RECUENTO DE PROBIÓTICOS EN PRODUCTOS LÁCTEOS

RESUMEN:

 El   yogurt   es   un   alimento   funcional   al   contener   cierta   clase   de   probióticos,   que   son microorganismos vivos que, cuando se consumen pueden mejorar el equilibrio microbiano de   la   flora   bacteriana   intestinal.   Entre   los   probióticos   importantes   se   encuentran los Bifidobacterium Bb-12 y Lactobacillus acidophilus (lactobacillus bulgaricus y streptococcus thermophilus).  Para  la   identificción de estos probióticos se realizó 6 diluciones  las cuales fueron sembradas en agar  MRS,  medio selectivo para microorganismos  lácticos,   luego se añadió   clorhidrato  de   clindamicina  para  el   recuento  de   lactobacillus,   Posteriormente   las siembras   se   incubaron   en   anaerobiosis   a   35°c/   24h.   Pasado   las   24h   se   procedió   a   la identificación de colonias mediante el aislamiento de cepas, las cuales se tiñó con coloración de gram

Palabras claves: Probióticos,   Bifidobacterium,   lactobacillus   acidophilus,   bulgaricus, thermophilus, clindamicina

INTRODUCCIÓN:OBJETIVOS:

El yogur es un producto lácteo obtenido mediante la fermentación bacteriana de la leche.

Si bien se puede emplear cualquier tipo de leche, la producción actual usa predominantemente leche de vaca.. A menudo, se le añade fruta,vainilla, chocolate y otros saborizantes, pero también puede elaborarse sin añadirlos; en algunos países se conoce al de sabor natural. El yogurt es un alimento suave, viscoso de sabor propio, con una única estructura proteica

o gel débil características que son desarrolladas durante la fermentación de la leche por bacterias ácido lácticas. Este producto lácteo se conoce de muchas maneras . No se sabe con exactitud el origen de de este producto, pero existe la creencia mundial acerca de sus efectos beneficiosos en la salud y nutrición humana. (Tamime y Robinson, 1991)

Las cualidades nutrimentales del yogurt no solo vienen de la leche, sino también de la transformación de estos como resultado de la actividad metabólica causada por la fermentación de los

microorganismos. Cultivos como Strptococcus thermophilus y Lactobacillus bulgaricus, que son microorganismos no mucogénicos se emplean en proporciones iguales, y tien temperaturas óptimas entre 38-44°c y entre 41-42°c, repectivamente (Valderrama J. 2001)

Próbiotico   es   un   término   de   reciente utilizado   que   se   aplica   a   productos obtenidos   por   fermentación   con microorganismos benéficos para  la salud.(Hernández   A.   2005).   Las   bacterias   que contienen   los   yogurts   con   Probióticos recargan   la   barrera   de   protección   que tiene   el   intestino   para   evitar   el   paso sustancias extrañas hacia  la sangre).  Esta barrera conformada por bacterias que son inucuas para los seres humanos), también favorecen  la  digestión y  los  movimientos gástricos naturales.

Agar MRS se utiliza para el crecimiento y recuento de los cultivos de Lactobacillus 

en los productos lácteos y otros productos alimenticios. La peptona y glucosa constituyen la fuente de nitrógeno, carbono y de otros elementos necesarios para el crecimiento bacteriano. El monoleato de sorbitán, magnesio, manganeso y acetato, aportan cofactores y pueden inhibir el desarrollo de algunos microorganismos. El citrato de amonio actúa como agente inhibitorio del crecimiento de bacterias Gram negativas. El medio puede ser usado para cultivar lentamente cultivo de lactobacilos tales como los microorganismos ya mencionados.  Este agar debe utilizarse a un pH de 5,7 (Pascual M)El objetivo de esta práctica es Enumerar bifidobacterias y lactobacilos en productos lácteos fermentado e  Identificar la morfología de  las bacterias probióticos por medio de la tinción de gram, para finalmente  interpretar los resultados

MATERIALES Y MÉTODOS:

Siembra MRS:

Tomando   todas   las  medidas   de   asepsia   necesarias   se   tomaron   10  ml   de  muestra   y   se prepararon seis diluciones (10-1 a 10-6) utilizando agua buferada estéril como diluyente. Para la siembra se utilizaron las tres últimas diluciones (10-1, 10-2y10-3) y se sembró por duplicado, para esto se colocó 1ml de cada dilución en las cajas utilizando diferentes pipetas para evitar contaminación. Posteriormente se añadió el agar templado a 45°C en las 7 cajas incluido el blanco que no contiene muestra. Una vez solidificado se adicionó 0.75 ml de clorhidrato de clindamicina  para  el   recuento  de   Lactobacillus.   Finalmente   se   coloca   las   cajas  de   forma invertida en la jarra de anaerobiosis e incubar a 31°C por 3 días  

Identificación y Tinción de Gram

Primeramente se realiza un aislamiento de cepas, observando y seleccionando la caja donde tenga las colonias más separadas. Con el asa previamente esterilizada se toma una colonia y 

se la fija en un porta objetos obteniendo una capa fina para una mejor observación.  Una vez seca y fijada la preparación, se procede a su tinción y posterior observación

RESULTADOS Y DISCUSIÓN:

Después de los días requeridos de incubación se observó el crecimiento de microorganismo, para el contaje de bacterias lácticas en cajas Petri se identificaron escasas colonias pequeñas redondas y cremosas, Al presentar esta morfología se puede decir que se trata de colonias lactobacillus. En la observación al microscopio se observó que eran bacilos gram positivos por lo cual,  pertenece al  grupo de los  Lactobacillus, L. vulgaricus. El género Lactobacillus está formado por bacterias Gram positivas de forma bacilar que suelen forman largas cadenasy producen ácido láctico como metabolito principal (son homofermentativas) (Hernández A. 2005)

Muestra Resultado Norma referencial

Yogurt Toni (normal)3.2x10-8UFC/g NPM/g

10 -6-10-7

Yogurt Toni (normal) 1.1x107UFC/g

Yogurt Toni (vivaly)                           3.0x108 

UFC/g

Yogurt Toni (vivaly) 7.0x105 UFC/g

Yogurt Alpina (regeneris bebible)

3.3x108UFC/g

Yogurt Alpina (regeneris bebible)

3.7x108UFC/g

Yogurt Chivería 1.3x108UFC/g

Las muestras que presentan un recuento de colonias mayor a la 10 7 ; yogurt toni normal, yogurt toni normal con antibiótico, yogurt toni vivavly, ypgurt alpina, yogurt alpina con antibiótico y la muestara siete. Estas muestras al contener un número elevado de bacterias se dice que su funcionamiento probiótica es mejor. Como lo cita la revista scielo “No hay acuerdos   generales   en   cuanto   a   la   concentración  mínima  necesaria   del   probiótico  para alcanzar   ventajas   terapéuticas.  Algunos   investigadores   sugieren  niveles  de   concentración mayores  a  10-6ufc/ml,  otros  estipulan  concentraciones  mayores  a  10-7ufc/ml  y  10-8ufc/ml como niveles satisfactorios (Kailasapathy y Rybka, 1997; Lourens-Hattingh y Viljeon, 2001, Kurmann y Rasic, 1991)

CONCLUSIONES:

Se pudo realizar el recuento de microorganismos lácticos, habiendo crecimiento de de lactobacilos

Se identificó

El objetivo de esta práctica es Enumerar bifidobacterias y lactobacilos en productos lácteos fermentado e  Identificar la morfología de  las bacterias probióticos por medio de la tinción de gram, para finalmente  interpretar los resultados

RECOMENDACIONES: Se debe esterilizar correctamente la superficie de trabajo al igual que los materiales y 

el empaque de la muestra, además se recomienda que se trabaje con un mechero encendido para conservar la esterilidad.

Para una mejor obtención e interpretación de resultados se debe realizar la siembra de cada una de las diluciones por duplicado

Cuando   se   realice   la  adición  de   la   sobre   capa  en  el   cultivo  en  cajas  Petri,   tener cuidado de no mojar la tapa de la caja con el medio de cultivo.

Bibliografía

Tamime, Robinson. Yogurt. 1991 Valderrama   j.   Propiedades   y   características   de   yogurt.   Centro   de   información 

Tecnologica. 2001. Edición 71

Hernánadez A. Prebióticos. Microbiología Industrial. 2005. 

Pacual M. Microbiología Alimentaria. Metodología Analítica para Alimentos y Bebidas. 2° Edición.

J.A. Ruiz Rivera J.A. Ramírez M. Scielo revista facultad de agronomía. Elaboración de yogurt con probióticos (Bifidobacterium spp. yLactobacillus acidophilus) e inulina. 2009 Fuente: http://www.scielo.org.ve/scielo.php?pid=S0378-78182009000200006&script=sci_arttext

ANEXOS

Muestra Placa 10-4 10-5 Estimado10-6

Contaje reportado NMP/g

Yogurt Toni (normal)

A TNTC TNTC 318 3.2x108UFC/gEstimadoB TNTC TNTC 325

Muestra Placa 10-4 10-5 10-6 Contaje reportadoYogurt Toni (normal)

A 111 19 2 1.1x107UFC/gB 112 18 4

Muestra Placa 10-4 10-5 Estimado Contaje reportado

10-6 NMP/gYogurt Toni (vivaly

A TNTC TNTC 347 3.0x108 UFC/gB TNTC TNTC 262

Muestra Placa 10-4 10-5 10-6 Contaje reportadoNMP/g

Yogurt Toni (vivaly)

A 93 5 0 7.0x105 UFC/gB 0 8 0

Muestra Placa 10-4 10-5 10-6 Contaje reportadoNMP/g

Yogurt Alpina (regeneris bebible

A TNTC TNTC 295 3.3x108UFC/gB TNTC TNTC 310

Muestra Placa 10-4 10-5 10-6 Contaje reportadoNMP/g

Yogurt Alpina (regeneris bebible)

A TNTC TNTC 394 3.7x108UFC/gB TNTC TNTC 358

Muestra Placa 10-3 10-4 10-5 Contaje reportadoNMP/g

Yogurt Chivería

A TNTC TNTC 1500 1.3x108UFC/gB TNTC TNTC 1260

TÉCNICA PARTICULAR DE LOJA La Universidad Católica de Loja UNIVERSIDAD