Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ...©todos de ensayo y validación...

La acreditación en laboratorios agroalimentarios

Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios

Fernando Lafont Déniz



Acreditación de laboratorios (ISO/IEC 17025:2005)

Reconocimiento formal por parte de una entidad autorizada, de

la competencia técnica de un Laboratorio para la realización de una actividad determinada, perfectamente definida.

Anexo Técnico (Alcance de acreditación)

Documento donde aparecen definidas las actividades (en el caso de laboratorios de ensayo, los análisis) que están cubiertos por la acreditación concedida.

REQUISITOS DE GESTION (Apdo. 4)

Organización

Sistema de gestión

Control de documentos

Revisión de pedidos, ofertas y contratos

Subcontratación

Compras de servicios y suministros

Servicios al cliente

Quejas


Control de trabajos no conformes

Mejora

Acciones correctivas

Acciones preventivas

Control de registros

Auditorias internas

Revisión por la dirección


Generalidades

Personal

Instalaciones y condiciones ambientales

Métodos de ensayo y de calibración y validación de los métodos

Equipos

Trazabilidad de las medidas

Muestreo

Manipulación de los ítems de ensayo

Aseguramiento de la calidad de los resultados de ensayo

Informe de resultados

REQUISITOS TECNICOS (Apdo. 5)





Personal (Apdo. 5.2)

COMPETENCIA TECNICA

Personal Métodos

Equipamiento

•Equipos alta complejidad: CG/MS, HPLC/MS, ICP/MS, IRMS, MS alta resolución…

•Métodos análisis complejos: dilución isotópica, adición standard, multirresiduos gran número de analitos (>200)…

PERSONAL ALTAMENTE CUALIFICADO

•Integraciones anómalas (analitos con varios picos, baja relación S/R,…)

•Identificaciones espectrales no adecuadas

•Desarrollo de métodos “defectuosos” (fragmentaciones iones en MS/MS, método cromatográfico…)

•Preparación de muestra y disoluciones no adecuadas (manipulación...)

Personal


METODOS DE ENSAYO Y VALIDACION (Apdo. 5.4)



Métodos Tipos

Características

Normalizados - Método Oficial (BOE…)

- Método normalizado (AENOR…)

- Método publicado por organizaciones de prestigio (AOAC, COI, EPA…)

Internos

- Método desarrollado por el LE - Procedimiento normalizado modificado

poca o nula revisión documental

poca validación*

Revisión documental

Validación

http://www.google.es/imgres?imgurl=http://3.bp.blogspot.com/_w8XuMV4WvsA/SkOJfAe9YJI/AAAAAAAAE80/8TteD1NZd3M/s400/NormasISOsistemasdegestiondecalidad.jpg&imgrefurl=http://librosytutoriales.blogspot.com/2009_06_01_archive.html&usg=__5fyLaWkE0XQOQ55CdbrybPhTngk=&h=400&w=283&sz=22&hl=es&start=20&itbs=1&tbnid=STj3UMgDE3xkFM:&tbnh=124&tbnw=88&prev=/images?q=norma+ISO&hl=es&tbs=isch:1

http://www.google.es/imgres?imgurl=http://www.cigua.com/OnLineStore/images/Logo_5.jpg&imgrefurl=http://cigua.com/OnLineStore/product_info.php?products_id=29&osCsid=21f62d0cdb2ea54bb008ce5d5748eef1&usg=__Y7IBy4DyMMCBk7zsEMfHIaqMSdY=&h=85&w=101&sz=25&hl=es&start=3&um=1&itbs=1&tbnid=Mmo9-j-DwyvyOM:&tbnh=70&tbnw=83&prev=/images?q=AOAC&um=1&hl=es&tbs=isch:1

Métodos Internos

Métodos de ensayo y validación


Guia SANCO (Pesticidas)

Decisión CE/657/2002

(Veterinarios)

Reglamento

CE 401/2006 (Micotoxinas)

Reglamento CE/1882/2006

(Nitratos)

Reglamento CE 1883/2006

(PCBs y Dioxinas)

etc…

Guías funcionamiento métodos



Características Generales Métodos Análisis Cromatográficos

Extracción

Preparación de Muestra

MS

MS

Clean-up

ECD, NPD, FID, FPPD, TCD…

UV, DAD, FLD, IR, ELSD…

Técnicas Cromatográficas

CG

HPLC HPLC



Manipulación de muestra

Métodos de muestreo

Manipulación objetos ensayo

Reglamento CE 401/2006. Métodos

muestreo micotoxinas en alimentos

Directiva CE 63/2002. Métodos

muestreo pesticidas en alimentos

Etc…

Reglamento CE 396/2005. Partes a analizar

pesticidas en alimentos y piensos.

