones de pH, cloro residual y turbiedad, seleccionar otro frasco oun vaso de muestreo y enjuagarlo tres veces consecutivas antes de tomar la muestradefinitiva. Efectuar el anlisis de pH, cloro residual y turbiedad.

2. PRESERVACIN DE LAS MUESTRAS

Verificar la correcta identificacin de la muestra (vase el cuadro 4.1).

La muestra deber ser transpor-tada al laboratorio lo antes posible. Eltiempo lmite entre el muestreo y el iniciodel examen bacteriolgico es 30 horas.

Las muestras deben ser trans-portadas en condiciones de refrigeracin(4-10 C), en cajas que las conserven eneste rango de temperatura. Se debecolocar dentro de la caja hielo o gelrefrigerado. En el laboratorio la muestradebe ser conservada a temperatura derefrigeracin hasta el inicio del examen.

TOMA DE MUESTRAS


3. TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS: EMBALAJE Y ENVO

Los frascos deben ser transportados o enviados en una caja resistente para evitarroturas. Esta caja puede ser de plstico, madera o metal. La caja tendr suficiente espaciopara colocar las bolsas con la mezcla refrigerante que permitir que la muestra se conservea temperatura de refrigeracin.

En la cubierta de caja de transporte se debe colocar una etiqueta que, de maneraimpresa o con tinta indeleble, muestre de un modo muy claro las inscripciones Frgil,Muestras de agua, urgente y Este lado hacia arriba, as como la direccin dellaboratorio al que se enviarn las muestras. En otra etiqueta debe figurar el remitente.

En la parte interna de la caja tambin ir el formulario detallado con los datos dela recoleccin de las muestras, su descripcin y el nombre de la persona que las recolecty las envi. Si el programa de vigilancia lo solicita, las muestras irn acompaadas de lacadena de custodia, que tiene por objetivo rastrear la muestra desde el momento delmuestreo hasta su entrega al laboratorio. En el apndice B se presenta un modelo decadena de custodia.

35

SEGUNDA PARTE

PROCEDIMIENTOS ANALTICOS DE LOSPARMETROS DE NIVEL BSICO

37

INTRODUCCIN

En la segunda parte del presente manual se describen las metodologas analticasreferidas a los parmetros que contempla un programa de vigilancia de nivel bsico.Estos parmetros son bacterias coliformes totales y termotolerantes, cloro residual,pH y turbiedad.

Los procedimientos se presentan en dos captulos. En el primero (cap. 5) sedetallan los procedimientos analticos que requieren un laboratorio, equipos y materialesespecficos para cada tipo de anlisis. Esta modalidad es la recomendada para ser aplicadaen el laboratorio central y en los laboratorios perifricos que atiendan la demanda deanlisis exigida por un programa de vigilancia de nivel bsico.

En el segundo (cap. 6) se desarrollan procedimientos analticos efectuados conequipos de campo, modalidad sugerida para ser aplicada en las zonas rurales u otrasreas que no tengan fcil acceso a un laboratorio. Se recomienda que los medios decultivo y la preparacin de los materiales para el anlisis se efecten en un laboratorioperifrico, a no ser que se empleen material desechable y medios de cultivo preparadosen ampollas, viales u otra forma de presentacin.

39

CAPTULO 5

PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO

1. DETERMINACIN DE INDICADORES DE CALIDADSANITARIA DEL AGUA: COLIFORMES TOTALES YTERMOTOLERANTES

1.1 Introduccin

El grupo de bacterias coliformes est conformado por dos subgrupos: loscoliformes totales y los termotolerantes. A estos ltimos antes se los denominaba coliformesfecales. El cambio de nombre se debe a que se demostr que en el grupo de coliformesque se detectaban en siembras incubadas a temperaturas de 44,5 C y en medios decultivo especficos, slo una parte del grupo eran bacterias de origen fecal; el resto eranbacterias ambientales. Se les puso entonces el nombre de bacterias coliformes termotolerantesdebido a la alta temperatura de incubacin (44,5 C) en la cual se obtena un ptimodesarrollo.

En el grupo de bacterias termotolerantes est incluida la Escherichia coli,considerada como un organismo indicador de contaminacin fecal. Se ha demostradoque esta bacteria siempre est presente en un nmero elevado en las heces de humanosy animales de sangre caliente y comprende casi 95% de los coliformes en las heces.

