Manual de Procedimientos Estandar Del Laboratorio Clinico

Titulo del Documento: Manual de Procedimientos estndar del Laboratorio Clnico de Unisalud. Cdigo del documento: MPS BLC MAI -004 Tipo de Proceso: Misional. Proceso: Prestacin de Servicios. Subproceso: Prestacin de Servicios Asistenciales.:

Versin: 2. Fecha de Emisin: 2006. Fecha de Revisin: 24/03/2009

Universidad Nacional de Colombia

Unidad de Servicios de Salud UNISALUD.

Elaboro: Alfonso Morato. Cargo: Profesional de Laboratorio Clnico.

Revis: Rose Mary Seplveda. Cargo: Jefe Nacional de Servicios de Salud.

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Aval documental: Comit de Gestin de Calidad.

Aprob: Marqueza Bozn Prez. Cargo: Gerente Nacional de UNISALUD.

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS ESTANDAR DEL LABORATORIO CLINICO DE

UNISALUD.

0. INTRODUCCIN.

La claridad de los conceptos en la realizacin de los procedimientos en cada una de las reas del laboratorio incide significativamente en el resultado final, por eso es indispensable no solo por norma sino por calidad que todos estos procedimientos se hagan bajo las mismas condiciones de manipulacin y anlisis independiente de la persona que realiza el procedimiento.

Titulo del Documento: Manual de Procedimientos estndar del Laboratorio Clnico de Unisalud. Cdigo del documento: MPS BLC MAI -004 Tipo de Proceso: Misional. Proceso: Prestacin de Servicios. Subproceso: Prestacin de Servicios Asistenciales.




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CAPITULO 1 GENERALIDADES.

1.1. ANTECEDENTES INSTITUCIONALES.

1.1.1 Manual de Toma de Muestras Laboratorio Clnico Unisalud: Documento realizado en el ao 2006, el cual enmarca los mtodos de recepcin, recoleccin, conservacin, transporte y toma de muestras en el laboratorio clnico de Unisalud.

Aporte del Documento: Los principales aportes de este documento radica en que describe de forma muy clara la manera de preparacin para el paciente antes de la toma de la muestra y los pasos que tienen que seguir las personas que recepcionan, toman y procesan las muestras.

1.1.2 Manual de Bioseguridad Laboratorio Clnico: Documento realizado en el ao 2006, el cual define el conjunto de medidas preventivas, destinadas a mantener el control de los factores de riesgo laborales procedentes de agentes biolgicos, fsicos o qumicos logrando la prevencin de impactos nocivos Involucra todas las actividades que permitan controlar los procedimientos y resultados de las diferentes reas del laboratorio.

Aporte del Documento: el principal aporte de este documento es dar a conocer las principales medidas o normas de seguridad que deben ser obligatoriamente observadas por todo el personal del Laboratorio Clnico de Unisalud, destacando la importancia que tiene para que en esta rea se trabaje con seguridad, en un medio seguro y utilizando herramientas y procedimientos seguros.

1.1.3 Manual de Control Interno y externo de Laboratorio Clnico: Documento realizado en el ao 2006, Involucra todas las actividades que permitan controlar los procedimientos y resultados de las diferentes reas del laboratorio.

Aporte del Documento: el principal aporte de este documento es el apoyar el trabajo diario del bacterilogo en cuanto al procesamiento de los controles de calidad internos en cada una de las secciones para asegurar de este modo la entrega de resultados reales y fidedignos con responsabilidad clara del bacterilogo encargado de cada rea.





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1.2 OBJETIVOS.

1.2.1 OBJETIVO GENERAL. Dar a conocer al personal del laboratorio los procedimientos estandarizados que se deben ejecutar en cada una de las reas del laboratorio.

1.2.2 OBJETIVO ESPECIFICO.

Ejecutar todos los procedimientos del laboratorio bajo los mismos parmetros de acuerdo a la seccin de trabajo y sin importar el operador.





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1.3 JUSTIFICACIN.

La adopcin de un manual de procedimientos estandarizados es de vital importancia para minimizar los errores procedimentales (errores de tipo aleatorio) que afectan los resultados que son informados por el laboratorio y que repercuten directamente en la salud y bienestar de los usuarios. Por tal motivo un seguimiento riguroso a los procedimientos escritos contendidos en este manual es imprescindible y critico en la calidad de los resultados reportados.





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2. PROCEDIMIENTO PARA EL ENVI DE MUESTRAS A LABORATORIOS ADSCRITOS.

2.1 OBJETIVO. Servir de referencia al bacterilogo encargado para que realice todas las actividades que aseguren el adecuado manejo y envo de las muestras a los laboratorios adscritos, con el fin de garantizar la entrega oportuna y fiable de los resultados de los exmenes solicitados.

2.2 ALCANCE. Aplica para todas las actividades que aseguren el adecuado manejo y envo de las muestras a los laboratorios adscritos.

2.3 REFERENCIA.

Manual del Laboratorio de Referencia Echavarra.

Manual del Laboratorio de Referencia Andreas Rothstein.

Manual del Laboratorio LIH.

2.4 DEFINICIONES.

Laboratorio de Referencia: Son laboratorios que han sido elegidos, con quienes se ha establecido un contrato de servicio, que tiene como objetivo solicitar el procesamiento de exmenes que no se procesan en el laboratorio de UNI SALUD.

Remisiones: Se refiere a las solicitudes especficas que se realizan a los laboratorios adscritos acerca del procesamiento de exmenes.

Formato de remisiones: Es el formato que se debe diligenciar con los datos del paciente y los exmenes que se solicitan procesar.

2.5 RESPONSABILIDADES.

Secretaria.

Bacteriloga de qumica

Coordinador de laboratorio.





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2.6 DESCRIPCIN DEL PROCEDIMIENTO

2.6.1 Elaborar rdenes de Remisin. La secretaria elabora rdenes de remisin de acuerdo a la orden original en el computador y hace firmar por el usuario.

2.6.2 Recibir, Centrifugar, Separar y Marcar Muestras. Las muestras despus de ser tomadas, son transportadas a la seccin de qumica, en donde son centrifugadas y separadas, si se requiere, para luego ser marcadas de acuerdo a las rdenes originales.

2.6.3 Confrontar y Registrar rdenes. Se confrontan las rdenes originales con las elaboradas por la secretaria, luego de verificar que estn bien se registran en el Formato de Control de Exmenes Remitidos

2.6.4 Alistar Muestras. Se revisan y alistan las muestras de acuerdo al tipo de exmenes solicitados y siguiendo las indicaciones dadas por los laboratorios adscritos

2.6.5 Entregar y Enviar Remisiones.

El coordinador firma cada una de las rdenes de remisin para posteriormente hacer entrega de las muestras con su respectiva orden al mensajero del laboratorio adscrito en la zona del laboratorio destinada para tal fin.

