Manual Micro 2015.doc

CECyTEG PUEBLO NUEVO Realizar análisis microbiológico

Nombre: _____________________________________

Grupo: ____________ Fecha: ____________________

Realiza análisis microbiológico

NOMBRE El MICROSCOPIO No. 1

Competencia a Desarrollar Manejar las técnicas básicas de los análisis microbiológicos.

Habilidades Identificar cada una de las partes del microscopio, su uso adecuado y cuidados, en un análisis microbiológico directo.

Instrucciones para el alumno

Al transportar el microscopio, tener cuidado de que no se muevan las piezas. Sujétalo del brazo y la base.

Cuando enfoques, mover los tornillos suave y despacio. Al enfocar con 4X, automáticamente está para 10X, 40X.

Instrucciones para el

DocenteSupervisar en todo momento el uso adecuado del microscopio.

Recursos Materiales de

ApoyoContar con diferentes preparaciones, para su observación. Contar con las instalaciones del taller y/o laboratorio

Actitudes a Formar

Orden, Limpieza y Responsabilidad

Manera didáctica de

lograrlas

Realizando adecuadamente la práctica, manteniendo su área de trabajo limpia y entregando su reporte en tiempo y forma.

Competencias Genéricas a Desarrollar

Se conoce y valora a sí mismo y aborda problemas y retos teniendo en cuenta los objetivos que persigue.

Manera Didáctica de

lograrlasCuestionarios previos de la técnica de enfoque.

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INTRODUCCIÓN.

Uno de los instrumentos esenciales para el estudio de microorganismos, tejidos y células es el microscopio, que es un aparato de óptica, del cual existen varios tipos: simple, compuesto, electrónico, etc.

El primer criterio de clasificación, es el tipo de energía que utilizan para formar la imagen, este criterio lo divide en dos grupos:

A) FOTONICOS: Son aquellos que utilizan la luz, ya sean natural o artificial por mucho tiempo también se les ha denominado ópticos.

B) ELECTRONICOS: Son los que forman la imagen con un flujo de electrones que como lentes, tienen campos magnéticos.

Los fotónicos según el número y disposición de sus lentes se clasifican en:

I) SIMPLES. Son los que trabajan como si fuesen una sola lente, ó sea que efectúan la operación de amplificación de la imagen en una ocasión.II) COMPUESTOS. Son los que efectúan la operación de amplificación de la imagen en dos o más ocasiones.

La función principal del microscopio es permitir al observador distinguir estructuras con claridad, a esta función se le conoce como PODER DE RESOLUCION. La resolución es más importante que la amplificación, por que no siempre es necesario obtener la imagen más grande posible, sino que es indispensable observar con claridad los detalles finos.

El estudio del microscopio lo iniciaremos conociendo el nombre de las partes que lo forman. Enseguida se enlistan estas estructuras, las que van precedidas de un numero, el cual colocaras en el esquema del microscopio, anexo.

OPTICAS:1.- OCULAR 6.- OBJETIVO SECO FUERTE.2.- TUBO DEL OCULAR 7.- OBJETIVO DE INMERSION.3.- TUBO DEL MICROSCOPIO. 8.- DIAFRAGMA.4.- OBJETIVO LUPA PANORAMICA 9.- LAMPARA.5.- OBJETIVO SECO DEBIL.

MECANICAS:A) REVOLVER F) TORNILLO MACROMETRICOB) PINZAS DE LA PLATINA G) TORNILLO MICROMETRICOC) PLATINA H) BASED) BRAZO I) RIOSTRATO DE LA LUZE) COLUMNA.

Tradicionalmente se ha conocido a los objetivos con el nombre de; LUPA, SECO DEBIL, SECO FUERTE Y OBJETIVO DE INMERSION.

Los objetivos secos, son cuando entre la preparación y la lente frontal del objetivo no se coloca ningún líquido de continuidad. El objetivo de inmersión es cuando se coloca un medio de continuidad que puede ser aceite mineral.

El poder de amplificación de los objetivos son: lupa panorámica, objetivo 10 X, ( seco débil), objetivo 40 X ( seco fuerte), objetivo 60 X ( seco fuerte ), objetivo 100 X ( de inmersión ).

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OBJETIVO:

Al finalizar la práctica el alumno será capaz de explicar la función de cada parte del microscopio y de manejar correctamente el microscopio.

