INTRODUCCIN El Laboratorio Clnico es una herramienta primordial para el rea mdica, ya que por medio de este se diagnostican diferentes patologas y adems se realizan estudios para establecer el tipo de tratamiento que se debe administrar al paciente, al igual que el seguimiento del mismo. SERVICIOS DEL LABORATORIO CLINICO 1. Toma de muestras. 2.Anlisis de las muestras. 3. Entrega de resultados. Esto requiere de numerosas medidas de atencin y cuidado, con eficientes actitudes ticas, profesionales y de procedimiento. LA BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO CLNICO DEL HGR 25 Son todos los procedimientos y acciones que garantizan una mejor calidad de vida, tanto del trabajador, del paciente y del medio ambiente. Mtodos de barrera Bata Guantes Tapabocas Gorro Gafas Careta Peto Consideraciones para su proteccin personal Todas las muestras de especimenes biolgicos deben considerarse potencialmente infecciosas. Vacunarse contra los principales agentes infecciosos neumococo, hepatitis, etc. Procurar no producir "salpicaduras" con la muestra obtenida. Debe limpiarse y desinfectarse cualquier superficie contaminada por algn espcimen biolgico (cloro 5%). Lavarse las manos correctamente, despus de haber tenido contacto con cada paciente y al concluir cualquier procedimiento. No deben ingerirse comidas, bebidas, goma de mascar o fumar en el laboratorio. Vigile que los elementos de trabajo estn en perfectas condiciones fsicas. Algn elemento en mal estado, podra causarle una herida. MTODOS DE ESTERILIZACIN UTILIZADOS EN EL HGR 25. ASEPSIA: Libre de microorganismos. Proceso mediante el cual se eliminan todas las formas de vida. MTODOS DE ESTERILIZACIN Comprende todos los procedimientos fsicos, mecnicos y qumicos, que se emplean para destruir grmenes patgenos. Qumicos Estos mtodos provocan la perdida de viabilidad de los microorganismos. Hipoclorito de Sodio al 5 %: Es el ms utilizado por su fcil adquisicin y por su efectividad en la desinfeccin. Alcohol: Esteriliza superficies. Mtodos fsicos Calor: La utilizacin de este mtodo y su eficacia depende de dos factores: el tiempo de exposicin y la temperatura. Todos los microorganismos son

1

susceptibles, en distinto grado, a la accin del calor. El calor provoca desnaturalizacin de protenas, fusin y desorganizacin de las membranas y/o procesos oxidantes irreversibles en los microorganismos.

Calor Hmedo: El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas, este proceso se lleva acabo por una autoclave. . Autoclave Se realiza la esterilizacin por el vapor de agua a presin. El modelo usado en el hospital es el de Chamberland. Esteriliza a 121 C, 15 lb de presin, por 15 minutos algunos medios de cultivo, el material sucio a 121 C, 15 lb de presin, por 30 minutos, el material limpio a 121 C, 15 lb de presin, por 20 minutos, se pueden cambiar los parmetros de acuerdo al trabajo que se va a realizar.. Calor seco: El calor seco produce desecacin de la clula, es esto txico por niveles elevados de electrolitos, fusin de membranas. Estufas-Hornos Doble cmara, el aire caliente generado por una resistencia, circula por la cavidad principal y por el espacio entre ambas cmaras, a temperatura de 180 C para el instrumental metlico y a 140 C para el contenido de los tambores.

SECCIN DE MICROBIOLOGA. Microorganismos Microorganismo, ser vivo que slo se puede observar utilizando microscopios pticos o electrnicos. Los microorganismos se clasifican en: bacterias y cianobacterias (o algas verde azuladas) pertenecen al reino Mneras. Son organismos con clulas procariticas y presentan una gran variedad de formas de vida. En la seccin de bacteriologa o microbiologa del HGR 25 se estudian los siguientes microorganismos. Los hongos y las levaduras: son microorganismos que pertenecen al reino fung. Los virus: son un tipo de parsitos intracelulares que causan un gran nmero de enfermedades en las personas, los animales y las plantas. Parsitos: los cuales viven a expensas de otros microorganismos. Bacterias: Las bacterias son organismos unicelulares y microscpicos, que carecen de ncleo diferenciado, las bacterias son muy pequeas, entre 1 y 10 micrmetros (m) de longitud, y muy variables en cuanto al modo de obtener la energa y el alimento. Estn en casi todos los ambientes: en el aire, el suelo y el agua, desde el hielo hasta las fuentes termales; incluso en las grietas hidrotermales de las profundidades de los fondos marinos. Tambin se pueden encontrar en algunos alimentos o viviendo en simbiosis con plantas, animales y otros seres vivos. Clasificacin de las bacterias Las bacterias se suelen clasificar siguiendo varios criterios: por su forma, en cocos, bacilos, cocobacilos, espiroquetas; segn la estructura de la pared celular; por el comportamiento que presentan frente a la tincin de GRAM (Positivos y negativos); en funcin de que necesiten oxgeno para vivir o no (aerobias o anaerobias, respectivamente); segn sus capacidades metablicas o fermentadoras; por la posibilidad de formar cpsulas y esporas resistentes cuando las condiciones son adversas, y en funcin de la identificacin serolgica de los componentes de su superficie y de sus cidos nucleicos. No todas las bacterias tienen capacidad de movimiento, pero las que lo hacen se desplazan gracias a la presencia de apndices filamentosos denominados pilis y flagelos. stos pueden localizarse a lo largo de toda la superficie celular o en uno o ambos extremos, y pueden aparecer aislados o en grupo. Dependiendo de la direccin en que gire el flagelo, la bacteria puede moverse avanzando o agitndose en una direccin concreta.

