cromatografia(1)

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Cromatografía del griego Chroma-”color” y graphos-”escribir”

Mijaíl Tswett (1903).Los primeros equiposde cromatografía

1938 -Reichstein: Introdujo la

cromatografía líquida o fluida 1947 Cromatografía de intercambio

iónico

1951 cromatografía de capa fina



Analito

Cromatografía analítica

Fase enlazada Cromatograma

Cromatógrafo

Efluente Serie eluotropica

Fase inmovilizada



Fase estacionaria Fase móvil

Cromatografía preparativa

Tiempo de retención Muestra

Soluto

Disolvente



Método usada para la separación deuna muestra

PRINCIPIO O FUNDAMENTO

Adsorción

Absorción



Interacciones entre cargas

CROMATOGRAFIA DE

INTERCAMBIO CATIONICO

CROMATOGRAFIA DEINTERCAMBIO ANIONICO



Cromatografía por filtración en gel,

separa partículas en función de sutamaño.

Se utiliza en los pasos finales de unproceso de purificación



La cromatografía de fluidossupercríticos (SFC) es un híbrido de la

cromatografía de gases y lacromatografía de líquidos, que reúneciertas ventajas de las dos.



Se forma un fluido supercrítico siempreque una sustancia se calienta por

encima de su temperatura crítica. Latemperatura crítica de una sustancia esaquella por encima de la cual no puedeexistir en fase líquida

independientemente de la presión.



Por ejemplo, el dióxido de carbono seconvierte en fluido supercrítico a

temperaturas por encima de 31°C. Eneste estado, las moléculas de CO2actúan independientemente unas deotras, del mismo modo como lo hace un

gas.



Una propiedad importante de los fluidossupercríticos, que esta relacionada con susdensidades elevadas (de 0.2 a 0.5 g/cm3), es sucapacidad para disolver moléculas grandes novolátiles.

Los analitos disueltos en ellos se recuperan confacilidad dejando que las soluciones se equilibrencon la atmósfera a temperaturas relativamentebajas.

Los fluidos supercríticos tienen la ventaja de quelas difusividades de los solutos son un orden demagnitud superiores a las de los solventes líquidosy las viscosidades son un orden de magnitudinferiores. Estas ventajas son importantes en lacromatografía.



Se aplica a compuestos no volátiles otérmicamente inestables que no pueden

ser separados mediante GC, o aquellosque contienen grupos funcionales queimposibilitan su detección en HPLC.



Debida a las características de la fase móvil(alta presión y temperatura) se empleanequipos parecidos a los de HPLC, pero con

dos diferencias: El empleo de un horno termostático para

poder controlar con precisión latemperatura de la fase móvil.

Restrictor, usado para mantener la presiónde la columna y para convertir el eluyentede un fluido supercrítico en un gas yarrastrarlo al detector.



En la fase estacionaria se emplea, al igualque en la cromatografía de gases, lascolumnas capilares o de relleno.

En la fase móvil, es comúnmente utilizadoel dióxido de carbono, por su fácilobtención como fluido supercrítico,

además de que disuelve gran variedad demoléculas inorgánicas. Como detector se puede emplear el de

ionización de llama, también usado en GC,

ya que permite detectar casi cualquier compuesto orgánico.



Se ha aplicado a la separación de unamplio conjunto de sustancias comofármacos, alimentos, plaguicidas yherbicidas, polímeros, aditivos depolímeros, combustibles fósiles,explosivos y propelentes.

Una de las aplicaciones másimportantes de esta técnica es laseparación quiral, sobre todo en laindustria farmacéutica.



Mezcla de compuestos orgánicosse disuelven en un disolventeadecuado

Se adsorbe en una fase estacionariaComo la alúmina (Al2O3) o gel de Sílice

(SiO2 hidratado) empaquetado en unaColumna de vidrio

Las moléculas con grupos funcionalesPolares se adsorben más fuertemente Ejemplo

una mezcla de un alcohol y un alqueno

por lo tanto puede separarse fácilmente con unacromatografía de liquido debido a queMigran mas fácilmente atraves de la fase el alqueno no polar pasa a través de laEstacionaria que las moléculas no polares de la columna mucho mas rápido

alcohol que es mas polar



Cromatografía de liquido de alta resolución (HPLC)

Basada en el descubrimientode que las separaciones

cromatografías mejoranInmensamente

Si la fase estacionaria estaconstituida por partícula esférica

de tamaño uniforme y muyPequeñas

El tamaño pequeño de lapartícula asegura un área

de superficie grandepara mejor adsorción

Y una forma esférica uniformepermite un empaquetamiento

de partículas uniforme y estrecho



Cromatografía de papel (CP)

Desarrollada por Consden,

Gordon y Martin (1944)

resulta

Separación de aminoácidos

Activa la celulosa en forma de

papel de filtro especialmentePreparado

puede

Aceptar humedad en un 6-7 %



Una mezcla de sustancias y la mezcla de sustancias seDisueltas en la parte inferior separa en una dirección

Del papel y se secala relación entre la distancia

El papel se somete en una recorrida por la sustanciaporcubeta cerrada la sustancia desde el puntode

partidaAl vapor de una disoluciónSaturada de un disolvente y la distancia recorrida por elOrgánico Miscible parcialmente frente del disolvente secon agua denomina Rf

como porejemplo depende de ciertas variables

temperatura, composición deButanol alcohol pentilico o ambas fases, constitución delFenol papel etc.

como consecuencia

Se adsorbe la disolución



se realiza normalmente por el métodoascendente

Generalmente el eluyente

se introduce en la cámarauna hora antes del desarrollo,

para permitir la saturación de

La atmósfera.