MATERIAL:

Un microscopio.Un portaobjetosUn cubreobjetosUna lancetaMuestra

MANEJO DEL MICROSCOPIO

El manejo del microscopio es bastante sencillo, aunque al principio cuesta trabajo, los pasos a seguir son:1. Colocar el microscopio en un lugar seguro, además el observador deberá estar cómodo.2. Revisar que este completo, de lo contrario comunicarlo al profesor.3. Girar el revólver para colocar la lupa panorámica (el objetivo más pequeño), en posición de observación

cuidando que ninguno de los objetivos roce con la platina al girar el revólver.4. Baje la platina a tope.5. Iluminación: prenda el aparato.6. Una vez iluminado el microscopio, proceda a colocar la preparación sobre la platina, la que quedara

sujeta por las pinzas de la misma. Tenga cuidado de que el material de estudio quede sobre el condensador.

7. Observe por el ocular y de ser necesario corrija la cantidad de luz y sin dejar de observar inicie el enfoque, el que se consigue bajando lentamente la platina, con el tornillo macrométrico hasta dejar la imagen lo más claramente posible.

8. Una vez enfocado el microscopio, proceda a definir la imagen con el tornillo micrométrico, a partir de este momento el único tornillo de enfoque que deberá usar es el micrométrico.

9. Si el microscopio quedó bien enfocado en la lupa panorámica, automáticamente lo esta el resto de los objetivos; solo basta girar el revólver para cambiar de objetivo y para enfocar adecuadamente, basta girar lentamente el tornillo micrométrico.

La lupa panorámica nos permite observar un campo grande, pero con poco aumento, esto es útil para elegir el campo más adecuado en forma rápida. El seco débil da mayor aumento pero con un campo más pequeño, por ultimo el seco fuerte nos da aumentos aún mayores, pero con campos más pequeños.

EL OBJETIVO DE INMERSION, es útil cuando se requieren grandes poderes de amplificación y se utiliza de la siguiente manera: Una vez que se tiene enfocado el microscopio con un seco fuerte, se gira parcialmente el revólver quedando a la mitad, entre objetivo seco fuerte y objetivo de inmersión, coloque una gota de aceite mineral, sobre la preparación, complete el giro del revólver para que quede el objetivo de inmersión en eje de observación, con el tornillo micrométrico, suba la preparación para que el objetivo toque el aceite y logre su enfoque fino con el mismo tornillo.

LO ANTERIOR SE RESUME DICIENDO QUE A MAYOR PODER DE AMPLIFICACION MENOR CAMPO DE OBSERVACION.

OBSERVACIONES.

Da nombre a cada parte del microscopio

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1. _________________________2. _________________________3. _________________________4. _________________________5. _________________________6. _________________________7. _________________________8. _________________________9. _________________________10. _________________________11. _________________________12. _________________________13. _________________________14. _________________________15. _________________________

CUESTIONARIO.

1.- ¿Cuál es la diferencia entre el microscopio simple y compuesto? _______________________________________________________________________________________

_______________________________________________________________________________________

2.- ¿Cuantos tipos de microscopio se conocen actualmente?_______________________________________________________________________________________

_______________________________________________________________________________________

3.- Investiga qué es el poder de resolución._______________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________________

4.- ¿Cuales son los objetivos secos y en que consiste este nombre?_______________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________________

5.- ¿Cuál es el objetivo de inmersión?_______________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________________

6.- ¿Cuál es la función del microscopio?_______________________________________________________________________________________

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CONCLUSIONES_______________________________________________________________________________________

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NOMBRE ESTERILIZACION DE MATERIAL POR CALOR HUMEDO No. 2


Habilidades Operar la técnica de esterilización de material por calor húmedo, como técnica básica para un análisis microbiológico.


Efectúa la técnica de esterilización atendiendo las indicaciones de tu docente, el cual te indicará el orden de envoltura del material.

Realiza con responsabilidad cada uno de los pasos cuidando los parámetros requeridos para que obtengas un producto de calidad.

Maneja con cuidado el material de vidrio y la autoclave.


Docente

Especificar el material que se puede utilizar para cada tipo de esterilización.

Verificar el acomodo del material en la autoclave.


ApoyoUsar cinta testigo, para verificar la eficacia de la técnica de esterilización. Si no se cuanta con autoclave, tener lista olla de presión.