2

Los pilis son vellosidades que se sitan alrededor de la bacteria y su movimiento es de lado de forma ondulante. MEDIOS DE CULTIVO Un medio de cultivo es cualquier sustancia que puede ser usada para el cultivo de microorganismos, puede ser llamada un medio o, dicho con mayor precisin un medio de cultivo. Los medios sirven para dos propsitos principales: a) Fomentar el crecimiento microbiano en forma que puedan comprobarse las caractersticas de cultivo. b) Facilitar algunas reacciones bioqumicas que luego puedan ser demostrables por observacin directa, o bien, indirectamente por la reaccin en presencia de algunos reactivos adicionales. Todas las reacciones de cultivo as como las bioqumicas, dependen de la composicin del medio y de la naturaleza del cultivo que se estudie. Los medios de cultivo se pueden clasificar en cuatro tipos diferentes: 1. 2. 3. 4. 1. Medios Medios Medios Medios bsicos enriquecidos selectivos, diferenciales y de enriquecimiento especiales

Medios bsicos

Solo contienen algn extracto de carne u otra infusin simple, peptona, sal y agua. El extracto o la infusin de carne proporcionan al organismo los aminocidos, vitaminas, sales, y pequeas cantidades de carbono, nitrgeno, hidrgeno y otros elementos. Las sales (usualmente cloruro de sodio) sirven para obtener isotonicidad requerida para el mantenimiento de presiones osmticas constantes. El agua sirve como disolvente, como medio de transporte, o para ambos fines (siempre se debe usar agua destilada para preparar los medios de cultivo). Los medios de cultivo que solo contienen extracto de carne, peptona, sal y agua, son lquidos; para el estudio de las caractersticas de las colonias es indispensable el uso de medios slidos. La solidificacin se consigue agregando agar, gelatina, albmina de suero o de huevo, a los otros ingredientes. Es preferible utilizar el agar, ya que es un medio slido que no se desintegra por los medios fsicos usados en el cultivo de la mayora de los microorganismos. Ejemplos de ste tipo de medios son los siguientes: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 2. Caldo y agar nutritivo Caldo de triptona y soya Caldo de infusin de cerebro y corazn Agar de infusin de cerebro y corazn Caldo de infusin de corazn Agar y extracto de hgado Dextrosa de Saboraud Medios enriquecidos

Koneman1992

Figura 7

3

Son aquellos medios bsicos que han sido complementados con lquidos corporales, vitaminas especficas, aminocidos, protenas y otros nutrientes claramente definidos como tales. Ejemplos: 7. Medios inclinados con suero 1. Agar proteosa 8. Agar de Bordet Gengou 2. Agar sangre 9. Medio de Levinthal 3. Agar chocolate 10. Agar de Mueller-Hinton 4. Caldo de suero 11. Agar infusin de cerebro corazn 5. Agar con suero 12. Agar sangre 6. Suero de Loeffler con sangre 3. Medios selectivos, diferenciales y de enriquecimiento Los medios selectivos son usualmente medios de agar bsico, o enriquecidos, a los cuales se les han agregado ciertos reactivos que impiden el crecimiento de la mayora de las bacterias, permitiendo por lo tanto el aislamiento de unas cuantas, seleccionadas en los especimenes que contengan grandes nmeros de organismos indeseables. Los medios diferenciales son medios bsicos o enriquecidos, a los cuales se les han agregado ciertos reactivos que reaccionarn con algunos tipos especficos de bacterias en cierta forma observable. Los medios de enriquecimiento son por lo general medios lquidos enriquecidos, que contienen algunas sustancias inhibidoras, con lo que se crea un ambiente especialmente favorable para lmites ms bien estrechos de bacterias. Ejemplos: 1. Medio de Thayer Martin 2. Agar con feniletanol 3. Agar con sangre y bilis al 40% 4. Agar con esculina y bilis 5. Agar con sangre y telurito 6. Medio de Tinsdale modificado 7. Agar con Lowenstein Jensen en tubos inclinados 8. Agar con citrato y desoxicolato 9. Agar de sulfito de bismuto 10. Caldo selenito de sodio 11. Agar XLD ( xilosa, lactosa, desoxicolato) 11. Agar sangre con azida 12. Agar con sal y manitol 13. Agar de Mc Conkey 14. Agar Salmonella -Shigella 15. Agar con eosina y azul de metileno (EMB) 16. Agar de bilis y rojo de violeta 17. Agar dextrosa y tripticaseina 18. Agar entrico Hektoen 19. Agar S-110 20. Agar tergitol 7 21. Agar verde brillante 22. Agar Vogel Jhonson 23. Agar Baird-Parke 4. Medios especiales

Son los medios que no pueden ser fcilmente agrupados bajo alguno de los anteriores grupos. La mayora de ellos sern medios empleados para comprobar una o ms a caractersticas bioqumicas. Ejemplos: Pruebas bioqumicas 1. 2. 3. 4. Fermentacin de carbohidratos Prueba de citrato Prueba de leche con tornasol Reduccin de leche con azul de metileno 5. Prueba de oxidacin y fermentacin: Hugh-Leifson (O/F) 6. Prueba de ureasa 7. Prueba de Voges Proskauer 8. Prueba con rojo de metilo 9. Reduccin de nitratos 10.Prueba de fenilalanina 11.Prueba de Sulfuro, indol, movilidad: SIM 12.Agar hierro y triple azcar: TSI

4

13.Descarboxilacin de la arginina y lisina: LIA 14.Descarboxilacin de la ornitina: MIO

Otras clasificaciones de los medios de cultivo son las siguientes:

5

De acuerdo a la consistencia

1.

Medios slidos. Son tiles para el crecimiento, aislamiento y obtencin de cultivos puros de bacterias y hongos. 2. Medios semislidos. tiles para la observacin de metabolismo, as como la propagacin y obtencin de cultivos de bacterias anaerbicas. 3. Medios lquidos. Permiten la difusin del microorganismo. De acuerdo a la composicin

1.