2.6.6 Recibir Resultados. El mensajero del laboratorio adscrito entrega a la secretaria los resultados de los exmenes enviados en das anteriores en original y copia.

2.6.7 Registrar Llegada Resultados. La secretaria verifica en el sistema la concordancia en los datos del paciente, exmenes solicitados, resultados y fecha de llegada.

2.6.8 Reportar Llegada de Exmenes. La secretaria reporta la llegada de los exmenes al coordinador e informa de inconsistencias en los mismos.





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2.6.9 Solicitar Informacin Sobre Inconsistencias. El coordinador se comunica con et laboratorio adscrito y solicita explicaciones y soluciones sobre inconsistencias presentadas.

2.6.10 Archivar Resultados. Las copias de los resultados se archivan en las carpetas de exmenes remitidos correspondientes a cada laboratorio adscrito, los originales se archivan en el archivo de exmenes de laboratorio para ser entregados al usuario.

2.7 CONTROL DE REGISTROS. Formato Control de Exmenes Remitidos





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3. PROCEDIMIENTO PARA EL PROCESAMIENTO DE MUESTRAS EN INMUNOLOGA.

3.1 OBJETIVO.

Apoyar el trabajo diario del bacterilogo en cuanto el procesamiento de muestras y de controles de calidad en el equipo DCA 2000+, adems de las pruebas de aglutinacin por ltex, serologa RPR y pruebas de embarazo asegurando de este modo la entrega de resultados reales y fidedignos con responsabilidad clara del bacterilogo encargado de la seccin el cual debe contar con la formacin y experiencia necesaria para tomar decisiones durante el desarrollo diario de su trabajo.

3.2 ALCANCE. Involucra todas las actividades que permitan dar un resultado empleando los equipos e insumos de la seccin de inmunologa

3.3 REFERENCIA.

Manual de operaciones del equipo DCA 2000+

Manual de procedimientos en inmunologa.

Manual de tcnicas e insertos pruebas

3.4 EQUIPOS.

Equipo DCA 2000+.

Pipetas automticas rangos variables Human.

Agitador de Mazinni.

Lmpara visualizadora de aglutinacin.

3.5 DEFINICIONES.

3.5.1 Anlisis: Def. 1. determinacin de la cantidad, actividad o potencia de

un constituyente; valoracin cuantitativa de un analito; Def. 2. examinar una muestra de un espcimen para determinar la cantidad, actividad o potencia de un analito especfico o sustancia.

3.5.2 Analito: constituyente o caracterstica que se va a medir en la muestra. Esto incluye cualquier elemento, ion, compuesto, sustancia, factor, agente infeccioso, clula, organelo, actividad (enzimtica, hormonal o inmunolgica) o propiedad cuya presencia o ausencia, concentracin, actividad, intensidad u otra caracterstica se vaya a determinar.





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3.5.3 Control de Calidad: proceso estadstico que monitorea y evala el proceso analtico usando los datos recopilados de los anlisis de productos de control de calidad.

3.5.4 Controles: Son sustancias que previamente se han probado y traen consigo valores de referencia o parmetros establecidos que deben satisfacerse al procesar los controles de calidad. Estos controles son procesados al igual que una muestra.

3.5.5 Dentro de control: Indica que el anlisis de las muestras del paciente es confiable.

3.5.6 Fuera de control: indica que el anlisis de las muestras del paciente no es confiable.

3.5.7 Muestras: Son especmenes biolgicos obtenidos de pacientes y recolectados en recipientes especiales para ser manipulados y analizados

3.5.8 Reactivos: Son sustancias que se hacen reaccionar con otras y que dan lugar a trasformaciones especiales que permiten averiguar o cuantificar la presencia de determinados compuestos o elementos en las sustancias con las que han reaccionado.

3.6 DESCRIPCIN DEL PROCESO.

3.6.1 Preparar Reactivos.

Sacar reactivos de la nevera y dejar que alcance la temperatura ambiente

En caso de no haber reactivos, prepararlos siguiendo instrucciones del fabricante

3.6.2 Preparar Controles.

Sacar los controles que estn listos de la nevera y dejar que alcancen la temperatura ambiente.

En caso de no haber controles listos, prepararlos siguiendo las instrucciones del fabricante.





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3.6.3 Revisar Estado del Equipo.

Encender el equipo DCA 2000+ y esperar a que alcance la temperatura de trabajo.

Ejecutar test ptico si es la fecha estipulada.

3.6.4 Procesar Controles.

Una vez al mes los controles son analizados y manipulados como muestras con el fin de corroborar y certificar el buen funcionamiento del equipo y de los reactivos, de acuerdo con los valores de referencia o parmetros establecidos.

Luego del procesamiento de cada control (alto y normal), se anotan los resultados en el formato destinado para tai fin y se realizan las correcciones del caso si estn fuera de control. En cuanto a las pruebas en lminas se procesan los controles positivo y negativo.

3.6.5 Analizar Origen de la Falla.

El bacterilogo encargado de la seccin hace una revisin del estado del equipo, de los reactivos y de los controles.

En caso de no encontrar la causa de la falla comunica al coordinador sobre el problema y se llama al ingeniero o al asesor cientfico de la casa comercial.

3.6.6 Corregir Falla.

Cuando Se determina la posible causa de la falla se realizan las correcciones necesarias como cambiar controles o reactivos, ajustar el equipo o modificar valores.


Luego de corregir la causa de la falla, se procesan nuevamente los controles.

Si los resultados obtenidos continan fuera de control se solicita asistencia tcnica o cientfica.





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3.6.8 Llamar al Ingeniero Asesor Cientfico.

El bacterilogo llama al ingeniero o asesor cientfico, quien le dar instrucciones telefnicas o asiste al laboratorio para solucionar personalmente el problema, segn la informacin suministrada.

3.6.9 Almacenar e Imprimir Resultados.

Toda la informacin sobre los controles de calidad debe ser anotada y almacenada con el propsito de verificar la realizacin diaria de dicha actividad dando cumplimiento a las polticas de calidad que rigen el laboratorio.

3.6.10 Procesar Muestras de Pacientes.

Luego de haber procesado los controles de calidad y verificando que estn dentro de control, se procede a realizar las labores operativas estipuladas en el manual de la seccin de inmunologa.

El procesamiento de las muestras implica el registro de los datos obtenidos en la hoja diaria de trabajo de inmunologa y el diligenciamiento del formato de control mantenimiento del equipo DCA 2000+.





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4. PROCEDIMIENTO PARA EL PROCESAMIENTO DE MUESTRAS EN COAGULACIN.