Por esta razn, la contaminacin de origen fecal puede ser evaluada mediante ladeterminacin de coliformes termotolerantes o mediante la presencia de E. coli. En losvalores gua para la calidad bacteriolgica del agua de bebida (OMS, 1995), ambasdeterminaciones se consideran como alternativas aceptables y su presencia indicacontaminacin de origen fecal. Por esta razn, en los mtodos descritos en el presentemanual se encontrar que algunos estn dirigidos a la investigacin de coliformes


termotolerantes y otros a la de E. coli, de acuerdo con las caractersticas de los mediosde cultivo empleados.

Hasta hace pocos aos, se consideraba a los coliformes totales como indicadoresde contaminacin del agua. Sin embargo, se ha demostrado que solamente algunas delas especies que conforman este grupo son de origen fecal mientras que otras puedenestar presentes en forma natural en diferentes ambientes acuticos. Actualmente, loscoliformes totales se emplean para evaluar la calidad higinica del agua (Allen, 1996) yel grupo de bacterias coliformes termotolerantes, para evaluar la calidad sanitaria delagua, calidad que est relacionada con la transmisin de patgenos.

Se ha desarrollado una serie de mtodos para la enumeracin de bacterias enmuestras de agua. Los ms usados son los de cultivo en tubos con caldo especfico paradeterminado grupo de microorganismos. Otro mtodo, tambin usado con frecuencia,es el de concentracin con filtro de membrana.

Las bacterias coliformes totales se detectan con los mtodos de membrana defiltracin y tubos mltiples, con medios especficos, y se incuban a 35-37 C hasta 48horas. Los coliformes termotolerantes son detectados con mtodos similares pero conmedios especficos y una incubacin a 44,5 C.

Los anlisis de coliformes pueden efectuarse en un laboratorio de nivel bsico otambin en el campo. Esta ltima es una forma prctica de analizar una muestra deagua, para lo cual se necesitan un equipo de campo y algunos materiales complementarios.

2. ANLISIS BACTERIOLGICOS DE LOS PARMETROS DE LACALIDAD SANITARIA DEL AGUA DE BEBIDA: COLIFORMESTOTALES Y TERMOTOLERANTES

Se ha desarrollado una serie de mtodos para la enumeracin de microorganismosen muestras de agua. Los mtodos usados con mayor frecuencia son los tradicionalesde filtracin con membrana y de Nmero Ms Probable con tubos mltiples.

En algunos programas de vigilancia se proponen alternativas para ahorrar enmaterial y horas de trabajo, como la prueba cualitativa de presencia-ausencia. Una vezdetectada la presencia de coliformes, se efecta un segundo muestreo con el objetivode cuantificar el nivel de contaminacin del agua.

A fines de los aos ochenta se difundi el uso de medios con sustrato definido osustrato enzimtico, con los cuales se pueden detectar o enumerar selectivamente colifor-mes totales, termotolerantes y E. coli, segn el mtodo y medio de cultivo utilizado.

41

Cuadro 5.1Nivel de facilidad, rapidez y costo de las diferentes tcnicas para la

determinacin del grupo coliformesa

Tcnica Tipo Determinacin Facilidadb Rapidezb Costo pormuestra

US$b

Fermentacin en Cuantitativa Coliformes totales 3 3 2,5tubos mltiples Coliformes(tradicional) termotolerantes

Filtro de Cuantitativa Coliformes totales 2 2 2,5membrana Coliformes(tradicional) termotolerantes

Filtro de Cuantitativa Coliformes totales 2 1 1.5membrana con Coliformesmedio m-7 horas termotolerantes

Presencia-ausencia Cualitativa Coliformes totales 2 3 2,5en medio Coliformes

termotolerantesa Clasificacin del 1 (mayor) al 3 (menor).b Costo por muestra, sobre la base de precios referenciales de medios de cultivo y filtros de membrana.

No incluye equipos ni materiales reutilizables.

