Procedimiento para la creacin y puesta en marcha de un anlisis de pesticidas por cromatografa HPLC

Se creara un mtodo de anlisis nuevo

Se editaran las condiciones un mtodo de anlisis nuevo

Se coloca todo lo relacionado a las condiciones de trabajo del mtodo de Anlisis como son: quien lo crea, flujo, temp, fase mvil, columna entre otras Condiciones iniciales para la creacin de un mtodo de anlisis nuevo

Se coloca el flujo del mtodo

Si el mtodo lleva gradiente se inserta en esta parte y se van programando de acuerdo a lo establecido en el mtodo de anlisis

Se coloca la temp de la columna

Se coloca la longitud de onda del mtodo

Se selecciona la longitud de onda del mtodo

Se selecciona ok para aceptar las condiciones de integracin establecidas por DEF_LC o si tenemos unas ya determinadas las colocamos

Se selecciona las condiciones del reporte dependiendo la necesidad que se tenga en el momento o las establecidas en el mtodo

Se debe seleccionar save GLPDATA que es guardar datos Como Buenas prcticas De Lab y save Mtodo in Data para que guarde los cambios en el mtodo de Trabajo

Se le da ok para aceptar las condiciones de trabajo de cada uno de los mdulos

Se salva el mtodo de anlisis y se le coloca el nombre predeterminado del mtodo

Escritorio del PC desde donde se activara el modulo de cromatografa

Mtodo guardado y listo para ser usado

Creacin de una secuencia de anlisis (se crea una por cada TURNO

Se establecen las condiciones de parmetros pedidas por el equipo como son nombres de los analistas secuencia de analistas, turno, fecha entre otras

Creacin de una nueva secuencia se colocan los datos dia fecha analista y mtodo Se busca el mtodo a utilizar

Se busca el mtodo a utilizar

Se guarda la secuencia iniciada con los datos expresados anterior mente

Se creara la tabla de anlisis Se programa la muestra que deseamos correr como tambin la seleccin del mtodo de anlisis con el cual se analizara la muestra el nmero de corridas que tendr la muestra entre otras condiciones otras

Se programa la corrida de una curva de calibracin la cual se ver expresada en una linealidad de picos vs a reas de pico de la forma en la que se programara esta curva ser como aparece ilustrada en la imagen La seleccin del mtodo de anlisis por el cual se analizara la muestra Se programa la muestra que deseamos correr como tambin la seleccin del mtodo de anlisis con el cual se analizara la muestra el nmero de corridas que tendr la muestra entre otras condiciones otras

Se guarda la secuencia con el nombre del analista la fecha y el mtodo de anlisis, todos los cambios realizados y condiciones programadas para esta secuencia de anlisis Se coloca en la tabla los pesos de cada uno de los estndares preparados para realizar la linealidad

En esta etapa ya tenemos el mtodo la tabla con las condiciones de trabajo y la secuencia de anlisisEjemplo de cmo debe guardarse la secuencia de anlisis

Este es el reporte del anlisis programado Se activad la secuencia para que inicie las corridas programadas

Se realizara la integracin de los picos de inters utilizando las variables establecidas por el software d l equipo

Ya realizamos la integracin y tenemos los picos que nos interesan

Adicin del 1ernivel o estndar de la curva (linealidad)Creacin de una tabla de calibracin nueva

Adicin del 1er nivel o estndar de la curva (linealidad) y se le coloca la concentracin del estndar

Adicin del 2 do nivel o estndar de la curva (linealidad) y se le coloca la concentracin del estndar Adicin del 2 do nivel o estndar de la curva (linealidad) y se le coloca la concentracin del estndar

Ya vamos a realizar la adicin del 3 er nivel

Ya vemos reflejada la adicin del nivel anterior sea el nivel 2

Ya aqu vemos reflejado los tres niveles de la curva como tambin vemos la linealidad establecida en esta

Ya aqu vemos reflejado los tres niveles de la curva como tambin vemos la linealidad establecida en la relacin picos vs rea