4.1 OBJETIVO. Apoyar el trabajo diario del bacterilogo en cuanto el procesamiento de muestras y de controles de calidad en el equipo de coagulacin Humaclot, asegurando de este modo la entrega de resultados reales y fidedignos con responsabilidad clara del bacterilogo encargado de la seccin el cual debe contar con la formacin y experiencia necesaria para tomar decisiones durante el desarrollo diario de su trabajo.

4.2 ALCANCE. Involucra todas las actividades que permitan dar un resultado empleando los equipos e insumos de la seccin de coagulacin

4.3 REFERENCIA.

Manual de operaciones del equipo HUMACLQT.

Manual de procedimientos en coagulacin.

Manual de tcnicas e insertos pruebas.

4.4 EQUIPOS. Equipo HUMACLOT de Human Pipetas automticas rangos variables Human

4.5 DEFINICIONES.



4.5.2 Analito: constituyente o caracterstica que se va a medir en la muestra. Esto incluye cualquier elemento, ion, compuesto, sustancia, factor, agente infeccioso, clula, organelo, actividad (enzimtico, hormonal o inmunolgica) o propiedad cuya presencia o ausencia, concentracin, actividad, intensidad u otra caracterstica se vaya a determinar.






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4.5.8 Reactivos: Son sustancias que se hacen reaccionar con otras y que dan lugar a trasformaciones especiales que permiten averiguar o cuantificar la presencia de determinados compuestos o elementos en las sustancias con las que han reaccionado. .



Sacar reactivos de la nevera y dejar que alcance la temperatura ambiente.

En caso de no haber reactivos, prepararlos siguiendo instrucciones del fabricante.

4.6.2 Preparar Controles.

Sacar los reactivos que estn listos de la nevera y dejar que alcancen la temperatura ambiente.

En caso de no haber reactivos listos, prepararlos siguiendo las instrucciones del fabricante.


Encender el equipo y esperar a que alcance la temperatura de trabajo.

Programar fecha

Preparar copulas de reaccin

Verificar existencia de papel trmico en la impresora





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Los controles son analizados y manipulados como muestras con el fin de corroborar y certificar el buen funcionamiento del equipo y de tos reactivos, de acuerdo con los valores de referencia o parmetros establecidos.

Luego del procesamiento de cada control (alto y normal), se anotan los resultados en el formato destinado para tal fin y se realizan las correcciones del caso si estn fuera de control.



En caso de no encontrar la causa de la falla comunica al coordinador sobre el problema y se llama al ingeniero.





Si los resultados obtenidos continan fuera de control se solicita asistencia tcnica.

4.6.8 Llamar al Ingeniero.

El bacterilogo llama al ingeniero, quien le dar instrucciones telefnicas o asiste al laboratorio para solucionar personalmente el problema, segn la informacin suministrada.


Toda la informacin sobre los controles de calidad debe ser anotada y almacenada con el propsito de verificar la realizacin diaria de dicha actividad dando cumplimiento a las polticas de calidad que rigen el laboratorio.





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4.6.10 Procesar Muestras de Pacientes

Luego de haber procesado los controles de calidad y verificando que estn dentro de control, se procede a realizar las labores operativas estipuladas en el manual de la seccin de coagulacin.

El procesamiento de las muestras implica el registro de los datos obtenidos en la hoja diaria de trabajo de coagulacin y el diligenciamiento del formato de control mantenimiento del equipo HUMACLOT.





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5. PROCEDIMIENTO PARA EL PROCESAMIENTO DE MUESTRAS EN QUMICA.

5.1 OBJETIVO. Apoyar el trabajo diario del bacterilogo en cuanto el procesamiento de muestras y de controles de calidad en el equipo Selectra Vitalab 2, asegurando de este modo la entrega de resultados reales y fidedignos con responsabilidad clara del bacterilogo encargado de la seccin el cual debe contar con la formacin y experiencia necesaria para tomar decisiones durante el desarrollo diario de su trabajo.

5.2 ALCANCE. Involucra todas las actividades que permitan dar un resultado empleando los equipos e insumos de la seccin de qumica.

5.3 REFERENCIA.

Manual de operaciones del equipo Selectra Vitalab 2.

Manual de procedimientos en qumica.

Manual de tcnicas.

5.4 EQUIPOS.

Equipo analizador Selectra Vitalab 2.

Centrfuga Clay Adams.

Bao serolgico MEMMERT.

Pipetas automticas rangos variables HUMAN.

5.5 DEFINICIONES.








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5.5.8 Reactivos: Son sustancias que se hacen reaccionar con otras y que dan lugar a trasformaciones especiales que permiten averiguar o cuantificar fa presencia de determinados compuestos o elementos en las sustancias con las que han reaccionado.



Sacar reactivos de la nevera y dejar que alcancen la temperatura ambiente.

Si no hay reactivos listos, prepararlos siguiendo instrucciones en los insertos de cada uno.

5.6.2 Reconstituir Atemperar Controles.

En la maana al iniciar el turno se deben preparar o atemperar los controles segn las recomendaciones dadas por la casa comercial para que estn a temperatura ambiente al momento de su utilizacin,





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Revisar y llenar tanque de agua

Revisar que el floppy original del sistema este colocado en el drive.

Prender el equipo empezando por el estabilizador, unidad refrigerante y por ltimo el equipo.

Colocar HCL 0.1N en la posicin 26

Revisar valores del blanco de rotor efectuado automticamente (F5, F1, Blanco rotor, Enter).

Revisar rotor de reactivos (volmenes a utilizar, posicin correcta segn numero en cada frasco, confirmar llenado de reactivos).

5.6.4 Programar y Procesar Blancos y Controles

Programar blancos (F8, Enter, Blanco, Marcar tcnicas con Enter).

Programar controles (F8, Enter, Control, asignar control con Enter, marcar tcnicas a controlar con Enter).

Cargar blancos y controles (F9, Enter).

Colocar agua o blanco de reactivo en posicin B y los controles en C segn posicin asignada.

Confirmar carga con F3.

Confirmar llenado de reactivos ( F9,F5,F2)

Luego del procesamiento de cada control (alto y normal), se guardan los resultados o se realizan las correcciones del caso si estn fuera de control.










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Si los resultados obtenidos continan fuera de control, se solcita asistencia tcnica.




Toda la informacin sobre los controles de calidad debe ser impresa y almacenada, con el propsito de verificar la realizacin diaria de dicha actividad dando cumplimiento a las polticas de calidad que rigen el laboratorio.


Luego de haber procesado los controles de calidad y verificando que estn dentro de control, se procede a realizar las labores operativas estipuladas en el manual de la seccin de qumica.

El procesamiento de las muestras implica el registro de datos en la hoja diaria de trabajo de hematologa y diligenciar el formato de control mantenimiento de los equipos Selectra Vitalab 2.





