LIMPIEZA, DESINFECCIÓN Y ESTERILIZACIÓN

En microbiología es fundamental:

Evitar toda contaminación por el material bacterianoestudiado, para prevenir la transmisión deenfermedades infecciosas

Evitar toda contaminación del material bacteriano aestudiar, porque imposibilitaría el estudiobacteriológico

Evitar el deterioro o la destrucción de materiales quetenemos que usar en el laboratorio: medios decultivo, dispositivos de identificación….

• La actividad de disinfectantes y esterilizantes se reduce por:

Suciedad

Presencia de un gran nº de microorganismos

Interferencias con otras sustancias

pH inadecuado

LIMPIEZA CON CARÁCTER GENERAL• Limpieza: se puede definir como la eliminación de restos orgánicos

en el material, equipos….• Este tipo de limpieza se va a aplicar a materiales de bajo riesgoREALIZACIÓN

A) Se lavará con agua jabonosa, se enjuaga con agua corriente y porúltimo con agua destilada, una vez limpios se dejan secar en losescurridores en posición invertida o se secan en estufa Pasteur auna Tª entre 70-80ºC (también en posición invertida)– Es aconsejable utilizar agua fría y no agua caliente (coagula las

proteínas y se pegan)

– Se utilizan soluciones jabonosas, aclaran con abundante agua paraevitar interferencias

– Combina la frotación con la acción química de los detergentes

LIMPIEZA CON CARÁCTER GENERAL

B) Los portas se sumergirán en depósitosapropiados con alcohol y después se lavaráncomo en el apartado A). Si quedan restos decolorantes se tratará con una mezcla deOH/HCl que contenga por cada 95 ml deetanol, 5 ml de HCl

LIMPIEZA CON CARÁCTER GENERAL

C) Las pipetas se les quitará el tapón graso y se deja durante 24h en los denominados cementerios de lejía diluida que contenga aproximadamente 5 g/l de cloro actico

Hacer el cálculo para preparar 5l de lejía que contengan 5g/l de cloro activo a partir de una lejía comercial que según etiqueta contiene 40 g/l de cloro activo

LIMPIEZA CON CARÁCTER GENERAL

D) El material metálico, una vez limpio hay queprestar especial cuidado con el secado para evitarla oxidación

E) El material con agar solidificado en primer lugarse licuará y después se eliminará (nunca por eldesagüe), se tira a la basura

ESTERILIZACIÓN

• La esterilización destruye toda forma de vida vegetativa, tanto patógena como no patógena, incluso destruye las esporas, va a destruir totalmente a los mo

• Son métodos físicos ( algunos desinfectantes químicos), se aplica a materiales de elevado riesgo: material que ha entrado en contacto con mo.

• Las técnicas de esterilización se pueden agrupar en tres apartados:

– Métodos térmicos– _Métodos no térmicos– Métodos químicos

MÉTODOS FÍSICOS TÉRMICOS

FLAMEADO INCINERACIÓN ESTERILIZACIÓN EN ESTUFA PASTEUR CALOR HÚMEDO:

Ebullición: desinfección baja. No destruye virus ni esporasVapor fluentePasteurizaciónTindalización

MÉTODOS FÍSICOS NO TÉRMICOS

NO TÉRMICOS

Filtración

Radiaciones: Rayos UV, Rayos X

Sedimentación

MÉTODOS QUÍMICOSSustancias químicas en fase líquida o gaseosa

MÉTODOS TÉRMICOS

• Se debe tener en cuenta:

– Nº de mo: a mayor nº de mo mayor intensidad de tratamiento

– Naturaleza del mo: las formas vegetativas son más sensibles que las esporas

– Tª, a mayor Tª mayor efectividad y rapidez

– Tiempo de actuación: es el resultado de sumar:

• Tiempo de penetración

• Tiempo de calefacción

• Tiempo de seguridad

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PROCEDIMIENTO

• Se introduce el material protegido sin tocar las paredes

• Se ajusta la Tª de esterilización (p.e. objetos de vidrio: 160-180ºC durante 1h-2h)

• Se espera a 70 ºC

• Se recoge con guantes aislantes

• Controlar la Tª interior

MÉTODOS TÉRMICOS

• CALOR SECOUna atmósfera de aire caliente Se realiza sobre el material limpio y seco, el

material se envuelve en papel de aluminioSe aplica a pipetas, matraces, tubo, metal y

porcelanaEs menos eficaz que el calor húmedoTª o tiempos mayores:

-140ºC 3h- 160ºC 2h y 30 min- 180ºC 1h

Hornos Pasteur

MÉTODOS TÉRMICOS

FLAMEADO:

Consiste en someter directamente a la llama el material a esterilizar

Es una esterilización por calor seco

Se aplica a asas, bocas de tubo, boca de matraces, punta de pipetas

INCINERACIÓN

Quemar y destruir el material desechables

Se practica en hospitales

MÉTODOS TÉRMICOS

ESTERILIZACIÓN POR CALOR HÚMEDO Es mucho más efectivo que el calor secoEBULLICIÓN Consiste en hervir al baño María, mata las formas

vegetativas pero no las esporas porque la Tª no supera los 100ºC

TINDALIZACIÓN Es una ebullición durante 3 días consecutivos durante

30 min cada día. Día 1 se matan formas vegetativas y las esporan que germinen, día 2 mueren las esporas y día 3 tratamiento de seguridad.

• CALOR HÚMEDO (AUTOCLAVE)

Vapor de agua sobrecalentado

Su eficacia depende del agua contenida en el interior de los gérmenes

ESTERILIZACIÓN EN AUTOCLAVE: Se realiza entres fases

1.- Esterilización preuso:

-pipetas y tubos se taparán con tapóngraso y se envuelven en grupos de 6 conpapel albal

- material de vidrio se tapará con unaalgodón y se envolverán los cuellos conpapel albal

- Los tubos de tapón de rosca se esterilizanabiertos o cada parte por separado

2.-Limpieza:Todo material que entre en un autoclave debe estar previamente lavado

3.- Esterilización post-uso:

- Material de desecho: placas Petriconteniendo medio de cultivo, pipetas Pasteur de un solo uso…., antes de desecharlos se introducirán en bolsas de autoclavar y posteriormente se autoclavan. El tiempo de autoclavado varía dependiendo del material a esterilizar, pero normalmente 1atm durante 20 min 121ºC

MÉTODOS NO TÉRMICOS

1.- FILTRACIÓN: para líquidos y gases, los moquedan retenidos en el filtro

2.- RADIACIONES Radiación UV, tiene efecto microbiostático( impide el

desarrollo de los mo)

Radiaciones X, son mucho más letales y penetrantes

Radiaciones gamma: son también muy efectivas porque son muy penetrantes

DESINFECCIÓN QUÍMICA

• Se denomina desinfectante a la sustancia química que disminuye el nº de mo pero no los elimina por completo

• La acción antimicrobiana de muchos agentes desinfectantes es poco específica, actuando sobre distintos componentes o funciones del mo, a menudo en función de su concentración

DESINFECTANTES

A) Efecto bactericida: mueren los gérmenes, se produce cuando utilizamos el desinfectante concentrado

B) Acción bacteriostática: sólo frena el desarrollo bacteriano mientras actúa el desinfectante. Desinfectantes diluídos

• Los desinfectantes más frecuentes:

Alcoholes: etanol(70%) e isopropanol (60-90%)

Aldehídos: formol, glutaraldehído

Agentes oxidantes: O3, H2O2