ISO 14698 Presentacion

7/23/2019 ISO 14698 Presentacion

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INTERNATIONAL STANDARDISO 14698-1

Cuartos limpios y ambientescontrolados asociados

Control de la Biocontamination

Parte 1: Principios Generales y Mtodos

Ing. Evelyn Artavia

2015


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La norma busca promover prcticas dehigiene apropiadas

Los mtodos de control debiocontaminacin o higienepara hacer productos seguros yestables.

Factores: diseo,especificacin, operacin y

control de cuartos y ambientescontrolados asociados.

Procedimientos estndar deensayos =Adaptacin

Alcance

Especifica los mtodosrequeridos para monitorearconsistentemente zonas deriesgo y aplicar controlesapropiados al grado de riesgo.

En zonas de riesgo bajo sepuede utilizar como fuente deinformacin.


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3. Trminos y definiciones

Sistema FormalSistema de control debiocontaminacin conprocedimientos establecidos ydocumentados

Biocontaminacin

Contaminacin de materiales,dispositivos, individuos,superficies, lquidos, gases oaire con partculas viables.

Cuarto limpio Cuarto donde laconcentracin de partculasareas estn controladas y suconstruccin minimiza laintroduccin, generacin yretencin de partculas dentro

del cuarto, adems los otrosparmetros relevantes comotemperatura, humedad ypresin estn controlados


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Trminos 2

Partculas viablesPartculas que son o soportan uno oms microorganismo vivos.

Unidad

viable (

VU)

Unas o ms partculas que secuentan como una sola unidad (unaCFU puede consistir en una o msVU).

Bioaerosol

Agentes biolgicos dispersados en unambiente gaseoso.

Ambiente

controlado

Zona definida donde las fuentes decontaminacin son controladas conmedios especficos.

Punto

de control (control

point

)

Lugar en un ambiente controlado dondese realiza control y un riesgo se puedeprevenir, eliminar o reducir a niveles

aceptables.

Zona de riego (

risk

zone

)

Espacio definido y delimitado donde losindividuos, productos o materiales sonparticularmente vulnerables acontaminacin.


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Trminos 3

Dispositivo de contacto (contactdevice)

Soporte especialmente diseado queposee un medio de cultivo estril yuna superficie accesible utilizado pararealizar muestreo de superficie.

Placa de contacto (contact plate)

Dispositivo de contacto donde el

contenedor es un disco rgido Plato fijo (settle plate)

Contenedor de tamao apropiado quecontiene medio de cultivo estril quese abre por un periodo definido paracolectar partculas viables del aire.

Muestreador de impacto (impact

sampler)

Dispositivo diseado para muestrearpartculas en el aire u otro gas pormedio de colisiones en una superficieslida.

Muestreador de inyeccin(impingement sampler)

Dispositivo diseado para muestrearpartculas en el aire u otro gas porcolisin con una superficie lquida y susubsecuente entrada en el lquido.


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Placa de contacto Dispositivo de contacto Placa fija

Muestreador de impactoMuestreador de choque

(lq.)


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Trminos 4

Nivel de accin (action level)

Nivel establecido por el usuarioque cuando se excede requiere laintervencin inmediata, incluyeinvestigacin de la causa y unaaccin correctiva.

Nivel meta (target level)Nivel definido asignado por elusuario como meta enoperaciones rutinarias, para usopropio.

Nivel de alerta (alert level)

Nivel establecido por el usuariopara brindar una prevencintemprana de una fluctuacin delas condiciones normales quecuando exceden requieren unamayor atencin al proceso.


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Trminos 5

Validacin

Confirmacin, medianteevidencia objetiva, que se hanllenado los requerimientos para

un uso especfico o aplicacin.

Verificacin

Confirmacin, con evidenciaobjetiva, que se han llenado losrequerimientos especficos.

Nota: Se pueden utilizar

mtodos de monitoreo yauditaje, procedimientos yensayos, incluyendo muestreoal azar y anlisis.


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Occupancy states

Instalacin completacon todos los serv.conectados yfuncionando, pero sinequipo de produccin,

materiales o personalpresentes

As-built

Instalacin completacon equipo instaladoy operando, pero nocon personalpresente

At-rest La instalacin

funciona de maneraespecfica, con unnmero especfico depersonal presente

Operacional


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4. Principios de la biocontaminacin

Un Sistema Formal de Controlde biocontaminacin puedeestablecerse, implementarse, ymantenerse con cuartos limpiosy ambientes asociados.