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6. PROCEDIMIENTO PARA EL PROCESAMIENTO DE MUESTRAS EN

UROANALISIS, PARASITOLOGA.

6.1 OBJETIVO. Apoyar el trabajo diario del bacterilogo en cuanto el procesamiento de muestras de orina y de los controles de calidad en el equipo Clinitec 500, adems del procesamiento de muestras coprolgicas, asegurando de este modo la entrega de resultados reales y fidedignos con responsabilidad clara del bacterilogo encargado de la seccin el cual debe contar con la formacin y experiencia necesaria para tomar decisiones durante el desarrollo diario de su trabajo.

6.2 ALCANCE. Involucra todas las actividades que permitan dar un resultado empleando los equipos e insumos de la seccin de uroanlisis y parasitologa

6.3 REFERENCIA.

Manual de operaciones de equipos Clinitec 500

Manual de procedimientos de parasitologa y orinas

6.4 EQUIPOS.

Equipo analizador Clinitec 500

Microscopio Olimpus CHS

Pipeta automtica 5-50uL

Centrfuga Clay Adams

Computador

6.5 DEFINICIONES.








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6.5.4 Controles: Son sustancias que previamente se han probado y traen consigo valores de referencia o parmetros establecidos que deben satisfacerse a l procesar los controles de calidad. Estos controles son procesados al igual que una muestra.






6.6.1 Preparar Atemperar Controles

Se toma una tira positiva y una negativa del control CHEK STIK COMBO PAK y se introduce cada una en un tubo conteniendo 10 cc de agua destilada durante 20 minutos, se mezclan y quedan as preparados los controles, si los controles ya estn preparados se sacan de la nevera y se dejan a temperatura ambiente durante 20 minutos.


Cada control es procesado como una muestra normal de orina, se introduce una tira reactiva de Multistix en cada uno de los controles y se ubican para su lectura en el equipo Clinitec 500.

Cuando los resultados no corresponden a los valores de referencia se revisan las tiras reactivas, los controles y el mismo equipo.





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Si los resultados obtenidos continan fuera de control, se solicita asistencia tcnica.



6.6.7 Almacenar e Imprimir Resultados. Toda la informacin sobre los controles de calidad debe ser anotada y almacenada en el formato de control de calidad de orinas, con el propsito de verificar la realizacin diaria de dicha actividad dando cumplimiento a las polticas de calidad que rigen el laboratorio.


Luego de haber procesado los controles de calidad y verificando que estn dentro de control, se procede a realizar las labores operativas estipuladas en el manual de la seccin de Uroanlisis.

El procesamiento de las muestras implica el registro de datos de pacientes en la hoja diaria de trabajo de uroanalisis, diligenciar el formato de control mantenimiento de los equipos Clinitec 500 y del formato de limpieza del microscopio.





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6.7 PROCESAMIENTO DE EXMENES COPROLOGICOS Y GRAM DE ORINAS.

Las pruebas que se deben realizar manualmente como son coprolgicos, coproscpicos, sangre oculta y Gram de orinas se anotan en la respectiva hoja de trabajo.

Se procesan de acuerdo a lo estipulado en el manual de procedimientos de parasitologa y orinas.





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7. PROCEDIMIENTO PARA EL PROCESAMIENTO DE MUESTRAS EN HEMATOLOGA.

7.1 OBJETIVO. Apoyar el trabajo diario del bacterilogo en cuanto el procesamiento de muestras y de controles de calidad en los equipos Coulter JT y T 540, asegurando de este modo la entrega de resultados reales y fidedignos con responsabilidad clara del bacterilogo encargado de la seccin el cual debe contar con la formacin y experiencia necesaria para tomar decisiones durante el desarrollo diario de su trabajo.

7.2 ALCANCE. Involucra todas las actividades que permitan dar un resultado empleados los equipos e insumos de la seccin de hamatologa.

7.3 REFERENCIA.

Manual de operaciones de equipos Coulter JT y T 540

Manual de procedimientos en hematologa.

7.4 EQUIPOS.

Equipo analizador Coulter JT.

Equipo analizador Coulter T 540.

Coloreador de laminas HEMATEK 2000.

Microscopio Olimpus CHS.

Contador electrnico de clulas KRAMER.

Pianos cuenta clulas.

Agitador de muestras Coulter Mixer.





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7.5 DEFINICIONES.








7.5.7 Muestras: Son especmenes biolgicos obtenidos de pacientes y recolectados en recipientes especiales para ser manipulados y analizados.






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7.6.1 Verificar Reactivos.

Mediante la observacin directa se determina si la cantidad y calidad de los reactivos dispuestos es la adecuada. (reactivos ltico, diluyente y limpiador).

En caso en que no satisfagan calidad o calidad se deben cambiar por reactivos nuevos dispuestos en los gabinetes situados debajo de cada equipo.

7.6.2 Reconstituir Atemperar Controles.

En la maana al iniciar el turno se deben preparar o atemperar los controles segn las recomendaciones dadas por la casa comercial para que estn a temperatura ambiente al momento de su utilizacin.


Revisar nivel de neumticos, deben estar dentro de las franjas verdes.

Verificar manmetros: Vaco: 2"Hg mnimo, 30PSI: 30+/-1ps, 5PSl:5+Mpsj, Presin: 60+/-5psi.

Revisar trampa de vaco: debe permanecer seca.

Realizar STAR UP y actualizacin de fecha.

Realizar PRIME.

7.6.4 Borrar en el Data Terminal Listado de Muestras.

El sistema almacena el nmero de identificacin de las muestras procesadas el da anterior, estas deben ser borradas para poder ingresar nuevas muestras.

7.6.5 Verificar Estado del Papel de la Impresora.

Se debe instalar as formas continuas de la impresora de tal forma que al imprimir queden los datos completos en el rea adecuada.


Los controles son analizados y manipulados como muestras con el fin de corroborar y certificar el buen funcionamiento del equipo y de los reactivos, de acuerdo con los valores de referencia o parmetros establecidos.

Luego de! procesamiento de cada control (alto, normal y bajo), se imprimen los resultados o se realizan las correcciones del caso si estn fuera de control.





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Luego de corregir fa causa de la falta, se procesan nuevamente los controles.

Si los resultados obtenidos continan fuera de control, se solicita asistencia tcnica.




Toda la informacin sobre los controles de calidad debe ser impresa y almacenada, con el propsito de verificar la realizacin diaria de dicha actividad dando cumplimiento a las polticas de calidad que rigen el laboratorio.


Luego de haber procesado los controles de calidad y verificando que estn dentro de control, se procede a realizar las labores operativas estipuladas en el manual de la seccin de hematologa.

El procesamiento de las muestras implica el registro de datos en la hoja diaria de trabajo de hamatologa, diligenciar el formato de control mantenimiento de los equipos Coulter JT y T 540.





