Últimos Avances en UHPLC - Agilent · 2016-09-02 · • El efluente completo de la primera...
Transcript of Últimos Avances en UHPLC - Agilent · 2016-09-02 · • El efluente completo de la primera...
1290 Infinity LC pág.: 1
Últimos Avances en UHPLC:
• Nuevas Soluciones Multidimensionales 1290
Infinity.
• Nuevo UHPLC-1290 Infinity Cuaternario.
• Soluciones DAD 1290 Infinity.
• ….
Isidro Masana
Especialista de Productos LC/MS
Agilent Technologies
27 de septiembre de 2012
12:00-12:40
1290 Infinity LC pág.: 2
Agenda - Últimos Avances en UHPLC:
• Nuevas Soluciones Multidimensionales 1290 Infinity:
• Comprehensive LCxLC & Heart Cutting LC-LC.
• Nuevo UHPLC-1290 Infinity Cuaternario. • Descripción, Prestaciones,…
• “BlendAssist”: asistente de mezclas.
• 1290 Infinity ISET: “El arte de la emulación en HPLC”.
• Soluciones DAD 1290 Infinity: • Mejora x10 Sensibilidad UV: “Max-Light High Sensitivity”.
• Mejora x30 Rango Dinámico: “HDR-DADTechnology”.
12:00-12:40
Novedad
1290 Infinity LC pág.: 3
Agenda - Últimos Avances en UHPLC:
• Nuevas Soluciones Multidimensionales 1290 Infinity:
• Comprehensive LCxLC & Heart Cutting LC-LC.
• Nuevo UHPLC-1290 Infinity Cuaternario. • Descripción, Prestaciones,…
• “BlendAssist”: asistente de mezclas
• 1290 Infinity ISET: “El arte de la emulación en HPLC”.
• Soluciones DAD 1290 Infinity: • Mejora x10 Sensibilidad UV: “Max-Light High Sensitivity”.
• Mejora x30 Rango Dinámico: “HDR-DADTechnology”.
Novedad
2-38 m
1290 Infinity LC pág.: 4
Soluciones
Multidimensionales
Agilent 1290 Infinity
• Capacidades de separación multiplicadas
para mecanismos de separación
ortogonales
• Dos modos distintos de trabajo*:
• Heart-cutting 2D-LC (“LC-LC”).
• Comprehensive 2D-LC (“LCxLC”).
*Ambos modos soportados por el 1290 Infinity 2D-LC
• LC-2D: Inyectar todo o una parte del efluente de una columna a una
segunda columna, idealmente con un mecanismo de separación
ortogonal.
• Objetivo: aumentar el poder total separación.
Una nueva solución
LC-2D, flexible y fácil de usar para
las muestras más complejas.
1290 Infinity LC pág.: 5
Heart-cutting 2D-LC (LC-LC):
LC-2D: “Heart-cutting“ 2D-LC (LC-LC)
LC1
LC2
• Sólo algunas partes del efluente de la primera
columna (picos seleccionados de la primera dimensión)
se inyectarán en la segunda columna.
• Normalmente, un pico de la primera dimensión se
muestra en su conjunto y en la segunda dimensión se
utiliza un gradiente con un mayor tiempo de
ejecución que el tiempo de recogida. En la segunda
dimensión se suelen utilizar columnas más largas con
mayor capacidad de separación.
• Los picos de la primera dimensión que eluyen
cuando está aún ejecutándose el gradiente en la
segunda dimensión - se perderán!!!.
• Ejemplo aplicación típica en farma: corroborar la
pureza del principio activo.
1290 Infinity LC pág.: 6
LC-2D: “Comprehensive“ LC-2D (LCxLC)
Comprehensive 2D-LC (LCxLC):
LC1
LC2
1st peak from
1st
dimension
2nd peak
from 1st
dimension
3rd peak from
1st
dimension
LC1
LC2
• El efluente completo de la primera columna se inyecta
a la segunda columna y se analiza con gradientes muy
rápidos.