Actitudes a Formar


Manera didáctica

de lograrlas

Seguir con precaución cada paso, para una buena esterilización.


Desarrolla innovaciones y propone soluciones a problemas a partir de métodos establecidos.


lograrlasRealizar varias veces la técnica de envoltura, con diferentes materiales.

Nombre: ______________________________________

Grupo: ___________ Fecha:______________________


INTRODUCCIÓN

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El proceso de esterilización es mediante el cual se destruyen todas las formas de vida bacteriana, una sustancia o material es estéril cuando está libre de microorganismos.

Los microorganismos se eliminan o inhiben mediante procedimientos físicos y agentes químicos.Dentro de los químicos tenemos los desinfectantes como, Alcohol, Fenol, Iones de metales pesados,

etc. Sin embargo un desinfectante, es un agente químico capaz de matar las formas de vida, pero no necesariamente las esporas de los microorganismos patógenos.

Los procedimientos físicos consisten en la aplicación de calor que es el más simple para esterilizar, solo con una condición de que el material no se dañe con el suministro de calor. Para ello existen dos métodos físicos: Calor Seco y Calor Húmedo.

OBJETIVO:El alumno aprenderá a manejar los diferentes tipos de esterilización de material de vidrio más

comunes en el laboratorio de microbiología.

MATERIALCajas de petri Nota: la cantidad de material dependerá, de lo disponible.PipetasMatraces ErlenmeyerTubos Papel de envolturaAutoclave (olla de presión)Cinta testigo

PROCEDIMIENTO:

1. Lavar todo el material de vidrio a esterilizar, enjuagar finalmente con agua destilada.2. Las cajas de petri se envuelven individualmente en el papel de envoltura y se sellan con cinta.3. Los tubos de ensaye y matraces, se etiquetan y se les coloca un tapón de algodón, cubriéndolos

posteriormente con papel de envoltura o aluminio, esto para evitar que el algodón se humedezca.4. Las pipetas se envolverán en el papel, se coloca un pequeño algodón en el extremo donde se pipetea y

se sellan con cinta.5. Para meter el material a la olla es necesario colocar agua al nivel de la rejilla y ahora si acomodar el

material.6. Cerrar la autoclave y abrir la válvula para permitir la salida del aire.7. Cuando sea suficiente el vapor eliminado cerrar la válvula.8. Observar el manómetro y cuando marque 15 libras de presión (la temperatura estará a 121ºC) empezar

a contar tiempo de esterilización (15 min.) mantener esta temperatura, bajando la flama.9. Pasado el tiempo de esterilización apagar completamente la flama y esperar a que el manómetro

marque cero y solo hasta entonces abrir la tapa, sacar el material con guante aislante o con lienzo seco.

NOTA: Los medios de cultivo frecuentemente se esterilizan por calentamiento en la autoclave a una temperatura y tiempos adecuados para cada uno. Otros medios, por su contenido en agentes inhibitorios no requieren esterilización e incluso su carácter inhibitorio y diferencial suelen verse afectados si se someten a elevadas temperaturas.

OBSERVACIONESTener mucho cuidado al manejar el material ya que es de vidrio, sobretodo al estarlo envolviendo.

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RESULTADOS:Verifica con tu maestro que la esterilización este bien realizada, para esto puedes usar cinta testigo.

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CUESTIONARIO:

1. ¿Qué es esterilización?_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2. ¿Cuáles son las condiciones de esterilización para material?_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3. ¿Por qué es importante envolver bien el material?_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________4. ¿Qué finalidad tiene el tapón de algodón en las pipetas?_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________5. Explica ¿Por qué es necesario sacar el aire de la olla de presión?_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

6. ¿En qué consiste la esterilización por calor seco y para que se utiliza?_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

CONCLUSIONES:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

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Nombre: ____________________________________

Grupo: ________ Fecha: ______________________


NOMBRE TINCIONES DE LOS MICROORGANISMOS No. 3


Habilidades Aplicar diferentes tinciones microbiológicas, de acuerdo a las necesidades del estudio microbiológico.


Efectúa la técnica de tinción atendiendo las indicaciones de tu docente, el cual te indicará cual es la más conveniente.


Cuidado con los tiempos y orden de aplicación de cada colorante.