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7.7 EJECUCIN DE PRUEBAS MANUALES.

Las pruebas que se deben realizar manualmente como son hemoclasificaciones, FSP, reticulocitos y gotas gruesas se registran en la hoja de trabajo diario de hematologa.

Se procesan de acuerdo a lo estipulado en el manual de la seccin de hematologa.





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8. PROCESAMIENTO DE MUESTRAS EN MICROBIOLOGIA.

8.1 OBJETIVO.

Establecer los lineamientos necesarios para el correcto procesamiento de muestras en el rea de microbiologa con el fin de obtener un resultado oportuno que le permita al mdico brindar un tratamiento adecuado al paciente y hacer un seguimiento de patologas especficas de los usuarios asignados.

8.2 ALCANCE. Inicia con el procesamiento inicial de la muestra obtenida segn la solicitud del mdico, luego con la identificacin del microorganismo causal de la infeccin, seguido de la realizacin del antibiograma que le permita al mdico dar un tratamiento eficaz al usuario y finalmente con el reporte del resultado en el libro de registro del rea de Microbiologa, definido por el Bacterilogo encargado del rea de Microbiologa. Aplica al procesamiento de las muestras correspondientes nicamente al rea de microbiologa.

8.3 RESPONSABILIDADES.

8.3.1 Coordinador de Laboratorio.

Garantizar el suministro del material y reactivos en la rea de microbiologa

Supervisar el correcto y oportuno procesamiento de las muestras en la rea de microbiologa.

Garantizar el mantenimiento preventivo de los equipos del rea de microbiologa

Solucionar las inquietudes de los usuarios.

8.3.2 Bacterilogo

Cumplir con las normas de bioseguridad para el procesamiento de muestras en la rea de microbiologa como guantes desechables, bata desechable, gafas, tapabocas

Garantizar el procesamiento adecuado y oportuno de las muestras en la rea de microbiologa de acuerdo a las tcnicas estandarizadas y a las indicaciones del manual de procedimientos en microbiologa.

Reportar los resultados en el momento indicado al paciente

Realizar controles de calidad interno y externo en el rea de microbiologa.





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8.3.3 Auxiliares de laboratorio

Cumplir con las normas de bioseguridad como el uso de guantes desechables, gafas, tapa bocas, bata desechable.

Organizar el material necesario en el rea de microbiologa para el procesamiento de las muestras como: mechero, reactivos, medios de cultivo, colorantes, tubos chupas, gradillas, bolsas para material de desecho.

Realizar limpieza permanente de los equipos correspondientes al rea de microbiologa como incubadora y neveras.

Realizar las coloraciones necesarias de las lminas del rea de microbiologa.

Registrar registro peridicamente de filtracin de los colorantes utilizados en la rea.

8.4 EQUIPOS EN EL AREA DE MICROBIOLOGIA.

Nevera para el almacenamiento de los medios de cultivo, sensidiscos antimicrobianos, solucin salina estril, disponibles para el procesamiento de muestras.

Nevera para el almacenamiento de cepas bacterianas para el control de calidad interno y externo, y muestras de pacientes que estn en proceso.

Incubadora para las muestras de los pacientes que estn en proceso.

Microscopio marca OLIMPUS para la lectura de las lminas de frotis directo y lminas coloreadas.

Lmpara Biobacter para la lectura del sistema BBL CRYSTAL.

Computador con el programa BBDM para la identificacin de los microorganismos del sistema BBL CRYSTAL en el procesamiento de las muestras.

Jarra de Co2 para incubar medios de cultivo para la identificacin de microorganismos anaerobios facultativos y anaerobios.

Lmpara para la lectura de antibiogramas.





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8.5 MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS.

Mechero

Asas bacteriolgicas

Lminas portaobjetos

Lminas cubreobjetos

Tubos de ensayo

Cajas de petri

Gradillas

Chupas

Pinzas

Tubos erlenmeyer

Probetas

Escobillones estriles

Perxido de hidrgeno

Hidrxido de Potasio.

Solucin salina estril.

Colorantes de Gram: cristal violeta, lugol, alcohol acetona, fucsina de Gram

Colorantes de Ziehl Neelsen: fucsina fenicada, alcohol cido, azul de metileno.

Medios de cultivo: agar sangre, agar chocolate , agar Mac Conkey, caldo tioglicolato, agar Mueller Hinton.

Sensidiscos antimicrobianos: Penicilina, Oxacilina, Eritromicina, Tetraciclina, Cefalotina, Clindamicina, Amoxacilina con cido clvulnico, Ciprofloxacina, Gentamicina, Norfloxacina, Ampicilina sulbactam, Nitrofurantona, Trimetropin sulfa, Cefalexina, Ampicilina, Ceftazidime, Ceftriaxona, Imipenem, Bacitracina, Noboviocina, Optoquina.

Indol.

Oxidasa .

Urobacter.





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8.6 DESCRIPCION DE PROCEDIMIENTOS.

Luego de obtener la muestra del paciente , sobre las palcas de cultivo se realiza un mtodo de aislamiento de bacterias con asa bacteriolgica, se distribuye en cuatro cuadrantes la muestra con el fin de observar el crecimiento bacteriano y poder hacer una interpretacin del crecimiento y clasificarlo como escaso (cuadrante I), moderado (cuadrante III) , abundante (cuadrante IV). Se incuba a 37 C por 24 horas en cmara de CO2 para los medios de cultivo agar sangre y chocolate lo cual ayuda a obtener un buen crecimiento de microorganismos anaerobios facultativos. Para aquellas muestras que a las 24 horas no se observa crecimiento se dejan hasta las 72 horas. Procedimiento realizado por la bacteriloga encargada del rea. Las lminas donde se realizan los frotis directos en la toma de la muestra se les realiza una coloracin de Gram con el fin de observar una morfologa bacteriana predominante que pueda ayudar a clarificar la etiologa del rea afectada. Realizado por la bacteriloga.

8.6.1 Coloracin de Gram:

- Se fijan las lminas a analizar con calor y se dejan enfriar por unos segundos. - Se les agrega cristal violeta por 1 minuto y se lavan con agua. - Se les agrega lugol por 1 minuto y se lavan con agua. - Se decoloran con alcohol acetona por 15 segundos, se lavan con agua. - Se les agrega fucsina de Gram por 30 segundos, se lavan y se dejan secar. Este procedimiento es realizado por el auxiliar de laboratorio. Se debe realizar un control de la coloracin para grmenes Gram Positivos y para Gram Negativos a partir de las cepas control y se registra en la carpeta de control de coloraciones de Gram. Este procedimiento es realizado por la bacteriloga encargada.

