Di r ecci ó n:Di r ecci ó n: Biblioteca Central Dr. Luis F. Leloir, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires. Intendente Güiraldes 2160 - C1428EGA - Tel. (++54 +11) 4789-9293

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Tesis de Posgrado

Contribución al estudio químico-Contribución al estudio químico-legal de las manchas de la sangrelegal de las manchas de la sangre

Fliess, Alois D.

1912

Tesis presentada para obtener el grado de Doctor en Químicade la Universidad de Buenos Aires

Este documento forma parte de la colección de tesis doctorales y de maestría de la BibliotecaCentral Dr. Luis Federico Leloir, disponible en digital.bl.fcen.uba.ar. Su utilización debe seracompañada por la cita bibliográfica con reconocimiento de la fuente.

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Cita tipo APA:Fliess, Alois D.. (1912). Contribución al estudio químico-legal de las manchas de la sangre.Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.http://digital.bl.fcen.uba.ar/Download/Tesis/Tesis_0087_Fliess.pdf

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M.on

UNIVERSIDAD NACIONAL DE BUENOS AIRES

FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS FÍSICAS Y NATURALES

. Contribución al estudio quimico legalDI LA.

Manchas de Sangre

PRENTADA PARA OPTAR AL TITULO DE DOCTOR EN QUI ICA

POR

ALOIS D. FLIESS

BUENOS AIRES

“LA ARGENTINA" — Inpuer Y EICUADIIIACIÓI- BAITA í 167i

1912

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A LA MEMORIA DE Ml PADRE

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A MI MADRE Y A MI HERMANO ENRIQUE

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A MIS HERMANOS

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A LOS MIOS

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Señores Couscjeros: ¡”JS v \| '-,.1 :3 ,0 5' ?

Señores Profesores: ¡f A” jo ’“.El trabajo que tengo el honor; (kr presentarosxfia

optar al título de Doctoren quírpïía, ¿unacontribución al estudio químico légïïflárdglasg ‘de sangre. En la primera parte del i'ii‘s-¿il‘oüde reunir los conocimientos teóricos, necesarios parala práctica de las reacciones corrientes en la investi­gación de las manchas de sangre. Dedicando la se­gunda parte de este trabajo, a la aplicación prácticade los diversos. métodos de que disponemos'para laidentificación de las mismas.

Al someterme a la última prueba, cumplo con undeber al agradecer al cuerpo de profesores de esta fa­cultad, las enseñanzas recibidas.

A mi padrino de tésis Dr. Jacinto T. Raffo, mireconocimiento por el honor que me dispensa al acom­pañarme en'este acto.

A los Dres. José Penna, Juan B. Emina, EnriqueHerrero Ducloux, Jacinto T. Raffo, Guillermo Schae­fer, Francisco P. Lavalle, Felipe Justo y Pedro J. Gar­cía mi gratitud por las atenciones y enseñanzas recibi­das en mi carrera universitaria.

No quiero terminar, sin hacer presente en esta in­troducción, el reconocimiento y afecto que mi eSpíritu.gnarda por Ia' memoria del malogrado Dr. FedericoJ. ’I‘agliabue.

3*

PRIMERA PARTE

CAPITULO I.

Caracteres físicos

Todas las funciones nutritivas están confiada; enprimer término a la sangre, asi como el sistema ner­vioso es el encargado de las funciones de relación; porlo tanto, se encontrarán en ella todas las sustanciasdestinadas a alimentar los tejidos y todos los produc­tos residuales que deben ser eliminados.

La sangre es fluida y circulante, lo que le permitesu objetivo de relacionar y ligar todos los tejidos fi­jos y sirviendo así de intermediaria, para el cambiode materiales del organismo. Contiene numerosos cor­púsculos celulares (glóbulos rojos, blancos y liemato­blastosl y una sustancia intercelular: el plasma.

Establecido asi ligeramente el papel fisiológico dela sangre pasaremos a ocupamos de sus propiedadesfísicas.

COLOR. — Es un líquido rojo, rojo escarlata lasangre arterial y dicróica la venosa; es decir, presentados colorueiones, una rojo obscura por reflexión y laotra con tintes verdosos’ por refracción, es opaca de­bido a la presencia de corpúsculos en suspensión yvista a través de capas muy delgadas, es translucida.

OLOR. — Su olor recuerda el del suero del ani­

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mal de que proviene, es debido a la presencia de ácidosgrasos volátiles; exaltándose dicho olor si se.añade áci­do sulfúrico a la sangre, que pone en libertad los ácidosgrasos.

SABOR. —-Tiene un sabor salado y desagradable.DENSIDAD. — La densidad de la sangre es muy

variable, en el hombre oscila entre 1.055 y 1.065; enla mujer entre 1.050 y 1.060, considerados ambos enestado fisiológico.

En la determinación del peso específico de la san­gre. puede ocurrirnos, que dispongamos de suficientecantidad de sangre ó de muy pequeñas porciones de lamisma, variando entonces el detalle del método. Cuan­do se dispone de cantidades suficientes de sangre, seemplea un pienómetro de 100 cc. de capacidad, la tapaque lo cierra está ajustada al esmeril y lleva en suinterior un termómetro que está soldado a la misma,con objeto de operar á la misma temperatura. Se lim­pia perfectamente el picnóinetro, se seca, se pesa va­cío,, se vuelve a pesar lleno de agua destilada, se vier­te el agua se seca, se lava con alcohol y eter, se vuelvea secar y se pesa nuevamente lleno de sangre; la sen­sibilidad de la pesada debe ser al milígramo. La den­sidad la obtendremos aplicando la siguiente fórmula:

_ o" p)D _ (P —p)

En la p peso del picnónietro vacíon n P n ‘ n n con agua destilada

n n P’ ,, ,, ,, con sangre

Si la cantidad de sangre de que disponemos esmuy pequeña seguiremos el mismo método disminuyen­do las dimensiones del picnómetro; lo que se realiza

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con el picnómetro capilar de Schmaltz. Este aparatoconsiste en un tubo capilar de vidrio de 12 ct. de lar­go por 1.5 mm. de ancho. Para obtener con él ladensidad de la sangre se opera en la forma siguiente:Sc limpia perfectamente el picnómetro, se seca y lue­go se pesa, se introduce por aspiración agua destiladay se pesa nuevamente, se extrae el agua, se seca, selimpia con alcohol y éter, se vuelve a secar y se intro­duce ahora sangre por aspiración y se pesa. Con losdatos obtenidos se produce como en el caso anterioraplicando la fórmula ya mencionada.

VISCO . lDAl). — Un fluido perfecto sería aquél,que considerado únicamente en la parte interna de sumasa liquida, tuviese sus partículas dotadas de unaextrema movilidad, la que podíamos considerar ilimi­tada. Pero esto no sucede con los líquidos que cono­cemos, pues no son fluidos perfectos y sus partículas noestán dotadas de esa extrema movilidad por el con­trario, encuentran al deslizarse las unascon las otras, una cierta resistencia. Seexpresa este hecho diciendo? que los lí­quidos son viscosos unos más que otros,pero aún en distinta medida todos losson. La sangre es viscosa, su viscosidades variable según la especie animal y de­pende en gran parte del número de cor­púsculos que tiene en suspensión.

La viscocidad relativa de la sangre,se toma coniparándola con la del agua:el aparato empleado en este caso es el

de A. Mayer (fig. 1). La operación con- FH“siste en medir por medio de un cronó- ApparodeMayergrafo el tiempo T empleado por la sangre, colocada

A

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hasta llenar la hola A, en descender por el capilar Hy llenar la hola B, se lava el aparato, se seca y se re.­pite la misma operación con agua destilada, midiendoel tiempo 'l". empleado en esta segunda operación. Latemperatura debe ser la misma en ambas medidas, loque se obtiene operando en un termostato especial, osimplemente en un recipiente de tempratura constante.

n - T . .la] cociente T , da el coeficnente de velocidad.

Pl-llCSION OSMOTICA.—J. H. Van ’T Hoff ha es­tudiado y establecido la teoría de las soluciones, laque sintetizaremos en breves líneas. Las sustanciasdisueltas en un líquido, se encuentran en un estadoanálogo al estado gaseoso; recordaremos que todo gasse caracteriza físicamente por los siguientes elementos:temperatura volumen y presión; veamos ahora estoselementos en las soluciones. Uua sustancia disuelta enun líquido. tiene una temperatura, que estará dadapor la que marque un termómetro sumerjido en lamisma, su volumen será el volumen final de la solu­ción, en cuanto a la presión, un ligero analisis nosaelarará este concepto; si en un líquido introducimosun cuerpo soluble, este caerá al fondo del recipienteen que está contenido el líquido y estará rodeado porlas capas inferiores del mismo, que serán las únicasque podrán ejercer su acción disolvente; pero despuésde un cierto tiempo la sustancia sólida, está comple­tamente disueltu _\'repartida igualmente en todo el lí­quido, lo (¡ne nos lleva forzosamente a aceptar la exis­tencia en el líquido, de una presión que se ha dirijidoal encuentro del cuerpo sólido, y lo ha llevado y difun­dido en todas las direcciones. Esta presión interna dellíquido, análoga a la presión internade un gas que

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también lo difunde en todas direcciones, 'se llama pre­sión osmótica de la solución.

¡.a presión osmótica de una solución, es directa­mente proporcional a su concentración; así, cuandomás concentrada es una solución mayor es su presiónosmótica. Las soluciones que tienen la misma presiónosmótica se laman isotónicas y anisotónicas las quetienen distinta presión osmótica, denominándose hiper­tónicas las de mayor presión'y bipotónica la de menorpresión. Se llama membrana semipermeable. unamembrana, que formando una de las paredes de unrecipiente que contenga una solución, deja pasar a tra­vés de sus poros solamente al disolvente impidiendo elpaso de las sustancias disueltas. Dos soluciones isó­ticas, separadas entre sí por una membrana semiper­ineable: como las presiones a uno y otro lado de lamembrana son iguales, no se establece ninguna c0­rriente líquida a través de ella, en cambio si las s0­luciones son de distinta presión osmótica, se estable­ce una corriente, que va de la solución más diluidaa la más concentrada, corriente que cesa, cuando lasdos soluciones han adquirido la misma presión osmó­tica.

La sangre, representa en conjunto, una soluciónde sustancias orgánicas y minerales, enla que nadanlos corpúsc'ulos (glóbulos rojos, glóbulos blancos y lle­matoblastos); las sustancias disueltas, son las que de­terminan en la sangre su presión osmótica, los cor­púsculos que viven en este medio sufren dicha presiónosmótica. i

Entre los corpúsculos que tiene la sangre se hallanlos glóbulos rojos. que contienen una sustancia (-nlo­rante de color rojo, la hemoglobina; la hemoglobina

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está íntimamente fijada al glóliulo y no se difunde enel plasma, las cOsas están dadas de manera que latensión osmótica del suero sanguíneo, equilibra la ten­sión interna del g'lóhulo rojo, pero si por una cir­cunstancia cualquiera se disminuye la tensión osnió­tica del plasma sanguíneo, el glohulo rojo se deforma.se distiende por causa de la disminución de presión asu derredor y acaba por romperse, dejando pasar en­tonces su materia colorante al plasma. que se colorea asl] vez.

La presión osmótica de la sangre. no es la misma cntodas las especies de mamíferos; según Eykinan, lapresión osmótica del suero de la sangre humana. enindividuos anos y enfermos, corresponde a la presiónosniótica de una solución de 0.78 a 0.90 por 100 decloruro de sodio. Entre los distintos métodos para de­terminar la presión osmótica de la sangre’ citaremosel de llamlmruer. que se funda en la investigación deuna solución de cloruro de sodio isotónica con el suc­ro sanguíneo.

Si diluimos el suero sanguíneo, de una cantidadcualquiera de sangre. con 50 o 60 olo de agua dila­tada, disininuirenios la presión de dicho suero _\'comoconsecuencia de esta disminución de presión. los gló­liulos rojos cederan su hemoglobina que pasará alsuero, coloreándolo. Ahora liien. si en una soluciónde cloruro de sodio. isotóuica con la sangre. introdu­cimos glóbulos rojos. estos permanece 'án inalteralilespero si diluiinos esta solución agregándole agua. la he­moglobina pasara como en el caso anterior y colorea­rá cl líquido.

La tecnica del metodo de llamburger, es la si­guiente: en un soporte pa 'a tuho de ensayo, se colo­

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can seis tubos de ensayo numerados; en cada uno de.estos tubos se vierten 5 cc. de suero, luego se añadea cada uno de los seis tubos de ensayo agua destiladaen la siguiente forma: al primero 3.1 cc., al segundo3.0 cc., al tercero 2.9 cc., al cuarto 2.8 cc., al quinto2.7 cc. y al sexto 2.6 cc. Después se dejarán caer.en cada uno de los tubos, tres gotas de sangre desfi­brinada, agitando y centrifugando por último dichasmezclas. Por otra parte, se disponen en otro soportepara tubos de ensayo, otros seis tubos numerados yse. vierten en cada uno de ellos, 8 cc. de una soluciónde cloruro de sodio cuyo título es para cada uno delos seis tubos respectivamente de: 0.62 o|o, 0.6]. oio.0.in olo, 0.59 lolo, 0.58 oio y 0.57 olo, luego se dejacaer como en el caso anterior, tres gotas de sangredesfibriuada en cada uno de los tubos y se agita. ’l‘rans­curridas dos horas, se observan los tubos de las dosseries y se observa:

1.".Que en todos los tubos se han depositado losglóbulos rojos;

2“. Que en algunos de' los tubos, el líquido se man­tiene rojo por la salida del pigmento y en otros no.

Supongamos que los tub0s en que se ha produ­cido la salida del pigmento correspondientes a la pri­mera serie, es decir. los que contenían suero y agua,fueran el 1“., y 3°. que correspondían a los siguien­tes titulos: 3, 1, 3.0 y 2.9, luego la mezcla de 5 cc.de suero _\'2.9 cc. de agua destilada. ofrece la salidadel pigmento. Observamos la segunda serie y notamospor ejemplo. que en la solución de cloruro de sodioque lla permitido el pasaje del pigmento es la queresponde a un título de 0.58 olo.

Por esas razones, .

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u)­- ésns— . , _la mezcla de s) cc. de suero +- -,', 1-=2.8=nle agua

es isotónica con una solución de cloru ro de sodio de:

urs 0:9’ Ï = (¡.585"/h

(.‘on estos datos podemOs calcular. con que solu­ción de cloruro dc sodio, es isotónico el suero normal,no diluido, planteando la siguiente proporción:

5 : Í) -|- 2.87) :2 0.355 : X

de la que se deduce:

r o r- - x­x :2 + """_X “"1” = 0.92 '1..

i)

De manera pues que en este caso, el suero de lasangre es isotónico con una solución de ClNa al0.92 oIo.

COAGULACÏON. — Como ya hemos visto, la san­gre circulante en el organismo de los vasos, está cons­tituida por un líquido: el plasma sanguíneo, que lle­va en suspensión los elementos figurados: "lóbulos ro­jos, glóbulos blancos y bematoblastos. Extraída delos vasos y abandonada al reposo en un recipientecualquiera, permanece líquida un tiempo variable,coagulándose luego. casi bruscamente; es decir, set'ansforma en una masa gelatinosa. (‘uando reciénse lia producido la coagulación.) toda la sangre pre­senta el aspecto de una masa; pero bien pronto co­mienza a contraerse esta masa y a expulsar un líquidoclaro, de manera que al cabo de varias horas quedaen el recipiente un blok rojo bastante duro, el coá­gulo rodeado de un líquido algo amarillento, el suero.

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El coágulo, esta formado por los glóbulos sanguí­neos. aprisionados dentro de una especie de retí­culo: las mallas o filamentos de este retíeulo, estánconstituidas por una sustancia albuminoide: la fibri­na. (‘omo \-'emos,- el plasma y el suero, difieren ensu composición por de pronto, el suero está despro­visto de fibrina. el suero se presenta en la sangrecoagulaila. en cambio el plasma. se halla en la’san­gre circulante en los vasos. "'

Si queremos obtener plasma sanguíneo. al extraerla sangre, debemos evitar que coagule y luego separarmecánicamente los eorpúsculos del plasma. en el quese hallan en suspensión. Varios procedimientOs nospermiten impedir la coagulación de la sangre:

Procedimiento de In .I/ugulur. — En los vasos. lasangre es fluida. luego si se aisla convenientmnentela vena yugular (le un caballo, la sangreque circulaen esta vena es fluida; ahora efectuando dos ligadu­ras que permitan llenar la vena de sangre e impidany la aislen de la circulación, obtendremos una especiede saco lleno de sangre; Seccionando de__unoy otro¡ado de las ligaduras. podremos retirar la vena Ile­na de sangre; como los glóbulos sanguíneos del caba­llo son mucho más pesados que el plasma. observa­remos en nuestro saco artificial. dos zonas bien deli­mitadas: la inferior. que ocupa la mitad de la vena,formada por glóbulos sanguíneos _\'la mitad superiorpor el plasma. El plasma asi obtenido es puro, pe­ro en cuanto se le retira del vaso coagula.

l'asos y, eánulus para/ínudas. — Si introducimosen una arteria una cánula que baya sido vaselinada oparafinada interiormente y ponemos en comunica­ción, .por medio de un tubo de cautchut también para­

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finado o vaselinado interiormente, dicha cánula. con,un recipiente cuyas paredes también han sido parafi­nadas o vaselinadas, la sangre que reciba este reci­piente se conserva mucho tiempo sin coagular. siem­pre que la sangre al salir, no se haya puesto eu con­tacto con los tejidos de la herida. Ahora, si conlasmismas precauciones, trasvasamos esta sangre a u'ntubo y la centrifugamos, separaremos mecánicamen­te, el plasma de los glóbulos. I

EHFRIAMIEN'I‘O. — Una vez extraída la san­gre del vaso y enfriada rápidamente a una temperatu­ra vecina de 0", permanece líquida.