Reglamento CE 1883/2006. Dioxinas y

PCBs en alimentos

Etc…



Manipulación de muestra

Identificación mediante una referencia única

Muestra mínima

Preparación de la misma previo al análisis (homogeneización, trituración,

liofilización, refrigeración, adición agentes estabilizantes…)

•Tiempo máximo de conservación previo al análisis y posterior al mismo

(especialmente analitos poco estables ó volátiles).

MUESTRA REPRESENTATIVA

Matriz (composicional, degradación)

Analitos (degradación, pérdida)



Analitos standard

Patrones puros/disoluciones certificadas:

Pureza (certificada)

Definir condiciones de almacenamiento adecuadas

(temperatura, exposición a la luz, recipiente…)

Caducidad

Disoluciones patrones:

•Uso disolvente adecuado (precipitación, volatilidad, reactividad…)

•Corrección pureza

•Identificación adecuada

•Condiciones de almacenamiento

•Comparación disoluciones nuevas con antiguas (<10%)

•Empleo disoluciones diferente “procedencia”

•Caducidad

Peso mínimo (10 mg aprox.)

Equipos calibrados

http://www.google.es/imgres?imgurl=http://pblequipo2.files.wordpress.com/2007/10/matraz1.JPG&imgrefurl=http://pblequipo2.wordpress.com/2007/10/page/2/&usg=__aCas5yMRBZtwip9mq5_yXdGxwMY=&h=170&w=170&sz=3&hl=es&start=10&um=1&itbs=1&tbnid=ii_p5lcTMp4HRM:&tbnh=99&tbnw=99&prev=/images?q=matraz&um=1&hl=es&sa=N&rlz=1T4HPEB_esES305ES359&tbs=isch:1



Métodos de extracción

Bibliografía

Pesticidas: acetato etilo, método Luke, QuEChERS (ENE-EN 15662:2009)…

Micotoxinas (agua/acetonitrilo,…)

Pesticidas, PAHs en aguas (SPE, ELL…)

Inyección directa (pesticidas aguas…)



Inyección directa

Análisis de matrices líquidas por inyección directa (aguas) o tras dilución (vinos, aguas

residuales…)

•Pesticidas en aguas por HPLC/MS

•Acrilamida en agua por HPLC/MS Rapidez, sencillez, menor costo

•Ocratoxina y aminas biógenas en vinos

Herbicidas (triazinas, fenoxiácidos..) agua consumo

Inyección 25 mL, HPLC/MS(MRM)

0.10 mg/L acrilamida

Acrilamida en agua consumo

Inyección 25 mL, HPLC/MS(Trap)

Dimetoato

Fluroxipir

Simazina

Diuron

Fosmet

Linuron

Terbutilazina

Tebuconazol

Diflufenican

Oxifluorfen

0.025 mg/L

Ocratoxina A en vino

Inyección 10 mL, HPLC/MS(MRM)

402/167

0.25 mg/L OTA



Inyección directa

Aminas biógenas en vino (dilución 1/100 en fase móvil)

0.2 mg/L aminas

(0.002 mg/L)



Efecto matriz

QuEChERs con PSA

QuEChERs sin PSA

Acetato etilo

Luke

Luke/GPC

Matriz lechuga fortificada con 125 pesticidas por CG/MS (0.02 mg/kg)

•Acetato etilo: 94%

•Luke: 96%

•QuEChERS: 98%

•Luke/GPC: 100%



3 seg (15 puntos) o

o o

o o

o

o o o

o o o o

o

o

o o o o o o o o

o

o

o

o

o o o o

o

o o

o

o

o o o o o o o o o o

Velocidad de adquisición

A B

Definición pico cromatográfico ≥ 10 puntos

3 seg (8 puntos)

0.2 seg/scan 0.4 seg/scan



Velocidad de adquisición iones en MS

Multirresiduos fitohormonas en vegetales por HPLC/MS:

auxinas, giberellinas y citoquininas

RSD Areas (n=5) = 9.5%

RSD Areas (n=5) = 2.1%

Ac Giberéllico

Velocidad de adquisición



Velocidad de Adquisición iones en MS

XIC of +MRM (297 pairs): 226.2/170.0 amu from Sample 1 (MRMs 100) of Data MRM pesticides_02.wiff (Turbo Spray) Max. 1.1e6 cps.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23Time, min