• Un pico de la primera dimensión debe ser muestreado por
lo menos 3 a 4 veces. No se pierden picos
• El tiempo de ejecución del método de la segunda
dimensión coincide con el tiempo de recogida de
efluente de la primera
dimensión. Finalmente, los
picos se reconstruyen.
• Aplicación típica: muestras muy
complejas que requieran la
máxima capacidad posible
de separación.
1290 Infinity LC pág.: 7
Modos de Operación LC-2D Soportados
Comprehensive LCxLC:
• Standard: muestreo en continuo
• Time-/Peak-triggered: ahorra disolvente de la 2ª
dimensión (muestreo discontinuo).
Heart-cutting LC-LC:
• Time-triggered
• Peak-triggered
level
1D chromatogram
2D sampling
2D gradient
level
Muestras Desconocidas/ Complejas:
Biofarma, Alimentación, Polímeros....
Muestras Conocidas/Aumentar la Confianza:
Farma, Desarrollo de métodos,...
2D sampling
2D gradient
2D sampling
2D gradient
2D sampling
2D gradient
1290 Infinity LC pág.: 8
Hardware: Elevada Flexibilidad Modular
1. Dimensión
2. Dimensión
1290 Infinity
Binary Pump
1290 Infinity
Binary Pump
1290 Infinity
Autosampler or 1260
HiP Autosampler
Optional
1260/1290
Infinity
Detector
1 ó 2
1290 Infinity TCC
Optional
1260/1290
Infinity
Detector
1260/1290
Infinity
detector 2ª
dimensión
1260 Infinity Binary
or Quaternary Pump
1260 Infinity
Capillary Pump 1260 Infinity
Autosampler
Monitorizar
cromatograma
1ª dimensión y
peak-triggering
Monitorizar línea
de desecho
Casi cualquier bomba, inyector automático Agilent puede utilizarse en la 1 ª dimensión!
Casi todos los detectores son compatibles!
Una bomba binaria 1290 Infinity es necesaria para la segunda dimensión.
Desecho
Loop1
Loop2
2pos/4port-duo
Nueva vávula exclusiva
Agilent 2D-LC con 2
rutas de flujo
completamente
simétricas y vaciado a
contracorriente de
ambos “loops“.
1290 Infinity LC pág.: 9
Ventajas Nueva Válvula Exclusiva Agilent 2D-LC
con Cabezal Intercambiable: “QuickChange”.
1. 2.
en carga
en elución /
análisis
en carga
Todas las vías de flujo son iguales (no hay más “loops puente”)
Llenado y Vaciado simétrico de ambos “loops“ en contracorriente.
(para reducir la dispersión)
Todo con 1 sola válvula (sin sincronización, con menores costes,…)
en elución /
análisis Loop1
Loop2
Desecho
2D-bomba 2D-pump
1D-column
2D-column 2D-column
Dirección de Llenado
Dirección de Análisis
Válvula
Conmutación
1290 Infinity LC pág.: 10
Cabezales Muy Fácilmente Intercambiables:
Enorme Flexibilidad de Múltiples Configuraciones.
1. Dimensión
2. Dimensión
waste
Loop1
Loop2
2pos/10
portvalve
• Fácil transferencia de los actuales métodos 2D-LC: la mayoría de configuraciones de válvulas
para LC-2D (comprehensive and heart-cutting) están soportadas.
• También se soportan configuraciones con 2 válvulas con sincronización automática sus
motores!
1290 Infinity LC pág.: 11
• Estándar: repite el mismo
gradiente en la 2D
• Con Desplazamiento Constante: %B2D
• Con Desplazamiento Constante: %B2D
+
• Incremento composición final: Δ%B2D
• Cualquier Combinación
%B2D
Start 2D sampling End 2D sampling
%B1D
Time
%B2D
%B1D
Time
%B2D
%B1D
Time
%B2D
%B1D
Time
Tipos de Gradientes 2D en Comprehensive 2D-LC: Gradientes 2D adaptados a lo largo del tiempo mejorarán la resolución
1290 Infinity LC pág.: 12
Select the 2D-LC
mode:
comprehensive /
heart-cutting
Define the gradient
of the 2nd dimension
Define repetition of
2nd dimension
gradient
(Modulation time)
Show rollout of
gradient in the 2nd
dim over the
runtime of the 1st
dimension
Define time
window(s) where
the selected 2DLC
mode is active
La Más Fácil Puesta en Marcha de Complejos
Métodos LC-2D – Parámetros especifícos de la bomba 2D
Graphical
editing of
gradient shift Access to standard
method UI of the
pump
Operation values,
warnings
Close-up of 2D-
gradient
Solvent & Flow-
Settings
Solvent
consumption
calculation
El conjunto de gradientes de la 2ª dimensión se
puede editar y modificar gráficamente mediante
sencillos arrastres de sus límites con el ratón.