Se procede a la lectura para observar la morfologa predominante, se le agrega una gota de aceite de inmersin sobre la lmina coloreada y se observa en el microscopio de Microbiologa en el objetivo 100x, este paso lo realiza la bacteriloga del rea. A las 24 horas de incubacin de los medios de cultivo se observa el crecimiento y la morfologa de las colonias, la apariencia de la colonia sobre la placa de agar ayuda a establecer una identificacin presuntiva para iniciar la identificacin del microorganismo causal de la infeccin. Despus de efectuar un frotis directo (coloracin de Gram) de la colonia pura para confirmacin del Gnero del microorganismo en estudio debern realizarse las siguientes pruebas para la identificacin de la especie.





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8.6.2 Prueba de catalasa: tiene como objetivo probar la presencia de la enzima, para esta prueba se coloca una gota de perxido de hidrgeno sobre una lmina portaobjetos, luego se toman de 1 a 2 colonias del cultivo en estudio y se disuelven sobre el perxido de hidrgeno, la presencia de burbujas nos va a determinar como positiva la prueba, y sta es negativa si no se ve ninguna reaccin.

Interpretacin:catalasa positiva (Staphylococo), catalasa negativa (Streptococo).(Fig. 1)

8.6.3 Produccin de coagulasa: esta prueba tiene como objetivo probar la capacidad de coagular el plasma por accin de las estafilocoagulasas del microorganismo. Sustancia que reacciona con el plasma convirtiendo el fibringeno en fibrina. Para esta prueba se realiza una suspensin de varias colonias de un cultivo que tenga de 18 24 horas de incubacin en 1ml de plasma fresco y se incuba a 37C, se observa a partir de las 4 horas siguientes para ver la formacin de cogulos. (Fig.1) Generalmente el Staphylococo aureus puede coagular el plasma en un tiempo de 4 horas, en ocasiones puede demorar de 8 a 16 horas . Si el tiempo de incubacin se prolonga de un da para otro, debe tenerse en cuenta que la produccin de estafiloquinasa por algunas cepas de Staphylococo aureus puede lisar el cogulo formado dando resultados falsos negativos. Si el cultivo utilizado no es puro o el plasma que se utiliza no est estril pueden ocurrir resultados falsos negativos.

8.6.4 Resistencia a la novobiocina: tiene como objetivo observar el comportamiento de la novobiocina, mide la sensibilidado resistencia a la novobiocina, para esta prueba se prepara una suspensin de la colonia que tenga turbidez 0.5 de la escala de Mac- Farland, esta suspensin se siembra con un hisopo de algodn sobre una caja de Mueller Hinton y se coloca un disco de Novobiocina sobre la superficie de la caja ya sembrada. Se incuba por 18 24 horas a 37C y se lee la zona de inhibicin. Si esta en menor o igual a 16mm se considera resistencia positiva a la novobiocina. Interpretacin: Novobiocina resistente (Staphylococo saprophyticus), sensible (Staphylococo epydermides)

8.6.5 Produccin de hemlisis: es producida en glbulos rojos de agar sangre, puede ser Alfa, Beta y Gamma.

Alfa hemlisis: cuando se presenta un destruccin parcial de eritrocitos alrededor de la colonia, produciendo una coloracin verde marrn del medio de agar sangre.

Beta hemlisis: Se observa una zona clara alrededor de la colonia, por destruccin total de los eritrocitos.

Gamma hemlisis: no hay actividad hemoltica aparente.





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8.6.6 Prueba de susceptibilidad a Bacitracina: utilizada para la identificacin presuntiva de Streptocococcus Beta hemolticos del grupo A, determina la sensibilidad a la Bacitracina; para esta prueba se utiliza un inculo concentrado del microorganismo a partir de un cultivo de 18 24 horas en agar sangre, se siembra uniformemente sobre una caja de agar sangre, luego se coloca encima un disco de Bacitracina. La placa se incuba de 18- 24 a 37C en aerobiosis, cualquier halo de inhibicin que se observe debe ser considerado como positivo. (Fig. 2)

8.6.7 Prueba de optoquina: determina la sensibilidad a la optoquina, prueba la fragilidad de la membrana a la tensin superficial ejercida por el clorhidrato de etilhidrocupreina, esta prueba es utilizada para la identificacin presuntiva de Streptococcus pneumoniae, se utiliza un inculo abundante del microorganismo, que se siembra sobre una caja de agar sangre repartiendo uniformemente y se coloca encima el disco de optoquina, se incuba por 18-24 horas a 37C en una atmsfera de CO2, un halo de inhibicin de 14mm se considera positivo. (Fig. 2)

8.7 ESQUEMA GENERAL PARA LA IDENTIFICACIN DE COCOS GRAM

POSITIVOS DEL GNERO STAPHYLOCOCOS.

Cocos Gram Positivos (Fig. 1)

Catalasa Positivo Coagulasa

Positivo Negativo Staphylococo aureus Novobiocina Sensible Resistente (Staphylococo epydermides) (Staphylococo saprophyticus)





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8.8 ESQUEMA GENERAL PARA LA IDENTIFICACIN DE COCOS GRAM

POSITIVOS DEL GNERO STREPTOCOCOS.

Catalasa negativo (Fig.2)

Hemlisis

Alfa Gamma Beta Optoquina Crecimiento en Na Cl Bacitracina Sensible Resistente Enterococo Sensible Resistente Streptococo Streptococo Streptococo Streptococo Pneumoniae viridans pyogenes agalactiae





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8.9 IDENTIFICACIN DE BACILOS GRAM POSITIVOS: MICROORGANISMOS DEL

GNERO CORYNEBACTERIUM.

Muestra clnica

Agar sangre Agar chocolate

Incubacin a 37C , 24-48 horas CO2

Aislamiento de colonias pequeas puntiformes

Coloracin de Gram: cocobacilos y bacilos Gram Positivos

Pruebas bioqumicas sistema BBL CRYSTAL

Corynebacterium spp





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8.10 IDENTIFICACIN DE BACILOS GRAM POSITIVOS: MICROORGANISMOS DEL

GNERO LISTERIA.

Muestra clnica (LCR- Secreciones genitales)



Aislamiento de colonias pequeas con Beta hemlisis

Coloracin de Gram: Bacilo corto delgado Gram Positivo

Pruebas bioqumicas sistema BBL CRYSTAL

Listeria spp





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8.11 IDENTIFICACIN DE COCOS GRAM NEGATIVOS: MICROORGANISMOS DEL

GNERO NEISSERIA.

Muestra clnica



Aislamiento de colonias grises y brillantes

Coloracin de Gram: Diplococos Gram Negativos intra y extracelulares

Oxidasa positiva

Neisseria spp





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8.12 IDENTIFICACIN DE MICROORGANISMOS DE GNERO GARDNERELLA.

