Manual Del Lab Toxi 2011-1 Ok1

Departamento de Ciencias Biolgicas Seccin de Bioqumica y Farmacologa Humana

Manual del laboratorio de TOXICOLOGA E HIGIENE PBLICA

FESC C-1 Cuautitln Izcalli Estado de Mxico Agosto del 2010

Manu del Lab ual boratorio de Toxicolog e Higie Pblica ga ene aAU UTORES Dr. Jacques A . Ades TotahProfesor de asignatura Departa amento Ciencia Biolgicas as n oga Seccin de Bioqumica y Farmacolo Humana Facultad de Estu udios Superior Cuautitln res Un niversidad Nacional Autnom de Mxico ma

Autore es

Profr Pascacio Vargas Ca r. astillosor ura Profes de asignatu Depar rtamento Cienc Biolgicas cias Secci de Bioqumi y Farmacol n ica loga Humana Facult de Estudios Superiores Cu tad s uautitln Universidad Naciona Autnoma d Mxico al de

M. en A. Ma. Vir n rginia Oliva Arellano oResponsable de Teora de Tox xicologa e Hig giene Pblica Departa amento Ciencia Biolgicas as Secci de Bioqum y Farmaco in mica ologa Huma Facultad de Estu udios Superior Cuautitln res Un niversidad Naci ional Autnom de Mxico ma

M. en A. Leticia Ziga Ra a amrezProfes sora de asignat tura Depar rtamento de Cie encias Biolgic cas Secci de Bioqumi y Farmacol n ica loga Humana Facult de Estudios Superiores Cu tad s uautitln Unive ersidad Naciona Autnoma d Mxico al de

Q.B.P. M Elena M Ma. Mondragn Esquive elProfesora d asignatura de Departame ento de Ciencia Biolgicas as Seccin de Bioqum y Farmaco mica ologa Huma Fa acultad de Estu udios Superiore Cuautitln es Un niversidad Nacional Autnom de Mxico ma

Q.F.B Pedro Carlos Mijan B. ngos Va argasonsable del Lab boratorio de To oxicologa e Respo Higien Pblica ne Depar rtamento Cienc Biolgicas cias Secci de Bioqumi y Farmacol n ica loga Humana Facult de Estudios Superiores Cu tad s uautitln Universidad Naciona Autnoma d Mxico al de

M. en C. Vernica C Castro Bear rProfesora d asignatura de Departa amento Ciencia Biolgicas as Seccin de Bioqumic y Farmacolo Humana n ca oga Fa acultad de Estu udios Superiore Cuautitln es Un niversidad Nacional Autnom de Mxico ma

Q.F Lucero Paniagua G F.B. GarcaProfes sora de asignat tura Depar rtamento de Cie encias Biolgic cas Secci de Bioqumi y Farmacol n ica loga Humana Facult tado de Estudio Superiores Cuautitln os C Universidad Naciona Autnoma d Mxico al de

o: rlos Dise Pedro Car Mij jangos Vargas s.

Ago osto 2010.

FES C

t tl C

Bioqumica y Farmacologa Humanandice

Autores.

2 4 5 6 8

Introduccin. Objetivo. Captulo 1. Reglamento. Captulo 2. Tratamiento de Residuos. Captulo 3. Desarrollo de las prcticas: -Prctica 1. Determinacin de Metanol en bebidas alcohlicas. -Prctica 2. Identificacin y cuantificacin de Cianuros (semillas y forrajes). -Prctica 3. Determinacin de Alcaloides en orina. -Prctica 4. Determinacin de Carboxihemoglobina en sangre. -Prctica 5. Determinacin de Plomo en vasijas de barro y cosmticos. -Prctica 6. Determinacin de Etanol en muestras biolgicas (sangre y saliva). -Prctica 7. Determinacin de Metahemoglobina en una muestra biolgica (sangre)

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Departamento de Ciencias Biolgicas Pgina 3

Bioqumica y Farmacologa Humana

Manual del Laboratorio de Toxicologa e Higiene Pblica

IntroduccinA manera de introduccin se puede decir que la Toxicologa es la ciencia que estudia los efectos nocivos de las sustancias xenobiticas a los cules se pueden encontrar expuestos los organismos y es de vital importancia determinar la presencia de los principios activos y/o sus metabolitos principales en diferentes muestras orgnicas. Para esto se requiere la identificacin rpida y confiable de las sustancias txicas que causan un cuadro clnico en estudio, por ello, es imprescindible capacitar al estudiante en el anlisis qumico Toxicolgico en las diferentes reas y en la interpretacin de resultados en el campo analtico y para lograrlo es indispensable reconocer un laboratorio de Anlisis Instrumental y su Aplicacin a la Toxicologa e Higiene Pblica. El laboratorio de Toxicologa e Higiene Pblica forma parte del plan de estudios de la Licenciatura de Qumico Farmacutico Bilogo, en la Facultad de Estudios Superiores Cuautitln Campo I de la Universidad Nacional Autnoma de Mxico, con clave 1804 y 6 crditos, 2 horas a la semana siendo complementadas con 2 horas de teora las cuales se imparten a los alumnos de octavo semestre y ser impartida en las carreras de Bioqumica Diagnstica y Licenciatura en Farmacia de acuerdo con las modificaciones establecidas para dichos fines educativos. El manual se divide por captulos siendo el primero el reglamento general de los laboratorios, posteriormente se explica de forma breve el tratamiento de residuos que se pueden generar durante la realizacin de las tcnicas y despus se especifican todas y cada una de las prcticas del laboratorio de Toxicologa e Higiene Pblica. Estas prcticas han sido aportaciones de diferentes dependencias gubernamentales, trabajos de tesis, artculos cientficos y tcnicas realizadas en la actualidad, las cuales aportan al estudiante un mejor entendimiento del campo laboral relacionado con la Toxicologa. El presente manual representa un esfuerzo constante de todos y cada uno de los profesores asignados a dicha materia ya que a travs de los aos se han realizado modificaciones con la finalidad de actualizar las prcticas de esta asignatura.Introduccin

Atentamente, Profesores: Virginia Oliva Arellano Y Pedro Carlos Mijangos Vargas.

FES Cuautitln Campo 1 Pgina 4


ObjetivoEl alumno aprender a identificar, extraer y cuantificar algunos principios activos presentes en diversas muestras biolgicas con la finalidad de que conozca las tcnicas y la utilizacin del equipo para este propsito y pueda inferir si el contenido del principio activo es nocivo o no a los organismos.

Objetivo




Captulo 1 Reglamento

Reglamento

1) Este reglamento aplicar para personal acadmico, alumnos y laboratoristas. 2) Para todo trabajo realizado en el laboratorio deber utilizarse bata blanca con manga larga. 3) La tolerancia para el inicio de la sesin de laboratorio ser hasta de 10 minutos a partir de la hora sealada. 4) Por seguridad, no deben cerrarse las puertas del laboratorio con llave durante las prcticas. 5) En todo momento deber mostrarse una conducta adecuada en el rea de trabajo. 6) Queda prohibido en los laboratorios: a) Tirar basura fuera del cesto. b) Ingerir alimentos y/o bebidas. c) Fumar. d) Recibir visitas. e) La entrada a los inter-laboratorios a toda persona ajena a los mismos. f) Realizar reuniones o convivios en los laboratorios. g) Salir del laboratorio en el horario asignado para la sesin experimental. h) Sentarse sobre las mesas de trabajo. i) Mover el mobiliario de su lugar. j) Utilizar las gavetas para guardar material que no corresponda a la asignatura. 7) Los residuos peligrosos deben depositarse en los contenedores destinados para tal fin, entendiendo por residuo peligroso: elementos, sustancias, compuestos, desechos o mezclas de ellos que en cualquier estado fsico representan un riesgo para el ambiente, la salud o los recursos


Bioqumica y Farmacologa Humananaturales, por sus caractersticas corrosivas, reactivas, explosivas, txicas, inflamables o biolgico-infecciosas (Art. 3 de la Ley General del Equilibrio y Proteccin del Ambiente). 8) Dentro del laboratorio no se permite el uso de telfonos celulares, reproductores de sonido o cualquier medio electrnico de entretenimiento. El uso de las computadoras porttiles queda restringido a temticas relacionadas con la asignatura. 9) El acceso al laboratorio se permitir nicamente cuando est presente un profesor.Reglamento

10) El uso del laboratorio para trabajo extraordinario, deber programarse con el profesor responsable en un horario que no interfiera con aquel destinado para el desarrollo de las prcticas. 11) Para solicitar material y equipo, es requisito indispensable que el alumno llene debidamente el vale de material (FPE-CB-DEX-01-09) y lo entregue a la persona responsable, dejando como depsito la credencial vigente de la UNAM. 12) El alumno deber revisar el material y/o equipo al momento de recibirlo indicando cualquier anomala (faltante o material daado) y ser devuelto en las condiciones en que se recibi, de no hacerlo, se har acreedor a las sanciones establecidas en cada laboratorio. 13) Es obligacin de todos mantener limpio y ordenado el lugar de trabajo y todo el laboratorio.




Captulo 2 Tratamiento de ResiduosTRATAMIENTO DE RESIDUOSLa Ley General del Equilibrio Ecolgico y la Proteccin al Ambiente (LGEEPA), define como materiales peligrosos a: Los elementos, sustancias, compuestos, residuos o mezclas que representen un riesgo para el ambiente, la salud o los recursos naturales, por sus caractersticas corrosivas, reactivas, explosivas, txicas, inflamables y biolgico infecciosas (CRETIB). Tienen un impacto ambiental: Calidad del agua, Calidad del suelo y Calidad del aire. (fig.).

T.R.

Residuos no peligrosos: Son aquellos producidos por el generador en cualquier lugar y en desarrollo de su actividad, que no presenta ningn riesgo para la salud humana y/o el medio ambiente; se consideran en este grupo los residuos biodegradables, reciclables, inertes y ordinarios o comunes.


Bioqumica y Farmacologa HumanaManejo de Residuos No Peligrosos

Hay residuos que no son peligrosos ni bioacumulables, y que se biodegradan rpidamente, por lo que se pueden verter por el desage de forma controlada, en pequeas cantidades, teniendo en cuenta que en ningn momento se superen los lmites establecidos en la Norma Oficial Mexicana NOM-002-ECOL-1996.

1. Tratamiento de ResiduosManejo de Residuos Peligrosos (Tratamiento de CIDOS O BASES) Los pasos del tratamiento que estn incluidos como parte del procedimiento de laboratorio no necesitan ser autorizados, pero a veces se requiere de la supervisin del especialista en manejo de residuos peligrosos. Residuospeligrosos: Losquetienen caractersticasinfecciosas, combustibles,inflamables, explosivas, reactivas, radioactivas,voltiles, corrosivasy/otxicas,que puedencausardaoala salud humanay/oalmedio ambiente. Se consideranpeligrososlos envases,empaquesy embalajesquehayanestado encontactoconellos.

1. Tomar la lectura del pH con las tiras indicadoras de pH, para conocer el estado inicial de la muestra, para identificar si es un cido o una base. 2. Colocar una porcin de residuo en el vaso de precipitados de 1000 ml para posteriormente agregar unas gotas de indicador fenolftalena (3 a 5 gotas aprox.). 3. Colocar el vaso debajo de la bureta y abrir cuidadosamente la llave para que la solucin contenida en la misma se mezcle con el residuo y lo neutralice, procurando agitar cuidadosamente la solucin con la varilla de agitacin. NOTA: cuando se trate de una sustancia cida, se neutralizar con una bsica y viceversa.

4. Una vez que la solucin haya cambiado levemente de color, significa que este residuo ha sido neutralizado. NOTA: En ocasiones el cambio de coloracin es poco apreciable, por lo que es importante el continuo monitoreo con las tiras indicadoras de pH.