1290 Infinity LC pág.: 13
Softwares de Tratamiento Datos LC-2D
• Heart-cutting 2D-LC by Agilent„s OpenLAB CDS ChemStation ed.
• Comprehensive 2D-LC Agilent recomienda para monitorización de las 2 dimensiones:
GC Image LCxLC Edition Software from GC Image LLC.
(Chemstation permite monitorizar 1 dimensión)
• Las principales características que ofrece:
• Importación directa de los archivos de datos Agilent.
• Identificación, integración y anotación de los picos.
• Análisis comparativo y Visualización.
• Crear bibliotecas de compuestos.
• Manejo de datos de MS.
12-28 m
1290 Infinity LC pág.: 14
Ejemplo de Perfil Gradientes 2D Optimizado
1ªt Dimensión: Eclipse Plus RRHD, C18, 150 x 2.1 mm, 1.8 µm. Flujo: 0.1 mL/min. Gradiente: 0 min 5% B – 30 min 95% B, 40min stop-time.
2ª Dimensión:
Eclipse Plus RRHD, Phenyl Hexyl, 50 x 3.0 mm, 1.8 µm
Flujo: 3 mL/min. Gradiente inicial: 0 min - 5% B, 0.5 min - 15% B, 0.51 min - 5% B, 0.65 min - 5% B. Modulation-time 0.65 min (intervalo conmutación válvula)
1290 Infinity LC pág.: 15
Ejemplo Aplicación: Repetibilidad Cuantitativa
Polifenoles en matriz Alimentaria
1
2
3
4
5
6
7
8 9
10
11
12 13 14
15
16
17 18 19
20 21 22
23
24
25 26
Compound
RT 1st dim
(min)
RT 2nd dim
(sec) Peak Volume
Esculin mean 9.75 18.58 177,383
s.d. nd 0.11 4,713
RSD (%) nd 0.57 2.7 Rutin mean 13.65 33.68 72,375
s.d. nd 0.07 853
RSD (%) nd 0.22 1.2 Coumaric acid mean 13.00 25.57 660,541
s.d. nd 0.13 13,037
RSD (%) nd 0.52 2.1 Reservatrol mean 18.85 26.65 1,122,219
s.d. nd 0.10 16,089
RSD (%) nd 0.37 1.4 Salicylic acid mean 19.50 18.53 211,092
s.d. nd 0.10 6,895
RSD (%) nd 0.51 3.3 Luteolin mean 19.50 32.70 695,601
s.d. nd 0.11 17,592
RSD (%) nd 0.33 2.5 7-Hydroxy-
Flavone mean 22.75 34.26 1,388,226
s.d. nd 0.10 17,195
RSD (%) nd 0.30 1.2 Pinoslyvin mean 24.70 18,85 1,588,654
s.d. nd 0.23 57,580
RSD (%) nd 1.24 3.6 Chrysin mean 27.30 27.42 808,916
s.d. nd 0.11 14,768
RSD (%) nd 0.39 1.8 Flavone mean 28.60 26.35 1,008,012
s.d. nd 0.13 20,911
RSD (%) nd 0.48 2.1
RSD% Volumen picos:
Todos los compuestos <3.6% RSD
(1.2-3.6%)
1290 Infinity LC pág.: 16
Agenda - Últimos Avances en UHPLC:
• Nuevas Soluciones Multidimensionales 1290 Infinity:
• Comprehensive LCxLC & Heart Cutting LC-LC.