DocenteEstimar los tiempos de aplicación de tinciones, para hacer las observaciones en tiempos adecuados.


ApoyoSe recomienda tener preparaciones testigo, para comparación de los alumnos.

Actitudes a Formar



lograrlasTener presente que el orden será el éxito de la técnica




lograrlasRealizando la práctica y los resultados compararlos con bibliográficos o bien con preparaciones testigo.

INTRODUCCIÓN

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http://wzus1.ask.com/r?t=a&d=us&s=a&c=p&ti=1&ai=30751&l=dis&o=13047&sv=0a5c4242&ip=bdea3c98&u=http%3A%2F%2Fwww.moldbacteria.com%2Fimages%2Fpenicillium-chrysogenum-spores.jpg


Las características morfológicas y estructurales de los microorganismos pueden ser determinadas por el examen de especies apropiadamente preparadas, cuando se utiliza el campo brillante del microscopio en el examen, es conveniente que las células sean teñidas para hacerlas más fácilmente visibles. Las células sin teñir son prácticamente transparentes y son mejor observadas por las técnicas de tinción que permiten un control crítico de la iluminación.

Los colorantes se combinan químicamente con los componentes del protoplasma bacteriano; por lo que resulta muy severo el proceso, esto es, si la célula no había muerto durante la fijación, el proceso de coloración la mata. Los colorantes más usados son sales.

OBJETIVO:El alumno realizará algunas tinciones diferenciales para bacterias (Gram), la identificación de

organelos en los microorganismos como los mohos (azul de metileno)

MATERIAL REACTIVOS2 Portaobjetos Gram (cristal violeta, lugol, safranina)1 asa de nicromo Azul de metileno2 Mechero Bunsen Alcohol-acetona 1:1 Microscopio PisetaPinzas punta romaCinta diurex

PROCEDIMIENTO:

TINCION DE GRAM1. Preparar el frotis y fijarlo al calor.2. Cubrirlo con solución de cristal violeta al 1% en agua por 1 min.3. Lavar con agua (lavado de canto).4. Cubrirlo nuevamente con lugol durante 1.5 min.5. Lavar nuevamente con agua.6. Decolorar con alcohol-acetona (1:1).7. Lavar con agua.8. Cubrir el frotis con safranina al 0.5% en agua por 20 a 30 seg.9. Lavar con agua, dejar secar y observar al microscopio con el objetivo de inmersión.

TINCIÓN DE AZUL DE METILENO1. Colocar una gota pequeña de azul de metileno en un portaobjetos limpio.2. Con una cinta diurex, tomar la muestra, esto es, en el dedo pulgar de la mano derecha, con la otra mano

tomar la caja para abrirla.3. Colocar la muestra sobre el colorante.4. Observar al microscopio con 4x, 10x, 40x.

OBSERVACIONES Analizar los resultados, comparando una tinción con otra.

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RESULTADOS______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

CUESTIONARIO1. ¿Para que sirve una tinción en microbiología?_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________2. ¿Por qué es más fácil la tinción de azul de metileno que la de Gram?_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________3. Describe 3 diferencias entre bacterias gram (+) y gram (-)_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________4. Explica cual de los dos grupos de bacterias gram son más patógenas para el humano._____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________5. ¿Qué efecto tendrá el colorante sobre el microorganismo?_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

CONCLUSIONES________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

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Nombre: ___________________________________

Grupo: _______ Fecha: ______________________


NOMBRE TÉCNICAS DE SIEMBRA No. 4, 5


Habilidades Aplicar las técnicas de siembra en los análisis microbiológicos, incluyendo la preparación y dilución de la muestra.


Efectuar las técnicas de siembra atendiendo las indicaciones de tu docente.



Docente

Jerarquizar el orden de aplicación de las técnicas, especificando su uso y prioridad, para verificar que el alumno desarrolle su competencia.Revisar que las cajas sean colocadas de manera apropiada en la incubadora y a la temperatura correcta.


ApoyoPracticar la técnica sobre gelatina casera.

Actitudes a Formar



lograrlas

Seguir la secuencia para la aplicación de la técnica.




lograrlas

Lectura previa de la norma NOM-109-SSA-1-1994. Variar el tipo de muestra, para aplicar en diferentes condiciones las

técnicas de siembra.