Asegura y controla factores que

pueden afectar la calidadmicrobiolgica de los procesosy producto.

HACCP, FTA, FMEA

Riesgopotencial

DocumentacinZonas de

riesgo

Lmitesde

controlcapacitacin

Monitoreoy horario

VerificacinAcciones

correctivas


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5. Establecimiento del Sistema Formal

5.1 Requerimientos Generales Desarrollar, iniciar, implementar y documentar un Sistema Formal

para control de biocontaminacin=deteccin de cond. adversas atiempo.

Incluir un programa de capacitacin apropiado.

Programa de monitoreo diseado e implementado minimizando la

posibilidad de que el muestreo contribuya a la contaminacin delproducto, zona de riesgo o ambas.

Clasificar las Zonas de riesgo segn lineamientos, regulaciones y Sist.Formal escogido. Acorde a nivel de biocontaminacin area osuperficial= riesgo bajo, medio, alto o muy alto.


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5.2 Niveles de alerta, accin y meta

Apropiados al campo de aplicacin, clasificacin de zonas de riesgo ytecnologa.

Los niveles meta microbiolgicos pueden ser usados como unaalternativa de alerta microbiolgica y niveles de accin en algunoscampos especficos.

Revisar datos de niveles de biocontaminacin para establecer o

confirmar la lnea base para determinar los niveles de alerta y accin. Los niveles de alerta y accin se pueden relacionar a los niveles meta

en cada aplicacin especfica. Deben ser revisados y ajustados


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5.3 Monitoreo de biocontaminacin

Plan de muestreo: mtodos de muestreo y conteo de unidad deviables. Anexos A,C, D y F.

Usos: lnea base en as-built, monitoreo de zonas de riesgo en as-built y at-rest, y monitoreo rutinario es estado operacional.


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Muestreo

Procedimientoescrito

Mtodoseleccionado

Dispositivo


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Dispositivo de muestreo

Tipo de partculasviables

Sensibilidad delprocedimiento

Concentracinesperada

Flora microbiananativa

Accesibilidad a laszonas de riesgo

Habilidad para

detectar bajosniveles debiocontaminacin

Condicionesambientales en la

zona de riesgo

Tiempo y duracindel muestreo

Mtodo demuestreo, materialy propiedades del

medio

Efecto deldispositivo demuestreo en el

proceso o ambiente

Precisin y

eficiencia de lacolecta

Incubacin ydeteccin de part.

viables y mtodo deevaluacin

Tipo de informacin(cuantitativa,cualitativa)

Eficiencia de fluidos

deextraccin/lavado


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Plan de muestreo

Desarrolladopor el Sist.Formal

Documentado

Durante elestadooperacional Periodos de mayor

estrs At-rest (diseo y

comportamiento)

a. Plan de muestreoinicial= punto dereferencia o lnea

base

b. Plan de muestreorutinario= resultadode implementacindel Sistema Formal


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Diseo de Plan de muestreo

Lugar de muestreoy funcin de z.

riesgo

Nmero de

muestrasFrecuencia

Mtodos demuestreo

Volumen o reaque se cubrir

Disolventes, fluidosde lavado,

neutralizantes

Factoresparticulares que

afecten resultadosdel cultivo

Impacto deoperaciones,

personal y equipo


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Frecuencia del muestreosegn Sist. Formal y se modifica cuando:

Incidentes no planeados que podran contribuir a la biocontaminacin

Cambios en los procedimientos de limpieza o desinfeccin

Reporte de resultados inusuales

Cambios al proceso que afecte el ambiente del cuarto limpio

Trabajo de mantenimiento significativo en el sistema de ventilacin

Deteccin de agentes infecciosos en zonas de riesgo

Prolongado paro de actividades

Niveles de alerta o accin se excedan consecutivamente


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Muestreo

Sitios de muestreo

Sistema Formal y Plan demuestreo.

Ms de una muestra de cadalugar y diferentes nmeros demuestras en diferentes lugares.

Puntos de controlmicrobiolgico definidos enprocedimientos escritos.

Identificacin de muestras

Etiqueta ocdigo

Sitio

colecta

Desviacin

Mediode

cultivo

Actividad

Persona

Fechay hora


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5.4 Procesamiento de muestras

La colecta, transporte yprocesamiento de muestras noafectar la viabilidad y nmerode organismos colectados

Las muestras se colectarn encontenedores y de forma queno agreguen o inhiban la

biocontaminacin.