Los mtodos tradicionales de investigacin de coliformes por tubos mltiplesduran hasta 96 horas para coliformes totales y 72 horas para coliformes termotolerantes.Con la tcnica de filtro de membrana, la prueba dura 24 horas. Pero en muchos casosde emergencia, como desastres naturales, y cuando se producen fallas en el tratamientoy distribucin del agua que ocasionan un riesgo de contaminacin fecal, se hace necesariauna evaluacin rpida. Con esta finalidad, se puede emplear el mtodo de filtro demembrana con el medio MT-7 horas para coliformes y se agiliza la obtencin deresultados.

2.1 Mtodo de filtro de membrana. Mtodo tradicional

2.1.1 Introduccin

La tcnica de filtro de membrana se fundamenta en la filtracin de un volumendeterminado de muestra (100 mililitros o volmenes menores segn la densidadbacteriana esperada) a travs de un filtro de membrana de 0,45 micrmetros de



dimetro de poro, el cual es colocado sobre un medio de cultivo especfico y luegoincubado a la temperatura adecuada.

El mtodo de filtracin con membrana para la determinacin de coliformestotales y termotolerantes est aceptado por el Standard Methods for the Examinationof Water and Wastewater (American Public Health Association-American Water WorksAssociation, 1999), que lo propone como una alternativa para la determinacin de loscoliformes totales y termotolerantes. Este mtodo se recomienda para la determinacinde bacterias en muestras de agua potable y agua de origen subterrneo. El procedimientodescrito a continuacin es una versin simplificada de la tcnica ofrecida por el StandardMethods for the Examination of Water and Wastewater (American Public HealthAssociation-American Water Works Association, 1999) y por la OMS (1988).

2.1.2 Equipos y material

Calculados para procesar 10 muestras de agua. (Las cantidades, en algunos casos,son aproximadas y pueden aumentar de acuerdo con el criterio del analista.)

Un autoclave. Un horno de aire caliente o estufa para esterilizacin. Un destilador de agua. Un potencimetro o cinta de pH universal. Una incubadora, con una temperatura de incubacin de 35 0,5 C, contermostato y termmetro. Un equipo de bao Mara, con una temperatura de reincubacin de 44,5 0,2 C, con termostato y termmetro. Un sistema de filtracin (una bomba de vaco o aspirador manual, 2 frascoserlenmeyer Kitazato de un litro, mangueras de conexin y portafiltros previamente

esterilizados).

10 frascos de muestreo de vidrio y boca ancha estril. 20 placas de petri de 48 milmetros x 8,5 milmetros esterilizadas, identificadascon el nmero de la muestra, as como el volumen de muestra que va a serfiltrado.

43

10 probetas graduadas de 100 mililitros estriles, con la abertura recubierta conpapel aluminio. (Si los portafiltros no son graduados.) Pipetas estriles de 10 y 1 mililitros. (Si fuera necesario para diluir la muestra, unapor dilucin.) 20 frascos de dilucin de 100 mililitros. (Si fuera necesario hacer diluciones enalguna de las muestras, se debe aumentar 2 por dilucin.) Un frasco de boca ancha para colocar las pipetas que han sido utilizadas. Una pinza sin dientes. 20 membranas filtrantes esterilizadas, de 47 milmetros de dimetro y unaporosidad de 0,45 micrmetros. 20 almohadillas o pads esterilizados (en caso de usar el medio de cultivo lquido). Un mechero de Bunsen, para mantener el ambiente asptico y efectuar ladesinfeccin de las pinzas utilizadas. Una lupa o un microscopio estereoscopio segn las facilidades con que se cuente. Una fuente de luz directa.2.1.3 Soluciones y medios de cultivo

En cantidades aproximadas para 10 muestras:

20 mililitros de medio m-Endo 50 mililitros de agar m-Endo o agar EndoLES (para coliformes totales). En el apndice A se presenta el procedimientopara la preparacin de los medios de cultivo.

20 mililitros de medio m-FC 50 mililitros de agar m-FC (para coliformestermotolerantes). Un mililitro de etanol al 95%. 0,5 mililitros de cido roslico al 1% en NaOH al 0,2 N. 4 litros de agua destilada para la preparacin de los medios y agua de dilucin.