• Nuevo UHPLC-1290 Infinity Cuaternario. • Descripción, Prestaciones,…
• “BlendAssist”: asistente de mezclas
• 1290 Infinity ISET: “El arte de la emulación en HPLC”.
• Soluciones DAD 1290 Infinity: • Mejora x10 Sensibilidad UV: “Max-Light High Sensitivity”.
• Mejora x30 Rango Dinámico: “HDR-DADTechnology”.
Novedad
14-26 m
pág.: 17 1290 Infinity LC
1290 Infinity – ¿Qué aporta al mundo del UHPLC?
1290 Infinity NO solo es un equipo capaz de proporcionar
unos rangos mayores de Flujo y de Presión…
1290 Infinity es un equipo INNOVADOR
1290 Infinity incorpora grandes avances en todos sus
módulos, que una vez más, marca la diferencia tecnológica.
pág.: 18 1290 Infinity LC
Tecnología Bombas 1290 Infinity UHPLC
- Máxima Potencia y Robustez
pág.: 19 1290 Infinity LC
Bombas UHPLC 1290 Infinity Robustez y alta capacidad de disipación de calor
Nuevo material del pistón: SSiC* (Carburo de
silicio sintético). Proporciona Mejor Conductividad
térmica y menor fricción para menor desgaste.
Permite una optima disipación de calor
• Mayor presión x flujo (1200bar at 2 ml/min)
• Alarga el tiempo de vida de los sellos/ intervalos
de mantenimiento (>150L)
• Un solo sello para fase normal y reversa
Capilares Multi-Capa para un
óptimo intercambio de calor entre los
cabezales de las bombas.
SSiC*: Material cerámico de alta
dureza formado por Carburo de
Silicio sintético.
Volumen Embolada variable (patentado)
menor desgaste y mejores prestaciones. (1050-1100-1200-1260-1290)
1290 Infinity LC pág.: 20
Rango de Potencia de la Bomba Cuaternaria
1290 Infinity
2.0 5.0 10.0
250
800
1200
p [bar]
[ml/min]
= Bomba binaria
Adicional
Bomba Cuaternaria
(HPLC semi-preparativa)
600
1000
1.0
Bomba
Cuaternaria
Agilent 1290 Infinity
• 1200 bars: 0-2mL/min
• 800 bars: 5mL/min
• 5-10mL/min hasta 250 bars
Bomba Cuaternaria
Competidor
pág.: 21 1290 Infinity LC
Fundamentos Mezclado a Baja Presión y
Especificaciones Bomba 1290 Infinity Cuaternaria
Combination and mixing of
mobile phases after the
pump head
Mixing by low-pressure
proportioning valve before
the pump head
Bomba Cuaternaria
Mezclado Baja Presión
• Combina y mezcla eluyentes mediante
válvula proporcional de baja presión
ANTES del cabezal de bombeo.
• El cambio de volumen al mezclar afecta
a la exactitud de la composición de la
mezcla.
• Mayor volumen de retardo del gradiente
(tiene que atravesar el cabezal de bombeo)
• Rango Potencia (Presión x Flujo): • 1200 bars hasta 2 mL/min.
• 1000 bars hasta 3.5 mL/min.
• 800 bars hasta 5 mL/min.
• 250 bars hasta 10 mL/min.
• Precisión y Exactitud de Flujo: • Flow Accuracy <0.07% RSD or 0.005 min SD • Flow Precision ± 1.0%
• Precisión y Exactitud de Composición: • ± 0.35 % absoluto en todo el rango • < 0.15 % RSD ó 0.01 min SD
• Rango Composición: • 1-99%
• Volumen de Retardo Gradiente (“Delay“) • <350µl
1290 Infinity LC pág.: 22
Los 3 Puntos Cruciales para conseguir las máximas prestaciones en una
bomba cuaternaria con mezclado a baja presión:
1. Conocer y tener muy bien caracterizados los eluyentes utilizados.
La Historia de la Bomba Cuaternaria 1290
Infinity es una Historia sobre EXACTITUD!!
1290 Infinity LC pág.: 23
La Historia de la Bomba Cuaternaria 1290
Infinity es una Historia sobre EXACTITUD!!