Factores

Condiciones y duracin detransporte/almacenaje

Uso de agentes

neutralizantes

Uso de solutos osmticos


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5.5 Cultivo de muestras

M.O.esperados

MedioCultivo

Condiciones

Incubacin

Ambiente

Proceso

Equipo


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Medio de Cultivo

No selectivo. Aditivos solo para minimizar

actividad microbiana residual.

La superficie externa o susrecipientes se mantendrn conel nivel de limpieza apropiado a

su uso. Pueden requerir doble o triple

cubierta y proc. control decalidad.

Incubacin

Temperatura Tiempo:

2-5 das Bacterias

5-7 das Hongos

Condiciones atmosfricas y

tiempos de incubacinespecficos para m.o. inters(anaerobios, termfilos)

Observacin en intervalos


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5.6 Evaluacin de los datos del muestreo

5.6.1 General

La evaluacin de los datos de biocontaminacin proveersuficiente informacin para acciones correctivas efectivas.

Ms informacin en ISO 14698-2.

NOTA: El monitoreo de contaminacin microbiana puede ser

realizada por medicin de indicadores indirectos, ej. Medicinde ATP.


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5.6.2 Conteos

Mtodos validados: Instrumentos y procedimientos pueden influenciarlos conteos.

NOTA 1: Informacin del conteo de partculas viables se da en otrasfuentes.

NOTA 2: Esta parte de la ISO 14698 no involucra o acepta ningunaconstante directa o relacin causal entre las concentraciones de

partculas viables y no viables. Niveles de control para esosparmetros pueden establecerse separadamente segn se requiera.


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5.6.3 Caracterizacin

El monitoreo microbiolgico no identifica ni cuantifica todas laespecies de microorganismos encontradas en ambientes controlados.

NOTA

Criticidad del rea / Futura investigacin

Categoras amplias (morfologa celular, propiedades de tincin yotras).

Identificacin, a nivel de gnero, con mtodos de laboratorio

establecidos. Evaluacin de limpieza, desinfeccin, fuente de contaminacin o

accin correctiva.

Aislamientos de reas crticas =antecedentes en reas no crticas.


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6. Expresin, interpretacin y reportede resultados

Expresin

Unidades viables (VU) ounidades formadoras decolonias (CFU) enunidades SI

ISO 14698-2

Interpretacin

Tendencias segn periodosextensos

Resultados inusuales, y laaceptabilidad de las

operaciones o productosprocesados, segnrevisin deinvestigaciones yresultados especficos


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Reporte de resultados

Tipo de muestraMtodo yestndar

Dispositivo decolecta

Sitio demuestreo

Actividad yestado

N personas enel rea

Fecha y horaDuracinmuestreo

Tiempo deexaminacin de

muestras

Condiciones yduracin

incubacin

Variaciones demtodo u otros

fact.

Resultados despde lectura inicial

y final

Unidades SI enensayos

cuantitativas

Descripcin deaislamientos

(caracterizacin)

Nombre deresponsable dereporte y fecha


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7. Verificacin del Sistema Formal

Los resultados de monitoreo de biocontaminacin se examinarnperidicamente en orden para confirmar que el sistema escogido

funciona de acuerdo con los procedimientos establecidos y losrequerimientos especficos se han completado.

NOTA

Se requiere el uso de mtodos de monitoreo y auditaje,procedimientos y ensayos, incluyendo muestreo al azar y anlisis.

Podra requerirse tambin un sistema de verificacin de todos lospasos de trabajo y equipo.

Desviaciones de los lmites establecidos o cambios en la condicinmicrobiolgica del ambiente controlado=accin correctiva.

Si aplica, el Sistema Formal se modificar.


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8. Capacitacin

Anexo G


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9. Documentacin

Descripcin delSistema Formal Reporte de aseguramiento de

riesgo

Plan de Muestreo Niveles de accin,alerta y meta

Procedimientos de ensayo ymuestreo

Reportes de ensayo,verificacin y capacitacin


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Anexo A

Gua en la determinacin de biocontaminacin del air


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Mtodo de colecta y

dispositivos de muestreoapropiados, segn Plan demuestreo.

En zonas de riesgo duranteestados as-built y at-rest, siaplica, y rutinariamente bajooperacin normal.

Seleccin de mtodo ydispositivo, segn finalidadde la muestra

MuestreoPasivo

Placas Petri

MuestreoActivo

Impacto,choque ofiltracin


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Seleccin de dispositivos de muestreo

No dispositivos de choque para muestreo areo =poco volumen,cantidad, y su tendencia a romper agregados.

