Enfermedad de Chagas

Diagnóstico de Laboratorio

Dr. Guillermo G. NuñezInmunoserología y Autoinmunidad

ESTADIOS EVOLUTIVOST. cruzi

trypomastigote amastigote

epimastigote

Mecanismos de Infección

VECTORIAL

TRANSPLACENTARIA

TRANSFUSIONAL

TRANSPLANTES

Curso clínico

ETAPA AGUDA

Período de incubación: ~7 días Generalmente asintomática Primoinfección en niños de zonas endémicas

Forma sintomáticaSigno de RomañaFiebreHepato/esplenomegaliaEncefalitis

*Alta parasitemia

ETAPA LATENTE

*Período de 30-40 años*Equilibrio entre la patología parasitaria y la respuesta inmune*Asintomático

*Baja parasitemia

*Alta producción de Anticuerpos

DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO

Infección Aguda Infección Crónica

Inte

nsid

ad d

e re

spue

sta

clínica clínica

Anti-T.cruzi IgM

Anti-T.cruzi IgG

parasitemia

Período incubación

Infección 1-2 semanas 9-10 semanas

Infección Aguda Infección Crónicaclínica

Período incubación

Transmisión congénita

Transmisión vectorial

Infección

Inte

nsid

ad d

e re

spue

sta

TRATAMIENTO ETIOLOGICO

1-2 semanas 8-10 semanas >1 año 3-5 años

Anti-T.cruzi IgG

parasitemia

METODOS PARASITÓLOGICOS

Fase aguda -Reactivaciones

Xenodiagnóstico Microhematocrito

Hemocultivo

Strout

Tripomastigote sanguíneo –(May-Grünwald-Giemsa)

METODOS SEROLÓGICOS

HAI

•Antígenos solubles de membrana y citoplasmáticos

ELISA

•Antígenos recombinantes (SAPA)

IFI

•Epimastigotes enteros

Etapas latente y crónica – Screening bancos de sangre

IgGAM

Hemaglutinación Indirecta (HAI)

Sensibilidad analítica Económico

NO automatizable

IgG IgM

Sensibilidad analítica Económico

Automatizable Reproducible

Enzimoinmunoensayo (ELISA)

IgG IgM

Sensibilidad analítica

Reproducible

Requiere microscopía de fluorescencia

Inmunofluorescencia Indirecta (IFI)

CMIA

•Antígenos recombinantes

Inmunoensayo quimioluminiscente (CMIA)

h.H2O2

Micropartículas-Ags

TcF-FP3FP6-FP10

muestraconjugado

Es la amplificación enzimática de un fragmento de ADN flanqueado por dos secuencias de oligonucleótidos que hibridan en la cadena complementaria de la molécula molde que se va a amplificar (cebadores o “primer”) y que son utilizados por una DNA polimerasa termoresistente para copiar la secuencia de la misma.

desnaturalización hibridización extensión

Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)

kDNA o sDNA

costosa

Sensible y específica

Requiere tecnología y experiencia

No dependientede Estado

Inmunitario

primers

Taq DNA-polimerasaF

R

ADN totalextracción

PCR convencional

PCR En Tiempo Real

nucleótidosdATP, dGTP, dCTP, dTTP

96°C

56°C

72°C

Ciclado (Amplificación)Desnaturalización

Alineamiento

Elongación

Schijman et al.PLoS Negl Trop Dis. 2011 Enero; 5(1): 931

Técnica de diagnóstico

Formas clínicas de la Enfermedad de Chagas

AGUDA LATENTE-CRÓNICA CONGÉNITA

GOTA FRESCA + - +

GOTA GRUESA ++ - ++

MICROCONCENTRACION +++ - +++

STROUT +++ - +++

HEMOCULTIVO +++ -/+ +++

XENODIAGNÓSTICO +++ + +++

PCR ++++ ++ ++++

SEROLOGÍA - (inicio)+ (>20 días)

+++ IgG materna<6 meses

IgM niño

ANTECEDENTE EPIDEMIOLOGICO-Transmisión vectorial-Transfusión sanguínea-Transmisión congénita-Trasplante de órganos

INFECCION POCO PROBABLE

SINTOMÁTICO ASINTOMÁTICO

FORMA AGUDABúsqueda de tripanosomas en sangre---------------------------------------------------Métodos parasitológicos:Xenodiagnóstico-Strout-MicrohematocritoHemocultivo -PCR

FORMA CRONICABúsqueda de Anticuerpos---------------------------------------------------Métodos Serológicos:HAI-ELISA-IFIAcs totales-IgG-IgM

DIAGNOSTICO IMPROBABLE

XenodiagnósticoPCR Seguimiento clínico

DIAGNÓSTICO CONFIRMADO

no

si

(-) (-)

(+) dos tests

(-)

(+)

Algoritmo diagnóstico

GESTANTE CHAGÁSICA

RECIEN NACIDO

BUSQUEDA DEL PARÁSITO-Microconcentración-PCR

BUSQUEDA DE ANTICUERPOS(IgG)-ELISA-IFI (titulación del suero)

CONTROL SEROLÓGICO A LOS3, 6 y 9 meses-ELISA-IFI (titulación del suero)

IgG >basal IgG ≤basal

NO CONFIRMACASO

CONFIRMACASO (tratamiento)

El problema de Inmunorreactividad Cruzada…

Enfermedad de ChagasLeishmaniosis

Trypanosoma cruzi(tripomastigotes)

Leishmania spp(promastigotes)

Familia Trypanosomatidae

ANTÍGENOS COMPARTIDOS

LABORATORIO

CLÍNICA

DIAGNÓSTICO DE CERTEZA

Muchas gracias