0.00

5.00e4

1.00e5

1.50e5

2.00e5

2.50e5

3.00e5

3.50e5

4.00e5

4.50e5

5.00e5

5.50e5

6.00e5

6.50e5

7.00e5

7.50e5

8.00e5

8.50e5

9.00e5

9.50e5

1.00e6

1.05e6

Inte

ns

ity

, c

ps

11.79Cuantificación de 200 pesticidas en naranja

usando 5 mseg “dwell time” por transición MRM

Equipos actuales MS:

Elevadas velocidades de adquisición

de iones (<5 mseg/transición MRM)

Eliminación segmentos adquisición

Métodos de adquisición de iones

inteligentes…

Métodos más rápidos

Mayor número analitos



Relación S/R

0.002 ppm 0.005 ppm 0.01 ppm

0.05 ppm 0.10 ppm 0.25 ppm

•Selección de señales cromatográficas que garanticen una adecuada relación S/R al

Límite de Cuantificación (LC)

Prometrina en lechuga por LC/MS

Concentración RSD (n=5) S/R

0.002 33.5 3

0.005 16.0 7

0.01 8.5 18

0.05 5.6 >100

0.10 5.0 >500

0.25 3.1 >1000

) Ruido

Señal



Relación S/R

ut

SE

ÑA

L (

S)

RUIDO (R)

S/R = 3 LD = 3 S

LOQ = 5 S

S: desviación standard blanco

S/R > 5

S/R =2



Métodos de detección

Métodos de confirmación residuos veterinarios

(Decisión CE 657/2002)

El método debe garantizar los siguientes aspectos (validación):

Sensibilidad suficiente

Selectividad adecuada

Métodos válidos (reglamentados)

Residuos veterinarios

Dioxinas/PCBs (HRMS), resolución≥10000




Relación tipos iones MS y puntos de

identificación en residuos veterinarios Ejemplos de cálculo puntos identificación

con diferentes técnicas

Sustancias Grupo A (prohibidas) ≥4 puntos

Sustancias Grupo B ≥3 puntos




• Espectrometría de Masas (requisitos de identificación dependen de la forma de adquisición/especificaciones técnicas de los equipos).

• Detectores universales/selectivos de Cromatografía: a menudo se requiere confirmación con la misma técnica (columna diferente), o con otro detector.

Requisitos de identificación por MS para pesticidas (Guía SANCO/2009)



Identificación MS

Intensidad

relativa

EI/CG/MS CI/CG/MS,

CG/MSn,

LC/MS, LC/MSn

>50% ±10% ±20%

20-50% ±15% ±25%

10-20% ±20% ±30%

<10% ±50% ±50%

Tolerancias Ion Ratios •Trabajar con Ion Ratios, preferentemente

•Tolerancias máximas establecidas (idénticas para

pesticidas y residuos veterinarios)

•Iones de mayor masa ≈ más selectivos

•Iones isotópicos (clusters Cl y Br)

¡¡¡ MUY IMPORTANTE CRITERIO ANALISTA !!!

Br

Cl

Br3 Br2

Cl2

Cl3

Cl2Br

ClBr

Cl3Br

ClBr3 ClBr2

Cl3Br3

Cl2Br2 Cl2Br3

Cl3Br2



Identificación/cuantificación cromatográfica

Meta

mid

ofo

s p

or H

PL

C/M

S

ACN

Fase móvil

Establecer criterios tR: ≤0.5% CG y ≤2.5% HPLC

tR ≥ 2t0 (frente cromatográfico ≈ interferencias)

Forma de picos adecuada: compuestos muy polares

en HPLC (eluyen al inicio) y CG (forman colas por adsorción

sobre grupos silanoles, baja volatilidad…)

Area cromatográfica (preferentemente)

S/R señal cuantificación ≥ 6/10

S/R iones cualificación (MS) ≥ 3

Preferentemente, intensidad iones >10% del ión más

intenso (cuantificación)

Meto

milo

po

r HP

LC

/MS

ACN



Iones cualificación

Micotoxinas en alimento infantil por LC/MS

(fortificación 0.1 mg/kg)