SANGRE DE LOS OVIPAROS. — Si se efectúauna sangría en un pájaro, la sangre que se obtieneooagula: pero si se recoge, teniendo la precaución deintroducir una cánula en la arteria incidida. de mane­ra a impedir que la sangre que se escapa por la lie-'rida, venga a estar en contacto con ella y se pierdenlas primeras porciones, la sangre que sigue escapán­dose, no coagula.

CABEZAS DE SANGUIJUELAS. — Inmirgien­do cabezas de sanguijuelas durante algún tiempo enalcohol, luego desecadas y pulverizadas, este polvopuesto en contacto con agua salada al 1 oïo, y filtran-rdo esta solución salada. el líquido filtrado que se ol)­tiene puesto en contacto con sangre, impide su coagu­lación.

PEP’I‘ONA DE WHITE. .— Si se inyecta una so­lución de peptona de White en el sistema venoso de unanimal y luego se efectúa una sangría en el mismo,la sangre que se obtiene no coagula.

Sales neuh-as.—Cuando se recibe la sangre al sa­lir del vaso en una solución de cloruro de sodio, o de

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sulfato de Magnesio, etc., de suficiente concentración,la sangre no coágula.

DECALCÏFICANTES. — Si se recibe la sangreen un recipiente conteniendo una solución capaz deprecipitar las sales de calcio, por ejemplo: solucio­nes de oxalatos neutros o de citratos, en estas condi­ciones, la sangre no coagula.

CAUSAS DE LA COAGULACION DE LA SAN­GRE. — Estudiaremos muy ligeramente este punto,limitándonos solamente a indicar, las causas que enotra epoca se creyeron que intervenían en este fenó­menos. Se supuso que intervenía la temperatura, atri­bnyéndose al enfriamiento que sufría la sangre, alsalir del vaso; pero esta consideración queda destrui­da si recordamos que precisamente enfriando la san­gre, se impide su coagulación. El contacto del airese pensó que podría influir en este fenómeno, lo quehay que abandonar en presencia del lieclio de que lasangre en el vacio también coagula. El reposo tam­poco explica este fenómeno, pues si agitamosïiva­mente la sangre contenida en un recipiente, con unavarilla cualquiera, la sangre también coagula. Se hasostenido que la sangre coagula porque ella no se ha­lla en contacto con la pared vascular sana y comoanálogamente, la sangre extraída con cánulas para­finadas o vaselinadas y recibida en recipientes tam­bien parafinados o vaselinados, que no moja, no coa­gula; se agregaha que la sangre en el interior de losvasos no moja las paredes de los mismos, lo que 'nopuede ser aceptado, pues los cambios materiales quese efectúan entre la sangre _\' los líquidos (le los teji­dos. exigen que la sangre inoje la pared vascular.

Como vemos. todas estas razones, no explican el

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fenómeno de la coagulación de la sangre; investiga­dores posteriores, siguiendo las huellas de AlejandroSchmidt, buscan la causa del fenómeno de la coagu­laeión de la sangre en otro terreno de hechos, atribu­yóndole un origen ldiastásico. l‘ln breves palabras|i0squejarenfi)s esta teoria. La sangre circulante enlos vasos tiene la siguiente composición:

Sangre on l—¡arte de glóbulos) rojo . banco-y lia-matohla-toslos vas... I \ sus! ¡lu-ia minerales

1 — parte ue ¡Lu —m-. l . I . .su tuu-l .s nrgumeas

l‘lntre las sustancias orgánicas que se hallan enel plasma sanguíneo se encuentran las sustancias pro­teicas que desempeñan un papel muy importante enestos fenómenos -_\'que detallamos en el cuadro ad­junto:

ero ailuiuám

Sulilurilspl'oteieals4'núcleo all-ll IIÏIIHld"

'l‘odas estas sustancias tienen los carácteres gene­rales de los alhuminoides, permitiendo sus carácteresrlit'erem-iales elasifiearlas en los distintos grupos delas sustaneias proteicas.

l‘ll suero sanguíneo, es decir, el líquido exudadopor el eoágulo, es un liquido claro que lleva en solu­ción sustancias orgánicas y minerales, entre las sustan­cias orgánicas se hallan las protóicas cuyo detalle esel siguiente:

s -ro albúmina

l su") gíolnuliua

i lilvrin glohulma Inucleo albuunnoule

Su lam-ias protein-us

_¡s ._-__

(‘ompu 'ando ahora la composición del plasma san­guíneo con la (l'el suero, hallamos:

1-".Que el librinógcno del plasma ba desaparecido;2". (Que en el suero ba aparecido una sustancia‘

nuev- , la libringlobulina;.‘l’.Que los glóbulos sanguíneos se hallan aprisio­

nados por una nueva sustancia. la fibrina.l‘or el becbo de la coagulación, todo el ñbinó­

geno del plasma lla desalmrecido, pero el peso de fi­brina prozlucida, no corresponde al de fibrinógeno con­sumido.

l‘lste orden de cosas ha conducido a varios experi­mentadores a admitir que por el hecho de la coagu­

. lación, el fibrinógeno se hubiese desdoblado en fibrinay libriuog'lobulina, pero esta interpretación es dudosa‘pues las relaciones del librinógeno, fibrinoglolmlina yfibrina son aun oscuras. en muchos puntos. lio que, pa­rece indudable es que el fibrinógeno se ha transfor­mado en fibrina; su interpretación según la teoría.ldiastásica. es la siguiente:

'(‘uando la sangre sale de los vasos aparece enella un fermeilto (una diastasa de origen leucocitarioprobablementel llamada trombina o plasma; bajo laacción de esta diastasa desaparece el fibrinógeno y seproduce la fibrina, que encierra entre sus mallas losglóbulos. s

Una condición esencial para que se produzca la.coagulación es que en el plasma se. hallen disueltassales de calcio (ver acción d'e los oxalatos); Pekelha­rin},r_\'llanunarsten, ban demostrado que la interven­ción de las sales de calcio en la- coagulación, se hacede la siguiente forma: la trombina no aparece inmedia­tamente, por el contrario, ella tiene un precursor inac­

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tivo que es la protrombina, quien bajo la influenciade las sales de calcio se transforma en trombina, quees activa. Respecto al origen de la protrombina. quece que ella proviene de los glóbulos blancos, quienesla ponen en libertad, según unos, por una excreciónosmótica y fisiológica de los mismos; según otros,por una destrucción aniïtóinica de los leucocitos. Másverosímil es que se trate de una alteración de los leu­cocitos.

Muchos sostienen que la diastasa. que producela transformación del fibrinógeno y la formación de fi­brina. es exudada por los liematoblastos, quienes po­nen en libertad esta sustancia, destruyendose. llosque tal hipótesis sostienen lo hacen fundándose enel becbo de que observado al microscopio sangre coa­gulada, los liematoblastos aparecen entre los filamen­tos de fibrina, ocupando posiciones tales, como losvértices de la red de tibrina, que haría suponer serellos. su punto de origen. Conviene referir los intc­resantes estudios de Aynand, quien en su tesis parael doctorado en medicina “Globulin des Mammiferes”,

Facultad de Medicina de l’arís, año 1909, se ocupa deestudiar el tercer elemento de la sangre. el bemato­blasto de l-laycm o pladueta de Bizzozero, que Ay­naud designa con cl nombre de globulino. conservan­do la denominación que le dió su descubridor, Donnc.

El autor citado. en el capítulo XIII “Globulinsel .becbo de que observando al microscopio sangre coa­gulación de la sangre comience. los globalinos handesaparecido, pero si se evitan todas las causas quepuedan destruir los globulinos, es decir. la arteriaque. va a producir la sangre, debe ser descubiertacon cuidado. no rompiendo los unisculos. artcriolas

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ni vónulas vecinas, líundiendo de un solo golpe eu laarteria una gruesa aguja de acero de 2 a 5 milíme­tros de diámetro interior, vaselinada. La sangre queescapa entonces de la arteria, recogida en un vasograduado, parafinado interiormente, coagula sin quese destruyan sus globulinos. Aynaud procede en lasiguiente forma:

1". Toma una gota de sangre de asno, desprovis­ta, por sedimentación, de la mayor parte de sus gló­bulos rojos, "la coloca en gota pendiente sobre una lá­mina vaselinada y la examina al microscopio, a la tem­peratura de 20 a 30 grados; al cabo de un cierto tiem­po (30 minutos a 1 llora), los globulinos se inmovili­zan y toman una forma redondeada.

Removiendo la preparación, el plasma coagula,los globulinos se_ven aislados los unos de los otrosy se notan filamentos de fibrina. Estos filamentos_están absolutamente independientes de los globulinos.que se hallan diespuestos al azar, en las mallas dela red de fibrina y no forman puntos de partida nide arranque de los filamentos fibrinosos.' 2". Los autores que atribuyen a los globulinos unaparticipación en la coagulación, invocan el paralelis­mo que hay entre la'conservación de ellos y el re­tardo de la coagulación. Los agentes anticoagulan­tes serían, entonces, sustancias conservadoras de losglobulinos 1ste hecho no es general, si bien ciertassustancias anticoagulantes como el citrato y oxala­to de soda, conservan la vida' de los globulinos; otras.como el fiuoruro de sodio, son un veneno intenso pa­ra ellos; el extracto de sanguijuela. mata y agluti­na los glohulinos. Los agentes físicos como el frío(0 grado), suspende la coagulación y mata los gloliu­

_ 23..

Iinos, en cambio el calor (45"), activa la coagulación

y ma\t.a los globulinos. Luego no hay paralelismo,entre conser 'ación de globulinos y retardo de la coa­gulación. i

3P. lla peptona en inyección intravenosa tiene lapropiedad de producir, en el perro, la incoagulabi-­lidad de su sangre, con desaparición bastante rápidade los globulinos. de la sangre examinada. l‘lsta des­aparición de los globulinos, no debe interpretarsecomo una destrucción de los mismos, pues si' sacri­íicamos el animal inmediatamente a la inyección depeptona, quitamos su hígado y le hacemos pasar porla vena porta una corriente de agua salada citradaal 1 olo, recogemos el líquido de lavage y lo exami­namos al microscopio como si se tratase de sangre,hallamos en él, gran cantidad «loglobulinos; luego,estos elementos no han sido destruidos sino simple­mente retenidos por el hígado.

Al cabo de un cierto tiempo de la inyección depcptona en un perro, reaparecen en la circulacióndel mismo, los globulinos, quedando incoagulable lasangre. Con el suero de anguila y .con el extractode músculos de cangrejo, pasa lo mismo; con esas sus­tancias, se puede obtener sangre incoagulablc con osin globulinos. i

l<)lsulfato de atropina, inyectado en el sistemade la vena porta. determina un retardo considera­ble de la coagulación, y en la sangre así tratada. losglobulinos no han sufrido ninguna modificación. Unainyección intravenosa de Azul de Prusia, tiene lapropiedad de llacer incoagulable la sangre, pero pre­

_eedida durante los primeros minutos que siguen a lain_\'ccción, de una faz de Iiiper-coagulabilidad extre­

ma. Ya sea incoagulable o liipercoagulable la sangreal Azul de Prusia, contiene siempre globnlinOs ais­lados. cn número normal.

4'". iia gelatina. que bajo el punto de vista de lacoagulación, es antagónica de la peptona, pues au­menta la coagulabilidad de la sangre, se comportarespecto a los L'thlllll‘IOS, lo mismo que la peptona,permitiendo obtener una sangre biper-coagulable des­provista de globulinos.' I’na cantidad de sustancias que modificanmu)" poco la coagulación. disminuyéndola algunas ypermitiendo la retracción normal del coágulo. Estassustancias que poca influencia tienen en el fenómenode la coagulación, hacen desaparecer los globulinosde la circulación. Se v6 entonces. que coagulación yretracción del coágulo. no se hallan condicionadaspor la presencia (le globulinos. La desaparición delos'globulinos es debida. no a una destrucción, sino auna repartición diferente y a su acumulación en cier­tas redes capilares.

Aynaud, admite que en las sangres deglobiniza­das in vivo, la desaparición de los globulinos es de­bida a su aglutinación, y considera esas sangres des­globinizadas in vivo. como sangres que han sufridouna primer: coagulación y que tienen una aptitudnormal para sufrir la segunda, habiendo algunaspara las cuales. la segunda coagulación lia sido con­siderablemente retardada (sangre de peptona o desanauijucla.)

lle las observaciones y experiencias que cita Ay­naud, se desprende el hecho que los globulinos no sonindispensables para la coagulación ni retracción delcoáguln. I'll mismo autor hace notar que esta conclu­

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w r-ar-wana-"MM.

.—30—

sión contraria a las ideas generalmente aceptadas hoydia. podría haber sido prevista a priori. La linfadesprovista de glohulinos, coaglila retrayéndoso tam­bién. Pero la linfa y la sangre in vivo, lo mismo quein‘vitro. obedecen a las mismas leyes de coagulación.(‘onsidera también como irracional admitir en la san­gre la existencia de un elemento. cuyo rol sería preci­samente entrar en función cuando ha sido extraídode los vasos. l‘ln el animal viviente, la sangre delinterior dellos vasos queda indefinidamente líquida,exceptuando los estados patológicos. La coagulaciónde la sangre, es una propiedad que aparece despuésde. su contacto con los tejidos _vque es proporcionala la duración o a la intensidad de ese contacto. llasangre extraída de lOs vasos coagula, porque ha to­cado los tejidos y no porque lleva ('on ella un podero­so hemostático.

CAPITULO II

Citología de la sangre

El eStudio citológico de la sangre, está basado enla observación microscópica de la misma, la que nospermite distinguir en ella tres clases de elementos:los glóbulos rojos (eritrocitos o bematies), los glóbu­los blancos (leucocitos) y los licmatoblastos de Ha­yem (plaquetas de Bizzozero, globulinos de Donnc).

GLOBULOS ROJOS.

La sangre de todos los animales vertebrados, con­tiene glóbulos rojos, exceptuando el anphioxus, queno losposee; los invertebrados po tienen glóbulos ro­jos y si la sangre de algunos invertebrados contienehemoglobina, ésta no se halla fijada a ningun corpús­culo figurado, encontrándose únicamente disuelta enel plasma. En los- vertebrados los glóbulos rojospresentan la siguiente variante: los mamíferos adul­tos tienen sus glóbulos rojos sin núcleo, en cambio,los ovíparos, tienen glóbulos rojos'con núcleo.

Los glóbulos rojos son corpúsculos redondeados,bicóncavos; vistos de cara aparecen como discos, decontorno circular. vistos'de perfil dejan notar un pe­queño estrangulamicnto_en su parte media. Todos los

glóbulos de lós mamíferos son discoides, exceptuan­do los del camello ¡y la llama, que son elíptieos, ob­se'rvándose en ellos también la forma hicóncava. (figu-,ra 2 y fig. 3.)- 7

Hematíes hummos

509”?Fm. 3

Hematíes (de izquierda a derechm: proteo. rana. lugartüá.tenga, paloma, hombre, llama. max-mota, cahra. almizle. Tamañorelativo (De Luclani). ‘

DIMENSIONES. ——En el hombre, tienen un diá­metro de 7 a 8 micrones y un espesor de 2 micrones:en los demás mamíferos sus dimensiones varían comopuede verse en el cuadro siguiente:

s'lfi/'\‘Ï‘n.f '. vAm

_ 33_I

Elefante '9 ¡i 4 micrones Perro 6.7 micronesue)" 5 ¡i 6' s Gato 5 --- n

('aballo 65 D Mono 7,6 nUarn-ru 5,6 n Conejo 7 —— _­Cabra 4.5 n Cobayo 7 ¡i 9 n

NUMERO. — La sangre normal contiene en elhombre 5.000.000 de hematies por mm.3 y 4.500.000 enla mujer.

COLOR. —- Aisladamente tienen un color amari­

llo ligeramente verdOso, pero cuando varios glóbulosse superponen, lo hacen tomando el aspecto de una"pila de monedas y su color entonces tiende a ser ve­cino de la coloración roja de la sangre.

ESTRUCTURA. — El glóbulo rojo se componede dospartes: el estroma, masa globular albuminoidey la hemoglobina, materia colorante roja. Schwannhabía admitido la existencia en el glóbulo rojo deuna membrana de envoltura que impedía la difusiónen el plasma de la hemoglobina, pero hoy se acep­ta con Hamburger, que el estroma se comporta comouna membrana semipermealfle, cod relación al conte­nido. El estroma, una vez extraída de él la hemo­globina, no es visible directamente al microsc0pio.para distinguirlo es necesario colorearlo por el yodoo la fuchsina _ven estas condiciones aparece con la'forma y figura del glóbulo.

GLOBULOS ROJOS DE LOS ONIPAROS. — Ba­tracios. — Los batracios tienen sus glóbulos rojos nu­cleados. su forma es elíptica, vista de cara, pero mi­rados de perll aparecen fusiformes, son también bi­convexos. Tienen un núcleo central grande, de forma 'oval, las dimensiones de estos glóbulos son las sigflion­19s:

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I_A.'_gn

-4-m

_34_

Rana, 22 micrones; 'l‘ritón, 30 a 40 micrones;Proteo, 80 micrones.

Pájaros. -- Sus glóbulos rojos son elípticos, hicon­vexos y nudleados. Sus dimensiones son 15 micronesde largo y un ancho que oscila entre 7 y 8 micrones.Peces. — Sus glóbulos rojos son elípticos _vnuclea­dos.

(‘ARM‘TERES FlSICOS DIC-LOSGLOBULOSROJOS. — Si se observa al microscopio, una prepara­ción de sangre seca se ven los glóbulos rojos con unaforma redondeada. que es la que casi siempre sedescribe, pero si se observa la sangre circulante en elmesenterio de una rana, por ejemplo, el aspecto quepresentan es distinto, aparecen los hematies alarga­dos eu el sentirlo de la corriente _\'cuando tienen queatravezar orificios muy estrechos, los capilares porejemplo. se cstiran en forma de huso alargado pararecuperar su forma primitiva una vez salvado el obs­táculo; estas modificaciones de forma las efectúanen virtud de su elasticidad.