Los 3 Puntos Cruciales para conseguir las máximas prestaciones en una
bomba cuaternaria con mezclado a baja presión:
1. Conocer y tener muy bien caracterizados los eluyentes utilizados.
2. Disponer de una bomba inteligente – Amortiguación Activa – con una
bomba de alta resolución (~300 pL por paso del motor)
3. Nuevo mezclador InletWeaver basado en la super-eficiente tecnología
Jet Weaver:
La Bomba Cuaternaria 1290 Infinity ofrece la mayor exactitud y precisión
en todo tipo de aplicaciones.
Premezcla el eluyente
antes de entrar en el
cabezal de bombeo
Mezclador opcional
situado después del
cabezal de bombeo (sólo para condiciones
muy críticas- p.e. TFA)
pág.: 24 1290 Infinity LC
1290 Infinity Cuaternaria – Análisis Isocrático
Precisión Composición
min 0 1 2 3 4 5 6 7 8
mAU
0
100
200
300
400
500
600
0
0.0005
0.001
0.0015
0.002
0.0025
0.003
Peak1 Peak2 Peak3 Peak4
SD data
Especificació SD < 0.01min
SD = 0,0024min
SD = 0,0006min
1/4
1/16
1290 Infinity LC pág.: 25
min 2 4 6 8 10 12
mAU
0
20
40
60
80
100
120
0
0.0005
0.001
0.0015
0.002
0.0025
Peak1 Peak2 Peak3 Peak4 Peak5 Peak6 Peak7 Peak8 Peak9
SD data Especificación SD < 0.01min
0,002min
0,0003min
SD = 0,001min
1290 Infinity Cuaternaria–Análisis Gradientes
Precisión Composición
1/5
1/10
1/20
1290 Infinity LC pág.: 26
Influencia Rango Composición Gradiente suave a Pequeñas proporciones de % orgánico Ejemplo Análisis de Analitos Muy Polares con Fase Reversa
Column: Agilent Poroshell 120 EC-C18, 4.6 x 50 mm, 2.7 µm (p/n 699975-902)
Mobile phase: A = Water / B = Acetonitrile
Gradient: 2-12%B: at 0 min 2 % B, at 5 min 12 % B
Flow rate: 2 mL/min
Stop time: 5 min
Injection vol.: 5 µL
Column Temp.: 40 °C
DAD: 254/10 nm, (ref. 360/ 100 nm), 20 Hz
1: Theophylline
N
N
N
N
CH3
O
CH3
O
H
N
N
N
N
CH3
O
CH3
O
CH3
2: Caffeine
min 2 2.5 3 3.5 4 4.5
mAU
0
20
40
60
80
100
1290 Infinity LC pág.: 27
Influencia Rango Composición Gradiente suave a Pequeñas proporciones de % orgánico Ejemplo Análisis de Analitos Muy Polares con Fase Reversa
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
1290 Infinity Quat. System
1260 Infinity Quat. System
Quat. UHPLC Other vendor
RS
D R
T (
%)
Theophylline
Caffeine
Precisión Tiempo de Retención
Specification (< 0.15 %)
2.4%
0.2%
1290 Infinity LC pág.: 28
Influencia Rango Composición: Prestaciones
con Pequeñas Proporciones de % Orgánico
0 10 20 30 40 50
mAU
0
50
100
150
200
250
Gradiente Escalonado
Saltos 1 % de 0 a 10 %
1290 Infinity Quaternary system
Quaternary UHPLC from other vendor
1%
3%
7%
10%
Sa
lto
in
icia
l
pág.: 29 1290 Infinity LC
Bomba Cuaternaria 1290 Infinity Herramientas que proporcionan sus elevadas Prestaciones
1. 4-channel
Degasser
2. MCGV (Multi-
Channel-
Gradient-Valve)
3. Inlet-Weaver
4. Pump Head
5. Multi-Purpose-
Valve
6. In-line Filter
7. Switchable Jet
Weaver Mixer
8. Bomba peristáltica
lavado pistones
9. Sensor presión
10. Sensor de fugas
disolvente
1
2 3
4
4
5
6
7
10
8
9
pág.: 30 1290 Infinity LC
Válvula Multifunción para la Mayor Comodidad
y Flexibilidad
Purga Automática (controlada por software)
pág.: 31 1290 Infinity LC
Válvula Multifunción para la Mayor Comodidad
y Flexibilidad
Filtrado eluyentes en línea para proteger columna
en aplicaciones con volumen de retardo estándar
pág.: 32 1290 Infinity LC
Válvula Multifunción para la Mayor Comodidad
y Flexibilidad
Lavado Automático del filtro en
contracorriente (backflush)
pág.: 33 1290 Infinity LC
Válvula Multifunción para la Mayor Comodidad
y Flexibilidad.