Deoxinilvalenol 1 Aflatoxina B1 2

Aflatoxina B2 1 Aflatoxina G1 2

Aflatoxina G2 2 Ocratoxina A 1 Ocratoxina A 2

Zearalenona 1 Zearalenona 2

Aflatoxina B1 1

Aflatoxina G2 1

Aflatoxina G1 1 Aflatoxina B2 2

Deoxinilvalenol 2

Micotoxina Concentración

(mg/Kg) RT (min)

Ion Ratio/

Teórico

Ratio OK

Deoxinilvalenol 1 79.4 1.00

Deoxinilvalenol 2 81.2 1.00 1.03 (0.92)

Aflatoxina B1 1 0.11 4.82

Aflatoxina B1 2 0.12 4.82 0.78 (0.74)

Aflatoxina B2 1 0.10 4.74

Aflatoxina B2 2 0.09 4.74 1.00 (1.12)

Aflatoxina G1 1 0.10 4.62

Aflatoxina G1 2 0.10 4.62 1.06 (0.98)

Aflatoxina G2 1 0.09 4.41

Aflatoxina G2 2 0.10 4.41 0.49 (0.56)

Ocratoxina A 1 0.21 5.82

Ocratoxina A 2 0.18 5.82 1.28 (1.46)

Zearalenona 1 5.0 5.80

Zearalenona 2 4.8 5.89 0.91 (0.93)



Iones cualificación

Análisis de opiáceos (morfina, codeina, tebaina y derivados) en semilla adormidera para alimentación por HPLC/MS

Ion Ratio= 0.13 (0.10-0.20)

Ion Ratio= 0.20 (0.05-0.15)

m/z 165

m/z 214

Codeina

No Si

Identificación Morfina

Grasa: 25-50%

Fit<500

Codeina Fit<700

TEBAÍNA

MORFINA

CODEINA

http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/5/5c/Codein_-_Codeine.svg

http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/3/33/Morphin_-_Morphine.svg



Identificación de analitos

42.50 43.00 43.50 44.00 44.50 45.00

Asignación adecuada de analitos

•Formados por más de un componente (cipermetrinas, deltametrina, fluvalinato, spinosad…)

•Espectros muy similares o idénticos (acrinatrina y l-cihalotrina, …)

Acrinatrin

l-Cihalotrina

Cipermetrinas

Fluvalinato



Calibración de analitos

Recta de calibrado: Relación de la respuesta del detector con la concentración

Aceptable 1 punto (señal ±50%), 2 puntos (rango lineal detector , FRalto/FRbajo<120%, Calto/Cbajo<4)

Preferible ajuste lineal para ≥3 niveles (dilución de extracto)

Trabajar con al menos dos criterios de linealidad (r2, RSD residuales, coeficiente linealidad…)

Frecuencia: por tanda o control de calibración (<30% a LCL ó <20% por encima LCL)

LCL≤LOQ

Calibración en matriz: en aquéllos casos donde la

matriz afecte a la respuesta de analitos

Deoxinivalenol 25-1250 ppb

Aflatoxina B1 0.1- 5 ppb

Aflatoxina B2 0.1-5 ppb

Aflatoxina G1 0.1-5 ppb

Aflatoxina G2 0.1-5 ppb

Ocratoxina A 0.1-5 ppb

Zearalenona 2.5-125 ppb

Criterios linealidad:

Coef. Corr. >0.99

RSDr <20%



Detección iones por Alta Resolución/MS

Detección masa exacta de iones: desviación mDa/ppm

Alta selectividad en confirmación

Cromatogramas iones masa exacta “muy limpios”

No es necesario realización MS/MS, otros iones confirmación…

Simplicidad de preparación métodos

Analizadores masas Alta Resolución:

MAGNETICOS

TOF

ORBITRAP

TRAMPAS LINEALES




Peso monoisotópico: es el masa del ión formado a partir de los elementos

monoisotópicos. Son las masas de los iones que obtenemos en MS

En la Tabla Periódica, lo que se proporciona es el peso atómico promedio del

elemento, tomando en cuenta las proporciones de sus isótopos en la naturaleza.

