Enfermedades causadas por enterobacterias.pdf
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06/12/2011
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ETA causadas por Enterobacterias
ENTEROBACTERIAS
Familia Enterobacteriacea
Cocobacilos o bacilos gramnegativos
No esporoformadores
Anaerobios facultativos.
Fermentadores de glucosa, con formacin de cido y gas.
Oxidasa negativos (variable)
Reducen nitratos a nitritos.
Pueden aislarse del intestino del hombre y de otros animales
Marcela Martnez M.Sc.
Enterobacterias: Clasificacin
Marcela Martnez M.Sc.
Salmonella
Segn la clasificacin actual existen dos especies:
S. bongori
S. enterica.
La especie S.enterica es la que se ha encontrado en los alimentos
y en el agua y est subdividida en
7 subespecies:
subesp. enterica (I)
subesp. salamae (II)
subesp. arizonae (IIIa)
subesp. diarizonae (IIIb)
subesp. houtenae (IV)
subesp. indica (VI)
Marcela Martnez M.Sc.
Patogenia de Salmonella spp.
Ingestin alimentos o bebidas
contaminados.
Multiplicacin en intestino delgado.
Inmunodepresin -invasin.
Citotoxinas y enterotoxinas.
Fiebre tifoidea (S. typhi)Marcela Martnez M.Sc.
Los sndromes producidos por Salmonella son fundamentalmente:
Grastroenteritis por Salmonella
Fiebre entrica
Bacteriemia
Infecciones focales
Secuelas
Marcela Martnez M.Sc.
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Fiebre entrica
Producida por
S. tiphy: fiebre tifoidea
S. paratiphy: fiebre paratifoidea
La dosis infectiva es muy baja: unos 10 bacterias por gramo.
Son siempre de origen humano.
Marcela Martnez M.Sc.
Gastroenteritis por Salmonella
Es causado por la ingestin de alimentos que contienen Salmonella sin especificar el hospedador.
Los sntomas aparecen en 12 o 14 horas
Sntomas: nauseas, vmitos, dolor abdominal, cefalgia, escalofros y diarrea.
Dosis infecciosa: 107 a 109
bacterias por gramo. Marcela Martnez M.Sc.
Hbitat de Salmonella
El principal hbitat de Salmonella es el tracto intestinal de humanos y animales tales como aves, reptiles, animales de granja.
Alimentos de origen animal y los que estn expuestos a contaminacin por aguas residuales.
Marcela Martnez M.Sc.
Salmonelosis Alimentos implicados
Hay dos fuentes principales de Salmonellaen alimentos:
Materias primas Carne
Leche
Aves de corral
Huevos
Manipuladores portadores Manos contaminadas
fecalmente.
Marcela Martnez M.Sc.
Factores que hacen posible la aparicin del caso o brote:
Tratamiento trmico insuficiente.
Condiciones de almacenamiento pos-tratamiento inadecuadas:
Temperatura inadecuada
Tiempo excesivo
Contaminacin pos-tratamiento trmico
Marcela Martnez M.Sc.
Contaminacin en carnes Animales con septicemia
producida por Salmonella
Desde el contenido intestinal y desde las heces que se adhieren en el pelo, en la piel y en las patas de los animales cuando llegan para el sacrificio.
Operaciones de escaldado y pelado.
Contaminacin cruzada desde canales contaminadas a utensilios, superficies de trabajo, y desde las manos de operarios que manipulan la carne, a las piezas de carne y a la carne picada. Marcela Martnez M.Sc.
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Contaminacin de canales de aves
Desde la superficie del TGI
Desde la materia fecal existen en las patas y en las plumas.
Operaciones decisivas: desplumado, evisceracin y enfriamiento de las canales.
Contaminacin cruzada: manos de los operarios, material y utensilios durante el troceado y la preparacin.
Marcela Martnez M.Sc.
Contaminacin de huevos
Por va transovrica en las ponedoras (gallinas, patas y pavas) infectadas.
Penetracin de la cscara y de las membranas.
La superficie de la cscara se puede contaminar durante su transito a travs de la cloaca o cuando est expuesta a un ambiente contaminado con materia fecal.
Las salmonelas pueden penetrar el huevo cuando se enfra o se lava inadecuadamente.
Las salmonelas existentes en la superficie contaminan el agua de lavado, las superficies de contacto y las manos de los manipuladores.
Marcela Martnez M.Sc.
Salmonella: Factores de crecimiento y supervivencia
El crecimiento se reduce a T inferiores a 15C y se inhibe a T inferiores a 7C. La T mxima de crecimiento es de 49C.
La Aw mnima es 0,94
El pH mnimo es 3,8
Susceptible a irradiacin, oxido de etileno y desinfectantes comerciales.