\’ÏSC()(‘ll).-\l). — l'ln las preparaciones micros­cópicas de snnsrre seca, comunmente se ven los gló­hulos rojos adlmridos entre sí y dispuestos unos so.­ln'e otros dando al conjunto el aspecto de una pilade monedas; esta disposición adherentc es debida ala viscocidad de que están dotados los glóbulos rojos.'l‘amhión se observa “esta disposición en monedas enla circulación lenta de los pequeños vasos de un ani­mal vivo. '

mms], me LOS GLOBULOS ROJOS. _ Loslienmtics. que en síntesis los podemos considerar com­puestOs de un corpúsculo discoide, el estroma, en elque está íntimamente fijada una sustancia de color

_35_

rojo, la hemoglobina, son, gracias a esta hemoglobi­na, fijadores y conductores de oxigeno. En los capi­lares del pulmón ellos toman del aire exterior oxí­g‘cno, que, se fija en la hemoglobina convirtiéndola enoxi-liemoglobina; el lc:lóbulo rojo en estas condicio­nes, es llevado por el torrente circulatorio y distri­buye a su paso entre los tejidos su oxígeno, pasandoentonces la oxi-liemoglobina al estado de hemoglobi­na. La forma biconvexa de estos corpúsculos está deacuerdo con su función, pues ella le ofrece una gran

superficie de oxidación y por consiguiente la canti­dad de OXÍP‘OHOcedida es mayor.

GLOBULOS BLANCOS.

Los glóbulos blancos o leucocit0s fueron descu­biertos en 1770 por llcwson. pero su importancia co­mienza con los trabajos de Virchow, Jones, Robin,Max Scllulze y una falangc de estudiosos, entre losúltimos de los cuales se destacan notablemente Ï‘llirllicli y Metclmilcoff. Se distinguifron, primero las va­riedades (¡lo leucocitos. luego sus movimientos pro­pios: se descubrieron las granulaciones de su masaprotoplasmática. ocupando actualmente su estudio unlugar'muy importante .en la patología moderna.

Los leucocitos son corpúsculos que en estado dereposo tienen una forma esférica y están constituí­(los por una masa protoplasmática que contiene unnúcleo. (fig. 4.)

COLOR. — Son incoloros, con un reflejo gris y tie­nen un aspecto granuloso. '

DIMENSIONES. — Sus dimensiones oscilan en­

tre 5 y 20 micrones. ' ’NUCLEO. — En el 'leucocito vivo el núcleo es

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poco visible; en la sangre del hombre se distingue el ' Ynúcleo muy vagamente como una mancha oscura en ' geeeee

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FI“. 4 . . ,'a. glólmlo rojo: 11,0, linfocitos: d. e. pequeños '

leucocitos mononuclearc-s; f, y, grandes leucocitosmononucleares neutrúñlos: lr. i. polianucloarns con­grunulacioues ueutn-filae: j, pnl‘nuclear mm grunula­ciones eosínófilas: A: mazlzelleu: I. plaquetas sanguí­DGÉLH.

la parte central del protoplasma; el ácido acético ha­ce destacar el núcleo, mientras que los alcalis lo-des­truyen. Cn los animales de sangre caliente, el nú­cleo es único,.pero hay ciertas variedades de leucoei­tos, que se designan con el nombre de polinucleares,que tienen un núcleo dividido en varios lóbulos.

GRANULAUÏONES DF] LOS LEUCOCITOS. ——

Algunos leucocitos contienen en su protoplasma gra­nulaeiones cuyo aspecto es variable y según su afini­dad con las materias colorantes, dan lugar a Lasiguien­te Clasificación: '

(ircmulacümes Posinófilas. — Estas granulacionesaparecen como eorpúseulos redondeados, refringentes,‘que resisten a la acción disolvente de los ácidos di­

¡O

7-37 T"

luidos; se colorcan con los colores ácidos y en parti­cular con la eosina. (fic. 4—j.) i

' (I'l'dllïll(l('i011(’.ïneutrófilas. ——Son muy pequeñasy para ser distinguidas exigen una técnica especial;son muy sensibles a la acción de los disolventes, setiñen en violeta rojo 'por el triácido de Ehrlich, pe­ro no se colorcan por la eosina. (fig, 4—h—i.)

(h‘(¡)r1(l(l0iunlz<basó/¡las o mastzellcn (le Ehrlich. —

El núcleo de los leucocitos que poseen estas granula­ciones. está formado de varios lóbulos; su protoplas­ma tiene g'ilmlvs granulaciones que no ¡se coloreanpor el triácido de Ehrlich o la llemateína-eosina, co­lorcándose en violeta rojizo con el azul policromo deUnna. (fly. 4—k.)

_MOVILÏDA|) DE LOS LICUCOCITOS. — Los leu­cocitos están dotados de movimientos, que los empleanpara su nutrición _\'desplazamiento; se estiran, sealargan, pudiendo dc ese ’modo atravesar las pare­des vasculares y caminar en los intersticios de los te­jidos Estos movimientos por su analogía con losmovimientos de las amilms, se llaman movimientosameboidales. ' 'Í

Los leucocitos emiten'1)1'()l()ngaciones"de su ma­sa protoplasmática _que se laman pseudopodios; a ve­ces, el lcucocito queda inmóvil y emite un pseudopo­dio, estos movimientos amehoidales son excitados porel calor y el oxígeno.

QUÏMIO’I‘AXIA. ——Es la sensibilidad que tie­nen los leucocitos frente a distintos agentes químicos;las sustancias que atraen los leucocitos, se dice quetienen propiedades quimotáxicas positivas. Entreellas encontramos numerosos bacteriOs, productos de

_33_o

secreción de losmismos, ciertas sustancias químicas,como el alcohol, etc.

Otras sustancias rechazan a los leucocitos o semuestran idiferentes a ellos, éstas se las llama comodotadas de propiedades quimotáxicas negativas. Aeste grupo pertenecen ciertos microbios muy virulen­tos, las toxinas segregadas por los mismos, ciertassastancias químicas. como el ácido láctico, la quini­na, el potasio, sodio, etc. _

FAGO(‘]’I‘OSIS. — Los leucocitos son capacesdel mismo modo que las amibas, de ingerir, envol­viendo con su masa protoplasmática, los cuerpos ex­traños que se les presentan; así, ellos encierran den­tro de su protoplasma, gotas de grasa, células di­versas, sustancias colorantes, etc. No solamente losleucocitos engloban y digieren los cuerpos muertosque pueden encontrar, sino que ellos también englo­ban y digieren, quitándoles la vida, a los elementos vi­vos y ¡microbios que se les presentan. Metchnikoff,ha expuesto su teoría de la fogocitosis, que trata (leexplicar la defensa del organismo humano, contracualquier ataque exterior, por medio de esta propie­dad de los leucocitos. Según Metchnikoff, los leuco­citos mononucleares o macrófagos, son los que inter­vienen en el organismo en la defensa contra los caer-­pos extraños y células; mientras que los polinuclea­res o micrófagos, son los que intervienen en la luchacontra los microbios.

NUMERO Y FORMA DE LOS LEUL‘OCITOS. —La sangre normal contiene alrededor de 7.000 leucn­citos por milímetro cúbico, distinguiéndose en ella dosclases de leucocitos: los mononucleados _\'los polinuclea­(los. En la técnica de observación microscópica, cuan­

_39_

do se colorean ambas clases de leucocitos, siguiendoprocedimientos especiales, se nota que los leucocitos

-mononucleares no tienen granulaciones en su proto­plasma, en cambio, los polinucleares tienen granula­ciones en su protoplasma. Los leucocitos mononuclea­res (no granulosos), se presentan bajo las siguientesformas:

Linfocitos. — Su tamaño es aproximadamente elde un glóbulo rojo, tienen un núcleo redondo o lige­ramente. reniforme. 1'

Leucocitos mononuclcares medianos. — Muy seme­jantes a los linfocitos, pero de mayores dimensiones,oxilando entre 10 y 14 micrones. -‘

Leucoútos monon-ucleares grandes. ——De mayoresdimensiones qm Losanteriores, oxilando entre 15 y 20micrones.

Además, se ohservan' otras clases de leucocitosmuy semejantes a los precedentes, pero su núcleotiene un gran extrangulamiento en su parte central,que le da el aspecto de una herradura; a veces el nú­cleo está formado por dos masas distintas. Esta di­visión del núcleo origina una confusión, entre estos

leucocitos y los polinucleares; pero, acertando la teo­ría de varios observadores que creen, en la transfor­mación de los mononucleares en polinucleares en lacirculación sanguínea; estos leucocitos serían verda­deras formas de transición. _

Lcucocitos polinucleares yra-nulosos. — Estos leu­cocitos tienen su núcleo dividido en varios lóbulos

que están reunidos por los filaiyntos aromáticos.Su protOplasma contiene granulaciones, cuya afini­dad para las materias colorantes y sus dimensio­nes, z'lasifican a estos leucocitos en las siguientes va­

_4o_‘

riealarles: Leueocitos polinucleares, a granulaeionesneutrófilug Leucoeitos polinueleares, a_ granulaci'o­nes eosinófilas; Leueoeitos polinucleares, a granulaeio­nes basófilas.

La proporción (le las diferentes variedades de"los leucocitos en la sangre, según Elirlicll, es la si­gmente:

Mononueleares: 24 a 29 olo del número total deleucocitos. \ |

l‘olimic-leares neutrófilos: 70 a 72 o|o del número.total de leucocitos. _

l’olinucleares eosinófilos: 2 a 4 o|o del número to­tal (le leucoeitos. '

l‘nlinueleares basinófilos (Mastzellen): 0.25 a 0.500:0 (lel número total de leucocitos.

III-1MA'I‘OBLAs‘ros.

‘lstos pequeños elementos que se hallan en lasangre, fueron llamados así por I‘Iayem; en cambio,Bizzozero, los designa- con el nombre de plaquetassanguíneas y Donne, que es el primer autor'que señalósu presencia en la sangre. en el año 1884, los llamaglobulinos.

M. Aynaud en el trabajo ya citado, ha hechoun estudio completo de los liematolflastos, conser­vando para ellos el nombre de globulinos. Estudia—(lo in vivo en la circulación, el globulino se presentabajo la forma de bastoncitos, de un color más pálidoque los'glólmlos blancos, de igual longitud y a vecessuperior a los glóbulos rojos, menos numerosos que(:stos últimos, pero en mayor número que los leuco­citos. ln vitro, siguiendo una técnica especial. ob­tiene Aynaud globulinos, también con la forIna’de

_¡*1_

bastoncitos. Bajo la influencia de variaciones detemperatura extrafisiológicas o bajo 1a acción deagentes químicos, toman una forma redondeada. Elancho de los globulinos más grandes llega, y a veceses mayor que el de los glóbulos rojos, las concentra­ciones moleculares fuertes, los destruyen, la elasti­cidad del globulino es nula. El rojo neutro, coloreavacuolos en el interior de los globulinos, no tiene nú­cleo en el sentido extricto, su número es termino me­dio de 500.000 por mm.3. In vitro, los globulinos sonsusceptibles de ser aglutinados por un cierto númerode sustancias coloidales, esas mismas sustancias in­yectadas en las venas, los hacen desaparecer de lacirculación.

, CAPITULO III

Caracteres químicos de Ia sangrez

El estudio sobre la composición química de lasangre, debiendo efectuarse en el laboratorio y tra­tándose de un líquido tan alterable, no responde conuna rigurosa exactitud a su composición en el orga­nismo. Nos ocuparemos ligeramente de la composi­ción química de la sangre, pasando por alto los mé­todos a seguir, dado que ello, no nos interesa en elpresente trabajo; estudial'emos la reacción, extractoy estalfleceremos la composición química del suero,plasma y glóbulos.

EXTRACTO SECO.

Si evaporamos a la estufa. una cantidad dada desangre, obtendremos un residuo sólido que estaráformado: por los materiales que lleva la sangre en,suspensión (glóbulos) y en solución (sustancias orgá­nicas e inorgánicas.) Entre las varias determinacio­nes de dicho residuo sólido, se han encontrado las si:guientes cifras:­

(h-s. 21,92 oo en el hombre (Askanazy.),, 20,53 o'o ,, la mujer ,,,, 22,72 050 ,, el hombre (Von Jackscli.)

. ,, 25,09 ojo ,, ., ,, (Abderhalden.)

q

alcalina; permaneciendo neutra con la

REACCÏON.La sangre al estado normal, presenta ante el tor­

nasol. la eoehinilla, el ácido rosólico, una reacciónfenolftaleína.la cocliinilla,alcalina. son

Los indicadores que como el tornasol,el ácido rosólico, indican una reacciónmuy poco sensibles a los ácidos débiles, como el ácidocarbónico; en cambio la fenolftaleina, es sensible alos ácidos débiles. Si para dosar la alcalinidad de lasangre, ¡empleamos una solución titulada ácida, lacantidad de ácido empleado en dicha neutralización,nos indicará simplemente, no la' cantidad de álcalilibre que tiene la sangre, sino esa cantidad combina­da a ácidos débiles, como el carbónico. Como vemos,

la reacción alcalina de la sangre es solo aparente.

COMPOSICION QUIMICA DEL SUERO.

El suero, es un líquido amarillento, alcalino. cuyadensidad oscila entre 1.027 y 1032. Contiene aproxi­madamente 95.60 grs. de materias sólidas por mil(Askanazy). Está formado por agua que lleva en so­lución sustancias orgánicas, inorgánicas y gases puedecontener otras sustancias accidentales introducidas porla alimentación, ¡medicamentos y productos de la des­trucción de los elementos de la sangre.

Sustancias minerales. — Las sustancias minera­les están formadas en su maj'or parte por cloruro desodio (5 gramos por mil), en menor proporción sehallan fosfatos de sodio y de calcio, sulfato de sodio,cloruro de calcio y bicarbonato de sodio.

El cuadro siguiente, da la composición de las ce­nizas del suero: '

HOMBRE aun" CABALLO

(Schmldt) (Bunga- (Bungel

Cloro . . . . . . . 3.610 3 3.720 . 3.750Anhidrido fu fóricn. . . 0.370 ’ — —

n sulfúrico . . . i 0.130 — —Poma. . . . . 3 0.390 0.950 0.270Soda. . . . . . . . ' 4.460 4.450 | 4.430Cal . . . . . . . . Í 0.153 I 0.130 —

Magno i. . . . . . i 0.101 ‘ ausHierro . . . . . . . rastrm l 0.0ll msth

Sustancias orgánicas. — En mayor proporción.70 a 80 por mil, se hallan las sustancias albuminóideas,que coprenden: una sera-albúmina coagulahlc a 75".con un poder rotatorio ad=—57.2 y una sero-globnlinacoagulable entre 68“y 75“,con un poder rotatorio ad=—47.'.’.Además se hallan pequeñas cantidades de fibrin­glolmlina que aparce en el momento de la coagulacióny de un núcleo-proteido, la núcleo albúmina del suero.

Grasas. — En proporción variable, según la espo­cie animal y variando sn cantidad con la naturalezade los alimentos ingeridos.

Glucom. — De 1.10 a 1.15 gramos por mil en lasangre de la carótida y 0.67_a 1.25 por mil en la san­gre de la vena yugular ((‘laudio Bernard). Durantela lactancia se halla lactosa.

(u‘lícógmm.— De 0.01 a 0.02 gramos por mil (Ru­pert y (‘zerny).

('rca. — En la proporción de 0.18 gramos por milen el sner del hombre sano (Yvon).

Algunos observadores han hallado en la sangre. ’ácido hipúrico (Hervier). ácido úrico (Abeles). Hipo­xantina (Salomón).

_46_

Amrmíaco. — En pequeuas porciones de 1,3 341,8miligramos por 100 cc. de sangre. x

Úolestcrína, Lecititna. — Estas sustancias parecenprovenir de la destrucción de los leucocitos.

(lliccrina. — Nicloux ha hallado de 2 a 3 miligra­mos por 100 cc. de sangre de perro.

Además se hallan pigmentos, fermentos y leuco­mainas. ' '

¡[zoe de retención. — Si acidificamos el suero, lue­go lo (-alentamos, coagulan las sustancias albumniói­deas, que se pueden separar por filtración, pero el lí­quido filtrado contienen todavía pequeñas porcionesde diversos cuerpos azoados que en este caso se cono­cen (-on el nombre de azoe de retención. Strauss, hahallado como promedio de varias determinaciones,una cantidad que oscila entre 0,20 a 0,35 por mil deazoe de retención en el suero humano normal.

El cuadro siguiente que tomo de A. Cliassevant,dá la composición quimica de 1000 gramos de suero:

HOMBR l-I BL'EY CABALLO

Agua . . . . . . 907.9 910.4 914.0

Materias sólidas. . . . i 92.1 ' 89.6 86.4D albuminóideas. . i 76.2 75.0 72.6

Glohulína . . . . . . 31.0 41.7 4.3.5

Serina . . . . . . . . 45.2 ¡ 33.3 26.8Lecitina, gra a, urea. ete. 7 l g 6.6 _ 5.4Sales minerales. . . . . . 8.8 8.1 I 8.0

(¡ases de la sangre. — Haciendo hervir o some­tiendo la sangre al vacío haromótrico (bomba de Gre­hant) se desprenden de ella gases, entre los cuales po­

. demos caracterizar el azoe, oxigeno y ácido carliónico.El a7¿0ese halla disuelto en la sangre; el oxigeno, parte

_47_

.disuello _\'parto combinado con la hemoglobina ;el gascarbónico, se encuentra en tres estados distintos: alestado de simple disolución. como combinación disocia­l)le y como combinación estable.

El cuadro siguiente, indica las cantidades variablesde estos gases en 100 cc. de sangre arterial y veuosas:

7 _> !

OXÍGENO I ¡una EIBBÜMMl AZOE

Scnsraan _ l lSangre arterial 19.2 cce 39.5 cc. 2.7 cc.

s venosa 11.9 cc. l 45.3 cc. ' 1.7 cc.

l

Hanon í

Sangre artcríal 20 á 24 cc. 39.0 cc. 1.5 cc.n venosa 8 n 12 cc. 46.0 cc. . 1.5 cc.

