FUNDACIÓN HEMOCENTRO BUENOS AIRES … y... · 2016-05-30 · SEROLOGICAS Y MOLECULARES EN BANCO DE...
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ACTUALIZACIONES EN PRUEBAS SEROLOGICAS Y MOLECULARES EN BANCO
DE SANGRE
FUNDACIÓN HEMOCENTRO BUENOS AIRES
Jorge Rey Jefe Div. ETT Hospital de Clínicas
Universidad de Buenos Aires
DE SANGRE
IMPLEMENTACIÓN DENAT EN ARGENTINA
CARACTERÍSTICAS DE LA DONACIÓN EN ARGENTINA
Nº DE DONACIONES ANUALES COMUNICADAS AL ANLIS
400.000
Nº DE DONACIONES ESTIMADO POR CONSUMO DE BOLSAS DE
1.000.000 - 1.500.000CONSUMO DE BOLSAS DE EXTRACCIÓN
POR CIENTO DE DONACIONES REPETITIVAS
< del 25%
PRUEBAS PARA LA SELECCIÓN DE DONANTES EN ARGENTINA
MARCADOR
HBsAg
anti HBc
anti HCV
anti HIV1/2anti HIV1/2
Combo HIV/Ag p24
anti HTLV
anti TC HAI
anti TC EIE
Anti-Cardiolipina/anti TP
anti Bruc.
PREVALENCIA EN DONANTES DE SANGRE
MARCADOR A (%) B (%) C (%)
Anti HIV 0,19 0,23
P24 0,06 ----
Combo HIV 0,51
A: ANLIS, Centro Nacional de Redes de Laboratorio, 2007: www.anlis.gov.ar/CNRL/Principal.htm
B: Proyecto Programa Nacional de Control de Hepatitis Virales. Epidemiología Informe N°8, 2008: www.hepatitisviral.com.ar/pdf/informeepi8.pdf
C: Hospital de Clínicas. Universidad de Buenos Aires. Comunicación personal
Combo HIV 0,51
Anti HCV 0,75 0,71 0.28
HBsAg 0,88 0,23 0.10
Anti HBc 3,17 2,31 1.43
CASOS DE HIV ADQUIRIDOS POR TRANSFUSIÓN EN ARGENTINA
2000 2001 2002 2003 2004 2005 Total
Transfusión 15 22 15 18 30 7 107
TOTAL* 1449 3137 2642 3311 3870 2066 16475
Fuente: Dirección de Sida y ETS. Ministerio de Salud de la Nación Argentina: Boletín epidemiológico diciembre de 2005; www.msal.gov.ar/sida/vigilancia.asp
% 1,04 0,70 0,57 0,54 0,78 0,34 0,65
*Número total de casos de HIV en Argentina
CASOS TRANSFUSIONALES DE HIV
0,501,001,50
% T
ota
l ca
so
s
co
mu
nic
ad
os
PORCENTUALES
0,000,50
2000 2001 2002 2003 2004 2005
AÑO
% T
ota
l ca
so
s
co
mu
nic
ad
os
En Argentina la industria realiza PCR desde 1995. Desde el año 2004 se
comenzó a realizar NAT en Bancos de Sangre. En la actualidad hay 12 Centros que realizan NAT por distintos métodos.
NAT - INTRODUCCION
que realizan NAT por distintos métodos. En nuestro país no existe obligatoriedad
para la realización de NAT y por lo tanto se crean desigualdades en el suministro de
sangre segura.
CÁLCULO DEL RIESGO RESIDUAL
(casos x 106)(casos x 106)
RRT = T i
365 d/año
Vs(casos x 106)
10/06/09
(casos por 105pac.)(casos por 105pac.)
Donde: Ti =tasa de incidencia=Incidencia
Dadores/año(casos por 105pac.)