2 litros de agua de dilucin estril (preparada a partir de las soluciones stockA y B). 34 gramos de fosfato monopotsico (KH2PO4) para la preparacin de la solucinstock A. 81,1 gramos de cloruro de magnesio (MgCl2 . 6 H2O) para la preparacin de lasolucin stock B.2.1.4 Procedimiento analtico

Antes de iniciar el examen, limpiar la mesa de trabajo con una solucin desinfectantey colocar sobre la mesa de trabajo el material necesario para ejecutar el anlisis.

1. Preparar el sistema de filtracinsegn indica la figura.

Colocar un matraz de seguridadentre la bomba de vaco y el matrazque sostiene el portafiltros.

El portafiltros debe estar estril yfro.

2. Preparar las placas.

Identificar las placas con lpiz devidrio o tinta indeleble en el reaexterna de la base.

Si se trabaja con caldo selectivoestril, abrir la placa de petri estrilcon una pinza esterilizada al fuegoy colocar una almohadilla o pad.

45

3. Con una pipeta estril, agregar 2mililitros de caldo selectivo: mediom-Endo para coliformes totalesy medio m-FC para coliformestermotolerantes.

Si se decide trabajar con agar,distribuir con una pipeta estrilentre 3 y 5 mililitros del agar li-cuado (a 45 C aproximadamen-te) a la placa de petri estril. Tapar-la y dejar solidificar el medio antesde proceder al anlisis.

4. Retirar la parte superior del porta-filtros y, con una pinza previamen-te flameada al mechero y fra,colocar un filtro de membranaestril, con la cara cuadriculadahacia arriba y en el centro de laparte superior del portafiltros.

5. Acoplar la parte superior del por-tafiltros, teniendo cuidado de nodaar la membrana.



6. Para comprobar la esterilidad delfiltro, verter cuidadosamente en elportafiltros 100 mililitros de aguade dilucin estril.

El volumen de agua destilada semedir en el mismo embudo sieste es graduado. Tambin se pue-de medir en una probeta estril.

Conectar a la bomba de vaco yproceder a la filtracin.

Seguir los pasos 10-15 como si setratara de una muestra de agua.

7. Retirar la envoltura de papel delfrasco con la muestra.

8. Homogeneizar la muestra, agitarun nmero no menor de 25 veces,inclinando el frasco y formandoun ngulo de 45 entre el brazo yel antebrazo.

47

9. Verter 30 mililitros de agua desti-lada estril con el fin de humede-cer la membrana.

Verter 100 mililitros de la muestrade agua.

Filtrar.

Despus de la filtracin de lamuestra, enjuagar el portafiltrostres veces con porciones de 20-30mililitros de agua de dilucinestril, para evitar la retencin dealguna bacteria en las paredesinternas.

Evitar que se seque la membrana.

Apagar la bomba de vaco alfinalizar la operacin.

10. Separar la parte superior del por-tafiltros y, con una pinza previa-mente flameada y fra, retirar lamembrana cuidando de que lapinza toque apenas la parte perif-rica, fuera del rea de filtracin.

Acoplar nuevamente la partesuperior del portafiltros a la parteinferior.



11. Teniendo cuidado de no contami-nar el filtro de membrana, colo-carlo cuidadosamente con la su-perficie cuadriculada hacia arriba,sobre la almohadilla embebida enel medio de cultivo o directamentesobre el agar, si fuera el caso.

12. Verificar que no se formen bolsasde aire entre la membrana y laalmohadilla con el medio decultivo o la superficie del agar.

Si esto ocurre, levantar uno de losbordes del filtro de membranacon una pinza estril y, haciendomovimientos circulares, deslizarlocon la finalidad de eliminar las bol-sas, pues ellas impiden el contactode las bacterias con el medio decultivo, y as se dificulta o evita sucrecimiento.

13. Tapar la placa de petri, verificarla identificacin de la placa con elnmero de la muestra, dilucin yfecha de siembra.

Colocarla en forma invertida; esdecir, con la tapa hacia abajo.

49

14. Lavar nuevamente el filtro conagua de dilucin estril y procedera la siguiente filtracin.

Los portafiltros deben estar estri-les en el inicio de cada serie defiltraciones.