Vuuur Y Jona-r ;

Sangre arterial 20 á 24 cc. 40.0 cc. ¡ 2.0 cc.r venosa 8 á 12 cc. Í 46.0 cc. : 2.0 ,r.

¡ I

' PLASMA.

Es un líquido amarillo verdoso el humano y decolor amharino el dc caballo, su densidad es muy pocosuperior á la del suero y su reacción es alcalina. (‘ontiene los mismos elementos orgánicos y minerales queel suero, teniendo además una sustancia alhuminóideaespecial, el fibrinógeno, que por la acción de un fer­mento segregado por los leucocitos: la plasmasa. setransforma en fibrina. El fibrinógeno es una glohuli­na, quo precipita del plasma, cuando se le añade un15 olo de cloruro de sodio; el calor la coagula. a 56°desdoblándola. Desvía el plano de polarización de la

_'45_

lI'Jzad=—43°. La fibrina es una sustancia sólida. elásti’ca, de color blanco gris, recien obtenida es. rojiza. debi­do a que está impregnada de glóbulos rojos que llevaentre sus mallas; lavándola con agua, toma su colorblanco. Por sus propiedades es una globulina, se ha­lla en el plasma en una proporción de 4,05 gramos pormil, coagula a 56° desdoblándose y quedando en solu­ción un allmminóide que coagula a 64".

El cuadro siguiente, tomado de Hoppe Seyler y(le Hammarsten dá la composición química del plasmapor mil:

¡ ,

lHOPl’E SEYLER' HAMMARSTEN

Agua. . . . . . . . .l . 908.4 917.6Materias sólidas . . . .É 91.6 82.4

n albuminóideas totjle 77.6 69.5De las cuüll'w: |

Fibrinn . . 10.1 , 6.“Sero globulina . . —- 38.4

Sero lllblllllln'l. . -— 24.6Grasa . . .: 1.2Materias extractivan.¡ 4.0

Sales solubles . . 6.4 12_9Sales inso ublcs . . .l 7.? l

COMPOSICION QUIMICAtDE LOS GLOBULOSROJOS.

Anatómicamente los glóbulos rojos, están consti­tuidos por un estro'ma y una materia colorante. Elestroma, está compuesto de materias orgánicas y mi­nerales; entre las primeras hallamos las siguientes:lecitina. colesterina y un albuminóíde que parece seruna. globulina, que es el que domina en la composicióndel estroma. Entre las sustancias minerales encon­

_49_

tramos: calcio magnesio, potasio, ácido fosfórico .ycloro.

La materia colorante está compuesta por la he­moglobina; albuminoide complejo que contiene fierroy azufre.

La composición de los glóbulos es la siguiente, se­gún (‘liassevantz

1000 partes de glóbulos contienen:

Agua . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 688

Materias orgánicas . . . . . . . . . . . .. 304Hemoglobina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 280.0

l Alhuminoide del estroma . . . . . . . 19.

Lecitina, Colesterina, etc . . . . . .. 2.7Grasas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.3

Materias minerales . . . . . . . . . . . . . 8Cloro . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.686

Acido sulfúrico . . . . . . . . . . . . . . .. 0 066

Acido fosfórico . . . . . . . . . . . . . . .. 1 134

Potasio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 8‘20

Sodio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. 1.052

Calcio . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . 0.114

Magnesio .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0.073

Henmgloln'na. '— Como hemos visto anteriormen­te, la sangre contiene dos materias colorantes: la he­moglobina y la oxiliemoglobina; la transformación dela primera en la segunda se obtiene por fijación deoxigeno y por reducción de oxiliemoglohina se llega ala hemoglobina. Al ocuparnos del glóbulo rojo, diji­mos que su materia colorante estaba fijada íntima­mente en el estroma; el estudio de la composición quí­mica de la hemoglobina, nos permitirá aclarar este con­

. cepto. 'm

-_mn...

_50_

La hemoglobina es un albuminoide complejo, con­tiene: C, H, N, O, Fe y S en la siguiente proporción:

C H O Fe S54.57 7,1] 16,38 21,04 0,33 0,568 (Osborne)

Su peso molecular es elevadísimo, superior a15.000.

El lugar que ocupa la oxiliemoglobina entre lassustancias ' proteicas, es el de un proteido (proteínaconjugada) del tipo de los cromoproteidos; es decir,resulta de la unión de una globulina, la globina y unpigmento ferruginoso (grupo prostético) la hematina.En efecto los alcalis fijos, los ácidos en solución con­centradas y el calor, la desdoblan en globina y hemati­na, en las siguientes proporciones: 94 y 6 olo respec­tivamente.

En cambio la hemoglobina en las mismas condicio­nes, es desdobluda en globina y en liemocromógéno,también en las mismas proporciones relativas.

El hemocromógeno, por fijación de oxígeno, rege­nera la hematina. la que a su vez por reducción. se con­vierte en hemocromógeno.

l Oxillemo­s Globina Globína'glnhinaHcmoglobina

l Hemocromógeno + Oxígeno = Hematina l

Como vemos. el hemocromógeno y la hematina poruna conveniente adición y sustración de oxígeno, pue­den transformarse eI uno en el otro, de modo que estepapel de la sustancia prostática respecto al oxigenodel aire, al que parece servirle de vehículo de transpor­te, lia permitido a algunos llamarle núcleo respiratorio.

Respecto a la fijación de la hemoglobina y de la

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_-_,—A“fiv‘

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oxihemoglobina en el hematie, se han emitido distin­tas hipótesis. Según Hoppe, Seyler, esas materias co­lorantes, están contenidas en el glóbulo rojo al estadode combinación con las lecitinas que contiene el mis­mo, de modo que la materia colorante extraída de lasangre se halla en un estado químico distinto del queposee en el organismo. Lo que halla su comprobación encl hecho, de que la solubilidad en el agua, de la hemo­globina extraída, es tal, que el agua contenida enlos glóbulos no podría nunca disolverla. Además. lasangre presenta mayor afinidad por el oxígeno y locede más fácilmente que la hemoglobina in vitro; to­das esas razones inducen a creer. que la hemoglobinay la oxihemoglobina. no se hallan disueltas en el es­troma, sino combinadas con otras sustancias.

La hemoglobina es soluble en el agua, insolubleen cl alcohol, es levógira, sus soluciones son dicroicas:por transparencia, amarillo verdosas y por reflexión,rojizas. Se obtiene cristalizada, variando el aspectode 10s cristales, con la especie animal y el método decristalización: los cristales de hemoglobina humana tie­nen la forma de tabletas rectangulares alargadas.

La cantidad de hemoglobina en la sangre humanaes de 10 a 15 OlQde sangre.

Se combina la hemoglobina. con el óxido de car­bono, bióxido de azoe, hidrógeno sulfurado y con el cia­nógeno. para formar distintas combinaciones que es­tudiaremos en cada caso.

El espectro de la hemoglobina, asi como el de sus.derivados será objeto, en el capítulo siguiente, de unestudio especial.

Orihemnglobina. — Esta materia colorante resul­tade la combinación del oxígeno con la hemoglobina,

produciéndose en este acto un desprendimiento de ea­lor, equivalente a 14,77 calorías, por cada molécula deoxígeno fijado. Un gramo de hemoglobina a 0° y '760mm., agitado en el aire, absorve 1,34 de 02 (lluf’fner);esta cantidad, a la temperatura del organismo huma­no. se convierte en 1.25.| La combinación del oxígeno con la hemoglobina,es fácilmente disociahle. y esta disociación depende.de la tensión y temperatura. Pura y cristalizada, esde color rojo bruno, soluble en el agua; coloreando lasolución acuosa en rojo oscuro, es insoluble en el al­cobol.

Su composición química es idéntica a la de la be­moglobina, diferenciándose, en el oxígeno que contie­ne en más: presenta la propiedad de cristalizar y_deafectar el estado coloidal. Las distintas oxibemoalo­binas. que se obtienen de diferentes animales. no sonidénticas. difieren en su forma cristalina, solubilidady proporción de hierro.

La oxibemoglobina de la sangre de rata, lancha,cobayo. carpa, perca, barbeau, cristaliza fácilmente.Añadiendo a su solución acuosa. éter, y enfriaudo a0" se obtiene una magna cristalina.

La oxibemoglobina de la sangre de caballo, perro_\'galo. cristalizan más difícilmente. es necesario agre­gar a su solución acuosa, 1!4 de su volúmen de a-l­cobol.

La oxibemoglobina de la sangre del hombre y del'mono, es más difícil aún de obtener cristalizada; bayque proceder como en el caso anterior y enfriar.

La oxibemoglobina de la sangre de chancho y debuey, ci'istaliza más difílmcnte todavía.

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. — 53 —

La oxihemoglobinase desdobla como hemos vistoanteriormente, cn globina y hematina.

Es soluble en las soluciones salinas diluidas, losalcalis fijos y carbonatos, el cloruro de sodio y carbona­to de potasio en exceso la precipitan de sus soluciones.

Los reductores la convierten en hemoglobina; lamisma transformación es producida por la acción delvacío. Los cristales de hemoglobina descomponen elagua oxigenada, ozonizan el oxígeno y azulean la tin­tura de guayaco. '

El cuadro siguiente dá la forma cristalina y lasolubilidad en el agua, de las hemoglobinas de distin­tas especies animales:

ESPECIE FORMACRISTALINA S 0 31‘23) AD

Hombre . prismas ortorómbicos (rectan- muy Solubles' gulares ¡llurgadosh '

Mono. . . prismns ortorómbicos (peque- muy solublesñas tablas).

Gato . . . prismas ortorómbicos ai 4 pa- poco solublesnes.

Ardilla. . prismas exagnnalesmgrupudos muy poco solubles_ en I'OSPI’B

Perro. . . prismas ortorómbicos. poco solublesCobayo . tetrnedros. muy poco solubles

' Lancha. . tabletas exagonales (finas a- muy poco solublesI gujas).

Conejo. . rectángulos alargados. extremadamente solu­bles

Caballo. . prismas ortorómbicos. muy solublesRana. . . ,, ,, muysolubles

Hemoglobina oxicarbonada. -— Si agitamos san­gre oxigenada, conteniendo por consiguiente oxillemo­globina con óxido de carbono, este gas desplaza volu­men a volumen, el oxígeno de la hemoglobina ocupan­

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do su lugar. dando origen a un nuevo compuesto: lahemoglobina oxicarbonada. Esta combinación es muyestable; el vacío muy difícilmente la quita el óxidode carbono. A 15 y 40 grados no es disociada; trata­da por los agentes reductores, entre ellos el sulfiihidra­to de amonio, no es reducida al estado de hemoglobi­na, cosa que sucede con la oxihemoglobina. _

El óxido de carbono se combina con la hemoglobinacon un desprendimiento de 18,7 calorías por molécula;en idénticas condiciones la hemoglobina con el oxígenose combina con “un desprendimiento de 14,77 calorías.Como vemos, la carbooxihemoglobina es más estableque la oxihemoglobina, lo que explica el hecho de que lahemoglobina en una atmósfera de oxígeno conteniendopequeñas porciones de óxido de carbono, se combinacon este gas. Las soluciones de hemoglobina oxicar­bonada, son de un .rojo escarlata; sus cristales análogosa los de la oxihemoglobina, son un de color rojo violetaintenso. ' _

Ciano hemoglobina. — Si se calienta'a 40 gradosuna solución de oxihemoglobina con ácido eianhídrieoen solución muy extendida, se obtiene ciano hemoglo­bina; también puede. obtenerse la fijación del eianóge­no sobre la hemoglobina, haciendo pasar una corrien­te de gas cianógeno sobre una solución de hemoglobina.

¡1zotooxihemoglobina. — Se obtiene por la accióndel bióxido de azoe sobre la hemoglobina. Se preparahaciendo pasar una corriente de gas bixoido de azoeen una solución de hemoglobina oxicarbonada; comovemos la azotooxihemoglobina es más estable que lacarbooxihemoglobina. Los cristales de azotooxihcmo­globina son análógos a los de la oxihomoglobina.

Mctahemoglobina. — Tratando la oxihemoglobina

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_ 55_

por oxidantes, como el permanganato de potasa, ferri­cianuro de potasio, los nitritos, el ozono, el yodo, etc"se obtiene una materia colorante pardo rojiza, que seconsidera isómera de la oxihemoglobina. Si bien esteenerpo se obtiene por agentes oxidantes, la acción di­recta del oxígeno atmosférico, no basta para producirdicho compuesto. Por disminución de la tensión del

'oxígeno externo, no pierde este gas, diferenciándosecon ello de la oxihemoglobina, que lo pierde. Crista­liza en forma de agujas prismáticas, es poco solubleen el agua a la que colorea en rojo oscuro, insoluble

. en el alcohol y en el éter. La metahemoglobina porlos reductores de alguna intensidad, se convierte cnhemoglobina reducida, que a su vez puede transfor­marse en oxihemoglobina. Por la acción de los alca­lis y los ácidos, es desdoblada en globina y hematina.La metahemoglobina aparece en la sangre de los su­jetos intoxicados por ciertos venenos: clorato de po­

° .tasio, nitrito de amilo, ácido pirogálii'o.Hematina. —-Tratando la oxihemoglobina por los

ácidos y alcalis, obtendremos un desdoblamiento dedicho cuerpo, en globina y hematina. La hematina esel núcleo coloreado de la oxihemoglobina, es una sus­tancia nitrogenada y ferruginosa; desccada, es unpolvo de color pardo oscuro, insoluble en el agua, al­

' cohol y éter; soluble en ácido acético en caliente, enácido nítrico y en los alcalis en solución diluída. Las ­soluciones ácidas son de color rojo oscuro, las alcali­nas dicroicas. Se combina con el ácido clorhídrico,dando cristales de clorhidrato de hematina, también co­nocidos con el nombre de cristales de hemina. Losjugos digestivos como el gástrico y el pancreático,transforman la oxihemoglobina en hematina, lo que

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explica el hecho de hallarse la hematina en los excre­mentos, después de la ingestión de sustancias ricasen sangre. '

' Ilcmvina. — La combinación del ácido clorhídricoicon la hematina, es decir, el clorhidrato de hematina,se conoce con el nombre de cristales de hemina; estecompuesto tiene importancia en medicina legal, parael diagnóstico de las manchas de sangre. Los cristalesde hemina se presentan a menudo, bajo la forma (lecristales romboidales, pardos. dispuestos en cruz; soninsoluhles en el agua, alcohol _véter; se disuelven des­componiéndose en las lejías alcalinas. Los cristales deheminn no se presentan siempre en la misma forma,dependiendo ella, no de la especie animal y si del mé­todo seguido para su obtención. Respecto a su ohten­ción, en la segunda parte de este trabajo nos ocupare­mos de ella.

Hematoporfina. — La hematina, sustancia ferru­ginosa o su clorhidrato, la hemina, tratados por elácido sulfúrico concentrado o clorhídrico fumante, sondescompuestos con pérdida de hierro, que se combinacon cl ácido y la hematina se transforma en hemato­porfirina, sustancia colorante no ferruginosa. Su fór­mula es: C32, 1136, A24, 06; es un polvo de color rojonegro violeta, casi insoluble en el agua; soluble, en lassoluciones ácidas y alcalinas. '

Hcmocromógeno. — Como hemos visto al tratarla hemoglobina, el hemocromógeno se produce comoun desdoblamiento de la hemoglobina, cuando se haceactuar sobre ella los alcalis fijos, los ácidos o el ca­lor en estas condiciones es desdoblada en globulina yhemocromógeno. Análogamente la oxihemoglobina, esdesdoblada en globina y hematina. La hematina trata­

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da por los reductores, como el sulfuro de amonio, setransforma en hemocromógeno. También puede obte­nerse el liemocromógeno; desdoblando la hemoglobinapor los ácidos o los alcalis, al abrigo del aire. El he­mocromógeno, es un polvo de color rojo obscuro se di­suelve en las soluciones alcalinas y ácidas débiles, a lasque colorea en rojo cereza, se oxida rápidamente enel aire reproduciendo la hematina.

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CAPITULO IV

Aplicación del e'spectroscopio alestudio de 1a hemoglobina y sus derivados

Haciendoincidir sobre un prisma P un haz derayos solares A B y recibiendo los rayos emergentessobre una pantalla, tendremos en esta, en lugar de unamancha de luz blanca B’ una banda R V que presentalos colores del arco iris y en tre los cuales, podremosdistinguir los siguientes: rojo, anaranjado, amarillo,verde, azul, indigo, violeta. (fig. 5).

.-..._.....-.. ........'. 6'

Tia. 5

Los rayos rojos que en la banda de colores ocu­

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pan el lugar R, han sido los menos desviados, con re­

lación a los rayos violetas V, que'lian sido los másdesviados; entre los rojos y los violetas se han colo­cado los demás rayos, ocupando posiciones interme­diarias dadas. por su desviación.

Ésta clasificación de los rayos desviados en sietecolores, es arbitraria: en realidad no se puede precisarcl punto exacto en que terminan los rayos rojos y co­mienzan los anaranjados. Hay tantos colores simples,como valores tiene el índice de refracción, esos colo;res se funden los unos en los otros, pues sus pro­piedades varian'por grados insensibles, cuando se pasadel primero al último, dando la impresión de los sietecolores mencionados.

La descomposición de la luz blanca en rayos. co­loreados, se llama dispersión y la banda luminosa tomael nombre de espectro solar.

Rayas dc Fra'unhó'fer. — Examinando con deten­ción el espectro solar, se hallan en él un gran númerode rayas negras, perpendiculares a la longitud del es­pectro, que se conocen con el nombre de rayas de Frau­nllófer. l‘lstas rayas ocupan posiciones determinadasen los diversos colores, sirviendo así, de puntos d-e re­ferencia del espectro; unas forman grupos bastantecompactos, otras están aisladas, pudiendo distinguirseocho grupos característicos que se designan con lasletras A., B., C., D., E., F., G., H., empleándosc. las‘letras a, b, c, d, ó a’, b”, c’, para designar las rayasintermediarias según su intensidad.