Medios sintticos Es aquel en el que se conoce la composicin qumica exacta de los ingredientes. 2. Medio no sinttico. No se conoce de una manera definida la composicin precisa de alguna o de todas las sustancias nutritivas. Ejemplos de estos: CALDOS EN TUBO Caldo y agar nutritivo Caldo de triptona y soya Caldo de infusin de cerebro y corazn Caldo de infusin de corazn Caldo de suero Caldo selenito de sodio AGARES EN CAJA PETRI Dextrosa de Saboraud (hongos) Agar sangre 5% (bacterias en general) Agar chocolate (neiseria gonorrea, haemophilus influenzae) Suero de Loeffler con sangre (corynebacterium difteriae) Agar de Bordet Gengou (bordetella pertusii) Agar de Mueller-Hinton (para antibiogramas) Agar de Thayer Martin (haemophilus influenzae) Agar con sangre y bilis al 40% (enterobacterias) Agar con esculina y bilis (streptococcus pneumoniae) Agar con sangre y telurito (enterobacterias) Agar con Lowenstein Jensen (mycobacterium tuberculae) Agar con sal y manitol (staphylococcus aureus) Agar de Mc Conkey (enterobacterias) Agar Salmonella Shigella (Salmonella thypi, shigella) Agar con eosina y azul de metileno (enterobacterias ejemplo clasico escherichia coli) Agar S-110 (staphylococcus aureus) Agar verde brillante ( salmonella y shigella, otras enterobacterias) PRUEBAS BIOQUMICAS En tubo. Prueba de citrato (inclinado y solido) Prueba de leche con tornasol (liquido) Reduccin de leche con azul de metileno (liquido) Prueba de oxidacin y fermentacin: Hugh-Leifson (O/F) (semisolidos) Prueba de ureasa (inclinado y solido) Prueba de Voges Proskauer (liquido) Prueba con rojo de metilo (liquido) Reduccin de nitratos (liquido) Prueba de Sulfuro, indol, movilidad: SIM (inclinado y solido)

Agar hierro y triple azcar: TSI (inclinado y solido) Descarboxilacin de la arginina y lisina: LIA (inclinado y solido) Descarboxilacin de la ornitina: MIO (semisolidos) Tinciones que se realizan en el laboratorio clnico. ZIEHL-NEELSEN (BAAR) Fundamento. Las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen cidos grasos (cidos miclicos) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloracin con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes bsicos. Por esto se denominan cido-alcohol resistente. La coloracin clsica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. 1. El frotis se tie durante unos 5 min con Carbolfucsina aplicando calor suave. 2. Lavar con agua. 3. Decolorar con alcohol etlico 95% con un 3% de HCl concentrado (alcohol cido). 4. Lavar y teir durante 30-60 seg con Azul de Metileno (color de contraste). 5. Lavar y secar Examen de muestras al microscopio: la tincin GRAM La tincin de Gram es uno de los mtodos de tincin ms importantes en el laboratorio bacteriolgico del HGR 25, su utilidad prctica es indiscutible y en el trabajo microscpico de rutina del Laboratorio de Microbiologa las referencias a la morfologa celular bacteriana (cocos, bacilos, positivos, negativos, etc) se basan justamente en la tincin de GRAM Las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas tien de forma distinta debido a las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. La pared de la clula bacteriana sirve para dar su tamao y forma al organismo as como para prevenir la lisis osmtica. El material de la pared celular bacteriana que confiere rigidez es el peptidoglicano. La pared de la clula Gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas interconectandas de peptidoglicano as como algo de cido teicoico. Generalmente, 80%-90% de la pared de la clula Gram-positiva es peptidoglicano. La pared de la clula Gram-negativa, por otro lado, contiene una capa mucho ms delgada, nicamente de peptidoglicano y est rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolpidos, lipopolisacridos, y lipoprotenas. Slo 10% - 20% de la pared de la clula Gram-negativa es peptidoglicano. Fundamento de la tincin. Las clulas fijadas al calor sobre un portaobjetos se tien, primero con una solucin de cristal violeta (otros colorantes bsicos no son tan efectivos) y son lavadas despus para quitar el exceso de colorante. En este estado, todas las clulas, tanto las Gram-positivas como las Gram-negativas, estn teidas de azul. El portaobjetos se cubre entonces con una solucin de yodo-yoduro potsico. El ingrediente activo es aqu el I2 ; el KI simplemente hace soluble el I2 en agua. El I2 entra en las clulas y forma un complejo insoluble en agua con el cristal violeta. De nuevo tanto las clulas Gram-positivas como las Gram-negativas se encuentran en la misma situacin. Se lleva a cabo despus la decoloracin, usando una mezcla de alcohol-acetona, sustancias en las que es soluble el complejo I2 -cristal violeta. Algunos organismos (Gram-positivos) no se decoloran, mientras que otros (Gram-negativos) lo hacen. La diferencia esencial entre esos dos tipos de clulas est por tanto en su resistencia a la decoloracin; esta resistencia se debe probablemente al hecho de que en el caso de bacterias Gram-negativas, la mezcla de alcohol/acetona es un solvente lipdico y disuelve la membrana exterior de la pared de la clula (y tambin puede daar la membrana citoplsmica a la que se une peptidoglicano). La delgada capa de peptidoglicano es incapaz de retener el de complejo cristal violeta-yodo y la

clula se decolora. Las clulas Gram-positivas, a causa de sus paredes celulares ms espesas (tienen ms peptidoglicano y menos lpido), no son permeables al disolvente ya que ste deshidrata la pared celular y cierra los poros, disminuyendo as el espacio entre las molculas y provocando que el de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado dentro de la pared celular. Despus de la decoloracin las clulas Gram-positivas son todava azules, pero las Gram-negativas son incoloras. Para poner de manifiesto las clulas Gram-negativas se utiliza una coloracin de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina bsica. Despus de la coloracin de contraste las clulas Gram-negativas son rojas, mientras que las Grampositivas permanecen azules. Tcnica. 1. El Frotis fijado con calor se tie; 2. 1 min con Violeta Cristal. 3. Se lava con agua. 4. Se cubre con solucin Yodada (lugol) durante 30 seg. 5. Se lava de nuevo con agua. 6. Decolorar durante 40 seg con mezcla alcohol etlico/acetona (alcohol-cetona). 7. Se lava de nuevo con agua. 8. Escurrir y cubrir con Safranina (color de contraste) durante 20 seg. SISTEMA AUTOMTICO VITEK El sistema automtico VITEK se utiliza en el rea de bacteriologa clnica en el HGR 25 respondiendo a las necesidades de la microbiologa clnica, la automatizacin aporta mayor seguridad, suprimiendo las manipulaciones repetitivas, y la rapidez de respuesta permite obtener resultados mas rpidos que con las tcnicas manuales. VITEK automatiza todas las etapas necesarias para la realizacin de las pruebas de identificacin y antibiograma. Est constituido: por un inoculador, un incubador/lector, un ordenador y una impresora. El inoculador permite la inoculacin de las tarjetas en pocos minutos. El incubador/lector asegura simultneamente la incubacin y la lectura de las tarjetas. El ordenador equipado con los programas, efecta un control permanente de las operaciones en curso, memoriza los valores, trata e interpreta los resultados. La tarjeta destinada a la identificacin o el antibiograma con los sistemas automticos se presenta en envase unitario, lo cual garantiza una perfecta conservacin de los tests hasta el momento de su empleo. Una vez inoculada, se encuentra hermticamente cerrada, y por tanto es manipulable sin riesgo de contaminacin. La identificacin Cada tarjeta de identificacin posee 30 pocillos que contienen los substratos bioqumicos en forma deshidratada. No es necesario aadir ningn reactivo, lo cual evita cualquier riesgo de olvido o error. La identificacin cubre ms de 300 especies encontradas en el campo de la microbiologa clnica e industrial. El antibiograma La tarjeta de antibiograma posee 30 o 45 pocillos que contienen los antibiticos deshidratados. Las pruebas especficas para la deteccin de los mecanismos de resistencia estn incluidas sistemticamente en las tarjetas de antibiograma: resistencias heterogneas (estafilococos), beta-lactamasas de espectro ampliado (enterobacterias), resistencias de alto nivel a los aminoglicsidos (enterococos), penicilinasas (estafilococos). El sistema experto goza del conocimiento y de la experiencia de BioMrieux en el campo del antibiograma y su interpretacin. Todo resultado de antibiograma es sistemticamente controlado, interpretado y comentado por el sistema experto: la calidad de las respuestas es continuamente verificada.