WPRWP
Rendimiento = RR x
Cálculo del rendimiento
10/06/09
WPRR= RIESGO RELATIVO
WPR:REDUCCIÓN DEL PERÍODO DE VENTANA
/WP:PERÍODO DE VENTANA
Incidencia = 3/105pa Incidencia = 30/105pa
Sensibilidad Analitica50% LOD
(copias/mL)
Numero de muestras en el pool
Periodo de ventana
infecciosoRR en 106
Donaciones
Rendimiento en 106
DonacionesRR en 106
Donaciones
Rendimiento en 106
Donaciones
HBsAg (no NAT)
individual 38,3 3,15 0 31,5 0
EJEMPLO
NAT)
20 individual 22,0 1,81,4
(1:710.000)18
14 (1:71.000)
32016-
donaciones
32,2 2,650,5
(1:2.000.000)26,5
5 (1:200.000)
Adaptacion de
Busch MP et al. Transfusion (2005), 45(2), 254-264
Kleinman S & Busch MP J Clin Vir (2006), 36(1) S23-S29
SUPONGAMOS:
Incidencia=prevalencia=0.1%=100x10E-5
Período de Ventana=21 dí
RR= 100x10E-5x21/365=57.5x10E-6RR= 100x10E-5x21/365=57.5x10E-6
1 caso / 17.391
Si Incidencia=0.2% 1 caso / 8695
ANTECEDENTES HISTÓRICOS Y LEGALES DE CASOS DE TRANSMISIÓN
AÑO 1995:� 2 PACIENTES HIV POST TRANSFUSIONAL (detectados
por SC y clínica)� TRANSMISION POR CGR. NO SE TRANSFUNDIERON
CP NI PFC� RESULTADOS DE DONANTES REPETIDOS EN PFC: p24
y anti HIV 3a Gen NEG (por ensayos de diferentes fabricantes)
� ESTUDIOS BM EN PFC: RNA HIV REACTIVOS (10.000 Y 8.000 cop/ml)
� JUICIOS. AMBOS FALLARON A FAVOR POR POSIBILIDADES METODOLOGICAS EXISTENTES
CAUSA N°16.015/96 A. H. C. JUZG. N°2 SECR. N°3
“…su reglamentación no impongan un determinado mecanismo de prueba –aunque sí, como señalé, obligan a detectar la sangre infectada para evitar la transmisión del virus-; lo importante es que había pruebas más eficientes a los fines perseguidos, conocidas por la comunidad científica. Además, como ya sentenció este fuero, no es óbice para imputar responsabilidad que la conducta médica se es óbice para imputar responsabilidad que la conducta médica se ajuste a las prescripciones legales o reglamentarias, pues el saber y la prudencia médicas no surgen de los reglamentos administrativos. Imprudencia no necesariamente es sinónimo de infracción Reglamentaria (conf. Sala III, 2/06/2005, “Chaves c/ Navarro y otros s/responsabilidad médica”)…”
NAT para HIV y HCV en Hemocentros Argentinos
Institución MarcaDS/ pool
Sens HCV UI/ml
Sens HIV
Cp/mlInicio N
Casos NAT+/Serol-
FUHESA NucliSens48 NE NE 2004 ? 0
HemocentroBuenos Aires
NucliSens 48/96 NE NE 2004 48.944 0
CDCBios NucliSens96/48 NE NE 2004 80.000 0
CIBIC Ampliscreen 6 21 50 2005 9.726 0
Congreso AAHI:2008
NAT para HIV y HCV en Hemocentros Argentinos
Institución MarcaDS/ pool
Sens HCV UI/ml
Sens HIV
Cp/mlInicio N
Casos NAT+/Serol-
Hospital Italiano PCR
“in house”1 NE NE 2005 5.500 1Italiano
Rosario“in house”
1 NE NE 2005 5.500 1
Fundación BS Cba
Ampliscreen 6 NE NE 2006 6.388 0
Hospital Garrahan
Ampliscreen 5 23 86 2007 4.469 0
Congreso AAHI:2008
EXPERIENCIA DEL HOSPITAL DE CLINICAS – UNIVERSIDAD DE BUENOS AIRES
IMPLEMENTACIÓN EN EL ÁMBITO DE LA UNIVERSIDAD DE BUENOS AIRES (UBA)
Se realiza mediante un protocolo de investigación aprobado por el Comité de
Ética del Hospital de Clínicas y el Consejo Ética del Hospital de Clínicas y el Consejo Superior de la UBA y presentado ante la
Administración Nacional de Medicamentos, Alimentos Tecnología
Médica (ANMAT)
PROTOCOLO DE INVESTIGACIÓN
REACTIVO COMERCIAL: PROCLEIX ULTRIOENSAYO MULTIPLEX (HIV,HCV,HBV)
Características:
ENSAYO MULTIPLEX (HIV,HCV,HBV)AMPLIFICACIÓN ISOTÉRMICA: TMATESTEO INDIVIDUALEN PARALELO CON LA SEROLOGÍA
RESULTADOS OBTENIDOS
Total de muestras:� 5868 donantes
Donantes BM reactiva:� 6 HCV reactivos � 6 HCV reactivos � 6 HIV reactivos � 3 HBV reactivos� 1 No estudiado (muestra insuficiente)
MARCADORNúmero de muestras
HBsAg 2
anti HBc<101 23