No forman esporas son capaces de sobrevivir por mucho tiempo en los alimentos y en otros sustratos: Judas verdes, remolacha, col,
zanahoria, apio, pepinos, lechuga, pimientos, rbanos, espinacas y tomates
Superficies tales como la cermica, el vidrio y el acero inoxidable y en la piel humana,
Marcela Martnez M.Sc.
Procedimientos de control de Salmonella
1. Operacin para garantizar la destruccin de las salmonelas en los alimentos contaminados, especialmente en los productos crudos de origen animal.
2. Prevencin de la contaminacin de los alimentos listos para comer.
3. Almacenamiento de los alimentos a temperaturas bajas o elevadas que impidan el crecimiento de las salmonelas.
Marcela Martnez M.Sc.
INVESTIGACIN DE Salmonella EN ALIMENTOS
1. Pre-Enriquecimiento en medio lquido no selectivo Agua de peptona tamponada
Caldo nutritivo
Caldo lactosado
2. Enriquecimiento en medios lquidos selectivos Caldo Tetrationato (menos usado Caldo selenito)
Caldo Rappaport
Caldo Selenito cistina
3. Aislamiento en placas de agares selectivos Agar sulfito bismuto (BS)
Agar Xilosa Lisina Desoxicolato (XLD)
Agar Hektoen (HE)
Agar Salmonella - Shigella
4. Identificacin bioqumica Agar TSI
Medio LIA (K/K)
Urea Marcela Martnez M.Sc.
Preenriquecimiento no selectivo
Se incuban 25g
de la muestra en
225ml de pre-
enriquecimiento
por 18-24 h a
35-37 C
Marcela Martnez M.Sc.
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Enriquecimiento selectivo
Se pasa 1ml del caldo
de pre-enriquecimiento
a un tubo con 10ml de
caldo de
enriquecimiento
selectivo, y se incuba a
43 C en bao Mara por
24h
Marcela Martnez M.Sc.
Aislamiento en medios slidos selectivos y diferenciales para Salmonella
Marcela Martnez M.Sc.
Agar Salmonella-Shigella
Observe las colonias lactosa negativa y
sulfuro + tpicas de Salmonella (Negras
con borde transparente)
Marcela Martnez M.Sc.
Agar XLD
Obsrvese las colonias negras
sulfuro +. Marcela Martnez M.Sc.
Agar Bismuto Sulfito
Observe las colonias negras
tpicas de Salmonella
Marcela Martnez M.Sc.
Agar Hektoen
Observe la colonia negra
verdosa tpica de Salmonella
Marcela Martnez M.Sc.
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Pruebas bioqumicas para Salmonella
TSI
K-ACitrato (-)LIA
(-)Urea (-) SIM
Marcela Martnez M.Sc.
Pruebas bioqumicas para Salmonella spp.
Marcela Martnez M.Sc.
Shigella spp.
Bacilo Gram negativo
Estrechamente relacionado con E. coli por sus propiedades bioqumicas, serolgicas y por similitudes genticas.
No fermentar la lactosa, ser inmvil, no produce lisina decarboxilasa y raramente produce gas a partir de hidratos de carbono
Marcela Martnez M.Sc.
Shigella spp.
Cuatro especies:
S. dysenteriae (es toxignica produce la toxina de Shiga y la ms virulenta)
S. flexneri (es la especie ms frecuente)
S.boydii
S. sonnei
Marcela Martnez M.Sc.
Epidemiologa: Shigella
Slo infecta al hombre
Nios de pases subdesarrollados
Dosis infectante de 200 bacterias por gramo
Hacinamiento, moscas y cucarachas
Transmisin oral-fecal
Marcela Martnez M.Sc.
Shigella - Patogenia
Transmisin persona-persona va fecal-oral
Invasin y multiplicacin en el
colon
Respuesta inflamatoria secundaria
S. dysenteriae: toxina de Shiga
Marcela Martnez M.Sc.
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Disentera bacilar
Diarrea caracterizada por eliminacin frecuente de heces conteniendo pus, sangre y/o moco.
Retortijones, fiebre alta, prdida de apetito, nuseas, vmito
Marcela Martnez M.Sc.
Distribucin en la naturaleza
Agua inadecuadamente tratada.
Hortalizas crudas y las frutas, por ejemplo, la lechuga y las fresas
Moscas contaminadas por contacto con aguas residuales o con heces
Marcela Martnez M.Sc.
Supervivencia en alimentos
Sobreviven en los alimentos a -20C, a temperaturas de nevera, a temperaturas ambientales durante tiempos prolongados e incluso a 80C durante unos pocos segundos.
En los alimentos con pH neutro, tales como la mantequilla y la margarina, huevos, en la leche, en los camarones y en la harina .