Los programas El programa BioLiaison centraliza las informaciones del laboratorio, organiza los resultados y genera los datos relacionando las muestras, las identificaciones y otras pruebas. Una interfase grfica permite a todos, incluso a los menos familiarizados con la informtica, utilizar el sistema automtico VITEK en el HGR 25. Estadsticas El mdulo estadstico reagrupa ms de 30 criterios de seleccin que permite efectuar estudios de distribucin de microorganismos, frecuencia de aparicin de perfiles bioqumicos, cargas de trabajo, tendencias, etc. Control de calidad Un mdulo de control de calidad integrado permite realizar los controles internos. Multitareas La estacin de trabajo (estacin IBM) es multitarea. Es por tanto posible lanzar simultneamente un estudio estadstico, editar un informe, etc. TheraTrac Este programa permite al clnico del hospital estar informado de los resultados del laboratorio a tiempo real e intervenir rpidamente con el fin de mejorar la terapia en curso mediante la eleccin de antibiticos ms apropiados y menos costosos, o detectar un tratamiento eventualmente incorrecto. Hongos Es un grupo diverso de organismos unicelulares o pluricelulares que se alimentan mediante la absorcin directa de nutrientes. Los alimentos se disuelven mediante enzimas que secretan los hongos; despus se absorben a travs de la fina pared de la clula y se distribuyen por difusin simple en el protoplasma. Junto con las bacterias, los hongos son los causantes de la putrefaccin y descomposicin de toda la materia orgnica. Hay hongos en cualquier parte en que existan otras formas de vida. Algunos son parsitos de organismos vivos y producen graves enfermedades en plantas y animales. La disciplina cientfica que estudia los hongos se llama micologa la cual se trabaja en el HGR 25. Hay unas cien mil especies conocidas de hongos. Se cree que los grupos ms complejos derivan de los tipos ms primitivos, los cuales tienen clulas flageladas en alguna etapa de su ciclo vital. En el hombre tienen gran afinidad por el cabello las uas y la piel. Recoleccin de muestras para estudios de hongos Piel y Escamas Interrogar al paciente sobre uso de talcos o cremas que interfieren con el examen. Abstenerse de tratamiento antimictico 10 das previos al estudio. Limpiar el rea de toma de la muestra con gasa humedecida en agua destilada estril o alcohol. (No se debe utilizar algodn en la limpieza del rea afectada). Raspar cuidadosamente cuchilla estril de bistur los bordes de la lesin. (Tomar muestras de diferentes lesiones). Colocar las escamas desprendidas sobre un portaobjetos de vidrio estril o dentro de caja Petri estril. Si existen vesculas, deben romperse con la punta de la cuchilla o de una lanceta estril y su contenido en los recipientes indicados. Puede colocarse tambin cinta pegante transparente sobre la lesin y despus de haber presionado la lesin con la misma, retirarla y posteriormente pegar la cinta en el portaobjetos. Procurar tomar muestras suficientes para examen directo y cultivos. Procesar las muestras antes de dos 2 horas. Uas Remover esmaltes de la ua tres 3 das antes del estudio. Abstenerse de tratamiento antimictico local 15 das previos al estudio. (En caso de tratamiento sistmico, suspenderlo y realizar el estudio entre dos y seis meses despus).

Limpiar el rea de toma de muestra con gasa humedecida en agua destilada estril o alcohol. (No utilizar algodn) Raspar con cuchilla estril de bistur la zona de la placa ungueal afectada, de extremo distal o proximal. Si la lesin se encuentra en la regin distal de la ua, cortar con tijeras o cortaas estriles la porcin afectada. Colocar el material recolectado en una caja petri estril. Procurar tomar muestras suficientes para examen directo y cultivos. Procesar las muestras antes de dos 2 horas.