0%

10%

20%

30%

40%

50%

60%

70%

80%

90%

100%

299.0825 300.0856 301.0801 302.0828

m/z

Ab

un

dan

cia

re

lati

va

Compuesto C16H14ClN3O:

PM promedio = 299.7597

PM Monoisotópico = 299.0825




Cromatogramas HPLC/ESI (fullscan) extracto naranja

Fortificación 0.01 ppm (250 pesticidas)

Azinfos metil en naranja (0.01 ppm) m/z=318.013

Flufenoxurón en naranja (0.01 ppm). m/z=487.029

ESI -

ESI+



VALIDACION PROCEDIMIENTOS DE ENSAYO

Objetivos Demostrar robustez método: evaluación de la recuperación media y

reproducibilidad del método

Pequeños ajustes en método en el tiempo no afectan al funcionamiento

Demostrar su aplicabilidad a matrices de la misma categoría

Determinar los valores de aceptabilidad (por ejemplo, recuperación) en

análisis de rutina

Recopilar información para determinar la incertidumbre del método

Resultado Información suficiente que pruebe, para el alcance fijado (ANALITOS,

CONCENTRACIONES, MATRICES), que el método es:

ESPECIFICO, SENSIBLE, VERAZ y PRECISO = EXACTITUD



Validación procedimientos de ensayo

¿Que procedimientos hay que validar?

Procedimientos no normalizados

Procedimientos normalizados utilizados fuera de su alcance previsto

Ampliaciones o modificaciones de métodos normalizados: en función de la

modificación realizada, el Laboratorio debe tener competencia suficiente para evaluar que

parámetros hay que revalidar.




VERIFICACION DE PROCEDIMIENTOS NORMALIZADOS

COMPROBACIÓN que los parámetros de funcionamiento establecidos para

dicho procedimiento, pueden ser alcanzados por el Laboratorio utilizando

sus medios específicos: equipos, personal, ambientales…

PRECISION, VERACIDAD, LOQ, LINEALIDAD




VALIDACION PROCEDIMIENTOS INTERNOS

El grado de validación y parámetros a evaluar dependen de cada método

Error de medición: diferencia entre el resultado de una medición y el valor de referencia

Error aleatorio: componente del error de medición que, en mediciones repetidas, varía de forma impredecible

Error sistemático: componente del error de medición que, en mediciones repetidas, permanece constante o

varía de forma predecible



Errores de medición



Errores de medición

Requisito A

Requisito B



Veracidad (sesgo)

Precisión

•Repetibilidad

•Reproducibilidad

•Precisión intermedia

Selectividad/especificidad

Intervalo/Rango de trabajo

Linealidad

Límite de detección

Límite de cuantificación

Incertidumbre

Robustez

Parámetros en la Validación

Capacidad de un método para

cuantificar exactamente un

analito en presencia de

interferencias

Capacidad de un método analítico

de producir resultados que sean

directamente o por medio de una

transformación matemática

definida, proporcionales a la

concentración de analito en la

muestra

Menor concentración de analito en

una muestra de ensayo que puede

ser confiablemente distinguida del

blanco). LD=3 Sblanco

Menor concentración de analito

en una muestra de ensayo que

puede ser determinada con un

aceptable nivel de incertidumbre.

LOQ=10 Sblanco

Grado de concordancia entre

resultados obtenidos en

mediciones repetidas de un mismo

objeto o de objetos similares, bajo

condiciones específicas

Intervalo de concentraciones de

analito en el cual puede

considerarse el método validado

Capacidad del método de

mantenerse sin cambios ante

pequeñas variaciones en los

parámetros del método. Medida

de su confiabilidad durante su

uso rutinario

Parámetro asociado con el

resultado de una medición, que

caracteriza la dispersión de los

valores que podrían se

razonablemente atribuidos al

mesurando.

Grado de concordancia entre el

promedio de un número de

resultados y el valor de referencia

¿Cómo se evalúa?

Análisis varias veces de un Material Referencia Certificado (MRC)

Matriz blanca fortificada dentro del rango del méttodo



Veracidad

60

70

80

90

100

110

120

1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55

Rec

uper

ació

n (%

)

Clorpirifos en aceite

Capacidad de un método para cuantificar exactamente un analito en presencia de

interferencias

Interferencias: especie química que causa errores sistemáticos en la determinación de un

analito:

Interferencias que den señales y/o respuestas que no se distingan de las del analito

Interferencias que afecten a la señal del analito (efecto matriz)

EVALUACION

Blanco de reactivos

Blanco de matriz

Adición de cantidades conocidas de analito sobre blanco de matriz

Estudio con potenciales interferencias



Selectividad



Validación de procedimientos de ensayo

Parámetro Que/Como Criterio

Linealidad Con rectas calibrado Residuales ≤20%

LOQ Nivel más bajo que cumplen los

criterios de exactitud y precisión ≤LMR

Especificidad Blancos y muestras de control ≤30% LOQ

Exactitud Recuperación media en muestras

adicionadas o materiales referencia 70-120%

Precisión

(RSDr)