Marcela Martnez M.Sc.
Alimentos implicados en brotes de shigelosis
Leche
Ensalada de patatas
Ensalada de atn
Pur de patatas
Ensalada de pavo
Leche agria
Ensalada aderezada
Queso blanco
Budn de chocolate
Manzanas estofadas
Ensalada de camarones
Arroz cocido
Ensalada de hortalizas Marcela Martnez M.Sc.
Shigella spp.
Mtodos de presencia/ausencia
1. Enriquecimiento en medios lquidos selectivos Caldo selenito
Caldo para Gram positivos
Caldo EE de Mossel
Caldo Shigella
2. Aislamiento en placas de agares selectivos MacConkey: lactosa negativo
Agar SS: Salmonella-shigella agar
Agar XLD: Xilosa-lisina-dexosicolato
Agar Hektoen
Marcela Martnez M.Sc.
Shigella spp.
Mtodos de presencia/ausencia
3. Identificacin bioqumica Fermentacion de glucosa, sacarosa y lactosa
Produccin de cido sulfhdrico
Descaboxilacin de la lisina
Produccin de la urea
bateras comerciales miniaturizadas (por ej., Micro ID, Minitek, API 20E, Enterotube II, Vitek)
4. Identificacin serolgica
Marcela Martnez M.Sc.
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Crecimiento de Shigella en SS
Marcela Martnez M.Sc.
Pruebas bioqumicas Shigella
Marcela Martnez M.Sc.
Shigella spp.
Mtodos especiales de Identificacin Sistema miniauturizados: Excelente identificacin
Medios cromognicos: Pocos
Serologa:
Primordial para su identificacin
Mtodos moleculares PCR
Factores de virulencia
ial, ipaH y otros relacionados a invasividad
Secuenciacin
Marcela Martnez M.Sc.
Bacilos Gram negativos
No esporulados
Anaerobio facultativos
Fermentadores
Mviles
Agente etiolgico de septicemia, infecciones del
tracto urinario, meningitis
neonatal y gastroenteritis
Escherichia coli
Marcela Martnez M.Sc.
Escherichia coli
ECET: enterotoxgenaECEP: enteropatgenaECEI: enteroinvasiva
ECEH: enterohemorrgicaECEA: enteroagregativaECDA: difusamente
adherenteMarcela Martnez M.Sc.
Escherichia coli
Enteroinvasiva
Contagio por alimentos contaminados...
La bacteria se adhiere, invade y destruye las
clulas epiteliales...
Causa diarreas con sangre (disentera) y
acuosas...
Enterotoxina codificada en un plasmidio...
Enterohemorrgica
Contagio por alimentos contaminados...
Baja dosis infectiva (
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Escherichia coli Enterotoxignica Contagio por alimentos o aguas
contaminadas...
Causa diarrea de viajero leves hasta coltis
hemorrgica...
Fimbrias denominadas Factores de
colonizacin (CFA) codificadas en un
plasmidio. CFAI y CFAII, se adhieren
especficamente al epitelio del intestino
delgado...
Toxinas STI y STII (termoestables; codificada
en un transposn) y LTI y LTII (termolbiles)...
STI. Estimula la salida de Cl- y/o inhibe
absorcin de NaCl. Diarrea acuosa.
STII. Se cree que estimulara la salida de
HCO3-. Diarrea acuosa.
LTI. Funcin homloga a la toxina del clera.
LTII. Rara en el humano.Marcela Martnez M.Sc.
Escherichia coli Enterotoxignica Contagio por alimentos o aguas
contaminadas...
Causa diarrea de viajero leves hasta coltis
hemorrgica...
Fimbrias denominadas Factores de
colonizacin (CFA) codificadas en un plasmidio.
CFAI y CFAII, se adhieren especficamente al
epitelio del intestino delgado...
Toxinas STI y STII (termoestables; codificada
en un transposn) y LTI y LTII (termolbiles)...
STI. Estimula la salida de Cl- y/o inhibe
absorcin de NaCl. Diarrea acuosa.
STII. Se cree que estimulara la salida de
HCO3-. Diarrea acuosa.
LTI. Funcin homloga a la toxina del clera.
LTII. Rara en el humano.Marcela Martnez M.Sc.
Aislamientos e identificacin de E. coli
Enriquecimiento No aplica
Aislamiento en medios selectivos
MacConkey
EMB
Identificacin bioqumica
Indol (+), Citrato (-), mucato (-)
Marcela Martnez M.Sc.
E. coli - Mac Conkey
Marcela Martnez M.Sc.
E. coli - EMB
Marcela Martnez M.Sc.
Escherichia coli
Mtodo de Recuento en placa
Marcela Martnez M.Sc.