Cabellos Elegir con lupa los cabellos afectados (opacos, descoloridos, con ndulos, quebradizos, etc.) Cortar con tijeras los cabellos elegidos y depositarlos en caja de Petri estril. Si se aprecia descamacin de cuero cabelludo, recolectar escamas del mismo. Deben recolectarse por lo menos cinco cabellos Procesar la muestra antes de dos horas. Parsitos Parsito, cualquier organismo que vive sobre o dentro de otro organismo vivo, del que obtiene parte o todos sus nutrientes, sin dar ninguna compensacin a cambio al hospedador. En muchos casos, los parsitos daan o causan enfermedades al organismo hospedante. Los parsitos permanentes pasan la mayor parte de su ciclo vital dentro o sobre el organismo al que parasitan. Los parsitos temporales viven durante un breve periodo en el husped, y son organismos de vida libre durante el resto de su ciclo vital. Clasificacin de los parsitos. Endoparsitos: Parsitos que estn dentro del husped. Nematodos: Gusano redondo. Se aloja en el intestino y a veces se abre camino hasta otras partes del cuerpo, son de color blanquecino, rosa y caf. Sus huevos son observados en laboratorio clnico del HGR 25 para diagnosticar el tipo de parasito. Los gusanos pueden expulsarse por medio de purgantes. Filarias: Pertenecen a la clase de los Nematodos. El nombre cientfico de la filaria endmica en partes de frica, Espaa, Sudamrica, este de Asia, islas del Caribe, varias islas del Pacfico y Amrica del Norte, es Wuchereria bancrofti, el del gusano causante de la loaiasis (Loa Loa), el del gusano de Guinea Dracunculus medinensis y el de la filaria que causa la oncocercosis, Onchocerca volvulus por ejemplo. Cestodos: Gusano plano, tambin platelminto, nombre comn de un grupo de animales de cuerpo blando. Son los animales ms sencillos entre los que poseen cabeza. Presentan simetra bilateral y son un tanto aplanados dorso-ventralmente. La mayora son alargados, los gusanos planos o platelmintos comprenden: las tenias, que en su fase adulta son parsitos del tracto digestivo de los animales; Existen dos especies que pueden dar lugar a la enfermedad, la tenia porcina o Taenia solium y la tenia del ganado vacuno o Taenia saginata por ejemplo. Trematodos: Gusanos planos. El nombre cientfico de la duela del hgado del cordero es Fasciola heptica. Las duelas conocidas como duelas de la sangre pertenecen al gnero Schistosoma. Tanto la duela del hgado del cordero como las duelas de la sangre pertenecen a la clase Trematodos. Protozoarios protista: Ameba o Amiba, organismo unicelular perteneciente al filo Sarcodinos (Sarcodina) y al reino Protistas. La clula se compone de una membrana delgada, una capa semirrgida de ectoplasma, un endoplasma granular de aspecto gelatinoso y un ncleo oval. Hay especies que viven en las plantas acuticas, en la tierra hmeda y otras que son parsitas de animales. Las amebas se desplazan extendiendo el citoplasma hacia fuera y forman un pseudpodo o pie falso. La formacin de pseudpodos se produce como respuesta a los estmulos qumicos

generados por los microorganismos que constituyen su alimento; de manera que dos pseudpodos engloban al microorganismo y lo introducen en una cavidad o vacuola. Un cido secretado en la cavidad descompone este alimento en sustancias qumicas solubles que son difundidas desde la cavidad al citoplasma. El material de desecho y los restos no digeridos son eliminados a travs del ectoplasma. Al menos seis formas de amebas son parsitas del hombre. De stas, la ms importante es Entamoeba histolytica, que causa la amebiasis y la disentera; la enfermedad aparece en brotes epidmicos, cuando las aguas residuales contaminan los suministros de agua o cuando el suelo se fertiliza con desechos humanos sin tratar. Concentracin o de faust: Este es el mtodo mas usado y efectivo, en este se precipitan los parsitos por centrifugacin despus de haber filtrado la muestra. TCNICA: 1. Se tamiza una porcin de materia fecal en un embase de copropak agregandole agua. 2. Se vaca en un tubo de ensayo tubo de 13 x 100 Despus se centrifuga a 1500 rpm durante 1 min. 3. Despus se decanta, se pueden realizar mas lavados con agua decantando el sobrante dejando el sedimento (2 o tres lavados). 4. Al sedimento sobrante se le agrega sulfato de zinc (1.80 de densidad) y con un agitador se mezcla bien y se vuelve a centrifugar a 1500 rpm durante 1 min. 5. Despus se coloca una gota de lugol en un porta objetos y se toma una muestra de materia fecal. 6. Se observa en seco dbil y seco fuerte. Utilizacin de la Tcnica de Ritchie Modificada PROCEDIMIENTO 1. Tomar una muestra de aproximadamente 3 g de material fecal y agregarle 30 ml de agua mezclndola de forma homognea. 2. Filtrar la suspencin a travs de un colador o gasa y ayudndose con un embudo llenar el tubo de ensayo a 2 o 3 mm antes del borde. 3. Balancear con otro tubo de ensayo lleno de agua y centrifugar durante un minuto a 2500 r.p.m. 4. Decantar el sobrenadante y agitar el sedimento; agregar agua hasta llenar el tubo(efectuar los pasos 3 y 4 las veces que sean necesarias hasta que el sobrenadante sea claro). 5. Agregar 4ml de formol al 10% durante 10 minutos. 6. Agregar 2 ml de nafta, tapar el tubo y agitar vigorosamente durante 30 seg. destapando lentamente para que el contenido no salga al exterior. 7. Centrifugar un minuto a 1500 r.p.m. Se observan cuatro capas: 1-nafta, 2-restos fecales, 3formol, 4-sedimento. 8. Decantar el sobrenadante. 9. Agregar una gota de colorante al sedimento. 10. Colocar una gota del sedimento sobre un portaobjeto. Se observa la preparacin en el microscopio con objetivo 10x y 40x. PRECAUCIONES Evitar que hayan mecheros encendidos cuando se est manipulando la nafta. VENTAJAS. Concentra bien quistes y todo tipo de huevos EL ESTUDIO DE LA SANGRE EN EL LABORATORIO La sangre Sustancia lquida que circula por las arterias y las venas del organismo. La sangre es roja brillante o escarlata cuando ha sido oxigenada en los pulmones y pasa a las arterias; adquiere una tonalidad ms azulada cuando ha cedido su oxgeno para nutrir los tejidos del organismo y regresa a los pulmones a travs de las venas y de los pequeos vasos denominados