Las rayas de Fraunliófer más importantes, quepueden utilizarse como puntos de referencia, son lassiguientes:

Ag...­

_(,1_

A raya ancha difícil de percibir -se halla en el extremo rojoa-grupo de muchas rayas » n nB D I D

C-— » r anaranjadoD-raya doble r s amarilloE-— J I verdeb-tres rayas n . .F- I r azulG- x » indigoH-dos rayas anchas n r extremo violeta

Espectroscopío. — Para estudiar el espectro pro­ducido por e] sol o por las varias fuentes luminosas,se podría hacerlo proyectando sobre una pantalla, losrayos que emergen del prisma. Pero este procedi­miento no sería cómodo ni práctico, además, el eSpectroproyectado tendría muy poca intensidad. Para reme­diar estos inconvenientes, se lia ideado un aparato, quepermite la observación más práctica y exacta de losespectros; este aparato es, el espectroscopio _vconsis­te en lo siguiente:

'l‘res tubos A, B, C, convergen hacia un prisma(fig. 6). El tubo A, llamado colimador tiene en suextremidad una ventana o llendidura F, cuyo ancho sepuede variar por medio de un tornillo, esta liendiduraestá dirigida hacia la luz S, que se examina; la otra'extremidad del tubo A, lleva una lente convergente L,en cuyo plano focal está la hendidura F. Los. rayosque parten de S, atraviesan la liendidura _vcomo éstase halla en el foco de la lente L, los rayos luminonsos al emerger de la,lente, salen en un haz paralelo.Este haz de rayo paralelos cae sobre la cara N Q delprisma, penetran en éste sufriendo una refracción ydispersión. Al emerger del prisma penetran en el tu-'bo B, formando haces paralelos, los rayos que cons­tituyen los diversos colores del espectro. Estos diver­

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sos rayos penetran en el tubo .B, a'travensando una len­te convergente 0 y van a formar en el plano focal

Flo. 6

Fr FV, una imagen del espectro, imagen que se agran­da, por medio (le la lente.ocular 01. .

El tubo C, tiene una escala micrométrica M gra­bada sobre vidrio y en su extremidad una lente con­vergente 1, en cuyo plano focal se halla la escala. Laescala se ilumina por un foco de luz b y como dicha es­cala está en el pleno focal de 1, los rayos luminososque parten de ella, al emerger de la lente 1, lo hacenen .un haz (le rayos paralelos, haz de rayos que incidesobre la cara N S del prisma, donde se reflejan enlos puntos a y d y penetran en el tubo B por lalente O, de modo tal que la imagen de la esca­

I

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la, se forma en el mismo plano que la imagen del es­pectro, pudiendo entonces hacer coincidir las divisio­nes de la escala, ya sea con los colores del espectro ocon las rayas del mismo por medio de un tornillo que sehalla en M.

"Comparación de dos espectros. — Puede sucederque sea necesario comparar al mismo tiempo y en lamisma operación, dos espectros de fuentes luminosasdiferentes. Para ello se aplica un pequeño prisma dereflexión total, sobre la hendidura del espectrocopioqne se halla delante de los focos de luz, de modo querecubra la mitad de la misma, dejando la otra mitad li­bre. En estas condiciones, se colocan los focos lumi­nosos: uno delante de la liendidura del espectroscopio,de modo que los rayos que emanen de él, la atravie­san y no incidan sobre el prisma colocado delante dela hendidura; el otro, lateralmente, de modo que losrayos que él envían atraviesen el prisma por uno de

¡sus catetos y sean reflejados por su cara hipotenusa,la que los envía al prisma P, por el tubo A. Con estedispositivo, se tienen dos espectros de dos sustanciasdiferentes. yuxtapuestos.

Diferentes formas de espectros. — Según que losrayos luminosos, cuyo espectro se estudia. se observental como son emitidos por la fuente luminosa o des­pués de haber atravesado un medio, que retenga partede las radiaciones luminosas, se tendrán dos clases deespectros. ,En el primer caso se trata de espectros deemisión y en el segundo, de espectros de absorción.

Espectrsz dc. emisión. — Espectros continuos. —Los cuerpos incandescentes al estado sólido o líqui­do, producen esta clase de espectros, que se presentancomo una banda ininterrumpida que contiene todos los

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colores, desde el rojo al violeta inclusive. Espectrosde líneas-Los vapores o gases incondescentes, pro­ducen espectros que están formados por líneas bri­llantes, que se hallan repartidas en toda la extensiónde lespectro _\'cuyo color, es el del lugar del espectroque ellas ocupan.

[fis-¡metrosde absorción. — Haciendo pasar los ra­yos de luz blanca a través de un medio que absorliaciertas radiaciones se producen los espectros de absor­ción. En estos espectros faltan ciertos rayos o gruposde rayos que se manifiestan por la aparición de rayaso bandas oscuras, sobre un fondo brillante.

Espectro (le absorción (le la materia colorante (lela sangre. — Coloquemos delante de la liendidura delespectroscopio, un pico Bunsen, que queme con muypoco aire, dando por consiguiente una llama luminosa.

El espectro que producirá la llama del pico Bunsense 'á continuo pues la luminosidad de la llama esdebida a partículas sólidas que se hallan en la misma,al estado de incandescencia. Dejando el pico de Bun­sen delante de la liendidura de lespectroscopio, inter­ponganios entre el y el espectroscopio, un recipiente(tubo de ensayo o cuba de vidrio a caras paralelas)que contenga una dilución de sangre fresca y obser­vemos el espectro. Notaremos que el espectro conti­nuo primitivo se lia modificado. apareciendo en él dosbandas oscuras y anchas, que ocupan una posicióninvariable. Estas bandas se hallan, una en el amari­llo y otra en el verde. De modo que la oxiliemoglo­bina, nos lla (lado un espectro de absorción caracte­rizado por dos bandas negras. i

(‘on las nociones _'a adquiridas, estamos en condi­cioes de efectuar la observación espectroscópica (le la

_ 55_

sangre. Las diversas partes de esta operación son lassiguientes: l ,

R(f{/Í(l_(/('del espec!rom-opio. — Se iluminan; lalleudidura del espectroscopio y la escala graduada, pormedio de (los fuentes luminosas. lla bendidura seilumina, _\‘a sea con una bujía, lámpara eléctrica opico Bunsen con llama luminosa; la fuente iluminantedebe hallarse en el eje del tubo A. ’ara la ilumina­ción de la bendidurz, se puede emplear con buenosresultados un pico 'Bunsen con una camisa de incan­descencia. Mirando por el tubo B. se tiene una ima­gen del espectro, que se regula a la vista del obser­vador por medio del tornillo que llevo dicho tubo. Elespectro está a punto, cuando es claramente visible. ysus bordes son netos lo que se obtiene por medio deltornillo _\'acercando o alejando la luz. Reglado el es­

.pectro, se ilumina la escala graduada con una fuenteluminosa de poca intensidad, pues en caso contrarioun exceso de luz de ella, perjudiearía la visibilidad cla­ra del espectro; la iluminación de la escala debe per­mitir la lectura clara de' las cifras grabadas en ella.lil tubo (‘. que lleva la escala graduada, posee un dis­positivo, que permite colocar a la' vista del observa­dor las graduaciones de la escala sin tocar el ocular,de Ï’»que. ya lla sido colocado en posición convenientepara el espectro. Es conveniente. que las divisiones delmicrómetro, sean paralelas a las rayas del espectro,es decir, perpendiculares a la longitud del mismo y quela escala micrmnótrica caiga por encima del espectroluminoso, lo que se obtiene por un tornillo, que llevael tubo C.

Reglado el espectro y la escala, le llega su turnoa la llendidura del espectroscopio. [711tornillo adap­

\

tado a la extremidad del tubo A. que mira a la fuenteluminosa permite abrir o estrechar la hendidura dedicho tubo. Ésta hendidura debe ser suficientementeestrecha, posición que se obtiene, haciendo perder suluminosidad al pico situado delante de A; colocar enla llama un fragmento de sodio y mirando por el ocularde B, debe abrirse o cerrar la hendidura hasta obtenercon claridad, una raya delgada amarilla.

La escala graduada colocada en la parte posteriordel tubo C, se balla grabada sobre un trozo de vidrio,las cifras y trazos de la misma, están invertidos. demodo que. al mirarse por B, se vean normales. Lasdivisiones son micromótricas y su número varía segúnel espectroscopio, cualquiera que sea su numeración(que no tiene sino una importancia relativa) se des­plaza esta escala. por medio de un tornillo que lleva con­sigo, de modo que la división 80 de la escala micro­métrica, corresponda a la raya amarilla producida porel sodio.

Con estas operaciones se ha reglado el espectros­copio, el que no debe ser tocado durane la observación,para no falsear esta.

Examen de la solución de sangre. — La sangre aexaminar, convenientemente diluída, debe ser colocadaentre la fuente luminosa y el espectroscopio (1). Elrecipiente que contiene la solución es una cuba de vi­drio a caras paralelas, cuyas dimensiones son las si­guientes: 10 milímetros por 30 milímetros, las dosdiferentes dimensiones permitan observar el espectrode absorción a través de distintos espesOres, según la

(l) El espectroscnpiu más conveniente es el común a nn solo prlsma, puesoa espectroseoplos a dos [-risnias, dispersnndo muchos los ruyos refracmdos, pro­ducen bandas de nb'inruiún. muy pailidus.

¡bmw-0..'

._67_

concentración de la solución de sangre (fig. 7. Puedeutilizarse también un tubo de ensayo, pero es prefe­rible el dispositivo anterior. En caso de que la can­

tidad de sangre de que se disponga, sea muy pequeña,puede emplearse para contener la solución de la misma,una cuba celular que permita disponer 'una pequeñacantidad'de sangre a través de un espesor relativa­mente grande, o construir con un tubo de vidrio, unaespecie de tubo polarimétrico, de capacidad muyr redu­cida, pero con longitud grande. La técnica para ob­tener la solución de sangre o mancha de sangre, asícomo su conveniente solución y título, la exponemosen el capítulo siguiente.

Los diversos espectros de absorción que se puedendistinguir con el espectroscopio, en la materia colo­rante de la sangre y sus derivados, son los siguientes:

Oxihemoglobina. — La sangre fresca contiene oxi­hemoglobina 'y da el _siguiente espectro de absorción:

Dos bandas de absorción en las rayas D y E, quecorresponden a las divisiones 84-85 y 103-104 en elmedio de ambas bandas; la primera es más estrecha

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que la segunda. Tratando la oxihemoglobina por agen­tes reductores (ver capítulo siguiente) pasa al estadode hemoglobina y se obtiene el espectro de la

Hemnglnhina — que se caracteriza por una bandaúnica llamada banda de Stokes, que ocupa el espaciointermediario entre las dos bandas de la oxihemoglo­bina _\'es más pálida que estas últimas. La reducciónse efectúa, echando unas gotas de sulfihidrato de amo­niaco en la cuba de caras paralelas que contiene lasolución de oxibemoglobina y esperando cinco minutosse ve la reducción de la hemoglobina.

Henwglobina (nicarbouada. — La hemoglobinaoxicarbonada, da un espectro de absorción caracteri­zado por dos bandas muy semejantes a las bandas pro­ducidas por la oxihemoglobina. Sin embargo, compa­rando simultáneamente los dos espectros, lo que sepuede hacer utilizando el pequeño prisma a reflexióntotal que lleva la heudidura, se nota que las bandas deabsorción de la sangre oxicarbonada, están desviadasun poco a la derecha de las bandas de la sangre conoxihemoglobina. Si en la cuba conteniendo sangre conhemoglobina oxicarbonada, agregamos un reductorcualquiera. por ejemplo unas gotas de sulfihid 'ato deamonio, no hay reducción alguna y las dos bandas per­sisten. (Diferencia con la hemoglobina).

Metehemoglobina. —- El espectro de absorción (lela metehemoglobina varía según que ella se encuentreen solución ácida o alcalina. En solución ácida, dáuna banda en el rojo correspondiente a la división 68de la escala en solución alcalina. da una banda pálidaque coresponde a la división 80 de la escala.

(‘onio la metehemoglobina, es un producto de.transformación de la oxihemoglobina y como puede

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acontecer que no toda la oxihemoglobina haya. sidotransformada, se observará en este caso al mismotiempo, que el eSpectro de la metehemoglobina e]de la oxihemoglobina.

Hematina. — Su espectro varía como el de laanterior, según que se halle en solución ácida o alcali­na. La solución ácida, da una banda de absorción quecorresponde a la división 58.! En solución alcalina dáuna banda de absorción que corresponde . a la divi­sión 80. » é

Hemocromógeno. — Le hematina en mlución al­calina, tratada por los reductores, se transforma cnhemocromógeno, el que presenta las siguientes bandasde absorción: una banda negra y estrecha que corres­ponde a la división 98 de la escala, otra ancha, quecorresponde a la división 112 de la escala.

IImnatopo-rfina. — El ácido sulfúrico acciona s0­bre la oxillemoglobina, transformándola en hemato­porfirina, cuyo espectro varía según se halle en so­lución ácida o alcalina. En solución ácida, presentatres bandas que corresponden a las divisiones 80, 100y 118 de. la escala; la que corresponde a ladivisión 100,es la que presenta mayor intensidad. En solución al­caiina, dá tres bandas que corresponden a las divisiones92, 108 y 1.35de la escala, desapareciendo por completoel espectro a partir de la, división 170.

CAPITULO V

Hemolisis

Al tratar de la presión osmótiea de la sangre, vi­mos que la tensión osmótica del plasma sanguíneo, eraisotóniea con una solución de Cl Na al 0.92 o'o y queesa tensión osmótica equilibraba la tensión interna delglóbulo rojo, de modo que una disminueión de la‘ ten­sión del plasma, train por consecuencia la deforma­ción del glóbulo y el pasnge de la hemoglobina al plas­ma. en el que se disolvía. coloreándolo. La sangrese hace transparente y límpida. Este fenómeno de ladestrucción del glóbulo y difusión de su materia colo­rante. se conoce con el nombre de hemolisis. In vitro seproduce la hemolisis. cuando se colocan los glóbulosrojos en nn medio bipotónieo y tiene sn máximum enel agua destilada.

En eondiciones fisiológicas. cuando los hematíeshan cumplido su cielo evolutivo, al llegar a ciertosórganos y probablemente por la acción de enzimashemolítieas que sEgregan estos órganos, pierden loshenlutíos su hemoglobina total o parcialmente, siendosu estroma englobado por los leucocitos macrófagos,quienes lo digieren en parte y en parte también por elplasma de los órganos hemolítieos.

-72...

La hemoglobina es transformada en pigmentos bi­liares. Normalmente, esta destrucción de los glóbulosno Se efectúa en el torrente circulatorio, sino en ciertos

órganos-como e! bazo. En condiciones anormales estahemolisis se realiza en otros órganos y aún'dentro (lelos vasos, y en este caso se conoce con el nombre dehemolisis.

Ciertos compuestos tóxicos para el hematie, lo des­truyen dentro del aparato circulatorio, el estroma esdestruido, la hemoglobina se disuelve en el plasmaiyla sangre se hace transparente. Estos mismos agen­tes que producen in vivo la llemolisis, también la- pro­ducen in vitro.

AGENTES HliM()LI’l‘IC()S.-Los agentes hemo­lítioos de uso más freceunte son el agua destilada _\'lassoluciones hipotóuicas, respecto al plasma. Pero hayotras sustancias que producen la hemolisis, indepen­dientemente de la presión osmótica de la solución enque son empleadas. Estas sustancias obran cualquie­ra que sea su concentración, y su acción es mayor, cuan­to mayor es ella. Lo que se explica fácilmente, puesdichas sustancias obran por sí, son verdaderos vene­nos electivos para la sangre. Entre ellos encontramosglucósidos como la digitaleina, saponina, salicina; tox­albúminas de origen vegetal: ricina, abrina, ponsoña deserpientes, de escorpión, venenos microbianos, silica­

'tos, la antipirina, bilis, ciertas orinas patológicas iso­tonizadas con el plasma, algunos extractos orgánicos,muscular, tiroideo, pancreático, hepático, el sudor, to­xinas microbianas y los sueros de la sangre de anima­les de otras especies, siendo tanto más intensa su ac­ción, cuanto mayor es la desemejanza entre dichas es­pecies.

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La forma en que obran estas sustancias es oscuraaún, se supone que se trata de una acción enzimática.

El éter, alcohol. bencina, sulfuro de carbono. la bi­lis. tienen un poder liemolítico propio y se acepta que eneste caso, el fenómeno de liemolisis, no es producidopor una disminución de la' presión osmótica del medioque rodea al glóbulo, pues dichas sustancias obran enmedio isotónico. Y teniendo en cuenta que esas sus­tancias son disolventes de los lipoides, se admite quela liemolisis, en esos casos, es producida por una diso­lución de las lipoides, en especial de la lecitina de lapared globular. '

Los ácidos _\'las bases producen hemolisis, los pri­meros, coagulando y precipitando las sustancias protei­cas y los lipoides del estroma, y los segundos saponifi­cando los lipoides. En uno y otro caso reblandecen el es­troma, modificando así las condiconcs físicas del gló­bulo y ocasionando la difusión de la hemoglobina. l‘llsuero de la sangre de ciertos animales, tiene propie­dades liemolíticas naturales para los glóbulos rojos deotra especie: así: el suero de sangre de anguila, es he­milítico para lOsglóbulos rojos de todos los mamíferos;el suero de sangre de perro, es liemolítico para los gló­bulos de cobayo; el suero de sangre humana. es he­molítico para los glóbulos de carnero. Al lado de es­tos sueros liemolíticos naturales. tenemos los artificia­les. 'Si a un animal de la especie A, le inyectamos enla cavidad peritoneal glóbulosrojos della especie' Btomando las precauciones necesarias, al cabo de uncierto tiempo el suero de A, es liemolítico respecto alos glóbulos rojos de B, disolviendo .por consiguientelos hematíes de B. _

HEMOI.ÏSI.\'AS.—Las hemolisinas son sustancias

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que determinan la disolución de la hemoglobina, conte­nida en el liematíe. En un sentido general, esta defini­ción comprende a todas las sustancia capaces de pro­ducir la liemolisis;‘pero en el sentido extrictode lapalabra, esa denominación se aplica, no a las sustan­cias que obran, ya sea destruyendo el estroma o por- .que en virtud de la presión que determinan en la 'solu­ción que se emp'lea, rompen el equilibrio de presionesy permiten en una y otra forma, el pasage y la disolu­ción de la hemoglobina, en el líquido en que se hallanlos glóbulos rojos, sino más bien, a aquellas sustan­cias que obran independientemente de las causas arri­

.ba citadas y su acción per se las convierte en toxinasdel glóbulo rojo. La aloína, la _ricina, la crotina, queaún en cantidades infinitesimales son capaces de disol­ver cantidades grandes de glóbulos rojos de oveja ode conejo que se encuentran en un medio isotónico, Sonhemolisinas en el sentido extricto.