Manual del Laboratorio de Toxicologa e Higiene Pblica5. Verificar con las tiras indicadoras de pH, si el pH de la solucin en ese instante es el adecuado para verterse en el drenaje.

6. El pH de la solucin debe estar entre 5 y 7 para poder verterse en el drenaje. 7. Bajo las condiciones anteriores, el residuo estar listo para desecharse por el drenaje. 8. Se vertern en el desage las soluciones acuosas con metanol, etanol y las soluciones diluidas de los siguientes compuestos: Orgnicos: acetatos (Ca, Na, NH4 + K), almidn, aminocidos y sus sales, cido ctrico y sus sales de Na, K, Mg, Ca y NH4, cido lctico y sus sales de Na, K, Mg, Ca y NH4 , azcares, cido actico, glutaraldehdo, formaldehdo, entre otros. Inorgnicos: carbonatos y bicarbonatos (Na, K), cloruros y bromuros de (Na, K), carbonatos (Na, K, Mg, Ca, Sr, Ba, NH4 ), fluoruros (Ca), yoduros (Na, K), xidos (B, Mg, Ca, Al, Si, Fe), silicatos (Na, K, Mg, Ca), sulfatos (Na, K, Mg, Ca y NH4 ), acetatos (Ca, Na, NH4 , K) y clorito de sodio.

Preparacinyverificacin delpHinicial NeutralizacindelpH residualyaseaconcidoso bases VerificacindelpHneutro

cidos e Hidrxidos para neutralizar el pH residual

Listoparadesecharseenel drenaje


Bioqumica y Farmacologa HumanaTabla No. 1. Segregacin y desactivacin de los residuos generados en los laboratorios TIPO DE RECIPIENTE Y ETIQUETA DE IDENTIFICACIN Bolsa Negra o comn

RESIDUO

DISPOSICIN Y/O DESACTIVACIN

ORDINARIOS O COMUNES Residuos slidos como guantes, gasas, peridico, aserrn o viruta cubre bocas, basura de reas comunes y dems reas de uso general. Siempre y cuando no hayan estado en contacto con sangre considerada como de riesgo biolgico o de cualquier origen Nota: no depositar punzocortantes de cualquier tipo. RESIDUOS DE RIESGO BIOLGICO INFECCIOSOS Bacterias, parsitos, virus, hongos, virus oncognicos y recombinantes como sus toxinas, con el suficiente grado de virulencia; que no pueden ser sometidos a una desactivacin de alta eficiencia, y guantes, cubre bocas, algodn, o material semislido que haya estado en contacto con sangre considerada como de riesgo biolgico

Son recolectados por la dependencia correspondiente en el ramo de recoleccin de basura.

T.R.

Bolsa Roja

Desactivacin previa en una autoclave. Se envan luego a incineracin.



Manual del Laboratorio de Toxicologa e Higiene PblicaBolsa Amarilla Se mantienen congelados hasta que se envan luego a incineracin. Indicacin: es importante no mezclar otros desechos que no sean de residuos animales, tales como material de laboratorio, agujas, etc.

RESIDUOS DE ANIMALES Animales de experimentacin, inoculados con microorganismos patgenos y/o provenientes de animales portadores de animales infectocontagiosos. PUNZO CORTANTES Agujas de jeringas, agujas de bistur, cuchillas, resto de ampolletas, pipetas, lminas de bistur o vidrio y cualquier otro elemento que por sus caractersticas punzo cortantes pueda lesionar y ocasionar un riesgo infeccioso. RESIDUOS CIDOS O BSICOS Residuos lquidos provenientes de sustancias con carcter cido o alcalino. SOLVENTES Residuos de solventes como hidrocarburos, alcoholes, steres, cetonas, organoclorados, entre otros.

Recipiente para punzo cortantes Se almacenan en los recipientes para punzo cortantes, despus son recolectados por el personal autorizado y como disposicin final, estos residuos son incinerados. Estos residuos se deben neutralizar con una base o cido dbil segn sea el caso, hasta obtener un pH cercano a la neutralidad y verter al alcantarillado si no contiene una sustancia txica. Si es posible se puede destilar y reutilizar en el laboratorio; si no es posible se debe entregar a una empresa especializada para que los recupere o lo incinere. Vase tambin, procedimiento.

T.R.

Almacenar en recipientes plsticos

Almacenar en recipientes de vidrio, metlicos o de un material apropiado segn las caractersticas de la sustancia.

RESIDUOS DE COMPUESTOS INORGNICOS Residuos de sustancias que contengan concentraciones de aniones como nitritos, nitratos, amonio, sulfatos, cloruros, entre otras, con concentraciones elevadas o que superen los parmetros establecidos por la norma oficial mexicana NOM-052ECOL-1993. METALES PESADOS

ALMACENAR EN GARRAFAS PLSTICAS

Si no es posible hacer un tratamiento o desactivacin de estos residuos, se deben entregar a una compaa para que los disponga. No se deben diluir estos residuos con el fin de cumplir la norma.

Segn la naturaleza de cada


Bioqumica y Farmacologa HumanaSe deben disponer en envases plsticos. uno de estos elementos se puede hacer un tratamiento por precipitacin o floculacin de los metales. Si no se hace un tratamiento previo, se deben entregar a una empresa especializada para que los disponga. Los lodos resultantes de la precipitacin se deben desactivar mediante encapsulamiento con cal u otro tratamiento adecuado y enviarlos a confinamiento.T.R.

Cualquier residuo lquido que contenga mercurio, plomo, cadmio, nquel, cobalto, estao, bario, cromo, antimonio, vanadio, zinc, plata, selenio, arsnico, entre otros.

A continuacin, se muestran algunos mtodos para tratamientos ms detallados de acuerdo a la naturaleza del residuo, tiles para su desactivacin cidos. Una vez colectados los residuos, se proceder a diluir stos con agua de la llave. Se puede iniciar haciendo pruebas con una muestra pura y diluirla con agua. Por lo mnimo, esta dilucin deber hacerse con relacin de 1:100 de agua. Una vez diluido, se neutralizar con hidrxido de sodio (NaOH) al 10% en peso, hasta alcanzar un pH entre 5 y 7. Con esto, estar listo para verter en la alcantarilla. Peligro: Calor y vapores son generados durante este procedimiento. Realizar este procedimiento en una campana de vapores con el apropiado equipo de proteccin personal. Varias quemaduras podran resultar si se utiliza inapropiadamente el equipo de proteccin personal. Bases (Hidrxidos). Al trmino de la prctica, todos los residuos que sean hidrxidos que se hayan generado deben ser colectados en su contenedor correspondiente. El tratamiento se proporcionar diluyendo stos residuos con agua de la llave, para despus neutralizar con cido sulfrico 10% en peso hasta alcanzar un pH entre 5 y 7. Con esto est listo para verter en la alcantarilla. Peligro: Calor y vapores son generados durante este procedimiento. Realizar este procedimiento en una campana de vapores con el apropiado equipo de proteccin personal. Varias quemaduras podran resultar si se utiliza inapropiadamente el equipo de proteccin personal.



Manual del Laboratorio de Toxicologa e Higiene PblicaAlcoholes y Acetona Incinerarlos en plantas apropiadas. Por lo que se recolectar en un centro de acopio por el laboratorista llenando la documentacin correspondiente. Acetatos El tratamiento se proporcionar diluyendo stos residuos con agua de la llave, para despus neutralizar con cido sulfrico 10% en peso hasta alcanzar un pH entre 5 y 7. Con esto est listo para verter en la alcantarilla. Cianuro de Potasio El tratamiento se proporcionar diluyendo stos residuos con agua de la llave, para despus agregar NaOH 5%, y luego NaClO concentrado 10-12% en exceso. Se deja estar toda una noche y luego se verte al alcantarillado. Cianuro de Sodio El tratamiento se proporcionar diluyendo stos residuos con agua de la llave, para despus agregar NaOH 5% y luego NaClO concentrado 10-12% en exceso. Se deja estar toda una noche y luego se verte al alcantarillado. Cromato y dicromato de potasio Para su tratamiento, se mezclan estos residuos con exceso de Na2SO3 slido, luego se adiciona con agitacin y despus de 3-4 horas se agrupa con cuidado una pequea cantidad de cido sulfrico diluido. Cuando todo el cromo est como Cr3+, se adiciona NaOH para que precipite como hidrxido. Se filtra y el filtrado se agrega Na2SO3 y luego NaOH para asegurarse de tener todo el cromo en forma insoluble. El precipitado de cromo se filtra, se seca al aire y se guarda en recipientes de polietileno. Se deposita en sitio previamente autorizado. EDTA Al trmino de la prctica, todos los residuos de EDTA que se hayan generado deben ser colectados en su contenedor correspondiente. El tratamiento se proporcionar diluyendo stos residuos con agua de la llave, para despus neutralizar con hidrxido de sodio 10 % hasta alcanzar un pH entre 5 y 7. Despus de esto, se puede verter al alcantarillado o se incineran.T.R.



Los residuos que no se pueden minimizar ni verter por el desage se deben desactivar, segregar, envasar y almacenar temporalmente, hasta que se entreguen, a una empresa especializada en el manejo y tratamiento de residuos; en tal caso los recipientes donde se guarden los residuos deben estar debidamente clasificados e identificados por medio de un sello adhesivo o etiqueta de identificacin. LAS BOTELLAS DE VIDRIO, AS COMO LOS RECIPIENTES PLSTICOS, ya sea que contentan algn tipo de sustancia qumica o RESIDUO PELIGROSO, debern tener la siguiente etiqueta de identificacin, llenada por la persona responsable de acuerdo a las caractersticas de la sustancia en cuestin. La ETIQUETA DE RESIDUOS debe llenarse de acuerdo a las especificaciones que en ella se piden de la sustancia qumica o residuo. Dentro del rombo de colores, se colocan los nmeros del cdigo Winkler correspondientes al grado de peligrosidad y daos a la salud del residuo o sustancia en cuestin. (Adaptado del Instituto Tecnolgico de Sonora 2010). ETIQUETA DE RESIDUOS ROMBO DE COLORES

T.R.



Manu del Lab ual boratorio de Toxicolog e Higie Pblica ga ene a

Ca lo 3. De aptulo esarrolllo de la Pr las cticas Prc 1 ctica Det termin n de naci metano en b das alcohlicas ol bebidObjetivos:Identificar las fuentes de expos r sicin, toxicidad, preve encin y tratamiento por el met tanol. Estudiar la presenc de alco cia ohol metlic en beb co bidas alcoh hlicas de origen cas sero, por m medio de pru uebas cualitativas y cu uantitativas s.

Metanol

Introd duccin n:El alcohol m metlico, es usado c como solvente de g goma laca y como rem movedor d pintura. La dosis letal es de 60250 ml. La tox de . s d xicidad es de ebida a la m metabolizacin del al lcohol met tlico en c cido frmic o en el co for rmaldehdo ste ltimo tiene un efecto s o; selectivo le esionante sobre las clulas retina arias.

To oxocintic ca:El metanol es una sus e stancia inc colora con olor cara n acterstico, de bajo , ular e ribucin de 0.6 L/kg. e peso molecu y tiene un volumen de distr

Ab bsorcin:Se absorbe por el tract gastrointestinal. e p to La ingestin de apro n oximadame ente 4 ml puede causar ce m eguera y cerca de 15 m puede c ml causar la m muerte.

Metabolism mo:Laprincipalr rutametab blicaesatravsdel laoxidaci nconlaen nzima alc coholdeshidrogenasa a.