capilares. En los pulmones, la sangre cede el dixido de carbono que ha captado procedente de los tejidos, recibe un nuevo aporte de oxgeno e inicia un nuevo ciclo. Este movimiento circulatorio de sangre tiene lugar gracias a la actividad coordinada del corazn, los pulmones y las paredes de los vasos sanguneos. El cuerpo humano posee cinco litros de sangre aproximadamente. Composicin de la sangre: En una persona normal sana, el 45% del volumen de su sangre son clulas, glbulos rojos, glbulos blancos y plaquetas. Un fluido claro y amarillento, llamado plasma, constituye el resto de la sangre. El plasma, del cual el 95% es agua, contiene tambin nutrientes como glucosa, grasas, protenas, vitaminas, minerales, aminocidos necesarios para la sntesis de protenas, etc. GLBULOS ROJOS, ERITROCITOS O HEMATES: Son clulas de forma discoidea y bicncava con un dimetro promedio de 7,5 m y un espesor que llega a 2 m en sus bordes y que no alcanza 1 m en el centro y constituyen el 99% del total de clulas en la sangre. El eritrocito maduro no posee ncleo, no se reproduce y consume una cantidad mnima de oxgeno. Su membrana est compuesta de una combinacin de lpidos y protenas, que le confieren propiedades especiales de permeabilidad. La funcin principal de la clula roja es transportar oxgeno hacia los tejidos y traer de vuelta dixido de carbono de stos hacia los pulmones. Contiene alrededor de un 60% de agua, el in predominante en su interior es el potasio y el 34% de su peso corresponde a la hemoglobina, la cual constituye el 90% de las sustancias slidas contenidas en ste. Adems, contiene numerosas enzimas que son necesarias para el transporte de oxgeno y la viabilidad de la clula. La hemoglobina est contenida exclusivamente dentro de los eritrocitos y se une aproximadamente al 97% de todo el oxgeno. Es una protena conjugada formada por la globina, un grupo hem y un tomo de hierro. Cada molcula de hemoglobina puede unir cuatro molculas de oxgeno, por lo que le permite a la sangre humana transportar ms de 70 veces la cantidad de dicho gas que pudiera acarrearse de cualquier otra manera. La forma particular bicncava del glbulo rojo le permite una absorcin de oxgeno en los pulmones, as como su liberacin eficiente en los capilares de todos los tejidos del cuerpo. De hecho, se calcula que un eritrocito se satura totalmente de oxgeno en menos de un centsimo de segundo. GLBULOS BLANCOS O LEUCOCITOS: Los glbulos blancos son una vital fuerza de defensa contra organismos extraos. Tambin funcionan como nuestro "aseo urbano" ya que limpian y eliminan clulas muertas y desechos tisulares que de otra manera se acumularan. Los leucocitos son clulas de forma redondeada mientras circulan en la sangre y adoptan formas muy variadas cuando salen de los vasos sanguneos y su dimetro oscila entre 6 y 18 m. Muchas infecciones estimulan a la mdula sea a liberar a la corriente sangunea grandes nmeros de leucocitos que normalmente estn en reserva, lo que se evidencia como un aumento en el nmero de clulas blancas en la sangre perifrica. Este incremento es fcilmente detectado con una simple hematologa (BH) y contribuye notablemente en una primera aproximacin diagnstica. Algunas clulas blancas pueden morir en el proceso de lucha contra una infeccin y sus cuerpos muertos se acumulan y contribuyen a formar una sustancia blanca que es comnmente vista en el sitio de una infeccin, llamada "pus". No todas las infecciones llevan a un incremento en el nmero de clulas blancas; el virus responsable por el SIDA conlleva a su reduccin, especficamente en el nmero de linfocitos y a una consiguiente minusvala en la habilidad para luchar contra otras infecciones. De acuerdo a su apariencia al microscopio luego de su tincin, existen 5 clases de leucocitos: granulocitos (neutrfilos, eosinfilos y basfilos), linfocitos y monocitos. Neutrfilo: La principal funcin de los neutrfilos es la de detener o retardar la accin de agentes infecciosos o materiales extraos. Su propiedad ms importante es la fagocitosis y son capaces de ingerir bacterias y pequeas partculas. En muchas oportunidades, cuando se trata de combatir infecciones bacterianas severas, pueden

aumentar su nmero, ya que la mdula sea los libera en virtud de la emergencia, antes de terminar su maduracin. Los neutrfilos, adems de defender el organismo contra las infecciones, pueden ser dainos tambin, al liberar los componentes de sus grnulos txicos en diversos tejidos. Eosinfilos: Los eosinfilos tienen una igual actividad motriz que los neutrfilos y aunque poseen propiedades fagocticas, participan menos en la ingestin y muerte de las bacterias. Un aumento en su nmero frecuentemente acompaa a reacciones alrgicas o procesos inmunolgicos, al igual que presencia de parsitos. Basfilos: son los que tienen menos movilidad y menor capacidad fagoctica. Participan en reacciones de hipersensibilidad (picaduras). Linfocitos: El linfocito es una de las clulas ms intrigantes de la sangre humana y bajo ese nombre se engloban varios tipos diferentes de clulas linfoides, que encierran diferencias estructurales y funcionales (T linfocititos, B linfocitos y linfocitos NK). Las funciones del sistema linftico son en general la produccin de anticuerpos circulantes y la expresin de la inmunidad celular, refirindose esto ltimo al autorreconocimiento inmune, hipersensibilidad retardada, rechazo de los injertos y reacciones injerto contra husped. Tres tipos funcionalmente diferentes de linfocitos han sido descritos: los linfocitos T o timo-dependientes, los linfocitos B o mdula sea dependientes y NK o clulas acecinas. Aproximadamente el 70 a 80% de los linfocitos en sangre perifrica muestran caractersticas de clulas T, as como una gran capacidad y velocidad para recircular entre la sangre y los tejidos. Tambin almacenan y conservan la "memoria inmunolgica" (clulas T de memoria). Adems, una vez activadas, son las clulas efectoras o ejecutoras (clulas asesinas) de la inmunidad celular y secretan sustancias biolgicamente activas (linfoquinas) que sirven de mediadores solubles de inmunidad en la respuesta inflamatoria. Monocitos: Los monocitos son los grandes fagocitos mononucleares de la sangre perifrica. Son un sistema de clulas fagocticas producidas en la mdula sea, que viajan como tales por la sangre, para luego emigrar a diferentes tejidos como hgado, bazo, pulmones, ganglios linfticos, hueso, cavidades serosas, etc., para convertirse en esos tejidos en macrfagos libres o fijos, cuyas funciones se corresponden con lo que se conoce como sistema mononuclear-fagocitario. Plaquetas o trombocitos: Las plaquetas son fragmentos de citoplasma de megacariocitos, que circulan como pequeos discos en la sangre perifrica. En promedio, tienen un dimetro entre 1 a 4 m, su citoplasma se tie azul claro a prpura y es muy granular. No tienen ncleo y su concentracin normal en sangre perifrica es entre 150.000 y 450.000/l. Su duracin en circulacin es de 8 a 11 das Plaqueta, tambin denominada trombocito, fragmento citoplasmtico de un megacariocito (la clula de mayor tamao presente en la mdula sea), que se encuentra en la sangre perifrica, donde interviene en el proceso de coagulacin de la sangre. Si se produce un dao a un vaso sanguneo, las plaquetas circulantes inmediatamente quedan atrapadas en el sitio de la lesin, formndose un tapn, primer paso en el control del dao vascular. Este mecanismo es suplementado por el sistema de coagulacin sangunea, el cual es el ms importante medio de defensa contra las hemorragias.