TOMA DE MUESTRAActividad previa a la práctica de dilución y métodos de siembra de microorganismos.

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La técnica de recolección de muestra para su análisis microbiológico establece una serie de precauciones y condiciones que deben ser observadas a fin de obtener resultados significativos en el trabajo.

Puede tratarse de un alimento sospechoso de haber causado una infección o intoxicación, puede tratarse de un control de calidad rutinario, puede ser un alimento con un grado de frescura incierto, o puede ser un problema de investigación sobre la causa de intoxicación.

El tamaño de la muestra (peso, volumen a granel o en lotes) está determinado por la cantidad de alimento disponible, para lo que se recomienda lo siguiente:

Utilizar recipientes, bolsas y material estéril para su recolección, cubrirlos con papel estraza o aluminio para su protección.

Al colectar la muestra evitar tierra aire, estornudos y saliva, solo abrir lo necesario del recipiente a la hora de tomar la muestra e inmediatamente cerrar.

Es importante que el recipiente sea estéril y libre de sustancias que pudieran afectar la viabilidad del microorganismo. Rotular debidamente anotando cualquier observación para ser tomada en cuenta en el análisis. Si son envases tomar por niveles y al azar ya sea en cajas, piezas, costales pequeños, etc. Si son a granel o piezas grandes obtener de diversas posiciones y no mezclar en el mismo recipiente.

Transportar las muestras lo más rápido posible sobre todo si son alimentos perecederos o semiperecederos y mantenerlos en refrigeración de dos a ocho grados o congelación si son alimentos congelados.

DILUCIÓN DE MUESTRA

INTRODUCCIÓN:

Al diluir una muestra se pretende facilitar el conteo de las ufc (unidad formadora de colonias por gramo o ml de muestra). En este método un factor que disminuye el grado de confianza es que solo se toma una porción pequeña de la muestra (10%), ya que en las muestras no se presenta una distribución homogénea de los microorganismos, corriendo el riesgo de que la porción tomada de muestra no sea realmente representativa, introduciendo así un grado de incertidumbre.

En general, pueden presentarse tres situaciones en que se requiere realizar diluciones: 1) Se puede necesitar levantar una cosecha de células de una especie particular que se tiene a mano. 2) Puede ser necesario determinar el número de tipos de organismos presentes en un material dado. 3) Se puede desear aislar un tipo particular de microorganismo de una fuente natural.

Puede resultar sumamente difícil hacer que microorganismos a los que microscópicamente se observa creciendo en un ambiente natural, crezca en cultivo puro en un medio artificial

OBJETIVO:

Por medio de una serie de diluciones el alumno será capaz de reducir la concentración de una muestra, que incluso puede llegar a conocer el número de microorganismos, para posteriormente aplicar alguna de las técnicas de siembra.

MATERIAL REACTIVOSTubos de ensaye o cultivo Agua o solución BufferGradilla Muestra problemaPipetas de 1y 10 ml estérilesFrascos de diluciónAutoclaveVarilla LMecheros BunsenIncubadora

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PROCEDIMIENTO:

DILUCIONES (PRACTICA 4 Y 5)

1. Esterilizar material necesario.2. En un tubo de ensaye estéril se coloca 1 ml de muestra a analizar y se diluye con 9 ml de buffer.3. De esta manera de la primera dilución (1:10) se toma 1 ml (con pipeta estéril) y se diluye con 9 ml del

disolvente.4. De la anterior dilución (1:100) se toma 1 ml y se adicionan 9 ml de disolvente para obtener una dilución

1:1000.5. Se repite el procedimiento hasta obtener la dilución deseada que puede ser hasta 1:10000 o 1:100000 o

más.6. De aquí se puede pasar a cajas de petri (Sembrar por gota, extensión o vaciado).7. NO CONFUNDIR las pipetas y tener cuidado de tener el material rotulado previamente a la siembra

TÉCNICA POR VACIADO (PRACTICA 4)1. Esterilizar material (cajas petri).2. Preparar medio de cultivo.3. Utilizar la serie de diluciones.4. Inocular las cajas con 0.5ml de la dilución deseada.5. Agregar suficiente medio en estado líquido a temperatura de 30 a 35 ºC.6. Mezclar suavemente en forma de ocho y dejar que se solidifique para incubar.