Mezclado Extra para el mínimo rizado/ruido de la línea de base
en las aplicaciones más exigentes (TFA como modificador)
1290 Infinity LC pág.: 34
Agilent “Jet Weaver” - Una Nueva Tecnología en mezcladores
“Jet
Weaver”
35 µl (b. binaria)
Sin “Jet
Weaver” (b. binaria)
Competidor A
50 µl mixer
1 ml/min
2-35 % ACN/H2O
(0.1 % TFA)
Prestaciones con TFA
Tecnología: -Tecnología multicapa – Placas de difusión de acero
inoxidable con estructuras grabadas (Microfluidica)
Mezclador con 2 volumenes intercambiables: 35 o 100µL
La mejor eficiencia de mezcla, incluso
a flujos muy bajos, con el menor
volumen de retardo* (35 µl) para muy
bajo ruido UV
pág.: 35 1290 Infinity LC
Bomba Cuaternaria 1290 Infinity: BlendAssist
(Asistente de Mezclas)
Heramienta de software para la dilución en línea de tampones y
modificadores:
• Mejora la reproducibilidad de los tiempos de retención (inter-día).
• Facilita la programación del gradiente con diferentes concentraciones a
partir de soluciones stock.
Water Water
1% TFA
ACN
ACN
1% TFA
Ejemplo 2 Métodos con distinto % modificador:
1. 5 to 95% gradiente de ACN con 0.1% TFA en Agua y
0.08% TFA en ACN.
2. 20 – 80% gradiente de ACN con 0.5% TFA en Agua y
0.4% TFA en ACN.
Sin BlendAssist: se deben preparar manualmente los 4
eluyentes requeridos o programar complejos gradientes
(%A, B, C, D).
Con BlendAssist:
1. Definir el factor de dilución de las soluciones stock.
2. Programar un sencillo gradiente binario
orgánico/acuoso!!
29-11 m
pág.: 36 1290 Infinity LC
1290 Infinity Cuaternario: Asistente Preparación
Mezclas “On-line: BlendAssist*”
* BlendAssist standard incluido en bombas 1290 Cuartenarias. Opcional “BlendAssist Pro“ con funciones adicionales
Heramienta de software para la dilución en línea de tampones y modificadores:
Mejora la reproducibilidad y Facilita la programación del gradiente.
BlendAssist
calculará el factor
de dilución
necesario,
Programar un sencillo
gradiente binario
1290 Infinity LC pág.: 37
Estudio Repetibilidad Composición y Flujo en
Análisis Isocratico de Glucocorticoides: Muy Sensibles a Pequeños Cambios Composición
Hidrocortisona
Beclomethasona-di-proprionato
Hidrocortisona acetato
min 1 1.5 2 2.5 3 3.5
mAU
0
5
10
15
20
25
30
71% ACN 70% ACN 69% ACN
Hydrocortisone
acetate
Hydrocortisone
Beclomethasone-di-proprionate Tiempo de retención
MUY influenciado por
composición
Column: Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18, 4.6 x 100 mm,
5 µm (p/n 959996-902)
Mobile phase: Water/ Acetonitrile = 30/70
Flow rate: 1 mL/min
Stop time: 5 min
Injection vol.: 3 µL (needle wash for 3 sec)
Column Temp.: 30 °C
DAD: 254/10 nm, (ref 400/ 80 nm), 20 Hz, slit 4 nm
1290 Infinity LC pág.: 38
6 eluyentes mezclados dinámicamente
min 1 2 3 4
Norm.
