CONTROL DE CALIDAD EN PARASITOLOGÍA -...
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Dra. Enedina Jiménez Cardoso Laboratorio de Investigación en Parasitología Hospital Infantil de México Federico Gómez CONTROL DE CALIDAD EN PARASITOLOGÍA
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Dra. Enedina Jiménez CardosoLaboratorio de Investigación en ParasitologíaHospital Infantil de México Federico Gómez
CONTROL DE CALIDADEN PARASITOLOGÍA
Programa de control de calidad
Toma de muestra5-10g en un recipiente de boca
ancha limpio, seco y libre de detergentes
Toma de muestra5-10g en un recipiente de boca
ancha limpio, seco y libre de detergentes
Calibrar el equipo(centrifuga y microscopio)
Verificar el buen estado de los reactivos y que la muestra no
presente interferencias
Calibrar el equipo(centrifuga y microscopio)
Verificar el buen estado de los reactivos y que la muestra no
presente interferencias
Reporte Post-AnalíticaReporte Post-Analítica
Transporte en Formalina al 5%Transporte en Formalina al 5%PROCEDIMIENTO
Realizar análisis coproparasitos-cópico por concentración: flotación o sedimentación
PROCEDIMIENTORealizar análisis coproparasitos-
cópico por concentración: flotación o sedimentación
Archivar una copia del resultadocon los datos del paciente, de la
muestra, del analista y del laboratorio
Archivar una copia del resultadocon los datos del paciente, de la
muestra, del analista y del laboratorio
Recepción Datos completos del paciente,fecha y hora de la recolecciónfecha de recepción, código de
la muestra
Recepción Datos completos del paciente,fecha y hora de la recolecciónfecha de recepción, código de
la muestra
Identificación de las formas parasi-tarias teñidas con lugol, usando
micrómetro Incluir control positivo,comparar con fotografías y laminillas de colección
Identificación de las formas parasi-tarias teñidas con lugol, usando
micrómetro Incluir control positivo,comparar con fotografías y laminillas de colección
Evaluación de resultadosReportar casos raros para los
estudios epidemiológicos y realizar una colección con tinción
permanente
Evaluación de resultadosReportar casos raros para los
estudios epidemiológicos y realizar una colección con tinción
permanente
Fase Pre-analíticaFase Pre-analítica Fase AnalíticaFase Analítica Fase Post-AnalíticaFase Post-Analítica
Diagnóstico de Parásitos intestinalesDiagnóstico de Parásitos intestinales
Analisis coproparasitoscopicoFase preanalítica
Toma de MuestrasCondiciones
Aceptables.La muestra será la primera de la mañana y remitida al Laboratorio.Si es un Bebé, la muestra se tomará del pañal.Tres días consecutivos.Se enviará en un frasco de boca ancha.
Inaceptables.Contaminadas con orina.Mas de cinco días de emisión.Almacenadas en temperaturas inferiores a 0°C, mayores a 50°C.
MANEJO.
Rotularla con la siguiente información.- Fecha de colección- Nombre y número de identificación del paciente.- Historia clínica con datos de importancia para el
diagnóstico correcto.
Coproparasitoscopico, transporte, ejecuciónFase preanalítica
Fase Analítica
LABORATORIO (a, b, c).
Debe contar con un área de recepción de muestras y otra para desarrollar la
metodología restringido para actividades tales como comer, beber, fumar.
a) MATERIAL. b) CRISTALERIA c) REACTIVOSCentrifuga. Cubreobjetos Formalina 5%
Microscopio óptico. Portaobjetos Lugol-Yoduro 2%
Densímetro Tubos de ensaye Sulfato de Zinc
Balanza granataria. (13x100mm) 33% δ 1.180.
Embudo de plástico.
Malla de alambre galvanizado.
Fase AnalíticaControl de Calidad
a) CALIBRACIÓN DEL MICROSCOPIO.