Secrecin Vaginal

Frotis directo


Incubacin a 37C , 24-horas CO2

Agar sangre: aislamiento de colonias Puntiformes no hemolticas Agar chocolate: colonias puntiformes, traslcidas

Coloracin de Gram: Cocobacilos Gram negativos formando masas homogneas.

Gardnerella spp

pH: >4.5, solucin salina: Clulas clave

Coloracin de Gram: Clulas clave, Cocobacilos Gram variables





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8.13 IDENTIFICACIN DE MICROORGANISMOS DEL GNERO PSEUDOMONAS.

Muestra clnica (Secreciones, lquidos orgnicos)

Agar sangre Agar Mac Conkey

Incubacin a 37C , 24-48 horas en aerobiosis

Aislamiento de colonias pigmentadas

Coloracin de Gram: Bacilos Gram Negativos

Oxidasa y catalasa positivas

Pruebas bioqumicas Sistema BBL CRYSTAL

Pseudomona spp





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8.14 UROCULTIVO.

Es una prueba para establecer el diagnstico de certeza de Infeccin del tracto urinario, identifica el agente causal, se conoce la sensibilidad del agente causal a los antimicrobianos especficos. Es indispensable diferenciar una bacteriuria significativa de una simple contaminacin, que puede ser ocasionada por microorganismos presentes en la uretra distal, un nmero de unidades formadoras de colonias por mililitro debe cuantificarse, al igual que la presencia o ausencia de leucocitos, aunque este ltimo parmetro no es excluyente de infeccin del tracto urinario. Recuentos inferiores a 10.000 unidades formadoras de colonias por mililitro de orina deben ser considerados como contaminacin. Si la muestra es obtenida por puncin suprapbica, cualquier recuento es indicativo de infeccin del tracto urinario. Si la infeccin se localiza en prstata, epiddimo o uretra, el microorganismo no puede multiplicarse previamente en la orina y el nmero de Unidades formadoras de colonias puede ser bajo. Urobacter: es un procedimiento de microcultivo diseado para confirmar en forma rpida y sencilla un proceso de infeccin urinaria. Consta de una paleta plstica de 2 caras cubiertas en cada una de ellas por 2 medios de cultivo, la primera con agar Cled y la segunda con Mac Conkey. El agar Mac Conkey permite el crecimiento de los microorganismos de la familia Enterobacteriaceae tanto lactosa positivo (colonias rosadas), como lactosa negativos (colonias traslcidas), dentro de los cuales se encuentran los agentes etiolgicos ms comunes de la infeccin urinaria. Ela agar Cled, medio sobre el cual crecen todos los posibles microorganismos viables que puedan encontrarse en la orina en estudio, permite establecer el recuento de microorganismos presentes por mililitro de orina. E recuento de Unidades formadoras de colonias ayuda a determinar bajo ciertas condiciones si los microorganismos presentes son o no responsables del cuadro clnico.





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8.14.1 Procedimiento:

Colectar la orina en un recipiente estril de boca ancha.

Agitar la orina para permitir una suspensin uniforme de los microorganismos que puedan estar presentes.

Tomar un tubo Uro- Bacter y destapar girando la tapa y sacar la paleta.

Introducir la paleta en la orina, dejar que el exceso de orina caiga al recipiente que contiene la muestra.

Colocar la paleta en su recipiente estril, cerrar hermticamente girando la tapa completamente.

Identificar la muestra e incubar a 37C por 18 24 horas.

Terminado el tiempo de incubacin, remover la paleta y revisar el crecimiento obtenido interpretando los resultados segn el nmero de colonias.

Interpretacin de resultados: si al observar la paleta aparece un crecimiento mixto debe considerarse en principio como contaminacin y procesar una nueva muestra para confirmar. Luego de realizar el recuento de colonias se pasa a una identificacin bioqumica para determinar especie y pruebas de sensibilidad antibitica. El agar Mac Conkey es adicionado con 4 metil- umberiferi- B.D. Glucoronido) que es desdoblado por la enzima produciendo al finalizar el tiempo de incubacin, una fluorescencia azul sobre la superficie del medio verificada bajo la lmpara U.V. Una prueba de indol positivo de las respectivas colonias confirma la presencia de Escherichia coli de la muestra en estudio sin necesidad de pruebas bioqumicas adicionales. (Fig.3)





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8.14.2 Identificacin de Microorganismos de Infeccin del tracto urinario

Muestra clnica (Orina)

Urobacter- Agar sangre Agar Mac Conkey

Incubacin a 37C , 24-48 horas en aerobiosis

Observacin del crecimiento- interpretacin de recuento de colonias

Coloracin de Gram: Bacilos Gram Negativos

Indol Positivo Indol Negativo. Oxidasa Negativo Oxidasa (Positivo o Negativo)

Escherichia coli Pruebas bioqumicas Sistema BBL CRYSTAL





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8.15 SUSCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA.

8.15.1 Mtodo de difusin en agar KIRBY BAUER (Mtodo de discos) - Se mantiene un lote de discos de sensibilidad en nevera. - Se realiza sobre agar Mueller Hinton por la buena reproducibilidad que presenta. - Los medios se conservan en bolsas plsticas de 2- 8C . - Es necesario probar la zona de sensibilidad, para esto se dispone de cepas control

como Staphylococcus aureus, ATCC 25923 Escherichia coli (ATCC 25922), Pseudomona aeruginosa (ATCC 27853), las cepas se mantienen en nevera.

- El tamao de las zonas de inhibicin obtenido con estas cepas se comparan contra los resultados esperados.

- Se realiza una suspensin de 1 2 colonias de la bacteria en 3 ml de solucin salina a una turbidez que no sobrepase al tubo 0.5 de la escala de Mac Farland.

- Se hace una siembra del inculo sobre el medio de Mueller Hinton. - Los discos se colocan sobre la placa teniendo en cuenta las condiciones del

paciente y el microorganismo identificado. Tabla 1 - Posteriormente se incuba a 37C durante 24 horas. - Terminado el tiempo de incubacin se leen los dimetros de sensibilidad con la

reglilla graduada y teniendo en cuenta la tabla de referencia para los antibiticos se hace la interpretacin de susceptibilidad.

8.15.2 Mecanismo de control de calidad

con el fin de asegurar un buen resultado en lo referente a alas pruebas de sensibilidad bacteriana es necesario monitorear y controlar peridicamente los medios de cultivo, los discos de sensibilidad y la metodologa utilizada como un control de calidad interno, utilizando cepas de referencia para los cuales los halos de inhibicin son conocidos frente a los antimicrobianos de uso rutinario.





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8.15.3 Series selectivas de Antimicrobianos.

