PARASITOLOGÍA: LABORATORIO No1

MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO EN PARASITOLOGÍA CLÍNICA

INTRODUCCIÓN: Frecuentemente la mención de la parasitología médica, conjura una visión de infecciones exóticas en áreas tropicales, aunque algunas de las infecciones están limitadas en determinados lugares, otras ocurren con frecuencia en climas calientes y/o fríos. El examen del laboratorio constituye una parte de los procedimientos de diagnóstico, unas veces para confirmar el diagnóstico clínico de presunción y otras veces para el diagnóstico de nuevos e insospechados agentes etiológicos causantes de enfermedades. De acuerdo a la localización de los parásitos en los diferentes órganos y tejidos del huésped, existe una muestra adecuada para el diagnóstico de cada una de las parasitosis.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS: 1. Identificar la muestra indicada y el método diagnóstico según la localización del parásito en el huésped. 2. Observar e identificar los diversos estadíos morfológicos de los parásitos, además de los elementos formes de origen vegetal y animal que se pueden encontrar en las materias fecales.

GENERALIDADES:

LOCALIZACIÓN DE LOS

PARÁSITOS MUESTRA INDICADA

Intestinales Heces, aspirado duodenal, material de región perianal

Hemáticos Sangre

Aparato Genitourinario Flujo vaginal, secreción uretral, orina

Tisulares Biopsia y/o sangre

Pulmonares Esputo y/o biopsia

En nuestro medio las parasitosis más frecuentes están localizadas en el intestino, por lo que la muestra es materia fecal y el método diagnóstico para el análisis de la materia fecal, se denomina coprológico.

1. COPROLOGICO: Es el análisis de la materia fecal con fines diagnósticos. Aunque, para el paciente como para el personal de salud, recolectar y examinar la materia fecal suele ser algo desagradable, hay que superar esta aversión natural y valorar la importancia que tiene este análisis en el diagnóstico no solo de infecciones sino también de enfermedades. Recolección de la muestra: La obtención de la materia fecal debe hacerse en un recipiente limpio y seco que no debe estar contaminado con orina o agua. Debe enviarse al laboratorio inmediatamente y examinarse lo más pronto posible sobre todo en aquellos casos donde se sospecha amebiasis (los trofozoitos mueren rápidamente y son sensibles a la refrigeración). Las muestras mantenidas por más de 24 horas a temperatura ambiente son inadecuadas.

El uso de laxantes solo esta indicado en casos de estreñimiento (no usar aceitosos). El examen de materia fecal comprende examen macroscópico y examen microscópico.

A. Examen Macroscópico o Caracteres Organolépticos:

Cantidad: Diaria entre 100-200 gr/día, la séptima parte del total de alimentos ingeridos.

Color: Normalmente pardo oscuro o claro, dependiendo principalmente de la estercobilina, en los niños amarrillo claro debido a su régimen lácteo. Entre las enfermedades que alteran el color se encuentran las heces (acolicas) o de color arcilla en Hepatitis y TBC intestinal y las heces hemorrágicas de un aspecto negruzco y viscosos (Melenas).

Olor: Es producido por la presencia de sustancias aromáticas (Indol, Escatol) derivadas de la desaminación y descarboxilación del triptofano.

Consistencia: Normalmente las heces son blandas, contienen entre un 60% a un 85% de agua; patológicamente son líquidas o duras, dependiendo de alguna enfermedad o de la dieta.

pH: Normalmente es neutro (6.9-7.2), depende del régimen alimenticio. Ácido en dieta rica en carbohidratos, alcalino en dieta rica en proteínas.

Moco: Se encuentra generalmente en pequeñas cantidades. Por lo general indica inflamación o irritación del intestino.

B. Examen Microscópico: Es el denominado examen directo y consiste en observar al microscopio la materia fecal con solución salina para observar trofozoitos (formas móviles) y con lugol para colorear estructuras internas (núcleos). En el examen directo se puede observar lo siguiente:

Leucocitos: Se encuentran asociados a moco en enfermedades intestinales. Cuando son más de 20 por campo y predominan los PMNN indican diarrea invasiva. La coloración con azul de metileno ayuda en la diferenciación de polimorfos nucleares y mononucleares.