Anticoagulantes Existen mltiples factores involucrados en el proceso de coagulacin de la sangre. Los anticoagulantes son sustancias que previenen la formacin de cogulos. Existen diferentes tipos de ellos en polvo o lquidos. Deben seleccionarse siempre el anticoagulante apropiado segn el estudio que se quiera realizar. Los anticoagulantes utilizados en el laboratorio clnico del HGR 25 ms comunes son: EDTA: (ETILEN-DIAMINO-TETRA-ACETATO) Este tipo de anticoagulante es utilizado principalmente para realizar las BH en laboratorio clnico.

Citrato de sodio: Generalmente en concentraciones al 3.8 % y ser utiliza comnmente en estudios de coagulacin. Heparina: Se utiliza tanto en algunos estudios de rutina como especializados. Su presentacin puede incluir heparina con concentraciones de sodio o litio. En general, la heparina con litio es utilizada para estudios en urgencias del laboratorio clnico del HGR 25 para realizar gasometras. Cuando una muestra es tomada los tubos con anticoagulante deben mezclarse inmediatamente, una vez que la sangre ha entrado en ellos. Invertir suavemente (10 15 veces) o se colocan en rotores especiales, para as obtener mezclas homogneas. Existen cdigos de colores internacionalmente conocidos, para las diferentes presentaciones de tubos colectores de nuestras sanguneas los cuales se aplican en el laboratorio clnico del HGR 25. Tapa roja.. Sin anticoagulante (Tubo seco). Tapa violeta. Con EDTA. Tapa azul Con CITRATO DE SODIO. RECOLECCION DE MUESTRAS DE SANGRE Para una gran cantidad de estudios que requieren muestras sanguneas, en algunos casos se debe conservar condiciones de ayuno, el cual puede prolongarse como mnimo seis horas y en ocasiones durante doce horas. En cualquiera de los casos, deben seguirse las siguientes indicaciones generales, a saber: La sangre debe recolectarse en tubos de vidrio o plstico estriles (preferiblemente tubos al vaco). En caso de recolectar la sangre con jeringa y agujas estriles, deben llenarse los tubos con precisin y agilidad, evitando en todo momento realizar procedimientos bruscos que puedan producir rompimiento de las clulas sanguneas (hemlisis). En otro tipo de estudios, la sangre no se deposita en tubos, sino en otro tipo de recipientes (Frascos de hemocultivo). Al recolectar la sangre, debe permitirse que se coagule, si es el caso, o someter los tubos con la muestra a ciertas maniobras recomendadas para evitar su coagulacin. En otras ocasiones, tan solo se colocan unas pequeas gotas de sangre en lminas portaobjetos de vidrio, (extendidos de sangre perifrica), en capilares de vidrio o en placas de vidrio o plstico de origen comercial para la realizacin de algunos estudios. Seleccin del sitio de puncin Asegrese que el paciente se ubique en una posicin segura y cmoda. Nunca se practica una puncin sangunea en un paciente que se encuentre de pie (La posicin de pie es inestable y en caso que el paciente pierda el conocimiento o se desmaye, ser mas difcil evitar que se lesione). No se elige una extremidad en donde est colocada algn tipo de venoclisis. Inspecciones la vena que se va a puncionar. Coloque el torniquete con suficiente tensin. No se exceda (Un torniquete muy apretado produce hemlisis, colapso venoso, dolor, etc.) Si la vena no es muy visible ni palpable, realice un suave masaje en el antebrazo (si es el caso), con movimientos desde la mueca hacia el codo. Observe siempre las dos extremidades superiores (brazos), para elegir el mejor sitio de puncin. Al finalizar el procedimiento, indquele al paciente que debe hacer presin en el sitio punzado por lo menos durante cinco minutos. Coloque finalmente una banda adhesiva sobre la herida de la puncin. Si el sangrado no se detiene, aplique presin constante sobre la herida durante 10 minutos ms. Si el problema an no se soluciona, comunquese con sus superior inmediato o directamente con el medico tratante. Deposite y destruya todo el material desechable en los recipientes diseados para este propsito.

Asegrese de que los recipientes que contengan las muestras del paciente estn debidamente rotulados, marcados o identificados antes de atender a un nuevo paciente o realizar cualquier tarea.