TECNICA POR EXTENSION EN SUPERFICIE (PRACTICA 5)1. Esterilizar material (cajas petri)2. Preparar medio de cultivo.3. Vaciar el medio a las cajas de petri.4. Dejar solidificar y secar incubando 3 hr a temperatura ambiente.5. Utilizar diluciones preparadas (técnica anterior).6. Inocular de cada dilución 0.1 ml sobre la superficie de la placa por duplicado.7. Extender con la varilla el inoculo en la superficie de la placa pasando la varilla repetidas veces.8. Dejar a temperatura ambiente 15 min y después incubar a 35 ºC durante 48 hr.

NOTA: Utilizar una varilla para cada diluciónEn la técnica de extensión en superficie, tener cuidado de que cuando se inicie a girar la varilla dé por lo menos una vuelta completa

OBSERVACIONES____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

RESULTADOS13


Muestra: __________________________________________

Dilución Vaciado en placaNo. de UFC

Extensión en superficie No. de UFC

GotaNo. de UFC

1: 10

1: 100

1: 1000

1: 10000

Nota: UFC es unidades formadoras de colonias

Compara las técnicas aplicadas_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

CUESTIONARIO:1.¿A que tipo de muestras se recomienda hacer varias diluciones?______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________2.¿Qué técnica resultó ser más precisa?______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________3.¿A que se debe que algunas muestras tienen altos conteos?______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________4.¿Por qué usamos un buffer como diluyente? ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

CONCLUSIONES:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

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NOMBRE AISLAMIENTO DE BACTERIAS No. 6


Habilidades Realizar resiembras adecuadas para los análisis microbiológicos.


Efectúa la técnica de aislamiento de bacterias atendiendo las indicaciones de tu docente.


Tener cuidado de tomar el asa de manera correcta


Docente

Hacer hincapié sobre la importancia del aislamiento en la propia caja, para no perder el objetivo de dicha técnica.

Revisar que las cajas sean colocadas de manera apropiada en la incubadora.


Apoyo

Practicar previamente el uso del asa, para no romper el medio de cultivo, preparar cajas por duplicado

Actitudes a Formar



lograrlas

Seguir la secuencia para un aislamiento adecuado de bacterias




lograrlasIdentificar las destrezas de cada alumno, para el manejo del material y guiarlos en la aplicación de la técnica.

Nombre: _____________________________________

Grupo: _______________ Fecha: ________________


INTRODUCCIÓN

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Para estudiar las propiedades de un microorganismo dado, es necesario manejarlo en cultivo puro, libre de otro tipo de microorganismos. El método de estría cruzada par aislamiento de colonias de microorganismos, esta basado en la dilución sucesiva de la muestra original de modo que en la segunda o tercera estría, queden células separadas unas de otras, con lo cual se logra que dichas células al reproducirse formen colonias separadas unas de otras y originadas a partir de un solo microorganismo.

Puede no haber crecimiento debido a un mal manejo de la técnica o porque no hay microorganismos, en caso de no haber crecimiento puede ser por mala manipulación al hacer las estrías, por lo que no hay dilución. Contaminación por no trabajar en condiciones de esterilidad. Alta densidad celular en la muestra original, por lo que requieren diluciones previas.

OBJETIVO

Aplicar la técnica de estría para el aislamiento de bacterias.

MATERIAL REACTIVOSCajas petri Agar nutritivoAsa Muestra problema o siembra anteriorMecheros Agua destiladaIncubadoraAutoclaveMatraz erlenmeyerProbeta

PROCEDIMIENTO

1. Esterilizar material necesario.2. Preparar medio de cultivo, dejar solidificar.3. Descargar el inoculo primario en un extremo de la caja ya sea con el asa o con hisopo.4. Esterilizar el asa y hacer de 4 a 5 estrías, esterilizar nuevamente el asa.5. Voltear la caja en un ángulo de 90º y a partir de las anteriores estriaciones, hacer otras tantas.6. Repetir el proceso hasta obtener 4 grupos de estriaciones en la caja.

OBSERVACIONES Anota las características generales del resultado de la estriación.