FES C

t tl C


DESARROLLO DE LA PRCTICAEn esta prctica estudiaremos la presencia de alcohol metlico en bebidas alcohlicas como: Vodka, sangra, vino tinto, mezcal y otras bebidas alcohlicas de origen casero. MATERIAL POR EQUIPO: 1 1 1 2 1 1 1 10 1 1 1 2 1 2 2 1 3 1 1 4 4 2 4 1 Matraz de bola de 500 ml. Refrigerante. Una llave T de vidrio. Codos de boca esmerilada. Vaso de pdo. De 250 ml. Matraz volumtrico de 100 ml. Termmetro. Tubos de ensaye 13 x 100. Gradilla. Mechero. Anillo metlico. Pinzas de 3 dedos. Tela de asbesto. Soportes universales. Mangueras de hule de 50 cm. Tapn de hule horadado. Tapones de hule para tubo de ensayo. Pipeta pasteur. Pinza para tubo de ensayo. Pipetas graduadas de 5 ml. Pipetas graduadas de 1 ml. Nueces. Perlas de ebullicin. Termmetro. 3 1 1 6 1 2 5 2 5 1 2 4 8 1 5 6 2 MATERIAL POR GRUPO: Pipetas graduadas de 1 ml. Pipeta graduada de 5 ml. Pipeta graduada de 10 ml. Vasos de precipitado de 150 ml. Probeta de 100 ml. Vrtex. Propipetas de 10 ml. Baos mara. Matraces volumtricos de 10 ml c /u. Matraz volumtrico de 100 ml. Espectrofotmetros. Celdas de vidrio para espectrofotmetros. Matraces aforados de 100 ml. Piseta com gua destilada. Propipetas de 10 ml. tubos de ensayo grandes. Termmetros.

Metanol

REACTIVOS: Solucin de dicromato de potasio al 10 % en cido sulfrico al 50 %. Solucin de dicromato de potasio al 2.5 % en cido sulfrico al 50 %. cido cromotrpico. cido sulfrico concentrado. cido oxlico al 8 %. Solucin de permanganato de potasio al 2.5 % Solucin de Reactivo de Schiff. Etanol Q P. Metanol QP.




DE ESARR ROLLO EXPER RIMEN NTAL

1) )Secoloc can50mldemues straenelmatrazb bolacon4 4perlas alrefriger rante. deebullicinyseadaptaa

2)Seponeacalentarcontrolandola 2 atempera aturaa78 8.5C, dest tilandodu urante20 0minutos s.Me etanol

3)Recibireldes stiladoen nunvaso odeprecipitadosq que conte enga10m mldeagua adestilad da.

PRUE EBAS DE I IDENTIFI ICACIN N A A1mldeld destilados seleaade e1.0ml d desolucin ndedicrom matodepo otasioal 1 10%enci idosulfric co. U Unacolorac cinazul verdeindicala p presenciad dealcoholenlabebid da.

1. REACCI . IN PRESUN NTIVA PARA AL LCHOLE ES

FES C

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Bioqum y Fa mica armacologa Humana a a

2. REACCIN PRESUNTIVA PARA METANOL.

3.PRUEBADEOXIDACINYREACCINOMTODO MODIFICADODEDENINGES.

a) En u tubo de ensayo un colo ocar 1 ml de destilado y el una gota de un solucin al na mato de 2.5 % de dicrom pota asio en cid sulfrico al do 50 % %. b) Deja en repos ar so a la temperatu ambient a ura te dura ante 5 minu utos. c) Agre egar una go de etanol ota y un cristales de cido nos s crom motrpico. d) Estr ratifique con 5 ml de n cido sulfrico concentrad do. Se pro oducir un color prpu ura en la interfas de los se uidos, en caso positivo o 2 lqu para met tanol.

A 5.0 m del destilado obten ml nido de la bebida, el cual no deb be de co ontener ms de 3 a 5 % s de me etanol, se le adicionan los e rea activos resp petando el siguiente orden: a) 5.0 ml de perm manganato de p potasio al 2.5 %. 2 b) 0.4 ml de cido sulfrico o (con nc). c) Esp perar de 2 a 3 minutos y agre egar 2.0 ml de cido o oxlico al 8 %, osamente agitando vigoro hasta la decolo oracin tota al er n (tene cuidado, la reacci rmica). es exotr d) Adic cionar 1.0 ml, de cido m o sulf rico conce entrado mas 5.0 ml de react tivo de Sch hiff, ubar 3 min en bao e incu mar (30- 35 C), sino se ra e obtu color violeta. uvo La co oloracin vi ioleta deber se compara con la er ada inte ensidad de color de los s valores preparados de la cu urva dar. estnd Los tu ubos de la c curva patrn y tubo p problema se ern ledos en el espectrofo otmetro a 540 n nm.

Me etanol


NOTA: La curva patrn deber ser trabajada a la par con la muestra problema, una coloracin violeta va a ser proporcional al contenido de metanol.

CURVA PATRN Tomando en cuenta que al destilar 100 ml de una bebida alcohlica, se obtiene aproximadamente 33.3 ml, de una mezcla de metanol etanol. Se preparar una curva patrn con concentraciones conocidas: TUBO 1 2 3 4 5 6 (tubo bco.) % METANOL 0.1 0.3 0.5 0.7 0.9 . ml METANOL 0.1 0.3 0.5 0.7 0.9 .. ml ETANOL 0.9 0.7 0.5 0.3 0.1 1.0 ml Agua destilada 99.0 99.0 99.0 99.0 99.0 99.0

Metanol

LA MXIMA CONCENTRACIN DE METANOL PERMISCIBLE EN BEBIDAS ALCOHLICAS ES DE ORDEN 0.5 %



Mtodo cuantitativo 2(DETERMINACIN DE METANOL EN BEBIDAS ALCOHLICAS) PREPARAR POR GRUPO MATERIAL: 2 Matraces aforados de 100 mL. 1 Pipeta graduada de 10 mL. 1 Pipeta graduada de 1 mL. 1 Piseta con agua destilada. REACTIVOS: Alcohol etlico R.A. Alcohol metlico R.A. Preparar un blanco con alcohol etlico al 5.5% en volumen y una solucin patrn conteniendo 0.025% en volumen de metanol en alcohol etlico al 5.5% en volumen; leer la absorbancia de la solucin patrn y de la muestra a 575 nm utilizando el blanco para el ajuste del espectrofotmetro. Expresin de resultados: El contenido de metanol expresado en miligramos por 100 cm3 de alcohol anhidro se calcula con la siguiente frmula: M= (A/A) x 0.025 x FD x 0.790 x (100/G.A.R.) x 1000 En donde: M= Metanol expresado en mg por 100 cm3 de alcohol anhidro. A= Absorbancia de la muestra. A= Absorbancia de la disolucin patrn de metanol. 0.025= % de metanol en la solucin patrn. FD= vol. Total de la dilucin/vol. de la muestra empleada en la dilucin) G.A.R.= Grado alcohlico real de la muestra a 288 K (15 C) en la escala Gay Lussac. 0.790= Densidad del metanol expresado en g/cm3.

Metanol




Cuestionario previo:1.- Cules son las fuentes de contacto y contaminacin de metanol? 2.- Cules son los efectos nocivos del metanol, dosis txica, dosis letal, en bebidas alcohlicas y en el ambiente? 3.- Cul es el fundamento de la prueba presuntiva? 4.- En que se fundamenta la determinacin del mtodo modificado de Deninges en la prueba de metanol? 5.- Explique en forma breve el metabolismo del metanol y el tratamiento por sobredosis?Metanol

6.- Cules son las posibles interferencias o falsos positivos que pueden dar en los mtodos presuntivos para esta prctica? 7. Mencione por lo menos tres mtodos analticos confirmativos para determinar metanol en bebidas alcohlicas. 8. Mencione el fundamento de espectrofotometra de luz ultravioleta y diga por que se leen las muestras en esta prctica de 540 a 575 nm.

Referencias:1. OREISBAK, Robert, Manual de Toxicologa Clnica. Ed. Manual Moderno, 5 ed. Mxico 1983. 2. LOOMIS, Ted. A. Fudamentos de Toxicologa, Ed. Acribia, Zaragoza Espaa, 1988. 3. MADDE, J. S., Alcoholismo y Farmacodependencia, Ed. Manual Moderno 1995. 4. STANLEY E. MANAHAN. Toxicological Chemisty. Lewis Publishers, 2 th. Ed. 1992. 5. KAYE, Sidney, Handbook of Emergency Toxicology. 5 th., ed. CC Thomas EUA 1988. 6. Comprensive Review in Toxicology Chapter 25, siglo XXI. 7. NMX-V-021-1986. BEBIDAS ALCOHLICAS DESTILADAS. DETERMINACIN DE METANOL.


Bioqumica y Farmacologa HumanaDIAGRAMA ECOLGICO

MUESTRA 50 ml de bebida alcohlica

Destilacin

R1

Metanol

PRUEBA PRESUNTIVA ALCOHOLES

PRUEBA PRESUNTIVA METANOL

MTODO MODIFICADO DE DENINGES

R2

R3

R4

H2SO4 Cromato Dicromato

H2SO4 cido cromotrpico

H2SO4 MnO4 cido oxlico

R1. Es el desecho de destilado y se elimina en aguas comunes. R2 y R3. Todos los desechos de cidos sern neutralizados con solucin de bicarbonato. Posteriormente se depositan en frascos de residuos color mbar previamente etiquetado con el nombre de residuos de cromo. R4. Depositar en frasco color mbar previamente etiquetado con el nombre de residuos de permanganato.




Prc 2 ctica Id dentif ficaci y cuan in ntifica acin de cianu ( uros (semillas y forra ajes)Objetivos:Identificar las fuente de expo r es osicin y rie esgo en un individuo para que n pueda pre esentar una intoxicaci por cian a n nuros. Aplicar las tcnicas para la iden s p ntificacin y cuantificacin de cianuros. Analizar e fundame el ento de la i identificaci y cuanti n ificacin de cianuros e en una muestra.

Introd duccin n:El c cianuro, un compuest inorgnic ya sea en forma d gas (cid cianhdr n to co, de do rico, HC CN), como in (CN- pr resente en sales com KCN) o como cid prsico, es n mo do , uno de los t o xicos de a accin ms rpida so s obre los mamferos. El HCN y sus E sales alcalinas se hallan en fumigadores, limp piadores, en ndurecedor y refinados res de metales.

Cianuros

La do osis DL50 d sales de CN, administrado or de e ralmente es de 0.5 a 3.5 s mg g/Kg. El in se absorbe con fa acilidad des spus de la administ tracin ora o al parenteral y en el conta e acto prolon ngado con soluciones de cianur o con HCN s ro ede producir absorci in de can ntidades t xicas por la piel. In nicialmente se pue aprecia excitacin y temblores muscular res genera alizados. P Puede exi istir sal livacin, lag grimeo y eliminacin d heces y orina. Para su tratam de a miento hay q que iny yectar por va intrave enosa Nitrit Sdico; administrar despus Tiosulfato de to So odio.

Debid a la rapid con que aparecen los sntom do dez e n mas, el lavado gstrico se o debe llevar a cabo luego de habers iniciado l tratamie o se los entos antes descritos. s

FES C

t tl C

Bioqum y Fa mica armacologa Humana a aAc ccin bioqu umica: Dato clnicos: os Intoxicacin: Por inhalac cin o ingestin (+ 10 DL) Inconscien ncia inmediata, convulsion nes, muerte en unos n 15 min. (C Cerca de la DL): Vrtigo, respiracin rpida, cefalea, somnolencia, cada de la presin ar rterial, pulso rpido e inconscien ncia.

El cianuro p priva de ox xgeno al or rganismo, pr roduciendo o as sfixia. In nhibe a la e enzima fe erricitocrom mo ox xidasa.

Respiracin rpida a. Cada de la a presi arterial. n Convu ulsiones. Coma a.

TRATAM MIENTO: POR INHAL P LACIN DE E CIA ANUROS (M MEDIDAS DE URGENCIA)

Ad dministrarNitritodeAmiloporinhal lacin,una m mpula(0.2m ml/5min).Su uspendersila aPASbaja am menosde80Hg.Dar rrespiracinartificial co onoxgenoa100%param mantenerun natensin ele evadaenlas sangre.