anti HBc>101 54
DONANTES EIE + / NAT -
anti HCV<32 7
anti HCV>32 1
HIV COMBO 13
COMBO + aHIV+ WB- 1
aHIV+ WB- 7
1. CO/S
2. S/CO
AÑO DADOR SEROLOGIA REACTIVA DISCRIMINATORIO
2007 3369 Anti HCV /anti HBcUltrio reactivo,
discriminatorio no realizado
2007 3559 Anti HCVUltrio reactivo,
discriminatorio no realizado
2007 3647 HBsAg/anti HBcUltrio reactivo,
DONANTES EIE + / NAT +
2007 3647 HBsAg/anti HBcdiscriminatorio no realizado
2007 3891 HBsAg/anti HBcUltrio reactivo,
discriminatorio no realizado
2007 4118 Anti HIV/Combo HIVUltrio reactivo,
discriminatorio no realizado
2007 4247 Anti HIV/Combo HIVUltrio reactivo,
discriminatorio no realizado
2007 4789 Anti HIV/Combo HIV/anti HBcUltrio reactivo,
discriminatorio no realizado
2007 5537 Anti HCVUltrio reactivo,
discriminatorio no realizado
AÑO DADOR SEROLOGIA REACTIVA DISCRIMINATORIO
2007 5638 Anti HIV/Combo HIV/anti HBc HIV
2007 5830 HBsAg HBV
2007 6264 Anti HCV HCV
DONANTES EIE + / NAT +
2008 1575 Anti HIV/Combo HIV HIV
2008 1680 Anti HCV HCV
2008 3578 HBsAg / anti HBc HBV
2008 3590 Anti HCV HCV
Anti-HIV 3rd generation Axsym : No ReactivoAnti-HIV/p24Ag Combo test Murex: No Reactivo
Procleix Ultrio : Reactivo RP 17.0Procleix Ultrio Discriminatorio: Reactivo para RNA de HIV,
No Reactivo para HCV/HBV
DETECCIÓN DEL PRIMER PERÍODO DE VENTANA
Donación de sangre: 03/06/08Resultados:
Anti-HCV Murex: No ReactivoHBsAg Murex: No Reactivo
anti-HBc AxSym Abbott: No Reactivoanti HTLV I/II: No Reactivo
HAI Chagas Polychaco: No ReactivoEIE Chagas Wiener: No Reactivo
Sifilis USR Wiener: No ReactivoBrucelosis (Aglutinación en placa) Wiener: No Reactivo
Recitación: 23/06/08
Anti-HIV 3rd generation Axsym : Reactivo RP 10Anti-HIV/p24Ag Combo test Murex: Reactivo RP7,0
Western Blott: Indeterminado (reactivo débil para gp 160)Procleix Ultrio : Reactivo RP 17.0
Procleix Ultrio Discriminatorio: Reactivo para RNA de HIV, No Reactivo para HCV/HBV
Resultados:
DETECCIÓN DEL PRIMER PERÍODO DE VENTANA
No Reactivo para HCV/HBV
Anti-HCV Murex: No ReactivoHBsAg Murex: No Reactivo
anti-HBc AxSym Abbott: No Reactivoanti HTLV I/II: No Reactivo
HAI Chagas Polychaco: No ReactivoEIE Chagas Wiener: No Reactivo
Sifilis USR Wiener: No ReactivoBrucelosis (Aglutinación en placa) Wiener: No Reactivo
Genotipificación:Summary Data:
EIE- / NAT +
1 Resultado obtenido usando Bayer Versant. Usando NASBA Real Time: 105 cp/ml. Usando Cobas Ampliprep/Cobas Taqman: 99 cp/ml
FECHA MUESTRA RNA HIV
03/06/08 3517 91 cp/ml1
Summary Data:Sequence includes PR: codons 1-99Sequence includes RT: codons 1-400There are no insertions or deletionsSubtype and % similarity to closest reference isolate:
PR: B (93,9%)RT: B (95,2%)
“Detection of HIV-1 infection in blood donorsduring the immunological window period usingthe nucleic acid-amplification technology”
P. S. P. Scuracchio,* M. C. C. Poli,* M. M. M. Lemos,* A. G. Oliveira Filho,* N. A. Salles,†D. A. F. Chamone,†‡ M. Magri,§ N. J. F. Cavalcante§ & R. Collela* *Cavalcante§ & R. Collela* *
Banco de Sangue de Sa˜o Paulo,†Fundacxa˜o Pro´-sangue/Hemocentro de Sa˜o Paulo, ‡Department of Hematology and Hemotherapy, Universidade de Sa˜o Paulo, and §Reference and Training Center–AIDS, Sa˜o Paulo, Brazil
Received 1 November 2006; accepted for publication 2 February 2007
Transfusion Medicine, 2007, 17, 200–204
� El número de NAT + / EIA negativo fue mayor que el estimado:– 1,1 casos / 100.000 CI 95% ( 7,1-14,5) estimado– 4,18 casos / 100.000 (encontrado)
� Aumento del riesgo puede ser explicado por “dadores buscadores de pruebas”, puede ser la “dadores buscadores de pruebas”, puede ser la explicación para este aumento del riesgo calculado.