No contaminar el ambiente que se muestrea o se reaspira

1. Tamao y tipo de las partculas viables.

2. Sensibilidad de part. viables al proc.

3. Concentracin esperada.

4. Habilidad para detectar altos o bajos niveles de biocontaminacin

5. Medio de cultivo

6. Hora y duracin del muestreo

7. Condiciones ambientales

8. Alteracin del flujo de aire unidireccional


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Propiedades del dispositivo de muestreo

1. Succin apropiada al flujo en niveles bajos de partculas viables enel aire.

2. Velocidad apropiada de impacto/flujo de aire

3. Colecta precisa y eficiente

4. Facilidad de manejo y operacin (bombas de vaco, agua,electricidad)

5. Facilidad de limpieza y desinfeccin o esterilizacin

6. Posible adicin intrnseca de partculas viables a la biocontaminacin


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Muestreo Pasivo (Sedimentacin)

Mide partculas viables que seposan en las superficies

Uso: evaluacin cualitativa ocuantitativa de lacontaminacin del aire

Conteo de placa por tiempo:

relacin entre el rea y eltiempo de exposicin.


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Muestreo activo (1)Niveles bajos (Biocontaminacin normal)

Impacto y choque

Velocidad de impacto:

1. alta, atrapar part. viables 1 m

2. baja, sin dao mecnico o ruptura de agregados.

3. apropiada al medio de cultivo

Volumen de muestra: grande, detectar nivelesmuy bajos de contaminacin y pequea paraevitar la degradacin fsica o qumica del mediode colecta.

Tasa de flujo: 1 m3 en un tiempo razonable, sinsecar medio.


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Muestreo activo (2)Niveles bajos (Biocontaminacin normal)

Filtracin Condiciones de filtracin no afecten viabilidad

(ej. deshidratacin).

Eliminar electricidad esttica que interfiera contasa de impacto.

Mismo flujo de succin y velocidad de impacto

del aire que en m. de impacto.

Contar con dispositivo que mida la tasa desuccin.

Colocar y remover membranas de los filtros demanera asptica.


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ANEXO B

Gua de validacin de muestreadores de aire


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Colecta eficiente

EficienciaFsica* Eficiencia

Biolgica


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Mtodo experimental (1)

Ensayo en una cmara

Aerosol en un cuarto de 1mx1m, flujo de aire

no unidireccional, filtro HEPA Suplir y extraer suficiente aire para presin

negativa y recircular con ventilador Mtodo de muestreo de aire filtrado HEPA

Ensayo de cepa de m.o.

Cepas para probar la eficiencia fsica:Bacillus subtilis var. niger , esferas depoliestireno u otros. Ms fcil identificar m.o.

Cepas para ensayos de eficiencia biolgica:bacterias tpicas en el aire del cuarto, ej.Staphylococcus epidermidis. Menos eficienteque ensayo de eficiencia fsica


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Mtodo experimental (2)

Generacin de partculas que transportanm.o.

Disco generador de aerosol de disco giratorio +suspensin de m.o.= aerosol tamao controladode partcula.

Ecuaciones que determinan el tamao departculas hmedas y slidas

Ensayos

Dentro de cmara o rea adjunta turbulenciasimilar a cuarto limpio. El muestreador y el soporte de filtro de

membrana (0,45 m) se colocan a 1m delgenerador de aerosol .Contador de part.*

Tiempo de muestreo: unos pocos minutos.Incubacin: 2 das a 37C

Cinco soluciones con dif tamao de partcula (d=0,8 m a 15 m).


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Resultados

Usar campos del muestreador de prueba y el muestreador de filtro de

membrana del mismo volumen de aire para calcular la eficiencia.

Graficar tamao de partcula por eficiencia, para utilizar datos paradesviaciones estndar y eficiencias.


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ANEXO C

Gua sobre la determinacin de biocontaminacin desuperficies


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Principio

Conteo de microorganismo1. Un dispositivo con un medio slido de rea conocida se pone en

contacto con una superficie= imagen espejo de las unidades viables.