Ejemplo del equipo en el que se Desarroll la investigacin

AGILLENT 1200

Ejemplo de un sistema de HPLC

Qu es Cromatografa Lquida de Alta Eficiencia?La cromatografa es un mtodo fsico de separacin basado en la distribucin de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y otra mvil. En la cromatografa lquida, la fase mvil es un lquido que fluye a travs de una columna que contiene a la fase fija.La cromatografa lquida clsica se lleva a cabo en una columna generalmente de vidrio, la cual est rellena con la fase fija. Luego de sembrar la muestra en la parte superior, se hace fluir la fase mvil a travs de la columna por efecto de la gravedad.Con el objeto de aumentar la eficiencia en las separaciones, el tamao de las partculas de fase fija se fue disminuyendo hasta el tamao de los micrones, lo cual gener la necesidad de utilizar altas presiones para lograr que fluya la fase mvil. De esta manera, naci la tcnica de cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC), que requiere de instrumental especial que permita trabajar con las altas presiones requeridas HPLC = (High Performance Liquid Chromatography) = Cromatografa de Lquida de Alta EficienciaPASOS A SEGUIR PARA LA VALIDACION DE UN METODO DE Y PUESTA EN MARCHA DE UN ANALISIS DE CROMATOGRAFIA HPLCVALIDACIN DEL MTODO ANALTICO

Matriz particular se debe disponer como mnimo:

Blanco de reactivos (ausencia de interferencias).

Blanco de productos o anlisis histricos (ausencia de interferencias).

Recuperacin del analito agregado a una muestra libre de residuo (nivel

Cercano a la tolerancia).

Fijar el lmite de deteccin / cuantificacin.

Calibracin de cromatgrafos: Los parmetros a tener en cuenta son:

Tiempo de retencin. Eficiencia forma de pico. Reproducibilidad. Linealidad.PROCEDIMIENTO PARA LA PREPARACIN DE LA MUESTRA A ANALIZAR

Las muestras deben recogerse en recipientes de vidrio debe ser refrigerada de acuerdo con los requisitos del procedimiento de preservacin de muestra. El Equipo de muestreo automtico debe ser en lo ms posible de plstico y que no haiga otros tipos de contaminantes.Las muestras deben ser refrigeradas a 4 C desde el momento de la recoleccin hastade extraccin.Todas las muestras deben ser extrados dentro de 7 das y analizado por completo dentro de 40 das de extraccin.Aadir 60 ml de cloruro de metileno a la botella de muestra, cubrir y agitar 30 segundos y enjuague las paredes interiores. Transferir el disolvente al embudo de separacin y el extracto de la muestra agitando el embudo de 2 minutos con ventilacin peridica para liberar el exceso de presin. Permitir que la capa orgnica a separarse de la fase de agua por un mnimo de 10 minutos, al producto obtenido de esto se le realizara lo establecido en el procedimiento de cromatografa

CONDICIONES Y PUESTA EN MARCHA DE UN MTODO HPLC PARA DETERMINACIN DE PESTICIDAS

Condiciones de Trabajo:Columna: C18*250*4mmFlujo: 0.3 mL/minFase mvil Agua /Metanol Longitud de onda: 230nmFase mvil ReversaVol de inyeccin: 10uLReporte del anlisis de pesticidas en frutas y verduras

ConclusinDespus de haber aprendido a realizar la creacin de un mtodo de anlisis, una secuencia, una tabla de anlisis, y una curva de calibracin (la cual usara el equipo para realizar la cuantificacin de los compuestos de inters)Podemos decir que esta forma se pondr en marcha el anlisis de los pesticidas que deseamos investigar en nuestra marcha analticaEl mtodo HPLC que presentamos aqu se utiliz de forma directa para el anlisis de carbamatos en frutas y vegetales las cuales fueron extradas en pH neutro con aguaY solventes orgnicos antes de su anlisis por la cromatografa de HPLC.