Microorganismos Gram Positivos Staphylococcus spp

Penicilina

Clindamicina

Meticilina u Oxacilina

Eritromicina

Tetraciclina

Vancomicina

Amikacina

Gentamicina

Kanamicina

Cloranfenicol

Trimetropin sulfa

Nitrofurantoina*

Norfloxacina*

*= solo para infecciones urinarias

Streptococcus faecalis (enterococo)

Ampicilina o Penicilina

Vancomicina

Tetraciclina

Eritromicina

Nitrofurantoina*

Norfloxacina*

Cefalosporinas de 1 Generacin

*= Solo para infecciones urinarias

Streptococcus Grupo Viridans y no enterococos

Cefalosporina de 1 Generacin

Clindamicina

Eritromicina

Penicilina

Tetraciclina

Vancomicina

Nitrofurantoina*

Norfloxacina*






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Pseudomonas spp

Amikacina

Ceftazidime

Ceftriazona

Gentamicina

Trimetropin sulfa*

Tetraciclina

Norfloxacina*


Enterobacterias

Amikacina

Ampicilina

Cefotaxime o Ceftriazona

Gentamicina

Tetraciclina

Trimetropin sulfa

Nitrofurantona

Norfloxacina*

Ampicilina sulbactam






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8.16 PROCEDIMIENTOS PARA MUESTRAS DE FLUJO VAGINAL.

FLUJO VAGINAL

PH vaginal Aspecto del flujo

EXAMEN DIRECTO

Examen fresco Extendido coloreado con Gram

Clulas gua, Polimorfonucleares, hemates, blastoconidias, Pseudomicelios

Clulas gua, morfologa bacteriana, blastoconidias, pseudomicelios, polimorfonucleares





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8.16.1 Interpretacin de resultados:

Clasificacin FV C GRAM MICROORGANISMO

Vaginosis

Bacteriana

Homogneo,

baja viscosidad,

gris,

pH>4.5

Cocobacilos

Gram variables,

Bacilos curvos

Gram negativos

Gardnerella

vaginalis,

Bacteroides spp,

Mobilluncus spp.

Vaginitis

bacteriana

Diplococos

Gram negativos

intra y/o

extracelulares

Neisseria Gonorreae

Vaginitis por

candida sp

Blanco grumoso

pH< 4.5

Blastoconidias,

Pseudomicelios

Candida sp

Vaginitis por

Trichomonas

Espumoso

amarillo- verde

Fresco Tricomonas

vaginalis

Flora vaginal

normal

Blanco

opalescente

Bacilos Gram

Positivos

Lactobacillus sp

8.17 BASCILOSCOPIA: se utiliza para el diagnstico de Tuberculosis pulmonar producida por la Bacteria Mycobacterium tuberculosis en pacientes sospechosos de sintomticos respiratorios con tos y expectoracin por ms de 15 das. El gold estndar es la Baciloscopia donde se va a observar la presencia de bacilos cido alcohol resistentes. La muestra de eleccin es el esputo que es una secrecin pulmonar que el paciente debe recoger en un frasco estril de boca ancha y llevarlo al laboratorio, debe recolectar 3 muestras de diferente da de acuerdo a la solicitud del mdico. Como control de calidad interno se realiza un control negativo donde se hace una lmina con una cepa de Staphylococo aureus y se colorea con el mtodo de Ziehl Neelsen y un control positivo con un extendido de la vacuna TBC y se colorea con el mtodo de Ziehl Neelsen, se registra a diario en la carpeta de control de coloraciones de Ziehl Neelsen. Este procedimiento es realizado por la bacteriloga encargada del rea.





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8.17.1 Extendido de la muestra: para este procedimiento se utilizan lminas nuevas, las cuales previamente de dejan en alcohol por 24 hora y luego se dejan secar, se envuelven en papel sobre las cuales se va a realizar el extendido.

Se cubre el rea con papel impregnado de hipoclorito.

Luego se colocan las lminas para el extendido frente a cada frasco de la muestra.

Se marcan con un lpiz azul en el extremo donde se coloca el nombre del paciente, la fecha y el nmero de la baciloscopia.

Con un baja lenguas lo partimos y tomamos de la parte ms gruesa de la muestra para realizar el extendido en la lmina, este tiene que ser uniforme, evitando tocar los bordes de la lmina, no debe quedar muy fino ni muy grueso para facilitar la lectura.

Se dejan secar evitando que les llegue el sol y en un lugar donde no les caiga polvo.

Se fijan rpidamente con calor y se procede a realizar la coloracin de Ziehl Neelsen.

Este procedimiento lo realiza el auxiliar encargado el cual debe cumplir con todas las medidas de bioseguridad como: gafas, careta, tapabocas, guantes, bata desechable y en un lugar adecuado.

8.18 COLORACIN DE ZIEHL NEELSEN.

8.18.1 Reactivos: Fucsina fenicada, alcohol cido, azul de metileno.

8.18.2 Procedimiento: - Se cubre con Fucsina fenicada de Ziehl Neelsen la totalidad de la lmina y se

calienta suavemente con llama hasta emisin de vapores, por 10 minutos a partir del momento que empieza a emitir vapores.

- Se lava con agua. - Se le agrega alcohol cido a la totalidad de la lmina por 1 minuto. - Se lava con agua. - Se le agrega azul de metileno por 3 minutos. - Se lava con agua y se dejan secar. Este procedimiento lo realiza el auxiliar de laboratorio encargado.





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8.18.3 Lectura: Se coloca una gota de aceite de inmersin sobre la lmina coloreada, se lee en el microscopio del rea de microbiologa en objetivo 100x empezando de derecha a izquierda durante mnimo 10 minutos por cada lmina. Se van a identificar Bacilos cido alcohol resistentes. Procedimiento realizado por la bacteriloga encargada.

8.18.4 Informe de resultados:

(-): No se observan BAAR en 100 campos microscpicos observados en 10 minutos de observacin.

(+): Menos de un BAAR por campo, en 100 campos microscpicos observados

(++): Uno a diez BAAR por campo en 50 campos microscpicos observados

(+++): Se observan ms de 10 BAAR por campo en 20 campos microscpicos observados

8.18.5 Gram de orina sin centrifugar:

Mezclar bien la muestra de orina

Con asa calibrada sobre lmina extender una gota ms o menos del tamao de una laminilla.

Fijar, con calor.

Colorear con el mtodo de Gram

Contar 10 campos en 100x

Promediar.

Informe: Informar Cocos Gram positivos, Bacilos Gram Positivos, Cocobacilos Gram positivos, Cocobacilos Gram negativos. Si hay 3 microorganismos es contaminacin, se debe solicitar nueva muestra. Procedimiento realizado por la bacteriloga del rea de microbiologa. Valores de r

Manual de Procedimientos Estandar Del Laboratorio Clinico

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