INTRODUCCIÓN-CUESTIONARIO

FUNDAMENTOS DE LAS PRUEBAS DE DIGESTION

Hidrólisis de Gelatina

PRINCIPIO:Determinar la capacidad de un microorganismo de producir enzimas de tipo proteolítico que licuan/hidrolizan la gelatina.

ENZIMA GELATINASAS

La gelatina es una proteína que tiene la capacidad de gelificar, cuando es hidrolizada por la gelatinasa en los aminoácidos que la componen, pierde su característica de gelificar.

Proteína Aminoácidos Individuales Gelatinasas

Determinar la capacidad de un microorganismo de hidrolizar el almidón. Probar la desaparición del almidón con el uso de un reactivo con yodo.Estructura básica del almidón: amilosa (lineal), amilopectina (ramificada)

α -amilasa: Enzima que hidroliza los enlaces α(1-4) de polímeros de glucosa.

Hidrólisis del Almidón

Agar Almidón Sustrato: Almidón (polímero de glucosa). Enzima: Amilasa (exoenzima). Producto: Glucosa. Revelador: Lugol.Almidón Dextrinas Maltosa Glucosa

Las proteasas son excretadas al medio para la degradación de proteínas, la caseína es la proteína de la leche que le confiere el color blanco. cuando la caseína es hidrolizada desaparece el color blanco alrededor del crecimiento microbiano

Digestión de Caseína

Enzimas proteolíticas (caseasas) hidrolizan proteínas de la leche.Agar Leche Descremada Sustrato: Caseína (proteína). Enzima: Caseinasa (Proteasa, exoenzima). Producto: Aminoácidos. Revelador: No requiere.

Hidrólisis de FosfolípidosLos fosfolípidos son ésteres complejos de alcohol, ácido graso, ácido fosfórico y una base nitrogenada.Las fosfolipasas son enzimas catabolicas importantes en el metabolismo de los fosfolípidos que se producen constitutivamente.

● Nutritivo, proceso infeccioso*Fosfolipasa A

Fosfolípidos lisofosfolípidos y ácidos grasos*Fosfolipasa C: Fosfatidil colina Fosforilcolina y diglicérido

Composición:● Triptona, extracto de carne, extracto de levadura,

glicina, piruvato de sodio, cloruro de litio, telurito de potasio.

Interpretación:❖ Prueba positiva: Formación de un halo

transparente alrededor de la colonia.

Medio de cultivo agar yema de huevo

Prueba Positiva Prueba negativa

Composición:Infusión de corazón de ternera, triptosa, cloruro de sodio❖ Prueba positiva: Se visualiza una zona

amarillenta➔ opaca➔ traslúcida

hidrólisis de fosfolípidos de la membrana celular de los eritrocitos.

Medio de cultivo agar sangre

hemólisis parcial

Halo opaco amarillento

enlaces éster fosfato con acumulacion extracelular de digliceridos

hemólisis total

halo transparente

Enlaces éster y utilizacion de acidos grasos

sin hemólisis

sin halo no empleo de los fosfolípidos membranales de los eritrocitos

Interpretación:

Digestion de proteinas y fermentacion de la leche tornasolada

Accion sobre la leche tornasolada

INFORME

RESULTADOS: Hidrólisis de gelatina en tubo

Microorganismo

Crecimiento1 Hidrólisis2

48h 72h 48h 72h

Escherichia coli - -

Bacillus subtilis - -

Pseudomonas aeruginosa

+ -

Salmonella typhi - -

Proteus vulgaris +

Klebsiella pneumoniae

- -

Shigella flexneri + -

Staphylococcus aureus

+ -

No hubo crecimiento en gelatina en tubo.

Teoría: Desarrollo sin licuefacción

Posiblemente debido a la concentración de gelatina.

Escherichia coli.Hidrólisis de Gelatina

Bacillus subtilis. Hidrólisis de gelatina en tubo

Prueba resultó un 50 % positiva

Teórica: positiva

Sin desarrolloTeoría:Desarrollo y licuefacción

Proteus vulgaris

Hidrólisis gelatina

P. vulgaris

Prueba: Negativa

Teórica: Positiva

Staphylococcus Aureus.

S. aureus

Prueba: negativa

Teorica: Negativa

Klebsiella pneumoniae

K. pneumoniae

Microorganismo Crecimiento1 Hidrólisis2

Escherichia coli + -

Bacillus subtilis + +

Pseudomonas aeruginosa

+ +

Salmonella typhi + -

Proteus vulgaris + -

Klebsiella pneumoniae + -

Shigella flexneri + -

Staphylococcus aureus

+ +

HIDRÓLISIS DE GELATINA EN PLACA

Prueba negativa formación de p.p. blanco.

Proteus vulgaris

Hidrólisis de Gelatina en Placa

Prueba negativa: formó precipitado blanco.

Escherichia coliHidrólisis de Gelatina en Placa

E. Coli

Prueba 100% positiva

Teórica: positiva

Bacillus subtilis. Hidrólisis de fosfolípidos: yema de huevo

Prueba negativa.

Teoría: Prueba positiva

Proteus vulgaris

Hidrólisis Fosfólipidos: Yema de huevo

Staphylococcus Aureus.

Hemólisis tipo α: Halo opaco, hidrólisis de los enlaces éster fosfato.

Escherichia coli.Hidrólisis Fosfólipidos: Agar sangre

E. Coli

Prueba 75% hemolisis β y 25% hemolisis α

Teórica: hemolisis β

Bacillus subtilis.Hidrolisis de fosfolipidos: agar sangre

Bacillus subtilis

Hemólisis Ɣ: Ausencia de halo,no utilización de eritrocitos membranales.

Proteus vulgaris

Hidrólisis Fosfólipidos: Gelosa Sangre

Prueba negativa:no hay presencia de halos de hidrólisis.

Escherichia coliDigestión de la Caseína en placa

E. Coli

AcidificaciónCoagulaciónReducciónTeoría:

Escherichia coliLeche Tornasolada

E. Coli

Prueba positiva.Teoría: prueba positiva

Proteus vulgaris

Hidrólisis de Caseína

Prueba 100% positiva

Teórica: positiva

Bacillus subtilis.Digestión de caseína

Bacillus subtilis

Alcalinización.

Proteus vulgaris

Leche Tornasolada

Proteus vulgaris

Prueba ❖ reduccion❖ licuefaccion❖ alcalinizacion

Bacillus subtilisDigestión de proteinas y fermentacion de leche tornasolada

Bacillus subtilis