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

RESULTADOSRealiza un dibujo de las colonias obtenidas y determina lo siguiente:

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Morfología colonias Macro Hacer dibujos de las característicasTamaño Diámetro

Confluencia Separación

Elevación Elevadas o Planas

Apariencia por la luz transmitida Centros oscuro

Apariencia por la luz reflejada Brillo u opaca

CUESTIONARIO1.¿Qué ventajas tiene la técnica de asilamiento?______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________2.¿Qué desventaja tiene?______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________3.¿En que casos se pudiera emplear esta técnica?______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________4.¿Por qué es importante determinar la morfología macroscópica de las colonias?______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________5.¿De que manera influye el trabajo del analista y la zona de esterilidad para obtener un resultado confiable?______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

CONCLUSIONES___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

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Nombre: _____________________________________

Grupo: ____________ Fecha: ___________________


Nombre: ____________________________________

Grupo: _____________ Fecha: _________________


NOMBRE RECUENTO BACTERIANO DE MESOFILICOS AEROBIOS POR VACIADO EN PLACA No. 7


Habilidades Determinar de manera aproximada los microorganismos viables de contaminar un alimento, ya sea fruta u hortaliza, o en ambos.


Efectúa la técnica de Mesofílicos atendiendo las indicaciones de tu docente, el cual te indicará el orden de envoltura del material.


Asegurarte de realizar una distribución correcta de la muestra


Docente

Verificar que el alumno comprenda la técnica, antes de realizar la práctica.

Sondear entre los alumnos la forma de preparar los medios de cultivo. Revisar que las cajas sean colocadas de manera apropiada en la

incubadora.


ApoyoSe recomienda hacer las siembras por duplicado.

Actitudes a Formar

Orden, Limpieza y responsabilidad


lograrlas

Seguir la secuencia para el recuento adecuado de Mesofílicos





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INTRODUCCIÓN

La precisión del método radica principalmente en: Homogeneización de la muestra, volumen, manejo de muestra, número de diluciones, temperatura de incubación. Esta técnica determina el número de bacterias que se encuentran en la muestra.

Dentro de los métodos empleados para determinar microorganismos, ninguno de estos métodos permite la determinación de números exactos de microorganismos y aunque algunos métodos de análisis son mejores que otros cada uno tienen sus limitaciones.

Algunos de éstos métodos son directos, en ellos se encuentra directamente cada microorganismo, este método no permite distinguir células viables de las células muertas en cambio en los métodos indirectos el analista observa algún producto de microorganismo que guarda relación en su intensidad o abundancia con los microorganismos originalmente presentes en la muestra, en este tipo de pruebas únicamente participan los microorganismos viables y de ellos un grupo seleccionado de acuerdo a las condiciones ambientales, la composición del medio de cultivo.

OBJETIVODeterminar el número total de bacterias viables que se encuentran presentes en la muestra.

MATERIAL REACTIVOSCajas petri (estériles) Agar para cuenta estándarPipetas estériles de 10 ml y 1 ml Buffer de fosfatosMatraces de 250 ml Agua destiladaTubos con tapón de roscaIncubadoraOlla de presiónEspátula Vaso de precipitado 250 mlGradillaPlancha de calentamientoCampana de flujo laminarMecheros BunsenProbeta

PROCEDIMIENTO:

Preparar el medio de agar cuenta estándar: 23.5 gr de medio en un litro de agua, esterilizar a 15 lb durante 15 min.1.Homogeneizar la muestra.2.Transferir 10 ml de la muestra al matraz con 90 ml de Buffer, homogeneizar.3. Continuar las diluciones usando alícuotas de 1 ml con 9 ml de buffer. Al concluir cada dilución inocular 1ml

en cada caja petri, antes de preparar la siguiente dilución. No inocular la muestra sin diluir.4.Completar en ambos casos hasta la cuarta dilución.5.Agregar a cada caja de 12 a 15 ml de medio Agar- cuenta estándar fundido y manteniendo caliente el

medio de 35 a 37ºC.6.Incorporar el inoculo al medio por rotación de caja sobre un superficie lisa y dejar solidificar.7.Incuba a 37ºC durante 48 hr.8.Contar las colonias en todas las cajas, en aquellas que contengan menos de 300 una mitad representativa

de la caja si contiene aproximadamente 301 a 500 colonias multiplicar por 2 el resultado; una cuarta parte representativa de la caja si el numero en toda la placa es aproximadamente de 501 a 800 y multiplicar por

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cuatro si el número de colonias es mayor de 800 contar con 5 cuadros mayores de la cuadricula del contador y multiplicar por 13.