Cianur ros

ANTD DOTO:

A)NitritodeSodio.Admin nistrar10mlde solucinal3% %porvaI.V.,aunavelocidad de e2.55ml/m min.SuspendersilaPASe es me enorde80H Hg. B)Tiosulfatod deSodio.DespusdelNi itrito de eSodio,adm ministrarsolu ucindeTios sulfato de eSodioa25% %I.V.,aunavelocidadde e2.55 ml l/min.

ME EDIDAS DE URGENCIA: E

Adm ministrarNitr ritodeamilop porinhalacin,una mp pula(0.2ml/5 5min). Ella avadogstricodebetratar rsehastaque esehaya dad doelantdoto otiosulfatode esodioynitri ito. Dar rrespiracina artificialcono oxgenoal10 00%para man ntenerunate ensinelevad dadeO2 ensa angre.


DESARROLLO DE LA PRCTICAI.- IDENTIFICACIN DE LA PRESENCIA DE HCN POR LA TCNICA DE GUIGNARD MATERIAL POR EQUIPO: MATERIAL POR GRUPO: 1 1 1 1 1 1 1 1 2 1 1 1 1 2 2 1 1 1 2 2 2 Mortero con pistilo. Vaso de precipitado graduado de 50 ml. Vaso de precipitado de 250 ml. Piseta con agua destilada Frasco con tapn de rosca (100 ml aprx.). Pipeta graduada de 10 ml. Pipeta volumtrica de 10 ml. Pipeta volumtrica de 2 ml. Manguera ltex Probeta graduada de 100 ml. Equipo de destilacin. Matraz aforado de 250 ml. Refrigerante Llave T de vidrio Codo de boca esmerilada Soporte universal Aro metlico Mechero Tela de asbesto Pinzas de tres dedos Nuez Tapn de hule sin orificio 5 Balanzas granatarias. 2 Bao mara. 2 Termmetro. 1 Matraz aforado de 10 ml. 2 Matraz aforado de 100 ml. 8 1 1 2 1 1 1 1 1 1 Frascos con tapn de rosca por grupo. Pipeta volumtrica de 1ml. Pipeta volumtrica de 3 ml. Pipeta volumtrica de 5 ml. Pipeta volumtrica de 10 ml. Probeta graduada de 50 ml. Bureta graduada de 50 ml. Soporte universal. Pinza de tres dedos. Nuez metlica para pinzas de tres dedos. Matraz Erlenmeyer de 250 ml. REACTIVOS: Solucin de cianuro de potasio 120 mg/100 ml Agua destilada 1 Galn. Nitrato de plata (0.02 N). Hidrxido de Amonio 6 N. Yoduro de potasio al 5%. Solucin de hidrxido de sodio (0.5g en 20 ml de agua destilada). 20 Tiras de papel Guignard: KCN c. Pcrico. Carbonato de Sodio.

Cianuros

(UNOS DAS ANTES): PARA LA TITULACIN ALCALINA, un matraz de bola de 500 ml. 1 Probeta graduada de 100 ml. 1 Piseta con agua destilada. Muestra problema pesada de sorgo o yuca (10 a 20g).



DE ESARR ROLLO EXPER RIMEN NTALPesar2g.demu uestrapro oblemasec ca.2.E Esperar hast taqueestn nterminadas slassolucionespatrn y ymacerarlo os2g demuestrapro oblemaenunmorterohastaobtene erunapapilla a.

3.C Colocarlamuestraenun nfrascocontapndero osca,ayudndosecon10 0mlde agu uadestilada, ,paraevitarquenoquedepartedelamuestrae enelmorter royaadir 10mlmsdea aguaamaneradequequ uedetodala amuestracu ubiertacona agua (ev vitarqueelf frascoesta abiertomien ntrasseterm minadeprep pararlo). 4.Introduciren nelfrascolatirareactiva adeGuignar rd,humedec ciendolapuntacon agu uadestilada, ,evitandoqu uestatoqu uelamuestra aylaspared desdelfrasco,cerrarel fras scodetenien ndolatiraco oneltapny yverificarqu uequedepe erfectamente ebien cerrado.

Cianur ros

5.Llevarelf frascocon nlamuest traproble emaylass solucione es pa atrn alba aomaraelcualde ebeestaraunatem mperaturade 35 5C,paraa acelerarla ahidrlisis senzimti icaporun ntiempom mximo de e5minuto os.NOTA El pape impregn A: el nado con picrato es amarillo gradualm s o, mente se torna anaranjad y finalm a do mente rojo o prpura si la mues stra contien HCN. ne


SOLUCIN PATRN: Pesar 120 mg de KCN, aforar a 100 ml, tomar 20 ml y aforar nuevamente a 100 ml. Esta solucin tiene 240 ppm de KCN lo cual equivale a 100 ppm de HCN. Sol. de KCN (ml) 1.0 3.0 4.0 5.0 6.0 8.0 9.0 10.0 Aforar a (ml) 10 10 10 10 10 10 10 10 ppm 10 30 40 50 60 80 90 100

Mtodo de titulacin alcalinaPROCEDIMIENTO: 1. Pulverizar lo ms que se pueda una muestra problema (10-20g) pero siempre conociendo la cantidad a trabajar. 2. Colocar la muestra problema en un matraz de bola de 500 ml con 200 ml de H2O destilada, se mezclan y se dejan por lo menos 14 hrs en reposo (esto es para que se lleven a cabo la autolisis, el aparato debe estar completamente conectado para la destilacin y el tubo de salida debe borbotear en un vaso de precipitado que contenga una solucin de 0.5g de NaOH en 20 ml de agua destilada). 3. Destilar y recibir de 150 a 160 ml del destilado. 4. Aforar el volumen del destilado recibido en una solucin alcalina a un volumen de 250 ml con agua destilada. 5. Tomar 2 alcuotas de 100 ml c/u y adicionar a cada una: 8 ml de NH4OH 6N. 2 ml de solucin de KI al 5%. Titular la mezcla con una solucin de AgNO3 0.02N. NOTA: El punto final de la titulacin se reconoce por la turbidez verde lechosa que se torna permanente en la solucin durante 30 segundos por lo menos. Este punto final es ms fcilmente observable en un fondo negro.

Cianuros



PARA LOS CLCULOS DE CONCENTRACIN DE HCN SE TOMA LA SIGUIENTE EQUIVALENCIA: 1.04 ml de AgNO3 (0.02N) = 1.08 mg HCN. OBSERVACIN: En presencia de una muestra problema que presente espuma, se sugiere destilar utilizando la tcnica de arrastre de vapor con agua. En lugar de calentamiento directo.

Cuestionario previo1. Cules son las fuentes de exposicin con HCN las cuales puedan causar una intoxicacin accidental, incidental o intencional? 2. Cules son las reacciones qumicas de identificacin que se efectan en esta prctica? 3. Cules son los efectos de intoxicacin aguda y crnica causada por cianuro? 4. Toxocinticamente hablando, Qu factores bioqumicos se alteran en una intoxicacin con cianuro? 5. En qu se fundamenta el tratamiento para las intoxicaciones con cianuro.

Cianuros

Referencias:1. DREISBACH, Robert H. MANUAL DE TOXICOLOGA CLNICA. Ed., el Manual Moderno, Mxico, 1999. 2. LOOMIS. FUNDAMENTOS DE TOXICOLOGA. Ed. Acribia, Zaragoza Espaa, 1998. 3. GOODMAN and GILMAN. LAS BASES FARMACOLGICAS DE LA TERAPUTICA, 8 edicin, Ed. Panamericana Mxico, 1991. 4. STANLEY, ENMAHNAHA. TOXICOLOGICAL CHEMISTRY. Lewis, Publishers, 2th Ed., New York 1992.

Departamento de Ciencias Biolgicas Pgina 29 Bioqumica y Farmacologa Humana

Manual del Laboratorio de Toxicologa e Higiene PblicaEJEMPLO:

Cianuros

R1 y R2. Diluir con agua de la llave, agregar NaOH 5%, luego NaClO concentrado 10-12% en exceso. Se deja 24 hrs en reposo y se deposita en un contenedor para su correcto desecho. R3 y R4. Nitrato de plata y bases: Se diluye con agua y se hace reaccionar con cobre, se forma nitrato de cobre y se filtra dando un precipitado de plata el cual puede recuperarse. Posteriormente se neutralizan las bases con cido actico al 1%.



Prc 3 ctica D rmin Deter nacin de n a alcalo oides en orinaObj jetivos: :El alumn aislar un alcalo no oide de una muestr biolgic (orina) ra ca basndos en la dif se ferencia de solubilidad de las ba e d ases y de s sales, sus en medios como el agua y en s s a solventes or rgnicos. Identificar el alcaloide extrad de la muestra bio r do m olgica a travs de t pruebas presuntivas. p Identificar el alcaloid a travs de una prueba cua r de s p alitativa visu rpida ual por inmu unoensayo cromatogrfico con partculas de oro coloidal, n siempre y cuando se trate de anfetaminas marihuan cocana, etc. e s, na,

INTRO ODUCI N:Se llaman a e alcaloides (de lcali carbonat i, tos, de a alcalinos, y -oide, pa arecido a, en forma de) a aquellos met tabolitos se ecundarios de las pla antas sintetizados, ge eneralmente a partir de aminoc e, d cidos por la va del a c cido shikm mico o de la va del acetato. Tambin se define como un T e co ompuesto q qumico que posee un nitrgeno heterocclico procede e n ente del me etabolismo de amino ocidos; si procede d otra va se define como de a, ps seudoalcalo oide.[] Los alcaloides verdaderos derivan d un amin s de nocido, so por lo tanto nitro on ogenados. Son bsic cos (excep pto colchic cina) en pr resencia de cidos, fo e ormando sa ales y pose een accin fisiolgica intensa en los animales an a b n bajas dosis con efectos psicoactiv vos, por lo que son muy usados como frmacos para tras s stornos m mentales o como nalgsicos. El uso pro olongado de alguno de estos compuestos produce e an en el organ n nismo una dependen ncia ya se psicolg ea gica o fsica que co onstituyen v verdaderas toxicomanas. Ejemplos conocid son la c dos cocana, la morfina, la atropina, la colchicina la quinina cafena y la estricni a a, a, ina.

Alcaloid des

Manu del Lab ual boratorio de Toxicolog e Higie Pblica ga ene aSus es structuras q qumicas so variadas Generalm on s. mente actan sobre el s sistema ne ervioso cen ntral, si bie algunos afectan a sistema nervioso en s al para asimptico y otras al sistema nervioso simp s ptico, por ejemplo, la cocana a act a nivel del siste a ema nervio oso centra como u inhibido de la al, un or reca aptacin de serotonina e a-norepinef frina-dopam mina, aume entando el e efecto de esto neurotra os ansmisores, causando diferentes acciones a nivel sist , o mico.

La act tividad biolgica de los alcaloides es mu diversa, la ms uy , estu udiada es la accin eu a uforizante q presentan algunos como la c que s cafena o la c cocana, si bien tamb bin existen alcaloides con efec n ctos depres sores del sistema nervio central como la mo oso orfina.

La ma ayora de lo alcaloide son insol os es lubles o mu poco sol uy lubles en agu pero se disuelven bien en alcohol, ter cloroformo u otros s ua, e r, solventes org nicos. Se combina con c e an cidos para dar sale a es, compo ortndose ento onces como bases. La sales so bastante solubles e agua e in as on en nsolubles en solventes orgnicos. En la d diferencia d solubilid de dades de la base alca aloidea y d sus sale en agua y en solventes org de es gnicos se basa el mt todo genera de extrac al ccin.