Controles, fotografías y laminillas de parásitos conocidos.
b) PRECAUCIONES.Uso de guantes, bata y trabajar en un área destinada únicamente al procesamiento de las muestras.Las muestras diarreicas deben analizarse en los treinta minutos siguientes a su emisión.
c) ERRORES.El que los reactivos no estén en condiciones óptimas.(Frascos con fecha de elaboración).Confusión de artefactos con formas parasitarias.Confusión de genero yo especie del parásito observado.Densidad del sulfato de Zinc a una densidad diferente
d) LIMITES DE REPORTE.Estadio del parásito.Género del parásitoEspecie del parásito.
Fase AnalíticaControl de Calidad
Artefactos más comunes en el análisis de concentración por flotación
1. La materia fecal contiene en muchos componentes entre ellos se encuentran:
1.1.- Residuos de alimentos.1.2.- Productos de digestión.1.3.- Células epiteliales, leucocitos, eritrocitos.1.4.- Levaduras y bacterias.
2. Es necesario hacer la diferencia entre los parásitos, de otros elementos presentes en las heces.
2.1.- Material derivado de células humanas.2.2.- Cristales de Charcot-Leyden
Fase AnalíticaControl de Calidad
2.3.- Células epiteliales.2.4.- Macrófagos2.5.- Leucocitos polimorfonucleares2.6.- Eritrocitos
3. Otros elementos.
3.1.- Algas3.2.- Conidias3.3.- Esporas3.4.- Elementos de plantas3.5.- Granos de polen3.6.- Esporas3.7.- Artefactos de tinción3.8.- Espirales vegetales3.9.- Levaduras
Fase AnalíticaControl de Calidad
artefactos
Fase AnalíticaDiagnóstico Presuntivo (1)
Procedimiento
ProtozoariosQuistes/Huevos
HelmintosLarvas
ProtozoariosQuistes/Huevos
HelmintosLarvas
Heces no preservadas
0.85% NaCL Formalina al 5 ó 10% Fijador de Schaudinn´s
Obtención Directa Concentración Tinciones permanentes
ProtozoariosQuistes/Huevos
HelmintosLarvas
ProtozoariosTrofozoitosY Quistes
Motilidad MorfologíaGeneral
MorfologíaPrecisa
Fase AnalíticaDiagnóstico presuntivo (2)
Procedimiento
HecesMuestra líquida
HecesMuestra líquida
5 a 10% deFormalina
Mezclar 3-4 gotas conPVA con la ó 2 gotas
de la muestra
Fijador deSchaudinn´s
Concentrarla Tinciónpermanente
Tincionespermanentes
Huevecillos o larvas de Helmintos
ProtozoariosHelmintos
ProtozoariosHelmintos
MorfologíaGeneral
Morfología precisaProtozoariosy/o Helmintos
Morfología PrecisaProtozoariosy/o Helmintos
• Van Leewenhoek conocido como el padre de la microbiología (1632)
• Realizo la primera observación de Giardia
• Ninguna relación entre el microorganismo y su patología
• En 1859, Vilem Lamblobservo Giardia en muestras de niños con diarrea
• Comensal• Giardia lamblia
Es el agente etiológico parásito más importante que causa diarrea en niños.Lewis, D.J. Dig Dis. 1992;10(2):102-11. Farthing, M. J. Gastoenterol
Clin North Am. 1996;25(3):493-515.
En Asia, Africa y Latinoamerica se reportan 200 millones de personas con Giardiasis sintomática y 500,000 casos nuevos de Giardiasis por año.
WHO (1996) The World Heath Report 1996, WHO.
Afecta un gran múmero de mamíferos entre ellos a los animales domésticos. Por lo que además de la importancia médica y veterinaria este parásito se hace peculiar por sus características genéticas que lo ubican ocmo el eukariote más primitido.
Upcroft, J; Upcroft, P. Bioessays. 1998;20(3):256-63.