9. Repetir el recuento una vez concluida la primera lectura.10. Reportar microorganismos viables por gramo o mililitro de la muestra analizada 30, 300 colonias /ml.

OBSERVACIONES:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

RESULTADOS:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

CUESTIONARIO1. ¿Por qué se establece un conteo de 30 – 300 colonias por placa?_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________2. ¿Qué medio se pueden usar para esté propósito?_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________3. ¿Qué características tiene en cuanto a composición este medio?_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________4. Elaborar un medio para la determinación de mesofílicos aerobios ¿Cuál sería y dé su composición?____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

CONCLUSIONES___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

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Grupo: ___________ Fecha: ____________________


NOMBRE RECUENTO DE HONGOS Y LEVADURAS No. 8


HabilidadesDistinguir las características que diferencian a los hongos y levaduras, presentes en alimentos frescos y procesados a bases de frutas y hortalizas.


Efectúa la técnica de recuento de hongos y levaduras atendiendo las indicaciones de tu docente, el cual te indicará el orden de envoltura del material.


Considerar cualquier detalle como base para la identificación de los hongos y levaduras.


Docente

Verificar que el alumno comprenda las estructuras a diferenciar en los hongos y levaduras, antes de realizar la práctica.

Sondear entre los alumnos la forma de preparar los frotis de las muestras.

Revisar que las cajas sean colocadas de manera apropiada en la incubadora.


ApoyoApoyarse en esquemas bibliográficos de los hongos y levaduras.

Actitudes a Formar

Orden, Limpieza y

responsabilidad


lograrlas

En la medida de que se trabaje en orden, se tendrá éxito en los resultados.





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INTRODUCCIÓN

La importancia de los hongos en los alimentos puede considerarse desde diferentes puntos de vista.A. Por su utilidadB. Por su alteración en los alimentosC. Producción de toxinas y su efecto en los animales y en el ser humano.D. En algunos alimentos su número se asocia generalmente a deficiencias en las prácticas

higiénicas de fabricación y almacenamiento.Algunas diferencias que presentan los hongos con respecto a las bacterias son: La velocidad de

crecimiento en más lenta, la demanda de un ambiente aeróbico, la tendencia de algunas especies de desarrollar extensivamente sobre placas de cultivo.

La presencia de hongos en los alimentos se asocia a diferentes prácticas higiénicas de fabricación y almacenamiento.

Los recuentos pueden referirse a fragmentos de micelio de hongos que han desarrollado en el alimento de esta manera se conoce la cantidad de la materia prima utilizada en la fabricación.

OBJETIVOAnalizar un alimento, cuales quiera, para determinar la presencia de hongos y levaduras.

MATERIAL REACTIVOSCajas petri Medio de cultivo: Agar de papa dextrosaGradilla Buffer de fosfatosPipetas de 1 ml y 10 ml Agua destiladaMecheros BunsenVaso de precipitado 250 mlMatraces 250 mlIncubadoraOlla de presiónEspátulaTubos con tapón de roscaMortero con pistiloPlancha de calentamientoCampana de flujo laminar

PROCEDIMIENTO1.Sembrar frutas a excepción de naranja o alguna hortaliza, paleta, nieve de frutas.2.Realizar diluciones 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000

NOTA: Homogeneizar adecuadamente las diluciones para permitir un fácil conteo e identificación.3.Realice la técnica de vaciado en placa para cada dilución.4.Prepara medio de cultivo y esterilízalo.5.Vaciar a las cajas petri6.Dejar enfriar hasta que el medio este semisólido.7.Incubar a 28ºC durante 24 – 48 hrs8.Contar las colonias de hongos y levaduras presentes en las muestras.

OBSERVACIONES __________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

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RESULTADOSAnote en forma de cuadro las características morfológicas de las diferentes colonias de hongos y

levaduras observadas.

Alimento Hongos LevadurasConteo Características Conteo Características

CUESTIONARIO1.De la composición del medio empleado.______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________2.Mencione otro medio de cultivo empleado en el aislamiento de hongos así como su composición._____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________3.Mencione 5 ejemplos de productos obtenidos por la acción de los hongos._____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________4.Mencione 3 objetivos de la práctica diferentes a los que se presentan en la misma y concluya si se

cumplieron o no. Explique su respuesta___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

CONCLUSIONES____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

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