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Principio
El medio TBX contiene un agente cromognico X -D-glucuronido, que detecta la actividad de la enzima -glucuronidasa (GUD), presente en la mayora (92 a 99 %) de las cepas de Escherichia coli (no detecta la E. coli 0157) AGAR TBX
Marcela Martnez M.Sc.
Enumeracin de Escherichia coli -glucuronidasa positivo
Medio de cultivoAgar TBX (Triptona-Bilis-X- -D-Glucuronido)
Temperatura de incubacin 44 1C
Tiempo de incubacin18-24 h. (Clulas estresadas: 4 h a 37C) No incubar ms de 24 h !!!
Placas seleccionadas para el recuento
150 colonias tpicas y 300 colonias totales
Colonias tpicas Azules
Ventajas
Medio autoclavable. Permite siembra en placa vertida y en superficie Rpido. No debe realizarse confirmacin bioqumica
Desventaja Medio costosoMarcela Martnez M.Sc.
Escherichia coli Mtodo NMP
Mineral-modified glutamate medium (Caldo)
37 1 C / 24 2 h
Acidificacin (coloracin amarilla)
Agar TBX (Triptona-Bilis-Glucuronido)
44 1 C / 20 a 24 h
Colonias Tpicas: azules
Calcular el NMP en funcin de los tubos que dan presencia de colonias tpicas en Agar TBX
Enriquecimiento
Marcela Martnez M.Sc.
FDA-BAM
Caldo LST 35 1 C / 24-48 2 h
Caldo LBVB 35 1 C / 24-48 2 h
Caldo EC 45,5 0,2 C / 24-48 2 h
Agar EMB 35 1 C / 18-24 h
PCA
Gram y Pruebas bioqumicas:
I M V i C y gas de lactosa (LST)
C
CF
E. coli
1 5 2 2 (das de incubacin)Marcela Martnez M.Sc.
Pruebas bioqumicas E. coli
Indol +TSI A-AGas +
Citrato
(-)Marcela Martnez M.Sc.
Yersinia
enterocoltica
Bacilos Gram negativos
no esporulados
anaerobio facultativos
fermentadores
inmviles
agente etiolgico de peste
bubnica (Y. pestis),
diarreas acuosas agudas
(otras especies)
Marcela Martnez M.Sc.
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Serotipos responsables de Yersiniosis humana
Solamente son patgenos determinados biotipos de Y. enterocolitica
Cuatro serotipos (0:3; 0:5,27; 0:8 y 0:9) son responsables de la mayora de los casos de yersiniosis humana.
Marcela Martnez M.Sc.
Yersiniosis humana
Se presenta muy comnmente en nios de menos de siete aos de edad.
Los sntomas consisten en dolor abdominal y diarrea acompaada de una fiebre ligera.
Se cree que los cerdos son el principal reservorio de bioserotipos patgenos para las personas
Marcela Martnez M.Sc.
Crecimiento de Yersinia enterocoltica
en alimentos
Crece Desde -1 C hasta +40C.
Crecimiento ptimo en torno a 29C.
Es termosensible.
Es un microorganismos psicrtrofo y como tal es capaz de crecer a temperaturas de refrigeracin.
Crece a un pH de 7-8
Marcela Martnez M.Sc.
Cepas ambientales
Suelo
Agua dulce
Tracto intestinal de muchos animales.
Alimentos entre los que se incluyen la leche y los productos lcteos, las carnes, especialmente la de cerdo, las canales de las aves de corral, el pescado y el marisco, las frutas y las hortalizas.
Marcela Martnez M.Sc.
Brotes de Yersiniosis producidos por alimentos
Son muy poco frecuentes
Los cerdos son portadores crnicos de los serotipos patgenos.
Casi todos los brotes producidos por alimentos en los que se identific un origen han sido atribuidos a la leche fresca o contaminada pos tratamiento trmico.
Marcela Martnez M.Sc.
Aislamiento e identificacin de Yersinia
Mtodos de presencia/ausencia
1. Pre-Enriquecimiento en medio lquido1. Incubacin prolongada (7 das) a 4C
2. Solucin salina tamponada con fosfato (PBS)
3. Caldo triptona y soja (TBS)
2. Aislamiento en agares selectivos1. Agar Cefsulodin-Irgasan-Novobiocina (CIN)
2. Agar Salmonella-Shigella Desoxicolato y
cloruro clcico (SSDC)
3. Identificacin con pruebas bioqumicas Agar Hierro Kliger
Urea positiva
4. Serotipado y biotipadoMarcela Martnez M.Sc.
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Marcela Martnez M.Sc.
La verdadera generosidad para
con el futuro consiste en
entregarlo todo al presente
Albert Camus
Marcela Martnez M.Sc.