Del mismo modo, el suero de anguila y los suerosde muchas especies animales, que tienen propiedades­hemolíticas para los glóbuols rojos de otras especies,contienen hemolisinas; en este caso, son hemolisinasnaturales. El suero de la especie A, preparado elanimal convenientemente, por inyecciones intraperi­toneales de glóbulos rojos de especie B, contienen lie­molisinas artificiales respecto a los glóbulos de B, y eneste caso, específicas.

La especificidad de las hemolisinas de A respectoa los glóbulos de B, está dada por el hecho de queel suero de de la sangre de A disuelve únicamentelos glóbulos rojos de la especie B. Esta especificidad

¡es bastante grande y si bien las hemolisinas de A, di­suelven los glóbulos rojos de cualquier animal de la

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especie B, no manifestándose su acción hemolítica pa­ra llos glóbulos rojos de otra especie distinta, esta re­gla sufre limitaciones, interviniendo en ciertos casoslo que Kolle y Hestch, llaman reacción del grupo. Es­ta reacción interpreta el hecho de que el suero de A,preparado liemolítico, respecto a B, disuelve tambiénlOs glóbulos rojos de otra especie afín; lo que suce­de, por ejemplo, con el suero preparado llemoliticopara la sangre humana, que acciona sobre la' sangrede mono y vice-versa.

SUEROS HEMOLITICOS. — Nos ocuparemosdel estudio de los sueros hemolíticos, artificiales yespecíficos. Sn en la cavidad peritoneal del animal de laespecie A, inyectamos glóbulos rojos del animal de laespecie B, tomando las precauciones y en la formaque más adelante indicaremos, al cabo de un ciertotiempo, el suero de la sangre de A, tiene la propie­dad de liemolisar los glóbulos rojos de cualquier ani­mal de la especie B. Pasaremos revista a las condi­ciones que hay que satisfacer, para la obtención deun suero liemolítico.

Animal que sufrirá la inyección de glóbulos ro­

jos. — El animal escogido para inyectarlo, será tantomejor productor de hemolisinas, cuanto más diste snespecie, de. la especie a que pertenezca la sangre em­pleada para la inyección. El suero de la sangre delanimal inyectado, no debe tener propiedades hemolí­ticas naturales para los glóbulos rojos que se empleenen la inyección. Además, debe producir con facilidadhemolísina‘s. El conejo responde a las anteriores con­diciones; el suero de su sangre no tiene propiedadeshemolíticas naturales, para los glóbulos de hombre,carnero, buey, caballo y cobayo. Elegido el animal, se le

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practican, en la cavidad peritoneal. varias inyecciones(le glóbulos rojos para los cuales se quiere obtenersuero bcmolítico. Estas inyecciones se hacen con in­tervalo de algunos días entre cada una de ellas y co­mo a veces mueren 10s animales en el curso de la pre­paración. es conveniente inyectar al mismo tiempo,tres o cuatro.

Preparación (le los glóbulos. — La sangre que vaa proveernOs de los glóbulos rojos, debe ser obtenidaen las mejores condiciones de asepsia. Se recoge pormedio de una cánula esterilizada que se introduceen lawarótida, o también puede introducirse en la yu­gular externa. La sangre que gotea de la cánula, serecibe en un balón de 250 cc. de capacidad, preferen­temente en 'un frasco de Erlermeyer, cualquier reci­piente que sc emplee con ese objeto, debe ser esteri­lizado _\'contener, hasta la cuarta parte inferior, per­las de vidrio. Se recibe la sangre hasta las dos ter­Ceras partes de la capacidad del recipiente, se tapacon un trozo de algodón esterilizado y se agita regu­larmente. imprimiendole un movimiento de rotación,hasta que las perlas se aglutinen por los filamentos¡lc fibrina y la sangre que sobrenade quede líquida.Esta operación se conoce con el nombre de desfibri­nación de la sangre. Desfibrinada la sangre, li'ay queproceder al lavaje de los glóbulos. Para ello, se colo­can en cada uno de los tubos de una centrífuga, 1!5(le sangre desfibrinada. teniendo la precaución demarcar con un lápiz. el nivel (le la sangre en dicho tu­bo, luego se acaba de llenar con agua salada fisioló­gica esterilizada al 0.92 olo y se coloca el tubo en lacentrífuga, centrifugando, basta la completa sedimen­tación (le los glóbulos. Obtenida esta sedimentación

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de los glóbulos, se decanta el agua y se añade al mis­mo tubo, otra cantidad de agua salada filiológica, eo­mo la primera vez, se'agita el tubo para que todos10s glóbulos queden suspendidos en el liquido y secentrífuga nuevamente. Después {del tercer lavajey decantación del agua, se añade agua salada fisioló­giea, hasta el trazo que se marcó con lápiz y tendre­mos una mezcla de glóbulos y solución fisiológica, eu­yo volumen será igual al de la sangre correspondiente.

Preparados ya los glóbulos, es conveniente efee­tuar inmediatamente la inyección, al animal elegido,pero si el caso lo exige, pueden ser empleados dos otres días después, siempre que hayan sido conserva­dos en la heladera, tapado el recipiente (¡ue los con:tiene con algodón esterilizado. '

Armand Delille, aconseja, para conservar losglóbulos un tiempo mayor, añadirles después del lava­je formo] del comercio, en la proporción de 1 por500; el autor citado, ha conservado así llematíes du­rante un tiempo mayor de tres semanas, sin que pre­sentaran alteración. .

Inyección de los glóbulos. —- Los glóbulos que sevan a inyectar. se aspiran por una jeringa provistade su aguja, para evitar se oblitere por los grumosy filamentos fibrinosos. Se inmoviliza el animal. yasea por un aparato especial o con la intervención deun ayudante, la faz ventral debe mostrarla al opera­dor. Se le quitan los pelos de la pared abdominal enuna pequeña zona, en la vecindad de la línea mediade la región sub-umbilical y se desinfeeta con tinturade yodo un pequeño trozo de dicha región, en el pun­to en que penetrará la aguja de la jeringa. Se to­man con los dos dedos de la mano izquierda, la piel

de la región desinfectada, haciendo un pliegue conella, en el cual no estarán comprendidas las ansasintestinales; se pasa de parte a parte el pliegue. conla aguja de la jeringa, luego se retira la aguja 'has­ta que su extremidad quede en la cavidad peritonealy se. hace la inyección, manteniendo la jeringa hori.»zontal. (l)

Las. inyecciones deben hacerse con un intervalode 5 á 6 días y algunos aconsejan una semana y sunúmero debe ser de 5 a 6. (‘uando sea necesarioobtener rápidamente un suero hemolítico, se puedenhacer las inyecciones con un finterv‘alo m'enor detiempo, de 4 en 4 días por ejemplo, pero en estecaso, la dosis de glóbulos inyectados debe ser menor,‘2a 3 centímetros cúbicos.

Recolección del suero hemolítíco. — Ocho díasdespués de la última inyección. el animal debe sersangrado. Lo más conveniente es sacrificarlo y re.­coger la mayor cantidad posible de sangre, cuyo sue­ro tendrá un título fijo, respecto a su poder hemolí­tico. Si se desea conservar el animal, se puede efec.tuarle sangrías parciales, pero con el inconveniente.dc tener suero hemolítico, con distinto título. El pri­mer camino es el mejor, pues el suero hemolítico, scconserva sin debilitarse por un período mayor de unaño. El procedimiento más práctico para recogerla sangre, es la sangría en la carótida por medio deltubo pipeta de vidrio, que la figura siguiente dá unaidea. (fig. 8)

Los tubos pipeta tienen una capacidad de 50 cc.

(ll Respecto u la técnica u seguir cn la Inyección, hay vnrlas que puedenconsultarse en las Ilisunlas ubrnu especiales. Xr'sulros seguimos lu quo dclnllamos.

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y como un conejo de 2 y 122 ks. produce fácilmente70 a 80 cc. de sangre, se hacen necesarios (10s tubospipctas.

Fm. 8Tubo plpeta cortado on bisel para puncíonar la arteria

La sangría se practica en la forma siguiente: seinmoviliza el conejo, cuya cara ventral debe mirarhacia arriba, se le quitan los pelos en la cara ante­rior'del cuello _vluego en dicha parte, se hace unaincisión longitudinal sobre la línea mediana; se ais­la la carótida y se denuda ésta sobre una extensiónde dos centímetros, se liga la extremidad superior dela porción (lenudada y un centímetro por debajo de­la ligadura, se coloca una pinza de presión conti­nua. en el segmento comprendido entre la ligadura yla. pinza, se introduce la extremidad del tubo pipeta.La sangre penetra en el tubo hasta una cierta altura,en que la presión sanguínea disminuyendo, será ne­cesario para que penetre más sangre en e].tubo, com­primir la masa abdominal y ejercer presiones en laspartes laterales del tórax del animal. Cuando no pe­netre más sangre enel tubo pípeta, se retira, tenien­do la precaución de aspirar por medio de la boca, laextremidad superior del tubo, pues de lo contrario.se perdería sangre. En esta condición se cierra eltubo por medio de un pico Bunsen, s'e tapa con algo­

bso­

dón esterilizado y se guardan los tubos en un arma­rio oscuro, donde se dejan por espacio de '24 lio­ras. Los tubos con sangre no deben ser colocadosen una heladera, pues el frío impide la retracción delcnágulo. Intre las tres y diez horas siguientes a lasangría, es conveniente desprender el coágulo deltubo; puede obtenerse este desprendimiento, colocan­do en cada tubo antes de esterilizado y por consiguien­te, con anterioridad a la extracción de la sangre, unagota de solución fisiológica. Cuando el coágulo liaabandonado la mayor cantidad de suero, se decantaeste último por medio de una pipeta esterilizada y sele distribuye en varios tubos que se conservan en laheladera. (fig. 9)

Si se desea obtener rápidamente suero bemolíti­co, y que 61 sea muy límpido, se puede hacer la- san­gría por medio de una cánula, recoger la sangre enun tubo de centrífuga, centrifugar y entonces en laparte superior del tubo, queda un suero muy claro

. que se puede decantar.Mecanismo de la acción de 1m suero hemolítico. —

Supongamos tener suero de conejo llemolítico paralos glólmlos de carnero, y pongámoslo en contactocon glóbulos de carnero; la Ilemolisis se produce. Pe­ro. si antes de efectuar esa mezcla de glóbulos y sue­ro hemolítico, calentamos dicho suero a la temperatu­ra de 55-56", la liemolisis no se produce. Luego elsuero bemolítieo llevado a la temperatura de 55-56°,.pierde su poder bemolítico, pero no de un modo per­manente, pues si a la mezcla de suero liemolítico yglóbulos calentados a 55-56,", le agregamos una peque­ña cantidad de suero nuevo de conejo o de cualquierotra especie animal, que no hayo sido calentada a

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55-56“, la hemolisis se produce. Luego, la adición desueronuevo de cualquier especie animal. ha reactiVado

FIG. 9

Tubo pípeta con suero y el coagulo retraído ,

. la acción hemolítica del suero calentado. Por consi­

> guiente, en los sueros no calentados. existe una sus­i tancia que complementa 1a acción de la hemolisina,

y que ha merecido por esta razón, el nombre de eom­plemento. Esta sustancia no es específica, pues sehalla en los sueros de todas las especies animales ysu modo de comportarse res‘peeto al calor, la clasi­fica como una sustancia termolábil. Ehrlich, llama

a dicha sustancia complemento; Buchner, la designaalexina y Metclinikoff, citasa. I

Al suero .calentado a 55-56“, se le llama sueroinactivo y al que no ha sufrido la acción del calor,activo. Establecido así el papel del complemento, pa­semos a estudiar el mecanismo de la acción del suerohemolítico.

Si continuando siempre con nuestro suero de co­nejo liemolítico para los glóbulos de camero, hace­mos una mezcla de dicho suero, calentado a 55-56°,y glóbulos de carnero, la colocamos durante una horaa la estufa, a esa misma temperatura, luego la retira­

'mos y centrifugamos para sedimentar los glóbulos;recogemos éstos, previa decantación del suero; la­vamos los glóbulos con agua salada fisiológica, en laforma que ya hemos indicado, y añadiendo sueronuevo no calentado a los glóbulos, la llemolisis se pro­duce.- Luego la sustancia liemolítica que se hallaba .en el suero, se fijó íntimamente sobre los glóbulos,sensibilizándolos liemolíticamente, para la acción delsuero, lo que justifica el nombre de sensibilizatriz,que Bordet dió a esta sustancia. Si el suero liemolí­tico que estuvo en contacto con los glóbulos y que se­paramos por decantación, lo ponemos en contacto conotra cantidad de glóbulos rojos y suero nuevo, la he­molisis no se produce; lo. que prueba que el primerlote de glóbulos que estuvo en contacto con dicho sue­ro, absorvió la sensibilizatriz que se fijó sobre ellos,despojándolo por completo de ella.

La forma anterior, no es la única para obtenerI la fijación de. la sensibilizatriz sobre los glóbulos; co-'

chando durante 24 horas en una-heladera, temperatu­ra a la que no se produce hemolisis, glóbulos con sue­

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ro hemolítico para ellos, separando por centrífuga­ción y lavando los glóbulos, se comprueba como en elcaso anterior, que los glóbulos se han sensibilizado,quitándole al suero su sensibilizatriz hemolítica y de­jándole su complemento.

La sensibilizatriz hemolítica, es específica, se fi­ja enérgicamente sobre los glóbulos para los cuales,fué preparado hemolítico 'el suero que la contiene; yasí vemos que el suero de conejo, preparado hemolí­tico para los glóbulos de carnero, no tiene acción so­bre los glóbulos de otros especies. Es una sustanciatermoestable, pues el calor no la destruye. Bordetla llama sensibilizatriz, en cambio Ehrlioh, la desig­na con el nombre de amboceptor, por el hecho deque sirve (le intermediaría entre el glóbulo y el com­plemento, para que la llemolisis tenga lugar. _

Las dos figuras siguientes dan una idea esque­mática, del fenómeno de la hemolisis. (fig. 10)

Globulo rojo Sensibilizatriz Ambo- i Aleceptor. Complemento

CitaxaAntes de la fijación del complemento

Fm. 10

Fijación del Complemento(Lámina de A. Delille)

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Títulaje del poder de un suero hemolítico. — Conel objeto de aclarar los anteriores conceptos y fami­liarizarnos con ellos, indicamos un títulaje de un sue­ro hemolítico. . ..

Tomemos varios tubos de ensayo y en cada unode ellos. coloquem‘bs 1 cc. de una dilución al 5 o|o deglóbulos rojos en solución fisiológica, luego añadimoscantidades variables de suero liemolítico calentado;en estas condiciones tenemos en cada uno de los tu­bos glóbulos' rojos y sensibilizatriz, faltándonos com­plemento'para que se efectúe la liemolisis. .

A este objeto se agrega, a cada uno de los tuboscon la °anterior mezcla, 1 oc. de suero nuevo de coba­yo, no calentado, también diluido, y por último secompletan con distintas cantidades de agua fisioló­gica de manera de obtener un volumen final de 2 cc.en cada tubo. Efectuadas las anteriores mezclas, sellevan todos los tubos a la estufa, a la temperatura de37-38° y se observa frecuentemente la marcha de di­chos tubos. Se nota que en todos ellos se ha produ­cido hemolisis; en unos totalmente y en otros, par­

cialmente. Como en cada tubo tenemos para la mis- .ma cantidad de glóbulos, distinta de suero hemolíti­co, indudablemente que el fenómeno de la hemolisiskhabrá requerido distinto tiempo en los diferentes tu­bos. En aquéllos en que fué rápida la hemolisis, ha-ibía cantidad exagerada de suero hemolítico; otros delos tubos no presentan hemolisis completa, aun enlas mejores condiciones, dejándolos mucho tiempo enla estufa, luego estos tubos contenían cantidades pe­queñas de suero hemolítico. Toda la investigaciónconsiste en hallar la dilución más baja, para que con

ella y en el término de media llora se produzca hemo­lisis total. '

Suero hemolítico para los glóbulos (le camera. ca­lentnrlo á 56“. — Para el titulaje de un suero hemolí­tico para los. glóbulos de carnero, las diluciones y ele­mentos necesarios, son los siguientes:

(r'Io'bulos.— Glóbulos rojos de earnero recogidoscl mismo día, lavados por centrifugación y diluídosen solución fisiológica en la proporción de 5 de gló­bulos y 95 de solución. Antes de diluir los glóbulos,deben ser llevados al volumen inicial de sangre. comoya hemos indicado.

Suero nuevo de cobayo, no calentado. -—_Este sue­ro se diluye en la siguiente forma: 1 cc. de suero y 3cc. de agua fisiológica.

Agua salada fisiológica o solución fisiológica o.agua fisiológica. — Solución de cloruro de sodio al 9.2por 1000. _ Y

Tuhos de vidrio de 12 centímetros de alto y 12milímetros de diámetro; pipeta de 1 cc., graduada aldécimo. Los tubos y la pipe-ta convenientemente ta­pados con algodón y esterilizados.

Las sustancias que se colocan en los tubos se hacenen el orden siguiente: glóbulos, suero liemolítico. sue­ro nuevo de cobayo y la cantidad de solución fisioló­gica para llevar el volúmen a 2 cc.