G. intestinalis
Colonización
La ingestión de quistes permite pasar a éstos por el estómago y el desenquestamiento se lleva a cabo por al breve exposición con el ácido clorídico pH2, después de 5 a 10 minutos los trofozoítos colonizan la parte alta del intestino delgado.
Adherencia
Los trofozoítos se adhieren a la mucosa intestinal por el disco ventral
suctorio mediante microtúbulos que adheridos a la microbellocidad
intestinal provoca un aplanamiento de ellas y como consecuencia su
disfunción.
• Anaeróbico
• Amitocondrial
• Sensible a
fármacos
• Plásmido o virus
• Gen para toxina
• Dos núcleos
simétricos
• Citoesqueleto
desarrollado
• Cromosomas
múltiples
1. Núcleo2. Cuerpo medio3. Axonema4. flagelos
1. Núcleo2. Axonema3. Pared4. Cuerpos obscuros
• Asintomática•Portador
• Sintomática•Diarrea•Perdida de apetito•Calambres•Nausea•Pérdida de peso y deshidratación•Síndrome de malabsorción
giardiasis
diagnóstico
• El diagnóstico se hace al identificar los quistes y/o trofozoítos en heces.
• aspirado o biopsia duodeno-yeyunal.• El examen simple de una sola muestra de
heces no es suficiente (50-70%).• 3 muestras en un período de una semana
(90-95%).
Parasitosis intestinal por protozoarios
GIARDIASIS
HISTORIA NEGATIVO NO DESCARTARDIAGNÓSTICO
POSITIVO
TROFOZOITOS EN DUODENO
NEGATIVO
POSITIVO
DIAGNÓSTICOCONFIRMADO
NEGATIVO
NEGATIVO
POSITIVO
DIAGNÓSTICOCONFIRMADO
POSITIVOTRATAMIENTO
• DIARREA PERSISTENTE• MALA ABSORCIÓN• FLATULENCIAS
TROFOZOITOS O QUISTES EN MATERIA FECAL
DIAGNÓSTICO
1 200pb
1 2 3 4 Electroforesis en gel de agarosa al 1% en el que se observa: 1.- Marcadores de pesos moleculares.2, 3, 4.- Producto de RCP, fragmento de 1200pb que codifica para la enzima glutamato deshidrogenasa (gdh) de Giardia lamblia.
Reacción en Cadena de la Polimerasa
Análisis de los genes tsp11 y gdh de Giardia intestinalis
tsp11 gdh
Kpn I Xha I Hind III Sph I Apa I BspH I EcoRI Kpn I
Genogrupo Producto ProductoKb Kb
AI 1.80 + + + + 1.20 + + + +
AII 1.80 - - - - 1.20 + + + +
B No 1.20 - - - -Amplifica
transmisión zoonótica
transmisión zoonótica• 10% en perros bien
tratados• 36 a 50% en cachorros• hasta 100% en
criaderos.
En gatos es de 1,4-11% (dificultad para identificar el organismo)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
A A2 A3 A4 B G
ASINTOMATICOS
SINTOMATICOS
CULTIVOS
PERROS
Genogrupos de Giardia intestinales y su relación al origen del aislamiento
Árbol filogenético del gen ribosomal 16S, de aislados de Giardia intestinalis humanos y
caninos
Aislado Grupo
1) Ad23 F
2) Ad28 B
3) Ad137 C
4) Ad148 D
5) Ad13 A
6) Bris136 AII
7) Rat G
PM F B E C D AI AII Gpb
2000 -1500 -
1000 -
500 -
Multiplex
MuestrasAssemblage A
AI AII
Cultivon=6
6/6(100%)
0/6
Humanon=12
5/12 (41.66%)
7/12(58.33%)
Perron=20
11/20 (55%)
9/20 (45%)
Totaln=38
22/38 (57.89%)
16/38(42.10%)
Genotipo de Giardia intestinalis en aislados obtenidos de perros y humanos, mediante la restricción del gen de β-
giardina