La extrac ccin de m muestras p problema como: sang c gre, vscera orina, as, lavado gstrico, vmito o eventualm o , mente, res stos de alimentos o bebidas, prepa arados farm macuticos. En cuant a su deteccin, los alcaloide junto a . to es otras drogas bs sicas de int ters toxico olgico, tien un comportamiento anlogo nen e o vos cipitacin o coloreadas (reactivo d Mayer, s de frente a un grupo de reactiv de prec Drage endorff, Bo ouchardat, que perm miten sospe echar su presencia y a una reaccin positiva se supon la presencia de est txicos, aunque si bien, no a ne tos s son e especficas de los a s alcaloides, tambin p puede obte enerse un resultado positiv en prese vo encia, por ejemplo, de pptidos). e e

Alcaloid des

FES C

t tl C


DESARROLLO DE LA PRCTICADETERMINACIN DE ALCALOIDES EN ORINA MATERIAL POR EQUIPO: 1 1 3 2 3 4 3 1 1 1 3 1 1 Probeta de 100 ml. Embudo de separacin. Pipeta graduada de 1 ml. Pipeta graduada de 5 ml. Pipeta graduada de 10 ml. Vasos de precipitado de 100 ml. Vidrios de reloj. Tripi. Tringulo de porcelana. Embudo de separacin. Vaso de precipitado de 250 ml. Pinzas para matraz Placa de porcelana LBC para tincin con cavidades de 21 mm de dimetro. Pipetas pasteur. Propipeta. Vidrio de reloj. 2 1 1 30 MATERIAL POR GRUPO: Bao Mara elctrico. Termmetro. Kit inmunoensayo cromatogrfico para alcaloides. Tiras de papel pH (1-14). 1 Pliego de papel filtro Whatman #1. REACTIVOS: 1 1 1 1 1 1 1 1 Soporte universal. Pinzas de tres dedos. Matraz Erlenmeyer de 250 ml Aro metlico con varilla Nuez para pinzas de tres dedos Varilla de vidrio Nuez para aro metlico Piseta con agua destilada. cido clorhdrico 1N. Hidrxido de amonio 6 N. ter etlico. Cloroformo. Reactivo de Dragendorff. Reactivo de Bouchardat. Reactivo de Meyer. Vanadato de amonio. Sulfato de sodio anhidro. Papel filtro Whatman Tira de papel pH (1-14) cido sulfrico concentrado. Sol. lugol. Tiocianato de cobalto.

5 1 3

Alcaloides

MUESTRA: 25 ml de muestra de orina problema.




MTOD DE EXTR M DO E RACCINA 25 ml de orina, agreg HCl 1N hasta un pH = 4.0. Ha o gar acer 3 extra acciones co 10 ml de ter etlico c/u; colec la fase e on e o ctar etrea de la 3 extrac as cciones y filtr rarla a trav de un pa s apel filtro co sulfato de sodio an on d nhidro y eva aporar en bao mara en un vas de precipitado a un punto cerc a so n cano a sequedad Extract etreo # 1. to

La fase acuo debe se alcaliniza adicion a osa er ada nando unas gotas de h hidrxido de amonio hasta un pH = 9.0 10.0, extra o ayendo con ter etlico en 3 o ocasiones (10 ml c/u) filtrar el ex ), xtracto etr con pap Whatma que reo pel an s ro rar equedad en bao n contenga sulfato de sodio anhidr y evapor casi a se Mara. Extracto etre # 2. eo

La fase acuo de esta ltimas e L osa as extraccione es re extrada con 1 ml de es 10 clo oroformo en 3 ocasion c/u. Este extracto s filtra en p n nes e se papel Whatman con sulfato de sodio anhid y se eva dro apora en bao Mara casi a sequ uedad. Extracto clorofrm o mico. NOT Usar lo extractos etreos y clorofrmic para ha TA: os s cos acer las pru uebas de caract terizacin.MANEJO DEL EMBUD DE SEPARACIN D DO Alcaloid des

(a) S Sujetar con ambas manos. n

(b) A Apoyar con dedo ndi el tap y la n n ice ll lave con la otra mano y agitar. a o

(c) L Liberar la presin del interior y colocar p l e el sopor universal en rte

FES C

t tl C

Bioqum y Fa mica armacologa Humana a aPRUE EBAS DE C CARACTER RIZACIN

Colocar en la placa de p porcelana (vidrio de reloj) una gota de l muest en ca pozo por cad uno d los g la tra ada o, da de reactiv a utili vos izar AGREGAR A RUNAGO OTA DELOSSIGUIENTE ES REAC CTIVOS: Dragendor D rff. Mayer. M Boucharda at. Mandelin. M Lu ugol. Ti iocianato odecobalto.

Los reac ctivos de Lugol y Tio L ocianato de cobalto n sirven para e nos identificar cafena y c cocana.

IDENT TIFICAC CIN (RE EACCION NESCOL LORIDA AS) Re eactivo odeMa andelin: :1. En la placa de porcelan (o vidrio de reloj), colocar una gota de la muestra d na o a a do onde haya dado positivo con lo reactivos para cara os s acterizacin agregar n, un gotas d vanadato de amon (3 o 4) sobre el a nas de nio alcaloide y a su lado un gota de H2SO4, m na e mezclar lige eramente y en la unin de los reactivos ve erificar el color formad al primer contacto entre el vanadato y el alcaloide do l co el H2SO4, continuar mezcland y ver com vira el c on O do mo color inicial. TABLA DE RESULTA T ADOS COL LOR INICIA AL COLO FINAL OR EJEMPLO DE ALC CALOIDE IDEN NTIFICADO O HE EROINA QUININA CO ODENA YOH HIMBINA TROS OT ALCA ALOIDESAlcaloid des

LIL PLIDO LA ANA ARANJADO O AZU UL-VERDE E AZU UL-VIOLETA A

FUGAZ F GRIS AZUL A INC COLORO

Manual del Laboratorio de Toxicologa e Higiene PblicaAZUL-VIOLETA VERDE ACEITUNA LUGOL TIOCIANATO DE COBALTO DURAZNO VERDE ESTRICNINA ANFETAMINA

PRECIPITADO CAF COLOR AZUL TURQUESA

XANTINAS (CAFENA) CANAS (COCANA)

DETERMINACIN DE ALCALOIDES POR INMUNOENSAYO CROMATOGRFICO 1. 2. 3. 4. 5. 6. Usar guantes y cubre boca. Verificar que el cartucho est a temperatura ambiente. No tocar ni mojar la zona reactiva. Llenar la pipeta hasta la marca con la muestra de orina problema. Depositar la muestra en el pozo. Espere hasta que aparezca la banda de color no ms de 8 minutos.

RESULTADO: NEGATIVO C T POSITIVO C Ejemplo de resultado positivo Para THC (Tetrahidrocanabinol)


Bioqumica y Farmacologa HumanaTabla de resultados las reacciones de precipitacin y coloridas.

EQUIPO

DRAGENDORFF +/-

MAYER +/-

BOUCHARDAT +/-

MANDELIN +/-

MANDELIN Alcaloide identificado

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Ejemplos de Resultados Positivos: BOUCHARDAT TIOCIANATO DE COBALTO

Un precipitado caf nos indica la presencia de una base alcaloides

Una coloracin azul nos indica la presencia de canas

Alcaloides

Bouchardat: POSITIVO

Tiocianato de cobalto: POSITIVO



Manual del Laboratorio de Toxicologa e Higiene PblicaTabla de resultados del inmunoensayo cromatogrfico.EQUIPO RESULTADO +/ALCALOIDES IDENTIFICADOS

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Referencias:1. True, B; Dreisbach, R. 2003. Manual de Toxicologa Clnica de Dreisbach: prevencin, diagnstico y tratamiento. 7 edicin. Editorial el Manual Moderno. Mxico, D.F. 2. Kuklinski, C. 2000. Farmacognosia, Estudios de las drogas y sustancias medicamentosas de origen natural. Editorial Omega, Barcelona- Espaa. 3. Robinson T. 1981. The biochemistry of alkaloids. 2 ed. Springer, N.Y. 4. Azcn-Bieto,J y Taln, M. (2000). Fundamentos de Fisiologa Vegetal, Mc Graw Hill Interamericana de Espaa SAU. ISBN 84-486-0258-7.Alcaloides

Cuestionario previo1. Defina que es un alcaloide y describa sus caractersticas qumicas para su aislamiento. 2. Mencione los alcaloides ms importantes desde el punto de vista de drogas de abuso. 3. Llene la siguiente tabla con la informacin solicitada.

Droga de abuso Anfetaminas Estricnina Canabinoles Cocana Morfina

Grupo al que pertenecen segn su origen

Mecanismo de accin

Signos y sntomas provocados por su intoxicacin

Terapia antidotal


Bioqumica y Farmacologa Humana4. Mencione el fundamento de cada una de las tcnicas usadas en la prctica, as como ventajas y desventajas de stas. 5. Mencione cules son las principales tcnicas analticas confirmativas para un mejor anlisis qumico toxicolgico de drogas incluyendo de forma breve su fundamento.

Alcaloides




Alcaloides



Prctica 4 Dete nacin de ermin n arbox moglo ca xihem obina e san en ngreObjetivo:Evaluar c cualitativam mente la p presencia d monx del xido de ca arbono en ratones e expuestos a tal cont taminante, a travs de la form macin de carboxihe emoglobina (COHb) en la muestra sangune n a ea.

Introd duccin n:Las fuentes d exposicin al mon s de nxido de c carbono pu ueden ser cualquier c com mbustin d sustancias orgnica (madera combusti de as a, ibles fsiles cartn, s, rop pas, etc) de manera incompleta. Si la combustin e complet si hay d es ta, suf ficiente ox geno en e ambiente en conta el acto con e combustible para el com mbinarse, e carbono se combin con dos molculas de oxgen dando el na s s no CO pero si la combustin es incom O2, mpleta, en a ausencia de oxgeno suficiente, e sl podr combinarse c una molcula y dar CO. lo con r El pro opio cuerpo humano es product de carb tor boxihemoglobina en peq queas can ntidades, (u 0.6 0. %) y en determina un .7 n adas circun nstancias, pod demos enc contrar has un 7 % aproxima sta adamente. Ms all de estas cifr indican envenenamiento cas con segur ras, n si ridad, y es l letal en un 40 %.COHb b

Manual del Laboratorio de Toxicologa e Higiene PblicaCARACTERSTICAS GENERALES DE LA INTOXICACIN

El monxido de carbono es un gas incoloro, inodoro, inspido y no irritante que se origina durante la combustin incompleta del carbn. Las fuentes productoras ms frecuentes son estufas, calefacciones, hornos, incineradores, automviles etc., en mal funcionamiento. La toxicidad del monxido de carbono (CO) se debe a su combinacin con la hemoglobina para formar carboxihemoglobina (COHb). En dicha forma la hemoglobina no transporta oxgeno, dado que ambos gases (O2 y CO) reaccionan con el grupo hemo en la molcula tetramrica de la hemoglobina. Sin embargo, la afinidad del monxido de carbono por la hemoglobina es cerca de 240 veces mayor que por el oxgeno, de esta manera, la intoxicacin puede ocurrir an cuando pequeas cantidades de CO se encuentren presentes en la atmsfera. Cuando el paciente es removido del ambiente contaminado, la carboxihemoglobina desaparece rpidamente, particularmente cuando el oxgeno es administrado. Solo trazas pueden ser detectadas cuando el paciente alcanza el hospital y de esta manera la medida de carboxihemoglobina es raramente justificada en la clnica toxicolgica. CO +Hb.Fe.O2 Hb.Fe.CO + O2 La formacin de oxihemoglobina (Hb.Fe.O2) como de carboxihemoglobina (Hb.Fe.CO) son reacciones reversibles y dependen principalmente de la presin parcial de los gases y del pH sanguneo aunque otros factores como la temperatura y la concentracin inica tienen tambin incidencia. La toxicidad del monxido de carbono se manifiesta no slo de la interferencia en el aporte de oxgeno por la sangre sino tambin ejerce efecto directo al unirse a los citocromos celulares como los presentes en las enzimas respiratorias y la mioglobina.COHb

MATERIAL POR EQUIPO 4 2 1 1 4 1 Tubos de ensaye de 20 ml. Pinzas para tubo de ensaye. Gradilla. Jeringa p/insulina con su respectiva aguja. Tapones para los tubos de ensaye o parafilm. Estuche de diseccin con bistur con navaja nueva que debe traer el alumno el da de la prctica. Jaula p/ratn que debe traer el alumno para la prctica. Par de guantes. Pipetas graduadas de 1 ml. Pipeta graduada de 10 ml.