2. Un hisopo se usa para muestrear un rea

Conteo de la tasa de deposicin de m.o en una superfcie

Una superficie con nutriente se expone un periodo conocido a ladeposicin de m.o. y se incuba


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Dispositivos de muestreo

Dispositivo decontacto 20 cm2

Hisopos

Placas desedimentacin

d l d


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Expresin de resultados

El nmero de partculas viables en las superficies debeexpresarse: unidades viables / 1 dm2

O en el caso de placas: 1 dm2 /hora

1 dm2 =100 cm2


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ANEXO D

Gua sobre la determinacin biocontaminacin detextiles

F t l i d t til


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Factores para seleccin de textiles

Tipo y forma TelaGeneracin de

partculas ydispersin

Efecto barrerainsuficiente por

filtracin

Limpieza,descontaminacin oesterilizacin

Eficiencia enremocin departculas

Diseo de laprenda

Permeabilidad

C d bi t i i i


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Causas de biocontaminacin excesiva entextiles

Pobre retencin departculas

Uso incorrectoDescontaminacin

insuficiente

Ciclos de lavadoinapropiado

Recontaminacindespus del lavado

M t d t i i


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Muestreo de contaminacin

Segn Plan de muestreo Se utilizan dispositivos de contacto

Expresin de resultados:

unidades de partculas viables por 1 dm2 de muestra de tela


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ANEXO E

Gua sobre la validacin de los procesos de lavado

Mtodo de ensayo


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Mtodo de ensayo

1. Suspensin de microorganismos conocidos se prepara en una solucinde protena.

2. Un volumen conocido de la suspensin se aplica a las piezas deensayo.

3. Las piezas de ensayo se someten al proceso de lavado, carga normalsimulada. Se utilizan slo una vez. Tamao 10x5 cm, reacontaminada de 5x5 cm, extremos para adjuntarlas.

4. Conteo de m.o. piezas de prueba despus del proceso de lavado

5. La reduccin de la poblacin de m.o. se mide y se compara con losvalores.

6. Prendas utilizadas en la carga normal simulada deben esterilizarseantes reuso o se destruyen

Controles


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Controles

A

Conteo de unidades viables de suspensin inicial m.o.

B

Conteo de unidades viables sobre piezas de control sometidasal mismo procedimiento con la excepcin del proceso delavado

C

Conteo de unidades viables sobre piezas de control sometidasal mismo procedimiento y proceso de lavado, pero secontaminan con la suspensin de m.o. despus del proceso delavado

Microorganismos


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Microorganismos

Bacterias

Enterococcushirae ATCC 10541

Escherichia coliATCC 10536

Inculo 108clulas/mL

Hongos

SaccharomycescerevisiaeATCC 9084

Aspergillus niger

ATCC 16404 Inculo 107

clulas/mL

Esporasbacterianas

Bacillus subtilisvar. NigerATCC 6633

Inculo 107

clulas/mL

Suspensiones microbianas


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Suspensiones microbianas

Medio desuspensin

Solucin deprotenas

Medio derecuperacin

Procedimiento


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Procedimiento

Mezclar y dejar en contacto durante 5 min a temperatura ambiente 3ml de la suspensin de microorganismos y 2 ml de la solucin deprotena C.

Aplicar 0,5 ml de la suspensin resultante a la pieza de ensayo, porcada microorganismo probado, se contaminan tres piezas de ensayo.

Despus del proceso de lavado, las piezas de control se llevan al

laboratorio lo antes posible. Se realiza diluciones, filtraciones e incubacin y finalmente el conteo

de VU

Interpretacin de resultados


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Interpretacin de resultados

Calcular la relacin entre el nmero N de microorganismos aplicado alas piezas de control.

Comprobar la reduccin por un factor de al menos 105 de la cantidadde bacterias y de 104 el nmero de levaduras y esporas de hongos.


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ANEXO F

Gua para la determinacin de contaminantes en lquidos

Procedimiento


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Procedimiento

La seleccin del mtodo : naturaleza del lquido y el volumen demuestra requerido.

Ej. placa de vertido, placa de extensin, filtracin por membrana uotro.

Presin del lquido reducida para muestrear .

Segn nivel de biocontaminacin, la muestra se analiza directamente

o se realiza un tratamiento apropiado. Resultados: N VU / 1 mL (1 cm3)


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ANEXO G

Gua de capacitacin del personal

Elementos para programas de


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Elementos para programas decapacitacin estandarizados

Documentos deFormacin

Manual de Formacin

Procedimientos decontrol de

microbiolgico ybiocontaminacin

Verificacin de la capacitacin


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Verificacin de la capacitacin

Herramientasde evaluacin

Documentacin


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GRACIAS

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