0
5
10
15
20
25
30
Estudio Repetibilidad Composición y Flujo en
Análisis Isocratico de Glucocorticoides: - Mezcla
dinámica (/en linea) “vs” mezcla manual diversos usuarios
min 1 2 3 4
Norm.
0
5
10
15
20
25
30
35
40
6 eluyentes mezclados manualmente
(diferentes usuarios)
El mezclado dinámico mejora
considerablemente la reproducibilidad*
de tiempos de retención (*entre días)
Usuarios1 a 6
1290 Infinity LC pág.: 39
Estudio Repetibilidad Composición y Flujo en
Análisis Isocratico de Glucocorticoides: Mezcla Dinámica “versus” Manual
For illustration only, data can be found in Agilent Application Note 5991-0098EN
1 usuario,
1 botella (/preparación)
6 análisis
1 usuario,
6 botellas (/preparaciones)
Multiples usuarios,
6 botellas (/preparaciones)
Mezcla Dinámioca
6 análisis
Precision Tiempo Retención
Especificación (< 0.15 %)
1290 Infinity LC pág.: 40
Bomba Cuaternaria 1290 Infinity Conclusiones
Más Amplio Rango de Potencia: hasta 1200 bars (a 2mL/min) y hasta
10ml/min de flujo máximo.
La Mejor Precisión y Exactitud de Composición del mercado,
independiente del disolvente y en todo el rango de composiciones, flujos
y presiones.
Todo tipo de aplicaciones con prestaciones tipo bombas binarias con
mezclado a alta presión.
Blend Assist dilución en línea de soluciones stock de modificadores/
tampones
ISET-ready! (emulación de otras bombas)
Menor precio que la bomba binaria 1290 Infinity.
La máxima Flexibilidad!
Costes de operación y mantenimiento similares a bombas de HPLC.
1290 Infinity LC pág.: 41
Agenda - Últimos Avances en UHPLC:
• Nuevas Soluciones Multidimensionales 1290 Infinity:
• Comprehensive LCxLC & Heart Cutting LC-LC.
• Nuevo UHPLC-1290 Infinity Cuaternario. • Descripción, Prestaciones,…
• “BlendAssist”: asistente de mezclas
• 1290 Infinity ISET: “El arte de la emulación en HPLC”.
• Soluciones DAD 1290 Infinity: • Mejora x10 Sensibilidad UV: “Max-Light High Sensitivity”.
• Mejora x30 Rango Dinámico: “HDR-DADTechnology”.
Emulación de “cualquier”
HPLC/UHPLC con el 1290 y la
nueva tecnología ISET.
Saltar a DAD
12:00-12:40 34-6 m
1290 Infinity LC pág.: 42
Pesticidas: Ejemplo Emulación 1100 con ISET Columna: 3 x 50 mm, 2.7 µm Poroshell
min 1 1.5 2 2.5 3 3.5
mAU
0
100
200
300
400
500
600
700
800
Rs= 1.90 1100 Series Binary
LC
1290 Infinity LC - El gradiente llega antes
Rs= 1.15
Me
tam
itro
n
Ch
lori
dazo
ne
Sim
azin
e
Ch
lort
olu
ron
Diu
ron
Pro
pa
zin
e
Te
rbu
tyla
zin
e
Pro
me
tryn
Cya
niz
ine
1290 Infinity LC
with iSET
Rs= 1.87
1290 Infinity LC pág.: 43
Intelligent System Emulation Technology
ISET: - Cómo programarlo?
Select pump
Select autosampler
• Agilent 1100
• Agilent 1200
• Agilent 1220
• Agilent 1260
• Agilent 1290
• Waters Alliance (Agosto 0212)
• …
1290 Infinity LC pág.: 44
Tecnología de Emulación Inteligente - Como trabaja (1290 con un 1200)
Programa de gradiente
1290 gradiente
1200 gradiente
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
0
50
100
150
200
250
300
350
400
min
mAU
Inyecctión
Mismas condiciones de gradiente
pero desplazando el gradiente y
emulando el perfil del gradiente a
clonar
1290 Infinity LC pág.: 45
Agenda - Últimos Avances en UHPLC:
• Nuevas Soluciones Multidimensionales 1290 Infinity:
• Comprehensive LCxLC & Heart Cutting LC-LC.