Eritrocitos: Se observan cuando hay hemorragias del colon, hemorroides y fisuras sangrantes, también están presentes en diarreas invasivas.

Restos alimenticios de origen vegetal: Los almidones son frecuentes, son fáciles de identificar en las preparaciones con lugol debido a que toman un color azul cuando están sin digerir y rojos o morados cuando están parcialmente digeridos. Las células y fibras vegetales forman retículos en forma de panal o espirales y aunque muchas veces no tienen importancia pueden aparecer en síndromes de malabsorción o asociarse a diarreas.

Restos alimenticios de origen animal: Son principalmente grasas y fibras musculares, las fibras musculares son rectangulares con estrías transversales y las gotas de grasa tiene diferente tamaño y pueden ser transparente o amarrillas.

Microbióta bacteriana: Siempre esta presente de manera normal.

Levaduras: Pueden observarse en condiciones normales, pero se aumentan notoriamente cuando existe desequilibrio de la microbiota bacteriana. Solo cuando las blastoconidias están asociadas a pseudomicelio, se deben reportar.

Cristales: Son de morfología diferente. Es muy poca su significancía clínica. Los fosfatos triples tienen forma de ataúd, los oxalato de calcio se parecen a un sobre de carta, los de colesterina se parecen a una escalera y los de charcot-leyden tiene forma de agujas miden de 10 a 30 micras, se originan de productos de desintegración de los eosinófilos y se asocian a procesos alérgicos de variado origen y a parasitosis como helmintiasis e isosporosis.

Cómo se informa el examen coprológico?: Se informa por cruces con el objetivo de 40X:

1-15 (Quistes/Trofozoitos) por campo +

16-25 (Quistes/Trofozoitos)por campo ++

26-35 (Quistes/Trofozoitos)por campo +++

más de 36 (Quistes/Trofozoitos)por campo ++++

ANÁLISIS ADICIONALES EN MUESTRAS DE MATERIA FECAL:

COPROGRAMA O COPROSCOPICO: Es un estudio más completo de la materia fecal, que incluye, además del estudio microscópico, ya descrito, análisis bioquímicos.

MÉTODOS DE CONCENTRACIÓN: Su finalidad es aumentar la posibilidad de observación de parásitos en una cantidad definida, mediante los procedimientos de sedimentación y flotación.

CULTIVOS: El empleo de éste método está limitado al campo de la investigación.

COLORACIONES ESPECIALES: Son tinciones permanentes, que se usan especialmente para protozoarios, ya que en preparaciones directas a veces es difícil hacer identificación de las especies, por lo tanto es necesario confirmar recurriendo a coloraciones. Las más usuales son hematoxilina férrica y tricromico. Se deben hacer con materia fecal fresca y que no haya sido preservadas en formol, este impide que la parte cromatínica retenga bien el colorante.

RECUENTO DE HUEVOS: Este método es útil para tener un dato aproximado de la intensidad de la infección de algunos helmintos, se usan principalmente en algunas helmintiasis. Consiste en hacer un recuento de la cantidad de huevos encontrados en toda la placa; y se reporta el número de huevos por gramo de materias fecales (h.p.g.); este recuento también arroja información acerca del posible número de parásitos adultos que se encuentran en el intestino.

2. EXAMEN SANGUÍNEO Y DE TEJIDOS INFECTADOS: (parásitos sanguíneos y tisulares) Luego de las heces, la sangre es la segunda muestra importante donde se recuperan parásitos en sus diversos estadíos de desarrollo o donde se pueden detectar anticuerpos en suero o plasma. Se usa de rutina para diagnóstico de Malaria, Leishmaniasis, Tripanosomiasis, Filariasis, Toxoplasmosis entre otras parasitosis titulares. Con el desarrollo científico crecen las posibilidades de diagnosticar enfermedades infecciosas y a partir de tejidos o sangre se pueden detectar agentes infecciosos realizando extracción de su ADN y posteriormente, por medio de la PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) amplificar genes específicos del parasito.