El cuadro siguiente dá una idea muy clara del ti­tulaje:

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Glóhuloe Suero Suero AguaTUBOS dlluídos al hemolítlco do cobayo BBULTADO

6 olo calentado nuevo fisiológica

Hemolisis total en 10minutos.

Hemolisís total en uncuarto de hora.

Hemolisis total en uncuarto de hora.

Hcmolisis total en uncuarto de hora.­

Hemolisis casi totalen un cuarto de ho­ra, total en mediahora. '

Hemolisis casi totalen media hora.

Hemolisis ligera en

N°1 1 cc. 0.5 cc. 0.1 cc. 0.4 ec.

D31D.0.3 ¡0.1 ¡0.6n41» 0.2»0.1»o.7

.5 1 . 0.1-. 0.1' » 0.a V

’ 6 1 ¡P ’ D )' 7 1 ' 0'01 ' 0'1 ' 0'9 ' media.hora.

3'» 8 1 n sin suero 0.1 » 0.9 » Hemolisis nüla.9 » 9 1 r 0.5 cc. sin suero 0.5 n Hemolisis nula.Í . 10 1 n 0.5 n s s 1.0 '» Hemoiisís nula.

Como vemos, el tubo núm. 5, és el que tiene lasdosis mejores para la hemolisis. Una vez titulado elsuero llemolítico, el título obtenido no es necesarioverificarlo cada vez que se utilioe el suero, pues seconserva durante mucho tiempo. Del mismo modoque hemos titulado un suero hemolítico, podemos tam­bién titular la actividad aléxica de un suero, varian­do entonces en la experiencia anterior, las cantidadesde suero de cobayo que contiene la alexina.

PRECIPITINAS. — Hemos visto al estudiar lahemolisis, que inyectando ciertos elementos morfoló­gicos a un animal, se obtiene en el suero de su san­gre, agentes disolventes para los mismos; análoga­mente sucede inyectando ciertos líquidos que nos pro­

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ducen en el suero de la sangre del animal inyectado,propiedades precipitantes para el liquido inyectado.

Si en la piel o el peritoneo de un animal (le laespecie A. inyectamos suero sanguíneo de la especieB, el suero de A tiene propiedades precipitantes respec­to a la sangre de cualquier animal de la especie B.Estas propiedades precipitantes, no son determina­das únicamente por la inyección de elementos celu­lares. sino que también pueden obtenerse suerosprecipitantes y específicos para las especies bacteria:nas, para las distintas albúminas, para las diferen­tes carnes, ete. ¿01'th que fue quien inició esta cla­se de trabajos, inyectó en el peritoneo de un conejo.leche de. vaca y obtuvo de la sangre (le dicho animal,un suero, que precipitaba la leche de vaca.

Tsistowitsch, inyectando a un conejo suero desangre (le caballo, obtenía un suero precipitante, arti­Íicial y específico, para la sangre de caballo. Was­serinann y Schütze, inocularon conejos, con distintasespecies de leche: de vaca, mujer, cabra, y observaronque los sueros de los animales inyectados, tenían ca­da uno de ellos la propiedad de coagular la leche, conque habian sido inyectados. l

Los autores. arriba citados _\'con ellos Biffi _\'Uh­lenhuth, efectuaron numerosas experiencias, con ob­jeto de obtener sueros precipitautes, artificiales y es­pecíficos. IÏhlenhuth, inoculó conejos, con albúmina

.de huevos de gallina, unos y otros con albúmina dehuevos de paloma; obteniendo de esos animales, sue­ros que adicionados a las soluciones de albúmina delmismo origen, con un titulo de JO olo, daban un preci­pitado manifiesto.

Muchas experiencias posteriores han venido a de­

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mostrar la posibilidad (le diferenciar. por el métodode los sueros precipitantes específicos, las distintas al­búminas. I

Como las sustancias que hemos utilizado para ino­cular el animal elegido, contienen sustancias protei­cas, los sueros precipitantes, lo serán para la albú­mina del organismo que nos proveyó de la sustanciaa inocular y serán especificos para dichas albúminas,consideradas con las albúminas de otras especies ani­males, pero la reacción será común a todos los líquidosalbuminosos de ese organismo. En tal sentido. lasmanchas de esperma humano, dan la misma reacciónque. las manchas de sangre humana y esto se explicapor las sustancias proteicas de ambas, de igual origen.

Las'aplicaciones de los sueros precipitantes sonnumerosas: en química legal, nos permiten diferen­ciar la sangre humana, de la sangre de otra especieanimal; cOnlos sueros precipitantes podemos diferen­ciar las distintas albúminas; en higiene, se utilizandichos sueros precipitantes para diferenciar las car­nes de las distintas especies animales y aun para in­dicarnos carnes que pueden ser muy peligrosas pa­ra el consumo, como sucedería con la carne carbun­culosa. Y hasta es posible, en presencia de huesosque contengan aun albuminóideos, poder determinar laespecie a que han pertenecido dichos huesos.

Las sustancias contenidas en un. suero, y que de­terminan precipitaciones, se llaman precipitinas. Aná­logamente con los sueros hemolíticos naturales, tene­mos sueros precipitantes naturales y por consiguien­te, precipitinas naturales; lo que sucede con el sueronormal de buey, que precipita los extractos albumino­sos del bacilo tiphosus y los sueros normales de ove­

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ja, cerdo y caballo, que precipitan el virgula coló.­rico.

Espccificidad de los sueros precipita'ntes. ——Dadola naturaleza y el número de problemas que debe re­solver un suero precipitante; el grado de especificidad

- del mismo, es' de suma importancia. A veces sucedeque un suero precipitante, lo es para distintas albú­minas muy afines; así, el suero de un conejo inyecta­do con suero de pollo, produce un precipitado ensoluciones de sangre de paloma; del mismo modo elsuero precipitaute para la sangre de cabra, puedeserlo para la sangre de carnero. Fstos inconvenien­tes pueden evitarse, empleando sueros cuya eficaciay especificidad, hayan sido establecidas previamentecon gran exactitud. La sustancia a inyectar debe pro­venir de un animal cuya especie zoológica, diste lo másposible de la especie a que pertenece el animal inyecta­do. Se puede prever la importancia de este punto,recordando que el suero de un conejo, inmunizado conel suero humano, precipita no solo la albúmina huma­na, sino que también la del mono. El tratamiento delos animales para la obtención del suero precipitante,tiene importancia en lo relativo a la especificidad;cuanto más largamente y con mayor intensidad soninyectados, menor es su especificidad.

Modo de (¡cr-ión(le las precipitinas. — La precipi­tación ocasionada por un suero precipitante, tienelugar por la combinación de la precipitina que se hallaen el suero específico, con la' sustancia precipitable,que podemos llamar precipitinógena, que contiene lasolución de una sustancia proteica o el filtrado de unacultura bact'érica.

Las precipitinas son bastantes resistentes al ca­

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lor, en cambio, por la acción del tiempo se alteran,aconsejándose para conservar-las, la adición de cloro­formo o fenol. Respecto a su composición químicase las considera como globulinas. Los conocimientosque se tienen de ellas son bastantes incompletos.

Obtención de un suero precipitante para la sangrehumana. — Siguiendo un procedimiento análogo al delsuero liemolítico, indicaremos todos los puntos y deta- 'lles que interesa conocer, para obtener un suero preci­pitante.

a) Animal que sufrirá la inyección. — Varias es­pecies de animales han sido propuestas paraser utilizados en la inyección, pero el más in­dicado y el que se emplea en todos los labor- ­torios para la obtención de suero précipitantepara la sangre humana, es el conejo. Debeser elegido un animal joven y en buen estado.

b) Sus/(¡win a inyectar. — La sustancia que se in­yectará al conejo. será suero de sangre hu­mana. A causa de la dificultad que se presen­ta muchas veces para conseguir sangre Imma­na, algunos exlwrimentadores aconsejan.yutilizan otros liquidos provenientes del orga-'nismo y conteniendo albúmina humana, co­mo ser: líquido pleural, líquido ascítico, lí­quido del hidrocc'le, del quiste del ovario, le­che de mujer y hasta orina albuminosa. Losdos primeros son los que tienen mayor acepta­ción. En el caso de inyectar dichos líquidos,por falta de sangre humana. es convenienteconcentrarlos previamente, lo que puede con­seguirse por medio del calor o sometiendo ellíquido a inyectar a la acción de temperatu­

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ras muy bajas, en las que cristaliza el aguay no las sustancias albuminóideas; por repe­itidas cristalizaeiones y eliminación de loscristales, se llega a concentrar suficientemen­te el líquido albuminoso que se va a inyectar.

Lo más aceptado y conveniente, es inyec­tar al conejo suero de sangre humana. Pu­diéndose procurar esta última en los hospi­tales, ya sea sangre de urémicos o cardíacos,también puede usarse sangre de placenta. Lasangre debe ser recogida en un tubo esteri­lizado y desfibrinada en la forma que hemosindicado al ocuparnos de los sueros hemolí­ticos. Desfibrinada la sangre, se centrífuga,recogiéndose asépticaniente el suero, que esel que se inyectará al animal.

c) Inyección al animal. — Es conveniente inyectaral mismo tiempo 3 o 4 conejos, pues en eltranscurso de las inyecciones, aun tomandotodas las precauciones necesarias, mueren al­gunos de ellos en virtud dc fenómenos anafi­lácticos.

Las inyecciones pueden hacerse por distin­tas vías, nosotros seguimos la que hemos in­dicado al hablar del suero hemolítico.

d) Cunlidad (le líquido a inyectar. — La cantidadde líquido a inyectar, el número de las inyec­ciones y el intervalo que debe existir entreellas, varía según la vía que se ha elegido ysegún los experimentadores. El cuadro si­guiente dá una idea clara del asunto:

Número de Intervalo entrei Cantidad de

AUTOR la luyecclún liquido lnyeu-iones cada inyecclón

Kolle y Hetsch subcutainm 8 a 10 e.“ 5 a 6 4 a 6 díasr r intravenenosa 2 a 5 n 3 ¡l 4 4 a 5 n

Uhlenhuth intra peritoneal! 10 » 3 6 nBuída id. g l a 2 n 8 a 10 ' diarias

Wassermann id 5 a 10 » 5 a 6 f L’díasHerscher id. 5 a lo r 5 n 6 2 díasVigano id. l '2 a 3 » 4 a 5 5 a 6 díasCitron endoveno-u 1 n. 3 a 4 6 días

l‘ln la obtención de los sueros precipitantesque hemos utilizado en el presente trabajo,hemos inyectado suero humano en una can­tidad de 4 a 5 cc., en número de 5 inyecciones,con un intervalo entre cada inyección de 6 a7 días.

e) Recolección del suero precipitante. — Ocho díasdespués de la última inyección, debe reco­gerse el suero precipitante. Generalmenteantes de extraerle toda la sangre posible alanimal y sacrificarlo por consiguiente, se reco­mienda hacer nn ensayo, practicándolc unapequeña sangría en la oreja y probar pormedio de algunas reacciones, si el suero tie­ne suficiente actividad . _ '

La sangría definitiva, se hará en la mismaforma que la que hemos indicado para elsuero hemolítico. Es conveniente no alimen­tar el animal las 24 horas anteriores a lasangría para evitar tener un suero opales­cente. -Retraído el coágulo en el tubo pipe-.ta, se decanta el suero por medio de una pipe­

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ta esterilizada y se le coloca, distribuyéndo­lo, en ampollas de 1 cc. de capacidad, cadauna. ­

Tratándose de la naturaleza física del fe­nómeno, que producirá el suero precipitaute,es absolutamente necesario que sea límpido.Si el suero obtenido, no es límpido, puedeesperarse, de una simple sedimentación, querecupere su limpidez. Si ella no dá resulta­do puede recurrirse a una centrifugación, yen último caso, filtrarlo. El procedimientomás indicado es la filtración, con un filtroBerckefeldt. Para terminar, diremos, que unsuero que no sea completamente límpido, nodebe utilizarse. _

f) Conservación del suero. — El suero bien lím­pido se distribuye en ampollas de vidrio, (le1 cc. de capacidad. Las ampollas que he­mos empleado con tal objeto, han sido lasque se destinan para contener líquidos pa­ra inyecciones hipodérmicas. Hemos elegidoampollas de color amarillo, si se quiere mejor.caramelo; las hemos llenado con suero, si­guiendo la misma técnica que se emplea pa­ra llenarlas, en la industria y fueron cerra­das por medio de un mechero Bunzen. Lasampollas habían sido previamente esterili­zadas. Para conservarlas, las guardamos enuna heladera, donde no sufrían la acción dela luz.

Como la producción de un suero precipitante. esel resultado de una preparación larga y aun costosa,tiene mucha importancia, el problema de su conserva­

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. ción. Con tal fin se añaden al suero precipitantediversas sustancias: ácido fénico (0.5 olo), clorofor­mo (1 olo), tolnol (pequeñísimas cantidades). Conobjeto de comprobar si un suero precipitante, conser­vado con la adición (le antisépticos, sufre modifica­ciones, se han hecho numerosas experiencias. Wei­danz, lia comprobado que el ácido fénico es perjudi­cial al suero precipitante; Graham Smith, comoresultado de sus investigaciones llegan a la conclu­sión que todos los antisépticos perjudican el sueroprecipitante. Además el agregado de sustancias con­servadoras, modifica la limpidez del suero, condiciónindispensable, para la reacción precipitante.

Uhlenllutb, en el laboratorio de Salud Públicade Berlín, conservó sueros precipitantesL en frascosesterilizados, al reparo de la luz y del calor, durantevarios años, sin que hubiese sufrido alteración algu­na la acción precipitante de los mismos. Las mues­tras que no habían sido suficientemente protejidas,habían sufrido solamente, una modificación del título.

Actualmente, después de las experiencias de Uh­Ienbutb, se conservan los sueros en lugares frescosy al abrigo de. la luz, colocándolos _en recipientes es­terilizados.

Después de algún tiempo. se observan, en lossueros precipitantes, lun depósito gris-amarillento, re­sultado de una auto-precipitación: este depósito sepuede eliminar centrifugando el suero, la única precau­ción a tomar luego, es verificar el título del sueroprecipitante. También si el ambiente en que se en­cuentra el suero es demasiado fresco, se suelen en­contrar en los recipientes que contienen el suero pre­

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cipitante: un enturhamiento y a veces un precipita­do, que-desaparecen calentando ligeramente.

REACCION PRE(‘IPI’l‘AN’I‘E. — La reacciónprecipitante puede practicarse en dos formas distin­tas: reacción fioconosa y reacción zonal. .

Reacción _floconr)su.—l‘lllíquido o la dilución en loscuales se investiga la precipitina específica y el sueroprecipitante, se mezclan. La reacción se produce co­mo un enturbaniicnto con pequeños flocos que luegose precipitan en el fondo de la probeta.

Reacción Zonal. — Los dos líquidos no se mez­clan, se colocan superpuestos y en la zona de separa­ción-se forma un anillo opalescente. La figura siguien­te muestra un aparatito muy sencillo y cómodo parapracticar la reacción precipitante. (fig. 11)

Se vierte en la probeta 1!2 cc. de la dilución dellíquido cn el cual se investiga la precipitina y luegocon una pipeta Pasteur, se coloca sobre el fondo elsuero precipitante, dejándolo correr de modo que nose mezcle con el líquido; como el suero es más den­so que el líquido. ganará el fondo de la probeta. Sila reacción es positiva, en la superficie de separa­ción (le los dos líquidos se formará un anillo opales­cento. La reacción se examina a. la luz incidente, co­locando la probota contra una superficie negra.

Qtra aplicación práctica y un dispositivo cómodo ysencillo, es el ideado por Ascoli, para el diagnóstico delas carnes carliunculosas.

El método de la precipitina específica de Ascoli,consiste en lo siguiente: Una probeta de pie (fü.12), con un extrangulamiento en su tercio inferiory un ahultamiento debajo; esta probeta contiene 11a3­

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Suero preclpl­tanta.

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i Extracto

Suoro precipi- -. Z zonal.tante.

Liquido on”elqueso lnvostlgnla preclpltlna.

Reacción zonal

Fm. ll

ta la señal Z. suero precipitante, perfectamente lím­pido; cualquier precipitado eventual que pudiese exis­tir. se deposita en la parte abultada, quedando enella retenido, por el extrangulamiento. Un pequeñoembudo con un taponmniento de amianto, termina enun tubo capilar doblado y cortado a hisel.

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Para montar el aparato y efectuar la reacción,se procede (-n la siguiente forma: se coloca en la pro-_beta suero precipitante hasta la señal Z, luego se in:­troduce cl embudo en la probeta, de modo que la ex­tremidad del tubo adliiera a su pared, se vierte en­tonces en el embudo un extracto, en solución fisioló­gica. (le la carne o piel sospechosa de carbunclo; es­ta solución filtra a través del amianto y se ve obliga­da a correr lentamente a lo largo de la pared _va es­tratificarse netamente, arriba del suero precipitan­te. Si la reacción es positiva, se ve aparecer en lazona de contacto Z, entre los dos líquidos, un anillocircular lilanquecino.

TITULACIÓN DEL SUERO. — Para la deter-.minación del título de un suero precipitante, segui­mos el método indicado por 'Uhlenliutli. Dicho autorprepara soluciones de sangre en agua fisiológica, condiversos titulos: 1 por 10; 1 por 100; 1 por 1000; 1 por10000; 1 por 20000; 1 por 30000. En una serie de tu­bos de ensayo esterilizados y bien limpios o en laprobeta que ya hemos indicado, coloca 0.9 cc. de cadauna de las diluciones anteriores y luego deja caeren las paredes del tubo o probeta, 0.1 cc. de sueroprecipitantc, de modo que los líquidos se superponÁgan y nunca se mezclen. Se observa luego si 'se for­ma algún precipitado. El tubo en el cual tiene lugaruna precipitación con la más pequeña cantidad de al­búmina, dá el título del suero precipitante.

