“Recuento en Placas de Aerobios y Método Simplate”

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

Facultad de Ingeniería Ambiental y RRNN

Práctica N°: 2 y 3

Laboratorio: 90 G.

Docente: Blgo. Carlos Tome Ramos.

Tópico: Cultivo de Setas.

Estudiantes: Correa Flores Astrid.Díaz Mendez Gladys Xiomara.

Huayhua Turpo Katherine Liset.

Haro Wang Renata.

Semestre: 2015-B.

PRACTICA N° 2 Y 3 LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL 90 G2015-B

Práctica de Laboratorio N° 2 y 3

“Recuento en Placas de Aerobios, Bacterias Heterótrofas o mesófilas.”

I.-Procedimiento Experimental:

1. Esterilizar el ambiente.2. Traer aproximadamente 100g de la muestra de compost en una bolsa de primer

uso.3. Pesar en la misma bolsa, 10 g de compost.4. Agregarlo a un frasco con 90 ml de agua peptonada. Esta sería la primera

dilución.

5. Poner 1 ml de cada dilución en dos placas por concentración.

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6. Agregar aproximadamente 15 ml de medio de cultivo (Plate Count Agar)

7. Aparte se preparó una placa sobre el ambiente de trabajo.

Tubos de ensayo con el contenido de las diluciones 10-5; 10-4; 10-3; 10-2; en la parte de atrás frasco de vidrio de tapa roja con la dilución 10-1. En la parte frontal las placas rotuladas con su respectiva dilución.

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Práctica de Laboratorio N° 3

“Método Simplate para Dosis Múltiples de RPH”

I.-Procedimiento Experimental:

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II.-Cálculos y Resultados:

“Recuento en Placas de Aerobios”

ObservacionesÁrea de trabajo Optimo, sin crecimiento de

microorganismos oportunistas.

Medio de cultivo Bueno, sin presentar cambios en el medio

Para las diluciones en las placas:

Cantidad de Diluciones

10-1 10-2 10-3 10-4 10-5

Numero de microorganismos

Incontable Incontable Incontable 804 760976 704

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Para hallar la cantidad total de microrganismos se plantea la formula siguiente que solo se aplica:

Cuando x > 250, y que por cada 100 cm2 es contable.

d1

c1 , c2,

d2

c3 , c4>n ° x d2

d1= dilución

d2= máxima dilución

c1 , c2 , c3 , c4 ,= número de

microorganismos

n °= número más cercano de 250

10−4

804 , 976, 10−5

760 ,704>704 x105 UFC/g

“Método Simplate para Dosis Múltiples de RPH”

Cantidad de diluciones

10-1 10-2 10-3 10-4 10-5

Cantidad de pocillos de microorganismos

que emiten fluorescencia

420 420 420 420 416

Cantidad de diluciones

10-4 10-5

Numero de microorganismos

804 976 760 704

Por cada 100cm2 es contable

180 204 169 150

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III.-Discusión de Resultados:-Discutimos nuestros resultados en función de un artículo científico que caracterizó microbiológicamente el proceso de compostaje a partir de residuos azucareros microbianos:

En nuestros resultados se observa que la cantidad de unidades formadoras de colonia por gramo de muestra de compost varía entre 7.04x107 hasta 8.04 x107 mientras que en el artículo encontrado se observa que la población de bacterias heterótrofas aerobias mesófilas a lo largo del proceso de compostaje disminuyó de 1,40x106 a 5,30x105 UFC/g compost en la fase termofílica. Luego existe un ligero aumento a 9,40 x105 UFC/g compost en la fase de estabilización (pero nunca se supera a la población inicial). Durante el compostaje la población de bacterias heterótrofas aerobias termófilas aumentó drásticamente de 1,90x105 a 1,20x107 UFC/g compost, se observó una disminución cercana a la población inicial cuando el material tiende a la estabilización. Observamos que en cada etapa de compostaje se va menguando la cantidad de bacterias mesófilas mientras se incrementa la temperatura, en nuestro caso por estar en la etapa inicial del compostaje se ve un gran número de UFC/g, en comparación al artículo mencionado es mucho mayor, debido quizás a las condiciones de ambiente diferente ya que este estudio se realizó en Venezuela país que se encuentra en la zona intertropical con clima cálido mientras que nosotros presentamos menores temperaturas, o también esa diferencia puede deberse a las condiciones de sanitarias menores en comparación con el paper mencionado.

-Por la cantidad de 7.04x107 hasta 8.04 x107 UFC/g encontrado en la muestra de compost podemos deducir que incluso estando en la cuarta y quinta dilución si entrara en contacto con una fuente de agua en el supuesto caso por ejemplo de ser usado como abono en agricultura no sería permisible un efluente mayor a 500 UFC/ ml en nuestro país, sobrepasando los límites máximos permisibles ya establecidos para bacterias mesófilas.

IV.-Conclusión: Gracias al Método de Recuento de Placas en aerobios se logró estimar la biota total de

microorganismos pero sin especificar el tipo. Así mismo esta determinación nos refleja

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la calidad sanitaria del producto analizado y las condiciones higiénicas en las que se encuentra.

El Método Simplate nos permitió de forma más rápida contabilizar las colonias

bacterianas debido a la fluorescencia de los pocillos en la placa, ya que el nutriente

contenía sustrato que al contacto con las enzimas bacterianas de la solución se

metabolizaban.

Ambos métodos permiten cuantificar las cantidades de colonias existentes de bacterias heterotróficas, pero es mucho más sencillo el segundo método Simplate. Aunque es preferible seguir empleando el primer método debido que en el Perú la Norma sanitaria que establece los criterios microbiológicos de calidad sanitaria e inocuidad para los alimentos y bebidas de consumo humano están en función del recuento de mesófilos.

En general se puede observar que el recuento realizado da como resultado una alta cantidad de unidades formadoras de colonias por cada gramo de compost que supera algún estudio parecido y los límites en efluentes líquidos.

http://www.sunass.gob.pe/doc/normas%20legales/legisla%20web(cambio)/normas/calidad%20de%20agua/Oficio%20677.pdf

ESTE ES DEL PAPER:

http://www.scielo.org.ve/scielo.php?pid=S0002-192X2009000300007&script=sci_arttext