REACTIVOS Agua destilada. Hidrxido de sodio 10%.

1 1 2 1



DE ESARRO OLLO D LA PRCTICA DE A

Tomademuest tra La arecolecc cindelamuestra desangred debesero obtenida porpuncinvenosacon ante(hepa arina) anticoagula ev vitandola aformaci nde burbujasolaentradadeaire mienda alajeringa.Serecom corazn obtenersangredelc nasgruesascomo odelasven afemoral.Elrecipie entea la utilizarparalaconse ervacin delamues stradebee estar mpio,seco oycerrad doen lim fo ormaherm mtica.

Ensayopordilucin Se eobservan n simultneamenteam mbos ubosdeen nsayeconluz tu na aturaldifu usa.Lasan ngre no ormalpresentacolo orrojo am marillento o,mientrasla muestra,sicontiene m ca arboxihem moglobina, , pr resentaco olorcarminado ne eto.Estee ensayoesseguro yprctico,c con co oncentracionesde he emoglobin nasuperio oresal 20 0%.

COHb b


II.ENSA AYOALCALINO

Se ebasaenlamayor restabilid daddelacarboxihemoglobinacon re espectoa alahemoglobinae ensimilar rescondic cionesalc calinas.

1.Agr regar15mldeaguad destiladaa adostubo osdeensay yo

2. .Enambos stubosconaguacol loquetresgotasdesangrenormalen unoyenelotr rosangrep problema. .

3.Agregaracadatub 3 bo5gotasdesoluci ndehidr xidodesodioal 10%ym mezclarbien.

La asangreno ormaladqu uierecolor rcastaoa acastaov verdoso,y yaquela sangreoxicarbonadaperma aneceinalterada,mi ientrasque ela carboxihe emoglobina aadquiere euncolorcarminado odurantecierto tie empo.Ele ensayoofre eceunnet tocontrast teyresulta apositivocuando laconce entracindecarboxi ihemoglob binaessup perioral10 0%.

COHb b

Ejemplo d de resultado Positivo p para carboxihe emoglobina

FES C

t tl C


Cuestionario1. Cul es la va de ingreso del monxido de carbono a los organismos? 2. Porqu es importante tapar los tubos de ensayo al adicionar la muestra sangunea problema al tubo? 3. Cul es el fundamento de las tcnicas utilizadas en la determinacin de la carboxihemoglobina? 4. Porque es importante determinar la presencia de Carboxihemoglobina en muestras sanguneas? 5. Cules son los sntomas y signos de intoxicacin segn los diferentes % de carboxihemoglobina en muestras sanguneas? 6. Cules son las fuentes de contacto y contaminacin con monxido de carbono? 7. Cules son los efectos nocivos del monxido de carbono, dosis txica, dosis letal, en el organismo? 8. Qu otros tipos de pruebas se pueden realizar para la determinacin de carboxihemoglobina?

Referencias:1. Dreisback, Robert. Manual de Toxicologa Clnica. Ed. Manual Modero, 5aed. Mxico, 2009. 2. LOOMIS, Ted A. Fundamentos de Toxicologa. Ed. Acribia, Zaragoza Espaa 1988. 3. STANLEY, E. MANAHAN. Toxicological Chemistry. Lewis Publishers, 2th ed. New York, 1992. 4. KAYE, Sidney. Hanbook of Emergency Toxicology. 5 th ed. Ed. CC. Thomas. E.U. 1988. 5. GOODMAN Y Gilman. Las bases farmacolgicas de la Teraputica. Edit. Panamericana. Mxico. Octava edicin. 1991.COHb



Colocar los ratones en una caja Y saturarla con monxido de carbono

COHb

R1. Colocar los cadveres envueltos en papel de estraza, en una bolsa amarilla que indique que es residuo biolgico infeccioso y llevarlas al congelador para su posterior incineracin.

R2. La aguja de la jeringa Deber ser desechada en un contenedor rojo. R3. Depositar en contenedor para NaOH.



Prctica 5 Determinacin de plomo en vasijas y cosmticosObjetivos:Determinar cualitativamente la presencia de plomo en vasijas de barro y en cosmticos comerciales a diferentes valores de pH. Discutir si las vasijas de barro y/o los cosmticos comerciales son fuentes de exposicin al plomo.

Introduccin:El plomo es uno de los metales pesados ms nocivos, ya que su intoxicacin se ha reconocido como uno de los problemas ambientales ms importantes; sin embargo, el plomo es usado como metal de imprenta, en acumuladores, pinturas industriales, soldaduras, forros para cables elctricos, en esmaltado de alfarera, hule, juguetes, gasolina (tetraetilo de plomo) y aleaciones de latn. Tambin se incluyen cuentas de plstico o joyera cubiertas con plomo para dar la apariencia de perla; whisky desnaturalizado, esmaltado de alfarera casera, el polvo en galeras de tiro, cenizas y humos de madera quemada pintada con plomo, peridicos, revistas, pilas elctricas y pigmentos para pinturas como cosmticos. Los niveles de plomo en la sangre, superiores a los 10 mcg/100 ml pueden deteriorar las funciones cognoscitivas y conducir a trastornos en la conducta de los nios principalmente. Para prevenir y eliminar los daos ocasionados por dicho metal es imprescindible la identificacin y control de las fuentes de exposicin, as como dar el tratamiento adecuado a los individuos intoxicados. Identificar las fuentes de exposicin, nos permite disminuir el peligro que sufre la poblacin y contribuye a un ambiente libre de plomo.

Plomo


Manu del Lab ual boratorio de Toxicolog e Higie Pblica ga ene aTRAN NSPORTEY DIST TRIBUCIN Setrans sporta rpidam mentehacialos huesos, ,ahtiendea a bioacum mularse durante etodoel tiempoyalrededor r del90% %enpeso corpora alseacumula a enlosh huesos. Tambinsedistribu uye entejidoblando, hgadoy yrin. Losefec ctostxicos msgra avesson debidos salplomo sobreelencfaloyel S.N.P.La ascifrasde plomoe enencfaloe hgadosonde5a1 10 vecesm msgrandes quelascifras sangun neas.

ABSORCI N Laabsorcinatravs deltractoresp piratorio eslaprincipalvade exp posicin. Otrarutade absorcinesporel tra actoGI. Laabsorcinde plo omobajacua andose ele evaelniveld decalcio enladietay vic ceversa.

ELIMINACIN S Seeliminaen nforma temporalym t muylenta porlosagent p tes quelantes. q LISMO: METABOL E Elmscom nefecto bioqumicod b delplomo eslainhibicindela e enzimacido e odelta aminolevuln a nico deshidratasa d a eritroctica,u e una enzimaimpo e ortanteen lasntesisde e hemoglobina h a.

Interfiere con la conversi n del cido delta a-aminolevu ulnico a bilingeno, resultando una acum o mulacin de productos metablicos. Inhibe e s porfob a las enzimas qu tienen gr e ue rupos sulfhidrilos (-SH H). La actividad de esta enzima es parcialme a s ente inhibid a concen da ntraciones uneas de p plomo de 10 mcg/100 ml. 0 sangu Tambin inhibe la s sntesis de hem, un complejo del Fe2+ y porfirina el emoglobina y citocrom a mo. substituida en hePlomo o

FES C

t tl C

Bioqum y Fa mica armacologa Humana a aA Administrardi imercaprol, 4m mg/kg,IM,ca ada4hrs.en 3 30dosis.4hr rs.despus administraredetano d disdicoendo osisde12.5 mg g/kg.IM,c/4h hrs.ensol.al 20%adicion nadacon procanaa0. .5%en30 dosis.Sino omejora, a aumentar10dosispara camento. cadamedic L LMITESDEEX XPOSICIN DL= 0.5g/kg. ustinde DL encombu g gasolina=+20mcg/m3.

DA ATOSPATOL LGICOS Ene envenamien ntoagudo, loshallazgospa atolgicos inc cluyeninflam macinde lamucosa aGIy degeneracin d ndelos tbulosren nales.

AN NTDOTOS Adminis strarIVsoluc cin dedextro osaa10%,1 1020 ml/ /kg.12hrs. Sinosel lograladiuresis, administ trarmanitolsol. 20%51 10ml/kg/IV20 min.

t1/2 enhuesos=3 32aos. DT= 0.5 5mg/kg. DT =0.1 1mg/m3. Ensa angre=10m mcg/100 ml(inhibicinde elcido delt taaminolevu ulnico deshid dratasaeritr roctica). DT=0.00 001ppm. DT encom mbustinde gasolina= =3mcg/m3. t1/2 enrin=7 7aos.

MATER RIAL POR E EQUIPO 4 1 5 1 1 1 1 1 1 4 Vasos de pr V recipitados de 200 ml Probeta de 100 ml P Pipetas grad P duadas de 1 ml Pipeta gradu P uada de 2 m ml Tripi T Tringulo de porcelana T e a Mechero M Pinza para t P tubo de ens saye Tela de asbesto T Tubos de en T nsaye medi ianos

MATERIA POR GR AL RUPO 2 Ba mara o 2 Ter rmmetros Tira de papel pH asPlomo

REA ACTIVOS Agua destilada cido c clorhdrico 1 1N Hidrxido de sodio 1N o Sulfato de sodio 1% cido n ntrico (conc c.) Yoduro de potasio o o 16 g/10 ml 00


METODOLOGA PARA VASIJAS DE BARRO O COSMTICOS:1. Etiquetar las tres vasijas de barro nuevas con capacidad aprox. de 200 ml, (o para cosmticos etiquetar 3 vasos de precipitados de 200 ml) cada una, como A, B, C. 2. En cada una de ellas, agregar lo siguiente: Vasija (o cosmtico) Agua destilada HCl 1 N NaOH 1N A 100 ml -----------------B 99 ml 1 ml ---------C 99 ml ---------1 ml

Medir el pH en cada vasija (o en cada cosmtico) 3. Calentar las vasijas (o los vasos de precipitados con los cosmticos) a ebullicin por 30 min., cuidando de mantener el volumen constante. 4. Enfriar la solucin y medir el pH. 5. Rotular tres tubos de ensaye como A, B y C y agregar lo siguiente: Tubo Solucin de vasija (o del vaso) NaSO4 al 1% HNO3 conc. A 0.5 ml 2 ml 3 gotas B 0.5 ml 2 ml 3 gotas C 0.5 ml 2ml 3 gotas

6. En caso de que aparezca precipitado, decantar. Calentar los tubos entre 60 y 65 C en bao Mara durante 5 minutos. 7. Retirar los tubos del bao Mara y adicionar a cada uno 1 ml de una solucin de KI de 16.5 g/100 ml, procurando que caiga directamente en el contenido del tubo, no agite. Haga sus observaciones. 8. Un precipitado amarillo indica la presencia de plomo en la solucin original. 9. Emplee un blanco de agua destilada y proceda de la misma forma como se indica en los pasos anteriores.