Si hubo un intervalo de 30 minu-tos entre una filtracin y otra, losportafiltros deben ser esterilizadosnuevamente, para evitar la conta-minacin accidental.1

15. Incubar las placas de petri colo-cndolas en posicin invertida;para el caso de los coliformes to-tales (placas con medio m-Endo,agar m-Endo o agar Endo LES),en una incubadora con bandejasforradas de papel toalla humede-cido. La incubacin ser a 35 0,5 C durante 24 horas.

1 La esterilizacin rpida de los portafiltros puede efectuarse mediante los siguientes procedimientos:exponerlos a radiacin ultravioleta durante dos minutos o sumergirlos en agua hirviendo por no ms de30 minutos. Controlar la esterilidad de cada portafiltro usado para cada serie de filtraciones. Para elloes necesario efectuar la filtracin de una muestra de 100 mililitros de agua destilada estril, antes ydurante la filtracin de las muestras. Esto puede hacerse cada 10 muestras de agua de bebida procesadasen un mismo portafiltro (o segn el nmero considerado en el programa de control de calidad).



16. Las placas destinadas a la determi-nacin de coliformes termotole-rantes en medio m-FC, agar m-FCu otro medio de cultivo especficopueden ser incubadas de dosformas: en una incubadora con100% de humedad o colocandolas placas en una bolsa de plsticocon cierre hermtico y sumer-gindolas en bao Mara a 44,5 0,2 C durante 24 horas.

2.1.5 Lectura y verificacin

Coliformes totales

Despus de la incubacin, seleccionar para lectura las placas con filtros demembrana que presenten entre 20 y 80 colonias tpicas de coliformes y no ms de 200bacterias de todos los tipos.

En el medio m-Endo, agar m-Endo o agar Endo LES, las colonias tpicas decoliformes totales presentan una coloracin de rosado a rojo oscuro con brillo metlicosuperficial. El rea brillante puede variar de tamao recubriendo toda la superficie de lacolonia o parte de ella. Las colonias atpicas pueden presentarse de color rojo oscuro,mucoides y sin brillo. Las colonias rosadas, incoloras, blancas y sin brillo metlico sonconsideradas como no coliformes.

En agua potable, verificar todas las colonias sospechosas o al menos cincocolonias, para lo cual se procede del siguiente modo:

Con una aguja de siembra, picar cada una de las colonias seleccionadas, esterilizarla aguja con fuego y enfriar antes de pasar a otra colonia. Sembrar en caldo verde brillante bilis al 2% e incubar a 35 0,5 C durante24-48 horas.Coliformes fecales

Despus de la incubacin, seleccionar las placas con filtros de membrana quepresenten entre 20 y 60 colonias tpicas de coliformes termotolerantes.

51

En el medio m-FC o agar m-FC, las colonias de coliformes termotolerantes sepresentan de color azul.

Con ayuda de una lupa o con un microscopio estereoscpico y con iluminacindispuesta en forma directa a la placa, efectuar el recuento de las colonias tpicas en lasplacas seleccionadas para lectura.

Calcular el nmero de coliformes a partir del recuento de colonias tpicas. En elcaso de evaluar la calidad de aguas destinadas al consumo humano, en que la rapidez enla obtencin de resultados es de fundamental importancia, si se detecta un incrementode coliformes termotolerantes, se debe informar como resultados preliminares losdatos obtenidos en la lectura de las placas y, con carcter definitivo, la confirmacin encaldo de cultivo.

En agua potable, verificar todas las colonias sospechosas o al menos cincocolonias, para lo cual se procede del siguiente modo:

Con una aguja de siembra, picar cada una de las colonias seleccionadas, esterilizarla aguja con fuego y enfriar antes de pasar a otra colonia. Sembrar en caldo EC e incubar a 44,5 0,2 C durante 24 horas.2.1.6 Presentacin de resultados

1. El nmero de coliformes totales se obtiene a partir del recuento de coloniastpicas que se desarrollan en el medio m-Endo, agar Endo o agar Endo LES.

2. El nmero de coliformes termotolerantes se obtiene a partir del recuento decolonias tpicas que se desarrollan en el medio m-FC o agar m-FC.

3. El recuento de coliformes totales y termotolerantes determinados a travs de latcnica de filtro de membrana se expresa del siguiente modo:

Unidades formadoras de colonias de coliformes totales por 100 mililitros(UFC de coliformes totales/100 mL). Unidades formadoras de colonias de coliformes termotolerantes por 100mL (UFC de coliformes termotolerantes/100 mL).