CUADRO HEMTICO Es uno de los exmenes de laboratorio que ms se solicitan, comprende numerosas pruebas o parmetros, los cuales proporcionan individualmente o en conjunto un resultado de enorme valor para numerosas entidades clnicas. VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN GLOBULAR (VSG): La diferencia de gravedad especifica entre eritrocitos y plasma ocasiona la precipitacin de los primeros en el fondo del tubo que contiene sangre anticoagulada con una velocidad que es medida en determinada cantidad de tiempo. Se llena el tubo de Wintrobe con una pipeta Pasteur y se coloca en un soporte de manera que quede completamente recto, se observa despus de una hora que tanto han descendido los glbulos rojos, midiendo en esa distancia en la escala del tubo de Wintrobe cuya marca superior sea cero. Valores Normales para la velocidad de sedimentacin globular (VSG): Varan de acuerdo con la edad, el gnero y el mtodo. - Hombres menores de 50 aos: 0 - 15 mm/hora - Hombres mayores de 50 aos: 0 - 20 mm/hora -Mujeres menores de 50 aos: 0 - 25 mm/hora - Mujeres mayores de 50 aos: 0 - 30 mm/hora La eritrosedimentacin se encuentra elevada en infecciones, enfermedades inflamatorias, autoinmunes y malignas, especialmente las discrasias de clulas plasmticas. La eritrosedimentacin es particularmente til en las enfermedades reumatolgicas, especialmente en artritis reumatoide, en la evaluacin de artritis temporal y en la polimialgia reumtica, pueden haber variaciones fisiolgicas que se deben tener en cuenta ya que la VSG se puede acelerar en caso de nios y ancianos, en la mujer se aumenta antes y despus de la menstruacin, durante el embarazo y puede estar elevada uno o dos meses despus del parto, la toma de anticonceptivos orales puede tambin acelerar la velocidad, entre otras circunstancias o patologas. HEMATOCRITO Este mide el tanto por ciento del volumen total de una muestra de sangre venosa ocupado por los hemates o expresado de otra manera es la relacin entre el volumen de eritrocitos y el de la sangre total. Se expresa como porcentaje (%). Valores Normales: Al nacer: 44 - 62 % Nios de 1 ao: 35 % +/- 5 Nios 10 aos: 37 % +/- 5 Hombres: 40 - 54 % Mujeres: 36 - 47 %

Se aumenta en: Quemaduras, infecciones, intoxicaciones, policitemia, insuficiencia respiratoria crnica, entre otras circunstancias o patologas. Disminuye en: Concentracin baja del volumen globular, anemias crnicas, cirrosis, insuficiencias cardacas, ciertas hiperproteinemias, entre otras circunstancias o patologas.

HEMOGLOBINA: Es el componente principal de los glbulos rojos, es una protena conjugada que sirve de vehculo para el transporte de O2 y CO2. Se aumenta en hemoconcentracin, en estados de shock, quemaduras, por diarrea, vomito y poliglobulina primaria entre otras circunstancias o patologas. Se disminuye en casos de anemia entre otras circunstancias o patologas. Valores Normales: Neonatos, sangre de cordn: 13.6 - 19.6 g/dl Nios de 1 ao: 11.2 g/dl Nios de 10 aos: 12.9 g/dl Hombres: 13.5 - 18.0 g/dl Mujeres: 12.0 - 16.5 g/dl

RECUENTO TOTAL DE LEUCOCITOS: Valores Normales: 5.000 - 10.000 / mm3 Los leucocitos se dividen en cinco grupos: NEUTROFILOS: 60 70 % LINFOCITOS: 30 40% MONOCITOS: 0-5 % EOSINOFILOS: 0 5 % BASOFILOS: 0 1 % Cifras mayores de 10.000 indican leucocitosis, aunque algunas personas normales pueden tener cifras superiores. El ejercicio produce leucocitosis fisiolgicas, a veces de consideracin, de ah, que el recuento de leucocitos debe hacerse en condiciones bsales. Hay leucopenia cuando el recuento es inferior a 5.000 por mm3. Una recomendacin til en la valoracin del recuento de leucocitos en que una sola cifra puede ser equvoca y en caso de duda debe hacerse por lo menos dos veces. RECUENTO DIFERENCIAL Y FROTIS DE SANGRE PERIFERICA: Es una de las partes ms importantes del cuadro hemtico, se coloca una gota de sangre anticoagulada en una lmina nueva o en su defecto lminas completamente desengrasadas y con una lmina (Extensora) en un ngulo de 30 - 45 grados sobre la primera de forma tal que la sangre se extienda por capilaridad a lo largo del ngulo agudo formado por dos lminas y se deja secar. El extendido de sangre se hace mximo una hora despus de que se tome la muestra. Tcnica de Coloracin: Cubrir la lmina con Wright por cinco minutos. Se le agrega una solucin tampn (Buffer) y se deja por dos minutos. Se lava la lmina con agua de chorro. Nota: Tener en cuenta que cada vez que se empiece un colorante nuevo se debe estandarizar el tiempo de coloracin, y filtrar los colorantes cada vez que sea necesario. Este mtodo se realizar para confirmar los resultados del equipo automatizado. EN EL REA DE BIOQUMICA CLNICA, SE UTILIZA EL EQUIPO DIMENSION RXL. En laboratorio clnico del HGR 25 el sistema de qumica integrado Dimensin RxL combina los anlisis integrales de qumica y de muestras urgentes (STAT) en un slo sistema compacto y fcil de usar, sistema integrado de qumica e inmunoanlisis fue desarrollado para una productividad mxima y es tecnolgicamente avanzado, para el diagnstico clnico, adems

sus caractersticas para ahorrar tiempo, incluye procedimientos automatizados de control de calidad, procesos giles de operacin diaria y mejores capacidades de manejo de datos. Es un sistema analizador automtico, multiparamtrico, discreto y selectivo para qumica clnica, determinaciones inmunolgicas, electrolitos, dosaje de antibiticos, cardiotnicos y anticonvulsivantes. Velocidad de trabajo: 540 tests por hora. Posee lector de cdigo de barras tanto para la identificacin de las muestras, como para el control de los "flex" de reactivos. Permite trabajar con hasta 3 reactivos diferentes por test y la lectura se produce en la misma celda de reaccin a una temperatura uniforme de 37C. Los reactivos estn contenidos en un cartucho de diseo exclusivo, denominado "flex", que permite la utilizacin progresiva de los reactivos en porciones listas para su uso. En el caso de los reactivos que requieren mezcla o reconstitucin, el instrumento posee un sistema de dilucin a bordo, mediante un brazo robtico dedicado, que evita la intervencin del operador en estos pasos crticos, y que tambin los prepara a medida que son necesarios, en pequeas porciones. Se puede utilizar como muestra suero, plasma, orina o LCR, con dilucin y/o repeticin automticas. Seleccin de test: 1) Va teclado 2) Va Sistema I/F desde Host Central 3) Va Cdigo de barras (muestra) (opcin PSID) PARAMETROS DE REFERENCIA EN SANGRE DE QUIMICA SANGUINEA. Nmero Prueba Valores normales referencia en Laboratorio Clnico HGR 25. 70 110 mg/dl 14.9 - 38.5 mg/dl 7 - 18 mg/dl 0.6 - 1.3 mg/dl 2.6 - 7.2 mg/dl 0 a 200 / (