Obtenida en cada nivel de

concentración ≤20%

Precisión

(RSDR)

Reproducibilidad intralaboratorio

(QC) ≤20%

Criterios de validación de pesticidas (Guía SANCO 2009)

Procedimiento de Validación. Procedimiento que recoge la estrategia a seguir para realizar las validaciones de matrices y analitos, y se definen los criterios (resultados a alcanzar)



Criterios de Validación

Parámetro Que/Como Criterio

Linealidad Con rectas calibrado (al menos 5

niveles) Residuales ≤20%

Cca Límite de decisión

3 veces S/R 20 blancos

ISO 11843 (valor crítico

variable estado neto)

Ccb Capacidad de detección

3 veces S/R 20 blancos

ISO 11843 (valor

mínimo detectable

variable estado neto)

Especificidad Blancos y muestras de control ≤30% LOQ

Exactitud

Recuperación media en muestras

adicionadas o materiales referencia

Criterio depende concentración

-50% a +20%, ≤1 mg/kg

-30% a +10%, 1-10 mg/kg

-20% a +10%, ≥10 mg/kg

Precisión (RSDr) Obtenida en cada nivel de

concentración Horwitz CV = 2 (1– 0,5 log C)

Precisión (RSDR) Reproducibilidad intralaboratorio

(QC) Horwitz

Criterios de validación de residuos veterinarios (Decisión 657)



PLAGUICIDA N1 Recuperación Criterios (%)

Rec 1 (%)

Rec 2 (%)

Rec 3 (%)

Rec media (%)

Cumple Repetibilidad Criterios (%)

Repetibilidad (RSD%)

Cumple

a-ENDOSULFAN 0.01 70-120 101 86 93 93 si 20 8 si

a-HCH 0.01 70-120 85 90 99 91 si 20 11 si

ALDRIN 0.01 70-120 67 78 78 74 si 20 9 si

AZOXISTROBIN 0.01 70-120 90 87 90 89 si 20 1 si

b-ENDOSULFAN 0.01 70-120 94 99 101 98 si 20 4 si

b-HCH 0.01 70-120 90 99 102 97 si 20 6 si

BIFENTRIN 0.01 70-120 97 106 104 102 si 20 8 si

BROMOPROPILATO 0.01 70-120 84 89 86 86 si 20 3 si

BUPIRIMATO 0.01 70-120 105 96 95 99 si 20 5 si

CAPTAN 0.01 70-120 95 113 106 105 si 20 9 si

CIPERMETRINA 0.01 70-120 91 94 103 96 si 20 8 si

CLORFENVINFOS 0.01 70-120 90 98 94 94 si 20 4 si

CLORPROFAM 0.01 70-120 73 77 75 75 si 20 2 si

Concentración mg/Kg

Recuperación (%) Lechuga Tomate Limón Uva

Repetibilidad (CV %) Lechuga Tomate Limón Uva

Reproducibilidad (CV %) Lechuga Tomate Limón Uva

Incertidumbre relativa (%) Lechuga Tomate Limón Uva

≤ 0.01 79 - 109 77 - 106 74 - 110 71 – 106 1 - 11 1 - 11 2 - 13 2 – 11 1 - 19 4 - 16 2 - 16 3 – 18 6 - 37 12 - 34 9 - 39 14 – 38

0.01 – 0.1 75 - 112 73 - 113 72 - 106 73 – 107 1 - 14 0 - 13 1 - 15 0 - 8 1 - 17 1 - 21 1 - 19 2 – 18 6 - 34 8 - 33 8 - 37 9 – 34

≥ 0.1 77 - 104 72 - 99 72 - 96 73 - 98 0 - 8 0 - 6 1 - 10 1 - 6 1 - 15 2 - 19 2 - 20 2 - 17 7 - 35 8 - 31 10 - 34 8 - 37

Resultados de Validación



Informe de validación

Documento interno que debe contener la siguiente información (trazabilidad):

Objetivo y alcance (matrices, concentraciones)

Instrumentación y materiales utilizados

Personal involucrado

Protocolo de validación

Resultados y conclusiones

Procedimiento de ensayo

Firma de responsables



Alcance de Acreditación

Ensayos para los que se define un alcance de acreditación cerrado (matriz/analito)