� Ambos casos ocurrieron antes de los sintomas de fase aguda del HIV.
Salles N., FSP, Congreso argentino de hemoterapia. 2007
Infección oculta por Virus Hepatitis B (HBV) en hemodonantes: detección y caracterización genómica parcial.
Trinks, J1; Gambino, G2; Toledano, A2; Bobillo, MC3; Fernández Toscano, M2; Cuestas, ML1; Minassian, ML1; Rivero, CW1; Corach, D3; Mathet, VL1, Rey, J2; Oubiña, JR1.
•Población:• 110 muestras de donantes de sangre, HBsAg NR, anti-HBc R•71 hombres, 39 mujeres•71 hombres, 39 mujeres•Mediana de edad: 46 años•Período: Mayo del 2006. Marzo del 2008
Ensayos utilizados:•Procleix Ultrio en muestra individual, ensayo discriminatorio•Amplificación de la región S por PCR anidada (Zheng y col W Jgastroenterol 2004.)
•Amplificación del genoma completo ((Sugauchi y col J of Gen Virol 2001)
•Amplificación de la región pre C (Birkenmeyer y col J Virol Met |994)
•Secuenciación nucleotídica Big Dye termination Chemistry, Applied Biosystem•Cuantificación DNA HBV , Roche Amplicor Monitor
Resultados:
• Procleix Ultrio: 3 muestras reactivas (2,7%)Ensayo discriminatorio: 2 muestras HBV DNA reactivas (1,82% IC 95%; 0,0%-4,31%).
• Cuantificación viral: Inferior a 50 copias/ml• Otras amplificaciones génicas: bandas del tamaño • Otras amplificaciones génicas: bandas del tamaño
esperado para las regiones genómicas del HBV comprendidas entre las posiciones 1736 a 2471.
• Secuenciación: El análisis filogenético de la secuencia nucleotídica de la región Pre-core/corede una de las muestras reveló que ésta pertenece al genotipo E, oriundo de Africa y excepcional en nuestra población.
CONCLUSIONES:
1. Se documentó la presencia de infección oculta por HBV entre hemodonantes con anticuerpos anti-HBc (1,8% de la población estudiada).
2. La sensibilidad de la metodología empleada para detectar genomas virales es superior a la del enzimoinmunoensayo para pesquisar el HBsAg en la detección de portadores del HBV detección de portadores del HBV
3. El genotipo E exhibe la mayor divergencia aminoacídicaentre los genotipos del HBV a nivel del determinante “a” del HBsAg, -lo cual puede afectar su detección mediante equipos comerciales que utilizan anticuerpos monoclonales-
4. La circulación y eventual propagación del genotipo E requeriría replanteos en los planes de inmunización
Al 2010 existen por lo menos 10 centros que procesan muestras de donantes por biología molecular para sus muestras y
muestras de derivación. Estos centros se encuentran ubicados en Neuquén,
Córdoba, Rosario y Gran Buenos Aires. Córdoba, Rosario y Gran Buenos Aires. No existe política oficial acerca de la
obligatoriedad de la implementación. En aproximadamente 100.000 muestras,
utilizando single test o minipool, se han comunicado 6 períodos de ventana: 3 para HIV, 3 para HBV, y 1 para HCV.
Muchas gracias!!!!!
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