Las placas pueden desarrollarse durante untiempo prefijado, o hasta que se alcance una

línea dibujada a una distancia fija desde elorigen.Esto se hace para estandarizar

los valores de RF. Frecuentemente

esta distancia es de 10 cm,parece ser la más convenientepara medir valores de RF.

Después del desarrollo, lasplacas pueden secarse

rápidamente con unacorriente de aire caliente.



Se usan láminas de: vidrio como soporte del

adsorbente, plástico (ej: acetato) ó metálicos(ej: aluminio). Los tamaños de la placa para CCfconvencional son: 20 x 20; 10 x 20 y 5 x 2.

Hay placas que contienen un indicador de

fluorescencia, para facilitar la identificación delas muestras. Si no se usa indicador y loscomponentes no son coloridos se requerirántécnicas de revelado.



Las manchas de color son, por supuesto,inmediatamente visibles; las incoloras pueden

revelarse mediante:• Luz UV

• La introducción de la placa en vapores deyodo.

• El rocío con una solución de agua • Después calentar intensamente



a) Silica gelb) Óxido de Alumínio ó Aluminac) Celulosad) Poliamidas

Para la selección del adsorbentes deber tomar lassiguientes consideraciones:

a) Polaridadb) Tamaño de partícula; a. Diámetro

b. Área Superficialc) Homogeneidad

d) Pureza



a) Temperatura. b) La cromatografía debe llevarse a caboen un área sin corrientes de aire.c) Limpieza de las placas.d) Pureza de los disolventes.



La muestra se volatiliza y se inyecta en lacabeza de una columna cromatografiílla

La muestra debe ser volátil y térmicamenteestable.

La elución se produce por un fluido de gasinerte (He, N2,H2)



Existen dos tipos:

•Cromatografía de gas sólido

(CGS)

•Cromatografía de gas liquido(CGL)



La CGL es la forma mas usada en gases.

Se utiliza como fase estacionaria un liquidoinmovilizado sobre un soporte sólido inerte.

Debe ser estable y no volátil a lastemperaturas empleadas en el análisis, yde naturaleza a las muestras similar a las

muestras que se desea separar en ella.



La aplicación de la CGS es limitada amoléculas polares, la fase estacionaria es

un sólido sobre el que se retienen los

analitos por adsorción física.

Como la retención de las moléculas activaso polares no es permanente se presentan

colas



Detectores más usados en Cromatografíade Gases

Detector de Conductividad Térmica.

Detector de Ionización a la Llama. Detector de Captura Electrónica.

Detector de Fotometría a la Llama.

Detector de Ionización de Llama Alcalina

Detector de Espectrometría de Masas



La cromatografía en fase inversa es unaforma de cromatografía de particiónlíquido-líquido.

Es una de las más utilizadas y entre susaplicaciones destacan la separación de

compuestos farmacéuticos,bioquímicos, forenses, clínicos oindustriales.



En la fase estacionaria presenta un líquido

no polar inmovilizado sobre un sólidorelativamente inerte tal como partículas desílica químicamente modificadas conhidrocarburos saturados, insaturados o

aromáticos de diferentes tipos.

Mientras que la fase móvil se presenta unlíquido polar como agua, acetonitrilo,

acetato de etilo, acetona y alcoholesalifáticos.



El mecanismo de separación está

basado principalmente en interaccioneshidrofobitas que resultan de las fuerzasde repulsión entre un disolvente

relativamente polar, un compuestorelativamente apolar, y una faseestacionaria apolar.

l fí d f i l



En la cromatografía de fase inversa, loscomponentes mas polares son eluidos primeroy los no polares se eluyen en último lugar. Si seaumenta la polaridad de la fase móvil se

aumenta el tiempo de elución



Cromatografía liquida en fasenormal.

En esta cromatografía a diferencia de en fase reversa, la fase estacionaria espolar y la móvil apolar

La cromatografía en fase normal es una herramienta de separación muy potentedebido a la amplia gama de eluyentes disponibles que se pueden utilizar para

ajustar con precisión la selectividad de una separación.

La retención también (como la de fase reversa) tiene lugar en esa especie decapa líquida depositada químicamente, como consecuencia de la distintasolubilidad relativa en la fase estacionaria (polar) y la fase móvil (apolar). Dondeel analito menos polar será el primero que se eluye y el más polar el último en

eluir.

Se deduce que los analitos A, B, C tardan más tiempo en eluirse si se usa una fasemóvil poco polar. Es decir, cuanto más polar sea el analito, más tardará en eluir.



Se basa en la interacción de los analitos

con grupos funcionales polares de lasuperficie de la fase estacionaria, quealcanza su potencia máxima cuando seutilizan eluyentes no polares como fasemóvil.



Bibliografía

Técnicas de análisis de separaciónMiguel Valcáncel cases , A. Gómez Hens

Editorial revertéPág. 615-619 Principios y aplicaciones de la

cromatografía en gases

Miriam Barquero QuirósEditorial Universidad de Costa RicaPág.. 1, 2

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