Ensayos con alcances de acreditación genéricos (requieren un nivel de competencia

técnica y de gestión añadidas):

Nota Técnica 19: Rige criterios de acreditación para categoría de ensayo genérica de

plaguicidas en alimentos

•Lista Pública de Ensayos (LPE)

•Definición de familias de matrices (generalmente de acuerdo a las establecidos

en Anexo 1 SANCO)

•Matrices validadas y matrices comprobadas (LOQ)

Nota Técnica 18: Rige categorías de ensayo más genéricas

•Lista Ensayos Bajo Acreditación (LEBA): engloba todas las familias de

productos y productos en concreto, así como familias de parámetros y

parámetros en concreto acreditados. Ejemplo:

•Categoría de Ensayo: Contaminantes orgánicos en alimentos:

-Parámetros: PAHs (…), PCBs (….), melamina, acrilamida

-Familias de productos: productos de la pesca (…), alimentos infantiles (…),

carnes (…), cereales (…), aceites y grasas (...).

Aseguramiento de la calidad de los resultados de ensayos


ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD

ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD DE LOS ENSAYOS

¿Cómo sabemos que hemos realizado un buen trabajo en el Lab?

Benzo(a)pireno en

pescado



ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD

Aseguramiento de la calidad: plan global de gestión que garantiza la

integridad de los resultados

“el sistema”

Materiales de referencia

Intercambio de muestras

Ejercicios de intercomparación

Muestras dobles

Muestras ciegas…

Control de calidad: Conjunto de ensayos analíticos que se realizan

para asegurar la calidad/validez de los resultados de cada análisis

“la herramienta”



Aseguramiento de la Calidad

No existe un criterio general/hoja de ruta que indique como llevar a cabo el

aseguramiento de la calidad

MRC

Fortifica-ciones

Muestra doble

Muestra ciega

INTERNO

Intercomparativos

Laboratorios

EXTERNO

Periódicos / en cada tanda Más esporádicos



Control de Calidad Interno

Actividades a realizar:

Calibración/verificación (según criterios y frecuencia establecida)

Control de blancos (contaminaciones): señal<1/3 LOQ

Ensayos de recuperación rutinarios (preferentemente LOQ) y/o MRC.

Se puede establecer un plan de rotación en el caso de ensayos con

múltiples analitos (pesticidas). Criterios: X ± 2RSD (60-140%)

Muestras dobles y ciegas (establecer criterios)

60

70

80

90

100

110

120

1 6 11 16 21 26 31 36 41 46 51

ACEITE OLIVA

60

70

80

90

100

110

120

1 6 11 16 21 26 31 36 41 46 51

Rec

up

era

ció

n (

%)

ACEITUNA

Terbutilazina por CG/MS

Informes de resultados


Expresión resultados

La expresión de resultados debe hacerse de acuerdo a la reglamentación

En determinados casos, es obligatorio corregir el resultado con la recuperación ó

expresar ésta: residuos veterinarios, micotoxinas…

Utilizar las unidades y número de cifras significativas adecuadas.

En muestras realizadas por duplicado, establecer criterio para la expresión del mismo y

su aceptación.

Expresión de la Incertidumbre expandida (nivel de confianza del 95%) en los casos que lo

requiera.

La expresión de incertidumbre debe ser coherente con la de los resultados



Expresión incertidumbre

Valor Sin evaluar U Evaluación U

Co

nc

en

tra

ció

n

INCERTIDUMBRE:

Parámetro asociado al resultado de una medida, que caracteriza la dispersión de los

valores atribuidos al mesurando

Resultado= Valor ± incertidumbre

EXPRESION DE UN RESULTADO ANALITICO

INFORME DE ENSAYO



Expresión incertidumbre

Con una incertidumbre expandida del 50%, un resultados será violativo cuando X> 2LMR

0

0,4

0,8

1,2

1,6

1 2

mg

/kg

1.0 mg/kg

0.6 mg/kg

LMR=0.4 mg/kg

Resultados con incertidumbre del 50% (95%)

Resultado violativo

Resultado no violativo



Definición de residuos

Fumonisinas: B1 + B2

Aflatoxinas totales: B1+B2+G1+G2

Dioxinas: EQT PCDD/F-OMS

Pesticidas: según definición de residuo



Expresión resultados residuos suma

Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ...©todos de ensayo y validación...

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