Plomo



Cuestionario previo1. Cules son los efectos txicos que causa el plomo en los organismos vivos? 2. Cul sera un indicador clnico sensible para determinar la absorcin de plomo en un individuo? 3. Cules son los usos ms importantes del plomo? 4. Explique brevemente la toxocintica del plomo en el ser humano. 5. Por qu es importante cuidar el pH durante la determinacin de plomo? 6. Mencione una tcnica para la determinacin de plomo en diferentes muestras 7. Cmo influye la edad de un individuo en la absorcin gastrointestinal de plomo? 8. Cules son los factores importantes que hacen variar el grado de toxicidad de los compuestos de plomo? 9. Qu objetivo tiene el proceso de digestin cida en la determinacin de plomo? 10. Cmo influye el pH en la liberacin de plomo en los utensilios de barro?

Referencias:1. DREISBACK, Robert H. Manual de Toxicologa clnica. Ed. Manual Moderno, 5 ed., Mxico, 1983. 2. LOOMIS, Ted A. Fundamentos de Toxicologa. Ed. Manual Moderno, Mxico, 1995. 3. STANLEY, E. MANAHAN. Toxicological Chemistry. Lewis Publishers, 2 th ed. New York, 1992. 4. GOODMAN y Gilman. Las Bases Farmacolgicas de la Teraputica. Ed. Panamericana, Mxico, 8 ed., 1991. 5. ADES, OLIVA, M. 2001. Manual de toxicologa para la carrera de Q.F.B Ed. UNAM. 6. CORDOBA, D. 2001. Toxicologa Ed. El manual moderno. Colombia.

Plomo



Manual del Laboratorio de Toxicologa e Higiene PblicaDIAGRAMA ECOLGICO

Marcar 3 vasijas o vasos con cosmticos como A, B, C

A 100 ml agua destilada

B 99 ml agua destilada 1ml HCl 1N

C 99 ml agua destilada 1ml NaOH 1N

R1

Medir pH Calentar a ebullicin 30 mins. Enfriar y medir pH

R2

Rotular 3 tubos de ensaye A, B, C

A 0.5 ml Solucin del vaso. 2ml Na2SO4 1% 3 gotasHNO3

B 0.5 ml Solucin del vaso. 2ml Na2SO4 1% 3 gotasHNO3 Calentar 60-65C 5 Retirar y adicionar KI

C Solucin del vaso. 2ml Na2SO4 1% 3 gotasHNO3

Plomo

R3

R3

POSITIVO (pp amarillo) R1. Neutralizar con NaOH R2. Neutralizar Con cido actico

R3 y R4. Colocar en recipiente etiquetado

R4



Prc 6 ctica Determ cin de et D minac tanol en una mue n a estra b gica biolObjetivo:Determina cualitativa y cua ar antitativame ente etano de una muestra ol sangunea obtenid a da por p puncin ca ardiaca d de un an nimal de obtenidos experimen ntacin para comparar c los v valores espectrofo otomtricam mente con la curva d calibrac de cin y estab blecer los grados de alcohol ex e xistentes en una intoxi n icacin por alcohol.

Introdu uccin:El etanol tiene n E numerosas aplicac ciones, co omo disolvente en la industria, en producto domsticos, d e os en prepar e raciones farmacuticas, as como en la preparaci de be p n ebidas, po estos motivos son or muchas la personas que estn ms expuesta al m as as etanol que a cualqu otro alcohol. La potencia de e e uier a la bebida alcohlicas se informa e volme as as en enes por ciento lo que indica vol p o, lmenes d alcoho en de ol 100 volmenes d la bebida, o en gra 1 de ados alcohlicos, en los c a cules el nmero es casi el doble n s de la conc d centracin en volmenes po ciento. Por n or tanto, un grado a t alcohlico de 100 es de casi o 0 50 volme 5 enes por c ciento.

Etano ol

Manu del Lab ual boratorio de Toxicolog e Higie Pblica ga ene a Lac concentr racinde eetanolenlasb bebidas eslas siguiente e: Cerveza a Vino Vinofo ortificado Bebidasdestilad das 3 5% 101 12% 20% 2 40% 4

Las beb bidas alco ohlicas fe ermentadas contiene s en alcoho oles ms complejos, que son ms t s xicos. La d dosis letal para un ad dulto prome edio es de 300-4 ml de etanol puro si se consume en me 400 e enos de una hora, en tanto que se pro oducen sntomas grav en nio con 1 ml/kg de alco ves os ohol desna aturalizado que c contenga metanol al 5 m 5%. El lmite de expos e sicin es de 1000 ppm Aunque e m. los usuarios cr nicos tien nen una m mayor tolera ancia. El e etanol, por ser una r molc cula hidrfi peque se abs ila a, sorbe con rapidez en el agua corporal, n distrib buyndose de acuerdo al conten o nido de agu en los te ua ejidos, y ha asta cierto grado en tejido adiposo. S oxida en forma de acetaldehdo a CO2 y agua a o Se n una ta de 100 asa 0-110 mg/k kg/h. El sist tema de de egradacin del etanol se satura con c concentraciones plasm mticas de etanol de 1 mg/ml. Los homb e e bres y las mujer respond res den al etan de form diferente Despus de consu nol ma e. s umir dosis equiva alentes, las mujeres presentan una alcoholemia lige s eramente m mayor que los ho ombres. Este fenmeno se de en par a que los hombres presentan un mayor ebe rte bolismo del etanol cat talizado po la enzima acetaldeh or a hdo deshid drogenasa metab en la mucosa g gstrica y a que las mujeres tienen un menor volumen de s distrib bucin para los disolve a entes relativ vamente po olares, com los alcoh mo holes. El etanol deprime el sistema nervioso central de m e manera irre egular, en orden descendente desde l corteza a la mdula segn la cantidad in n la a, ngerida. El rango entre una dosis que produce an o nestesia y aquella que afecta las funciones a e vitales es pequea. sEtanol o

FES C

t tl C

Bioqum y Fa mica armacologa Humana a aMATERIAL Y REACTIVOS

MATERIAL POR EQUIPO M P 2 Ca ajas Petri c completas (Cmara de Co onway). 3 Pipetas graduadas de 1 ml. 1 Piseta con ag destilada. gua 1 Va de prec aso cipitados de 250 ml. e Estu uche de dis seccin. Jeringas de ins sulina. Gua antes de lt y cubreb tex bocas. 5 3 1 5 5

MATERIAL POR GRU L UPO Parrillas el lctricas. Pipetas vo olumtricas de 1 ml. Pipeta volu umtrica de 10 ml. e Matraces A Aforados de 100 ml. e Cajas Petr completas ri s REA ACTIVOS Dicromato de potasio 0.4 N en cido sulfrico 10 N. Solucin sa aturada de carbonato de potasio d Etanol Absoluto.

DESA ARROLLO Por g grupo se tr rabajar co 10 rato on ones, de lo cuales a 8 de ello se les os os admin nistrar en su agua de bebida 10% de una bebida al a lcohlica du urante los dos p primeros da 20% el tercer y cu as, uarto da, 30 el quint y sexto d y 40% 0% to da el sp ptimo da. El da de la prctica administr va oral 3 ml de la bebida a rar alcoh lica. 2 rat tones sern controles negativos y se les dar alimen y agua n nto ad libitum. mente, se sacrificarn los raton nes por dislocacin c cervical e Posteriorm inmed diatamente se les extraer sangr por puncin cardiac re ca. mpartimento externo d la cmar de Conw o de ra way, coloca 1 ml de ar En el com re onar 1 ml d la soluc de cin saturad de carbonato de potasio, el da p sangr y adicio cual v a actuar como el agente libe va r a erador. En el compart timento inte erno de la cmara colocar 1 ml de la solucin de dicroma de pota a ato asio 0.4 N en cido sulfr rico 10 N, cuya funcin es ser e agente at el trapante (ve figura). er Tapar la cmara r a. De maner paralela se realizar un blanc utilizand agua de ra r, co, do estilada en lugar de la sang y una c gre curva patr con las siguientes concentraciones de n etano ol ( = 0.79 g/ml): 0.25 g/l, 0.50 g/l, 1.25 g/l, 2.50 g 5.00 g/l. Trabajar 0 0 5 g/l, de la misma form que las muestras p ma problema. Dejar difundir 40 min en la estu o en parrillas elct n. ufa tricas a 70 C. Una vez transc currido dich tiempo, recoger la solucin del comp ho partimento interno y leer en el espectro ofotmetro a 620 nm.

Etanol o

Manual del Laboratorio de Toxicologa e Higiene PblicaTCNICA DE MICRODIFUSIN

Compartimento Dicromato dePotasio Interno

Compartimento Externo Figura. Cmara de Conway

Sangre CarbonatodePotasio

Cuestionario previo:1. 2. 3. 4. La ingesta de alcohol etlico, qu tipo de intoxicacin produce? Cul es el fundamento de la tcnica de Microdifusin? Qu otro tipo de muestras se pueden utilizar en la tcnica de Microdifusin? Describe otras tcnicas que se utilicen para la determinacin de etanol en muestras biolgicas. 5. Qu valores de alcoholemia se consideran con importancia mdico legal?

Referencias:1. DREISBACK, ROBERT H. Manual de Toxicologa Clnica. Ed. Manual Moderno, 5 ed., Mxico 1983. 2. LOOMIS, TED A. Fundamentos de Toxicologa. Ed. Acribia, Zaragoza Espaa 1988. 3. MADDEN, J. S. Alcoholismo y Farmacodependencia. Ed. Manual Moderno 1995. 4. STANLEY, E. MANAHAN. Toxicological Chemistry. Lewis Publishers, 2th ed. New York, 1992. 5. KAYE, SIDNEY. Hanbook of Emergency Toxicology. 5 th ed. Ed. CC. Thomas. E.U. 1988. 6. Comprensive Review in Toxicology. Chapter 25. Siglo XXI. 7. GOODMAN Y GILMAN. Las bases farmacolgicas de la Teraputica. Edit. Panamericana. Mxico. Octava edicin. 1991. 8. FERNNDEZ PREZ, RAMN. ELEMENTOS BSICOS DE MEDICINA FORENSE, 4. ed., Mxico D.F. 1980.Etanol


Bioqumica y Farmacologa HumanaDETERMINACINDEETANOLENUNA MUESTRABIOLGICA

Repartir8ratonesenlote controlpositivoy2ratones enlotecontrolnegativo

LoteControl Positivo

LoteControl Negativo

Enelaguadebebidaadministrar 10%deunabebidaalcohlicadurante losdosprimerosdas,20%eltercery cuartoda,30%elquintoysextoda y 40%elsptimoda

Duranteuna semana proporcionar alimentoyaguaad libitum.

Eldadelaprcticaadministrarvaoral 3mldelabebidaalcohlica

Sacrificarpordislocacin cervical

Cadveres

Extraer1mlporpuncin cardiaca

Jeringa

Colocar1mldesangre+1mldecarbonato depotasioenelcompartimentoexternode lacmaradeConway

Etanol

Colocar1mldedicromatodepotasioenel compartimentointernodelacmarade Conway ColocarlacmaradeConway enlaestufa40min.a70C

4



Manual del Laboratorio de Toxicologa e Higiene Pblica4

Tomarelcontenidodel compartimentointernoyleer enelespectrofotmetroa620

Sangrecon carbonatode potasio, dicromatode potasio

Realizarlosclculose Interpretarlos resultados CURVADECALIBRACIN

Prepararlossistemasauna concentracinde0.25g/l,0.50g/l, 1.25g/l,2.50g/l,5.00g/lapartirde etanolabsoluto Colocar1mldecadaunodelos sistemasenelcompartimento externodelacmaradeConway juntocon1mldecarbonatode potasio Adicionar1mldedicromatode potasioenelcompartimento internodelacmaradeConway

ColocarlascmarasdeConwayenla estufa40min.a70C Etanol Tomarelcontenidodel compartimentointernoy leerenel espectrofotmetroa 620nm Etanol, carbonatode potasio, dicromatode potasio



Prctica 7 Produccin de metahemoglobina por nitritos y efecto protector de azul de metilenoObjetivos:Conocer la tcnica de determinacin ms empleada en el estudio de la produccin de metahemoglobina por nitritos. Determinar la presencia de metahemoglobina formada por nitritos. Demostrar la formacin de metahemoglobina por la administracin de nitritos de sodio in vivo, para determinar los efectos de sta. Demostrar el efecto protector del azul de metileno sobre la hemoglobina y como antdoto.