Métodos diagnósticos de rutina en muestras de sangre:

Extendido: En un portaobjetos limpio, se coloca una gota de sangre y con otro portaobjeto se extiende de modo que quede una capa delgada y pareja, se deja secar al ambiente.

Gota gruesa: Se coloca una gota algo más grande en un portaobjeto y con la ayuda de otro portaobjetos se extiende uniformemente en un rectángulo de 1 cm. Se deja secar al ambiente, el objetivo en esta preparación es lisar los eritrocitos.

Los colorantes usados pueden ser: Giemsa, Wright, Hematoxilina, Leishman.

Métodos diagnósticos de rutina en tejidos infectados: Se toman biopsias que han sido fijadas en formol y se someten a cortes para posterior tinción con hematoxilina-eosina.

3. PROCEDIMIENTO CON OTROS TIPOS DE MUESTRAS:

Frotis vaginales y secreciones uretrales: Se utiliza para buscar Trichomonas vaginalis. En mujeres se toma la muestra usando especulo estéril. Evitar todo lavado vaginal o

10X Examen general

Recuento de huevos

1. Obtener muestra

2. Averiguar consistencia

Sln salina Lugol

40X mayor detalle Protozoarios

3. Criterios esenciales * Examinar toda la preparación * Hacer recuento de huevos

Leve Moderado Severo Asacaris 1-40 41-200 201+ Tricocefalos 1-10 11-50 51+ Uncinarias 1-10 11-50 51+

uretral previo a la toma de muestra, se monta en un portaobjetos con solución salina para su observación

Orina: La orina se centrifuga y se observa el sedimento. Se puede observar T. vaginalis, huevos de Schistosoma haematobium.

Esputo: Se recoge el esputo y se observa directamente o se hacen los métodos de concentración usados en heces.

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA # 1

1. DEMOSTRACIÓN: Observe el procedimiento para el montaje de un examen coprológico.

2. MATERIAS FECALES: Observe las características organolépticas de la muestra de materia fecal que trajo al laboratorio.

3. EJERCICIO:

De acuerdo a sus observaciones en el laboratorio, haga los dibujos correspondientes a lo que enseguida se enumera, mantenga la proporción de tamaños entre los dibujos observados:

Fibras vegetales Fibras musculares Grasas

Cristales Almidones Levaduras

Leucocitos Eritrocitos Parásitos

PRACTICA # 1: MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO EN PARASITOLOGÍA CLÍNICA

4. TALLER:

a. ¿Qué es un examen coprológico seriado y porqué se ordena? __________________________________________________________________________________________________________________________________________________

b. ¿Describa brevemente en qué consiste un coprograma y para qué se ordena? __________________________________________________________________________________________________________________________________________________

c. ¿Cómo se investiga la presencia de sangre oculta en un examen de materia fecal y con qué fin clínico se realiza el examen?

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d. ¿Cuál es el método para recuento de huevos en materia fecal recomendado por la OMS?

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e. ¿Cuál es la mejor hora del día para la recolección de una muestra de materia fecal? _________________________________________________________________________

f. ¿Diga cinco características químicas que se puedan medir en un examen coprológico? _________________________________________________________________________

g. ¿Qué sustancias se utilizan para preservar las materias fecales? _________________________________________________________________________

h. Llene los ítems del siguiente cuadro con los valores normales para un examen coprológico:

Examen macroscópico Valor normal

Cantidad

Color

Olor

Consistencia

Sangre macroscópica

Moco

Pus

Parásitos

Examen microscópico Valor normal

Grasa

Almidon

Huevos y segmentos de parásitos

Levaduras

Leucocitos

Examen químico Valor normal

pH

Sangre oculta