• Nuevo UHPLC-1290 Infinity Cuaternario. • Descripción, Prestaciones,…
• “BlendAssist”: asistente de mezclas
• 1290 Infinity ISET: “El arte de la emulación en HPLC”.
• Soluciones DAD 1290 Infinity: • Mejora x10 Sensibilidad UV: “Max-Light High Sensitivity”.
• Mejora x30 Rango Dinámico: “HDR-DADTechnology”.
Guía de ondas optofluídica
12:00-12:40 36-4 m
1290 Infinity LC pág.: 46
La Solución: Fibra no recubierta (sílice fundida)
1290 Infinity Diode-Array Detector Mejora Sensibilidad x10 “versus” Detectores 1200-VWD/DAD
- Comparación celdas “Max-Light High Sensitivity vs 1200-VWD“
1200-VWD (10 mm x σ Vol.: 14 µL)
S/N: 253
Muestra: Antraceno, 835 pg/µL
Col.:: 4.6x150mm ZORBAX SB C18, 5 µm
Fase móvil: Agua/Acetonitrilo = 20/80
Flujo: 1.5ml/min
Detección 251nm, PW >0.1min,
Volumen inyección : 5µl
Temp. columna: 40°C
Celda “Max-Light High Sensitivity“ (60 mm x σ Vol.: 4 µL)
S/N: 2944
Technical Note: 5990-5326EN
mD
LFr
24
42
V2
V
Mayor Sensibilidad: hasta x10 veces. Sin aumento de la dispersión del pico
1290 Infinity LC pág.: 47
Incremento 30x del Rango Dinámico
Lineal para cuantificar en 1 sola
inyección compuestos con
muy distinta respuesta
(/concentración).
Agilent 1200 Infinity High Dynamic Range
(HDR-DAD) Solution
1260/1290 Infinity HDR-DAD
pág.: 48 1290 Infinity LC
Rango Dinámico x30 con HDR-DAD Combina 2 DAD„s con celdas Max-Light de 3.7 mm y 60 mm
60 mm path-length
3.7 mm path-length
Computing the signals from 60 mm path-length for the low concentration
3.7 mm path-length for the high concentration
Detector Signal
[AU/cm]
Conc
[µg/mL] 10 x higher
sensitivity
~3x higher upper
limit
30x lower Limit of Detection
(LOD)
pág.: 49 1290 Infinity LC
Combinaciones Dosis Fijas de varios Principios
Activos (API) con Muy Distinta Respuesta: From Roche
Switzerland
API 1
API 2
Sin la opción HDR-DAD se requerirán
2 inyecciones con distinto volumen
• Agilent 1200 (black): API 2: 10 l injected
• Agilent 1200 (red): API 1: 100 l injected
• Infinity HDR-DAD (blue): API 1 and 2
simultaneously: 70 l injected
API 2: iny. 10 l (API 1 baja resp.)
API 1: iny. 100 l (API 2 satura detector.)
3 UA
7 UA
API 1+2: iny. 70 l con HDR
1290 Infinity LC pág.: 50
3 Conclusiones- Últimos Avances en UHPLC:
1. Familia Agilent 1200 Infinity ofrece la Máxima Flexibilidad
y Facilidad de uso en Soluciones UHPLC
Multidimensional para las separaciones más difíciles.
2. Las Mejores Prestaciones y Máxima Flexibilidad con la
nueva bomba Cuaternaria Agilent 1290 Infinity.
3. Agilent DAD 1290 Infinity: la Mejor Sensibilidad del
Mercado en Detección UV (x10) y
Rango Dinámico (x30)
1290 Infinity LC pág.: 51
¿Preguntas?
pág.: 52 1290 Infinity LC
Agilent 1290 Infinity LC
Muchas
Gracias
por su
Atención
Estamos a su disposición en
tel.: 901.11.6890
[email protected] www.agilent.com/chem