INTRODUCCIN El hierro de la molcula de hemoglobina se encuentra reducido; es decir, en estado ferroso unido o no al 02 o al CO2. Cuando la hemoglobina reducida es oxidada, el hierro pasa a un estado frrico y se forma metahemoglobina. La metahemoglobina se encuentra en equilibrio con la hemoglobina reducida. De manera normal, alrededor del 90% de la hemoglobina se encuentra en forma reducida y slo el 10% oxidada. Debido a la incapacidad de la hemoglobina al unirse al 02 o al CO2, los eritrocitos poseen un mecanismo para mantener la hemoglobina reducida en las cantidades requeridas. En caso de no mantenerse este equilibrio se produce la metahemoglobinemia. Aunque puede ser hereditaria, lo ms frecuente en la prctica diaria es la forma adquirida tras la exposicin a una gran variedad de sustancias qumicas y productos farmacuticos.MetaHb


Manu del Lab ual boratorio de Toxicolog e Higie Pblica ga ene aEntre los principa ales mos: txicos encontram

- Nitritos - Nitratos (la fuente es el s agu de pozo ua con ntaminada) - Fe ertilizantes - Nitrop prusiato sd dico (como tratamiento o hipotensor y vasodila atador) - Nitrog glicerina (co omo tratamien hipotensor y nto vasodilatador) - Anilina (t tintes para ropas y e calzado) el - Fena acetina (usa ado antigua amente com mo an nalgsico)

CL LASIFICACI NDELAS METAHEMOG M GLOBINEMIA AS

ADQ QUIRIDA A HER REDITAR RIA ENZ ZIMOPN NICA

MANIFESTAC CIONES CL LNICAS La cia anosis de piel y mucosas es el p p principal sig de la m gno metahemoglobinemia, donde se adquie un tono azul oscu caracterstico, que aparece a partir de e ere o uro e 1,5 -2 g/100 m de meta 2 mL ahemoglobi da; minante en pmulos, ina formad predom pabellones auric culares, ale etas nasale uas, pa es, almas de la manos, planta de as , as ar. anosis mej jora poco los pies, labios, conjuntiva y velo del palada Esta cia do as raciones de oxgeno, p lo que este dato, e por cuand se administran alta concentr en pr resencia de una pres e sin parcia de oxge al eno en sangre arterial normal condu a la co uce onsideracin de que la metahem n a moglobinem es la ca mia ausa de la cianos sis. La or rina adquiere color achocolata ado por la presenc cia de la

MetaH Hb

FES C

t tl C


metahemoglobina. Adems estn presentes los sntomas debidos a la hipoxia, cuya intensidad depende de la cantidad de metahemoglobina y de la rapidez de Su formacin que son: cefalea, disnea, visin borrosa, pulso filiforme, taquicardia, nuseas, vmitos; en los casos graves hay convulsiones y coma. Una metahemoglobina superior a 70 % tiene una evolucin fatal. En forma tarda se puede presentar dao renal por efecto txico sbito en una persona previamente sana con ausencia de antecedentes cardacos o pulmonares que expliquen la cianosis; casi siempre es posible encontrar el contacto con una sustancia oxidante. Dicha cianosis se caracteriza porque no mejora con la administracin de oxgeno; desde el punto de vista de laboratorio es subjetiva la presencia de sangre achocolatada, lo cual es ms evidente si se coloca una gota de sangre en un papel de filtro al lado de una muestra control, y determinar el porcentaje de metahemoglobina en sangre. DIAGNSTICO Se fundamenta en: 1. Anamnesis: antecedentes de exposicin a un agente oxidante, en presencia de cianosis inexplicable sin hipoxemia. 2. Analtica: - Determinacin de metahemoglobina mediante anlisis espectroscpico con un cooxmetro (nica de valor diagnstico). - Gasometra: La saturacin de O2 arterial no es til ya que se calcula a partir de la PO2. - Pulsoximetra: no til para valoracin clnica, ya que en presencia de metahemoglobinemia sus valores tendern a sobrestimar la saturacin de O2. TRATAMIENTO - De soporte: (oxgeno, etc.) - Eliminacin de las fuentes de intoxicacin a) Piel y mucosas: desnudar al paciente y retirar los vestidos y calzados que sean el origen (tintes) b) Oral: til la administracin de carbn activado y lavado gstrico. DE ELECCIN: Azul de metileno al 1%; se administrar por va IV a una dosis de 1-2 mg / kg (0,1 0,2 mL/kg) durante 10 min. Debe administrarse dicho antdoto solo si la metahemoglobinemia es superior a 30 %. Esta dosis se puede repetir si no existe respuesta, hasta un mximo de 7 mg / kg, pues a esa dosis el azul de metileno es metahemoglobinizante.

MetaHb



Manual del Laboratorio de Toxicologa e Higiene PblicaDESARROLLO EXPERIMENTAL MATERIAL POR EQUIPO Jeringas de insulina Jeringas de 3 ml Tubos de ensaye grandes Pinza de diseccin Caja para animales Balanza para animales Pipetas graduadas de 5 ml Pipeta graduada de 0.1 ml Goteros Jeringas de 10 ml Tijeras de diseccin Pipeta de 1 ml Embudo de tallo corto Pinzas para tubo de ensaye Gradilla

3 3 13 1 1 1 2 1 2 2 1 1 1 1 1

MATERIAL BIOLGICO: 10 ratas hembras de 200 a 250 g por grupo MATERIAL POR GRUPO: Espectrofotmetro. Centrifuga.

REACTIVOS EDTA al 10%. Cianuro de potasio. SSF. cido actico glacial. NH4OH. Buffer de fosfatos a pH = 6.6. Ferricianuro de potasio. Azul de metileno 4mg/ml de SSF. Nitrito de sodio de 25 mg/ml de SSF. ter etlico. cido pcrico.

MetaHb


Bioqum y Fa mica armacologa Humana a aDE ESARROLL EXPER LO RIMENTAL 1. Pesar cad uno de lo animales y marcarl da os los, distribu uirlos en lotes I, II y III. . 2. A los lo otes II y III dar po una se or emana una dieta ric en me a ca eta hemoglob binizantes (embutidos) ). 3. Administrar al lote III por va intraperitone una dos de 0,2 m de azul d eal, sis ml de metileno al 1%/Kg de peso. a e 4. Esperar 15 minutos administrar por la misma va 25mg/kg de peso d 1 s, a de nitrito de sodio en 0.5 mL de SS s SF. I sma va 25 5mg/kg de p peso de nit trito de sod dio 5. Administrar al lote II por la mis disueltos en 0.5 mL de SSF. e 6. Administrar al lote I, 0.5 mL de SSF. s tos despu de cad s da 7. Extraer sangre por puncin cardiaca 30 minut administra acin y colo ocarla en un tubo con 5 gotas de EDTA. e ar nido de met tahemoglob bina y hemoglobina de la siguien e nte 8. Determina el conten manera. olocar 4.9 m de buffer de fosfato en un tub de ensaye. mL os bo a. Co b. Agregar 0.1 d sangre con EDTA. de c. Me ezclar y reposar durante 5 minuto os. d. Ce entrifugar a 2500 rpm p 10 minu por utos. e. Re ecuperar completamen el sobre nte enadante. f. Lee en espec a 630 n (A1). er ctro nm g. Re egresar la solucin de la celda al tubo. h. Agregar al pro oblema 1 gota de solu ucin neutra alizada con KCN. i. Me ezclar y reposar 2 minu utos. j. De eterminar la absorbanc a 630 nm (A2). cia m k. Agregar 5 mL de reactivo de Drabk L o kin. l. Tapar y homo ogenizar. m. Re eposar 3 minutos a tem mperatura a ambiente. n. De eterminar a absorbancia a 540nm emplean a m, ndo como referencia el bla anco de rea activo de Dr rabkin (A3). . 9. Clculos.

Me etaHb

Depa artamento de Ciencias Biollgicas Pg 63 gina

Bio oqumica y Fa Farmacologa H Humana


Cuestionario prvio:1. Mencione tres fuentes de contaminacin por nitratos o nitritos. 2. Escriba el mecanismo de accin toxicolgico de los nitratos y nitritos en el ser humano. 3. Cual es el tipo de tratamiento para la intoxicacin de nitratos y nitritos? 4. Proponga un esquema que explique el efecto protector de los nitritos en una intoxicacin por cianuro, y el efecto protector del azul de metileno en una intoxicacin por nitritos. 5. Que complejo se esta determinando a 630 nm y a que corresponde A1, A2 y A3, por que leemos en el espectrofotmetro a dos diferentes longitudes de onda? 6. Qu importancia tiene el trabajar con soluciones amortiguadoras de fosfato?

Referencias:1. Arvelez, Fanny de. Terapia antihanseniana.Dermatologa Venezolana, vol. 32, n 4 ao 1994. 2. Rodrguez Fernndez, Aurelio. 2004. Manual de toxicologa clnica. Centro provincial de informacin de ciencias mdicas. 3. Souza do Nascimento, Tatiana. Lami Pereira, Rodrigo Otvio. Dias de Mello, Humberto Luiz. Costa, Jos. Metahemoglobinemia: del Diagnstico al Tratamiento. Rev Bras Anestesiol 2008; 58: 6: 378-385

MetaHb


Bioqumica y Farmacologa HumanaDIAGRAMA ECOLGICO

Pesar,marcarydistribuiren loteI,IIyIIIalasratas.

AloslotesIIyIIIdarporuna semanaunadietaricaenmeta hemoglobinizantes.

AdministraralloteI0.5mLde SSF.

AdministraralloteIInitritode sodioen SSF.

AdministraralloteIIIazulde metileno.

R1

Esperar15minutos,administrar porlamismavanitritodesodio.

Extraersangreporpuncin cardiaca30minutosdespusde cadaadministracinycolocarla enuntuboconEDTA.

R2

Colocar4.9mLdebufferenun tubodeensaye. Agregar0.1desangreconEDTA. Mezclaryreposarpor 5minutos. R3

Centrifugara2500rpmpor10 minutos. Recuperarcompletamenteel sobrenadante. MetaHb R4


Manual del Laboratorio de Toxicologa e Higiene PblicaLeerenespectroa630nm(A1). Regresarlasolucindelaceldaal tubo. Agregaralproblema1gotade solucinneutralizadaconKCN.

Mezclaryreposar2minutos.

Determinarlaabsorbanciaa630 nm(A2). Agregar5mLdelreactivode Drabkin. Taparyhomogenizar.

Reposar3minutos

Prepararunblancocon5mLde H2Odestiladay5mLdelreactivo deDrabkin.

Leera540nm(A3)calibrandocon elblanco.

R6

R1: Las agujas sern depositadas en un contenedor de plstico rojo y las jeringas en una bolsa roja para su posterior incneracin. R2: Las agujas sern depositadas en un contenedor de plstico rojo y las jeringas en una bolsa roja para su posterior incneracin. El cadver de la rata se depositar en una bolsa para desechos color amarillo. R3: La sangre con EDTA que no se utilizo se coloca en una palangana con suficiente agua y cloro. R4: La pastilla en el fondo del tubo se desecha en la tarja con suficiente jabn y agua. R5 y R6: La mezcla de reaccin se vierte en el frasco contenedor de desechos perfectamente etiquetado para su posterior tratamiento.

MetaHb


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Manual Del Lab Toxi 2011-1 Ok1

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