4. El recuento final de bacterias del grupo coliforme se calcula a partir del nmerode colonias tpicas que se desarrollan en el filtro de membrana y del volumen demuestra filtrado, aplicando la siguiente formula general:



UFC de coliformes totales/100 mL = N. de colonias tpicas

x 100 Volumen filtrado de muestra (mL)

Casos especiales:

a) Cuando la suma total de colonias (tpicas y atpicas) es superior a 200. El resultadofinal se expresa como conteo perjudicado (CP).

b) Cuando haya crecimiento en toda el rea de filtracin de membrana, sin coloniasbien definidas, expresar el resultado final como crecimiento confluente (C. Cf.).

c) Cuando se presentan colonias tpicas de coliformes y crecimiento confluente,expresar el resultado como presencia de coliformes y conteo perjudicado debidoa crecimiento confluente.

En los casos especificados para conteo perjudicado y crecimiento confluente, sedebe solicitar una nueva muestra y seleccionar menores volmenes de muestra para lafiltracin. De esta manera, para aguas tratadas, una filtracin de 100 mililitros puede sersustituida por 2 filtraciones de 50 mililitros 4 de 25 mililitros.

2.2 Mtodo del Nmero Ms Probable por tubos mltiplesMtodo tradicional

2.2.1 Introduccin

En esta tcnica los resultados de la fermentacin en tubos mltiples se expresanen trminos de Nmero Ms Probable (NMP) de microorganismos existentes. Elmtodo del NMP por tubos mltiples se fundamenta en un modelo de clculo deprobabilidades. De acuerdo con la alternativa de siembra elegida, se selecciona la tablade NMP correspondiente para obtener los recuentos de coliformes.

La tcnica de fermentacin en tubos mltiples es una alternativa para ladeterminacin de coliformes totales y termotolerantes y se recomienda para el anlisisde muestras de agua superficial que sirve como fuente de abastecimiento. Es muy tilen el caso de aguas superficiales con una alta densidad de partculas o coloreadas, queno pueden ser fcilmente procesadas por la tcnica de filtracin con membrana. Tambinse propone este mtodo para el anlisis de agua potable, para lo cual se recomienda lasiembra de una serie de 10 tubos con volmenes de 10 mililitros 5 tubos defermentacin con volmenes de 20 mililitros. Vanse los cuadros 5.2 y 5.3.

53

La tcnica de fermentacin en tubos mltiples para la determinacin de coliformestotales y termotolerantes consta de dos fases: la fase presuntiva y la fase confirmatoria.Ambos procedimientos se explican a continuacin. El procedimiento descritoinmediatamente es una versin simplificada de la tcnica multiple tube fermentation formembers of the coliform group del Standard Methods for the Examination of Water andWastewater (American Public Health Association-American Water Works Association,1999) y OMS (1988).

2.2.2 Equipos y material

Calculados para procesar 10 muestras de agua para consumo humano.

Un autoclave. Un horno de aire caliente o estufa para esterilizacin. Un destilador de agua. Un potencimetro o cinta de pH universal. 10 frascos de vidrio estriles y de boca ancha para el muestreo. Un equipo de bao Mara con una temperatura estable a 44,5 0,2 C Una incubadora a 35 0,5 C. Un mechero Bunsen. 450 tubos de 16 x 150 milmetros (o de mayor medida) con tapones. 450 tubos Durham. 20 pipetas serolgicas de 10 mililitros. 10 frascos de dilucin de 100 mililitros. Un asa de inoculacin con aro de nquel, cromo o platino. Material para la preparacin de medios de cultivo: esptulas, matraces, probetas,etctera.



2.2.3 Soluciones y medios de cultivo

En cantidades aproximadas para 10 muestras.

500 mililitros de caldo lauril sulfato (caldo lauril triptosa) a doble concentracin(para la prueba presuntiva del grupo coliformes). Vase la preparacin de losmedios en el apndice A.

Un litro de caldo lauril sulfato (caldo lauril triptosa) a concentracin simple (parala prueba

Manual Para Laboratorio

Documents

Transcript of Manual Para Laboratorio