ÏÏhlenhutll, exige para un suero precipitante,que con la solución al 1 por 1000 de sangre, dé casimomentáneamente un enturbiamiento, y que a mástardar estelse produzca, 1 a 2 minutos después. Unsuero en estas condiciones, dá con las soluciones al 1

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por 10000 y al 1 por 20000, un enturbiamiento entrelos 3 y 5 minutos después de puestos en contacto. Elhutor citado recomienda en química legal, el empleode sueros con título elevado.

TEORIA DE EHRLICH PARA LA EXPLICA­CION DE ESTOS FENOMENOS. — Para la mejorcomprensión de los fenómenos de hemolisis y preci­pitación que acabamos de describir, así como para ladesviación del complemento que más adelante veremosy que tienen todos ellos su aplicación en el diagnós­tico de las manchas de sangre, transcribiremos sus­cintamente esta teoría. °

INMUNÏDAD. — Es el estado de un organis­mo por el cual es refractario hacia una enfermedadinfecciosa, enfermedad que adquieren en iguales con­diciones, otros individuos de la misma especie y ra­za. Ehrlich distingue la inmunidad natural y la ad­(pliricla.

Inmzmidad natural. — La inmunidad natural ocongénita o resistencia natural no es completa en to­dos los casos, lesiones naturales o artificiales del or­ganismo pueden ser causa de su desaparición.

’.l‘odoslos investigadores están de acuerdo en acep­tar, que esta inmunidad natural es el resultado dedisposiciones internas del organismo, pero cuandose trata de explicar el mecanismo de esta disposicióninterna, los autores se dividen en dos escuelas, la dela Patología celular y la de la lmmoral. _

Metsclmikoff en su teoría de la fagocitosis, atri­buye esta inmunidad del organismo a la presencia deciertos elementos celulares, los fagocitos que él cla­sifica en (los grupos: los fijos y los móviles. A los,primeros pertenecen las células connetivales y endo-I

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teliales y a los segundos, los leucocitos, linfocitos yotras células que se hallan en la sangre y que pro­vienen de la médula ósea. Todos los elementos extra­

ños y perjudiciales al organismo son destruidos porlos fag'ocitos, en el interior de estos últimos y proba­hlemente por la acción de sustancias contenidas en losfagocitos.

Buchner, partidario de la teoría humoral, afirmaque la defensa del organismo contra los gérmenes in­fecciosos tiene lugar sobre todo en los humores delorganismo que no contienen elementos celulares.

Buchner demostró que el suero de la sangre po­see. in vitro, esta propiedad de matar los bacterios, yllama alexina a la sustancia dotada de ese poder. Laalexina sustancia termolábil, pues una temperaturade 56 a 60° la destruye, manifiesta su acción bacterici­da, a la temperatura del cuerpo humano, en un mediode reacción débilmente alcalina y en presencia de sa­les. Los animales que son inmunes hacia una deter­minada enfermedad infecciosa, tienen la propiedad dedestruir los bacterios, en un medio desprovisto de ele­mentos celulares.

Actualmente la mayor parte de los autores se co­looan en un lugar intermediario, entre estas dos teorías.Y como todas las manifestaciones vitales están liga­das a procesos celulares, aceptan que la destrucción delos gérmenes, tiene lugar, por la acción de sustancias

--enzimáticas producidas por los leucocitos, ya sea porsecreción de ellos o destrucción-de los mismos.

Buchner, el partidario de la teoría humoral, haexpuesto otra teoría conciliadora con las dos escue­las; según ésta: los leucocitos digieren los gérmenesque penetran en el organismo, y la alexina, es un pro­

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ducto de secreción de las células del organismo, quehan sido estimuladas por los mismos gérmenes, y .quetoma parte. en la destrucción de 10s gérmenes pató­genos.

Inmunidad adquirida. — Según Elll‘llcll, esta in­munidad puede ser activa o pasiva.

La pasiva es la que se obtiene inmunizando el or­ganismo con sueros de animales inmunizados activamen­te. En esta inmunidad, el organismo no toma parteactiva elaborando productos de defensa; el suero in­munizado le trasmite las sustancias defensivas, que élabsorbe.

Inmunidad activa. Los agentes infectivos o susvenenos introducidos en. el organismo, son absorbi­d0s por éste. El organismo atacado reacciona, elabo­rando sustancias, que las utiliza para defenderse delos elementos que le son perjudiciales.

Los elementos infecciosos o sus toxinas, le sirvenentonces de estímulo y provocan esta defensa del or­ganismo; el que atraviesa por un período de reacción,que no es nada más que el resultado de su actividadcelular aumentada.

La inmunidad activa adquirida, es un proceso es­pecífico que se puede provocar contra los agentes infec­ciosos vivos o hacia sus toxinas.

Visto lo que antecede, pasamos a la teoría deEllrlicli. i

Anfibmzos. — (‘on este nombre se conocen todaslas sustancias lieterogéneas que el organismo asimila,reaccionando a su vez sobre ellas. '

Por consiguiente las diversas albúminas inyecta- 'bles a un organismo: los bacilos, los glóbulos rojos, lascélulas, las toxinas, son antígenos. Todos ellos inyec­

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tados a un organismo, dan lugar a la formación en di­('llOorganismo de productos de reacción especificos con­tra los antígenos.

-71micuerpos. — Los productos de reacción del or­

ganismo hacia cada antígeno, se conocen con el non]­ln-e de anticuerpos. (‘ada antígeno provoca. por reac­ción vital. un anticuerpo que le es especifico. Segúnliln-lich el protoplasina de una célula está compuesto(le moléculas, carla una de las cuales está constituidapor un núcleo, llamado funcional y por cadenas late­rales.

Las cadenas laterales, llamadas también recepto­ras, sirven de ordinario para fijar y asimilar las sus­tancias nutritivas. Las sustancias nutritivas se fijanen las cadenas laterales en una forma poco estable,que les permite, una vez transformada la sustancia ali­menticia. desprenderse de la cadena y eliminarse. sindañar a la célula.

Las toxinas se fijan en el receptor de las cadenas­laterales, por medio de su grupo aptófero, y el grupotoxóforo ejerce entonces su acción tóxica. Esta fija­ción de la toxina por su grupo aptóforo, es muy enér­gica. Si la fijación de la toxina en una célula, pasa­de un límite, la célula queda inutilizada en Sus funcio­nes; si esto se repite con muchas células, se producela muerte del individuo.

Pero no se llega a tal límite, y según la ley deregeneración de ll'eigert, se produce en cambio de laspartes destruidas de la célula, una producción muygrande de las mismas, que viene a sustituir a la parteinutilizada. Y como esos receptores producidos enexceso, son inútiles para e] funcionamiento de la cá­lula, los receptores en exces0, son eliminados. Estos

I.

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productos eliminados, son receptores libres, que con­servan su propiedad de fijar las toxinas, y neutrali­zando así su acción. evitan que éstas inntilicen las có­lulas por el"procedimiento arriba mencionado.

Ilay varias clases de receptores: de 1ro., 2° y 3er.orden, que en estado de libertad toman el nombre de.aptinas.

A los receptores o aptinas de 1er. orden pertene­cen las antitoxinas y los antifernlentos; a los de 2°orden: las aglutininas y precipitínas; de 3er. ordenson: las hemolisinas y bacteriolisinas. Vemos que lasaptinas de 3er. orden poseen dos grupos aptóforos li­bres; Ehrlich las llama amboceptores, y uniceptores alas de lroi y 2° orden.

Las figuras siguientes indican gráficamente, lasnociones anteriores: (fig. 13).

Desviacioncs del complemento. — Cuando inyecta­mos en el peritoneo de un conejo, glóbulos rojos de car­nero, tenemos al cabo de un cierto tiempo, que el suerode la sangre del conejo inyectado, tiene la propiedadde hemolisar los glóbulos rojos de carnero. De acuer­do con las denominaciones que. hemos dado a las sus­tancias, tenemos: que los glóbulos rojos inyectados alconejo, constituyen el antígeno; que las lieinolisinasque aparecen en el suero de conejo, son los anticuerposespecíficos y para que la reacción hemolítica se pro­duzca, tenemos que poner en presencia:

antígeno + anticuerpo + complemento

Si ponemos en contacto glóbulos rojos sensibiliza­dos en presencia de un suero nuevo, la hemolisis seproduce; pero si tomamos este suero y lo ponemos encontacto con otra cantidad de glóbulos rojos sensibi­

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lizados, la liemolisis no se produce. Luego, el compleamento lia sido desviado por el primer lote de glóbulossensibilizados.

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Fm. 13

Supongamos tener suero de un animal inmunizadocontra el cólera, por consiguiente conteniendo sensi­l)ilizatrices. Si calentainos ese suero y-lo ponemos enpresencia de vibriones coléricos, las sensibilizatrices(anticuerpos) anticoléricas se fijarán sobre los vibrio­nes coléricos; si enseguida añadimos suero de cobayonuevo, los viliriones sensibilizados, fijarán el comple­mento. Si por último a la anterior mezcla, le agre­gamos glóbulos rojos sensibilizados, éstos no encon­trarán complemento v la hemolisis no se producirá.

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— 104 --—

Luego, los vibriones coléricos sensibilizados, lian des­viado el complemento.

Antígeno Anticuerpo Complemento

vibriones coléricos-l-suero inmunizado+ suero nuevo de cobayo ++ glóbulos rojos + hemolísina desviado

Resultado = hemolisis negativa

Para comprobar la desviación del complemento por'un antígeno sensibilizado, se añade a la mezcla de las(los sustancias anteriores glóbulos sensibilizados: si lalicmolisis se produce. el complemento está libre; en casoque la liemolisis no se produzca, el complemento ha sidodesviado. Supongamos tener un suero, que presumimosen ól. la existencia (le un anticuerpo. Para investigarla existencia de ese anticuerpo, ponemos en contacto elsuero dado. calentado a 55-56", con el antígeno corres­pondiente y añadimos suero nuevo. A la mezcla an­terior de suero sospechoso, antígeno y suero nuevo, leagregamos glóbulos rojos sensibilizados; si el comple­mento no lia sido desviado, los glóbulos sensibilizadosbemolisan, en caso contrario, la ausencia de liemolisisnos indicará, la desviación del complemento.

Esta reacción de la desviación del complemento,tiene numerosas aplicaciones en el diagnóstico médicoy en el diagnóstico de las manchas de sangre.

.lnaplz'ilaxin. — Creemos oportuno indiqar estareacción, aún cuando no la liemos practicado en nues­tras determinaciones de manchas de sangre.

El término anaphilaxia, lla sido creado por Riclieten 1902 y significa lo contrario de la protección. En ge­neral hemos visto que ciertas sustancias, en el caso dela inmunidad adquirida, introducidas en el organismo.disminuyen la sensibilidad dc este a su acción en cam­

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bio otras sustancias aumentan la sensibilidad del orga­nismo en que son introducidas, de tal modo que algúntiempo después de la primera introducción, una dosisinsuficiente para matar o enfermar el animal, introdu­cida por segunda vez en'el mismo organismo, ocasionaaccidente graves y mortales. No sc puede atribuir eneste 'aso, que haya acumulación (le la sustancia enel organismo, pues al cabo de 4 o 5 días ningún acci­dente sc produce y para que éste tenga lugar, es ne­ccsario efectuar la segunda introducción de la sustan­cia, dos o tres semanas después de la primera.

Uhlenhuth, Besredka y otros, han tratado de uti­lizar la especificidad de esta reacción para el recol­nocimiento de los' líquidos orgánicos. Uhlenhuth yHándel. han efectuado experiencias sobre un cobayo yhan comprobado dicha especificidad, pudiendo sensibi­lizar cohayos con suero humano.

1

SEGUNDA PARTE

CAPITULO I

Manchas de sangre-Sus caracteres

Muy difícil es poder precisar y clasificar las man;chas de sangre según sus caracteres exteriores, pues.el aspecto de. las mismas dependen de numerosas cau­sas: la época en que se produjo la mancha, el objetoen que se depositó, la forma en que cayó sobre él,agregando también como influencias que modifican suaspecto, las condiciones de humedad del ambiente, sutemperatura, etc. A estas causas naturales, se agre­gan las artificiales con objeto de destruirlas, como serlos lavajes con los distintos agentes químicos.

Las manchas frescas tienen un color rojo vivo,pero por la acción del tiempo se oxidan, cambiando decolor, y cuando son muy viejas, su color pasa a serpardo negruzco. El color del objeto en que se halladepositada la mancha, tiene su importancia para poderdistinguirla con facilidad; en objetos claros las man­chas se destacan bien, mientras que en objetos oscu­ros, se distinguen con dificultad.

Si el objeto en que cayó la mancha es absorbente(géneros, etc.), el líquido sanguíneo penetra con faci­lidad y más o menos profundamente. Las telas absor­bentes, manchadas con sangre, presentan sus manchas,

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en forma análoga a la que puede presentar el papelsecante o de filtro. Si el objeto no es absorbente res­pecto a la sangre, ésta se deposita sobre él, constituyen­do un pequeño montoncito, que una vez seco, tiene elaspecto de una escama brillante.

Tamaño. — Su tamaño es variable; cuando susdimensiones son grandes la tarea se simplifica, perocuando presentan dimensiones muy pequeñas, casi co-Imo puntos, la investigación de las manchas se hacemuy difícil por la exigüidad del material a examinar.

Forma. — La forma de las manchas depende de lainclinación con que han caído, del estado de reposo ode movimiento que tenía el individuo que las produjoy de la altura que cayeron. Cuando la sangre se dewposita en un soporte horizontal, y si provenía de unsujeto en reposo, la mancha toma una forma esférica.Si cae de una cierta altura, es rechazada, formandopequeñas manchas siguiendo una línea. Cuandocaen sobre un soporte poroso, presentan bordes denta­dos. Hallándose en movimiento la parte del cuerpo oel sujeto que produjo las manchas de sangre, éstastoman una forma tanto más alargada, cuanto más rá­pido era el movimiento. La misma forma alargadatoman las manchas, cuando son proyectadas contra unapared (fig. 14). .

Condiciones en que pueden ser presentadas al pe­rito. — Frecuentemente se remiten al perito encargadode diagnosticar sobre la naturaleza de unas manchas,objetos diversos, para que dictamine sobre las man­('llaS depositadas en ellos. Estos objetos son a menu­do, armas las más variadas, pañuelos, monedas, bille­tes de banco, uñas, etc., etc.; si el objeto en que sehalla la mancha no ha sido maltratado desde que ella

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se depositó, hasta llegar a manos del perito, la tarea.de su investigación no se complica. Pero a menudo

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m. 14

1. — Sangre caida en reposo.—— > sobre plancha de pino.— > caída on movimiento.

.

.91‘35:

. . . rápido.caida de 15 centlmetros de altura.

las manchas se hallan depositadas en objetos no trans­portables: paredes, pisos, intersticios del mismo, mue­bles, tapicerías, mármoles, cristales etc., etc., siendo' en­tonces ne cesario, destacar un pequeño trozo del lugaren que se halla la mancha. Lo más conveniente sería,que el perito se trasladase al lugar en cuestión y pro­cediera personalmente a extraer un trozo del objeto.en que se halla 1a mancha, tonJando todas las precau­ciones, para no destruirla ni modificarla.

. Los géneros, pañuelos, etc., en los que se ha de­positado sangre, muchas veces con objeto de despis­

.4 -2

-112­

tar, han sido lavados por diversas sustancias (agua,jabón. agua de Javel, etc). y el objeto, un pañuelo porejemplo, manchado con sangre y lavado, aparece decolor blanco. pero si se le fotografía, interponiendo en­tre él y el objetivo un transparente azul, la placa revela imanchas de un color gris oscuro.

A veces telas de color rojo u oscuro, presentanma'ncbas de sangre, siendo difícil precisar su ubicaciónpor cl contraste nulo de los colores. En estos casospara situar las manchas, conviene fotografiar la tela,con placas sensibles ortocromáticas, teniendo la precau­ción de colocar entre la tela y el objetivo, un transpa­rente amarillo. La placa revelada muestra entoncescon claridad las manchas.

Reiss, que se ha ocupado de'este punto, aconsejapara las manchas depositadas en telas de color azulpálido, gris claro, amarillo muy claro, verde claro. fo­tografiar dichas telas con placas comunes _sin interpo­ner transparentes, si las telas son de un colór amari­llo oscuro, verde oscuro o rojo, fotografiarlas conplacas ortocromáticas con transparente azul y si lastelas son de colar azul oScuro, negro o gris oscuro, in­terponer un transparente azul y fotografiarlas con pla­cas ordinarias.

'Precauciones que deben tomarse al practicar'suinvestigación. — El perito antes de proceder al análi­sis de las manchas, debe examinar y describir todoslos caracteres que presentan las manchas, en los obje­tos sometidos a su examen. Anotará el color, el aspec­°to, su ubicación, el número de ellas, forma, caracteres ’de su bordes. Si se trata de telas, debe observar siexisten señales de haber sido lavadas; en las armasdebe buscar indicios de raspaduras o cualquier modi­

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ficación que haya tenido por objeto, la desaparición dela mancha. Debe buscar indicios, que le puedan darprobabilidades de conocer la época de que data la man­cha.

Si el perito debe trasladarse en persona, para re­coger las manchas que se hallan sobre objetos no trans­]Í)0I‘tal)lOS,debe recogerlas con cuidado y llevarlas a sulaboratorio, tomando las precauciones necesarias, paraque. ellas no sufran ninguna modificación. Obvio seríaindicar una regla general, quedando librado estos cui­dados al criterio personal. - '

Tratamiento de la. mancha de sangra-Aún cuan­do en cada método de investigación, indicamos el tra­tamiento previo que 'ha de sufrir la mancha supuestade sangre, daremos aquí algunas reglas generales.

(‘ualquiera que sea el procedimiento que se empleepara establecer la naturaleza de las manchas, las reac­ciones que se efectúen, se harán con prudencia, em­pleando siempre lo extrictamente necesario, para nocorrer el riesgo de concluir con el material a examinar,sin haber podido efectuar todas las verificaciones ne­cesaria-s.

Si la mancha se encuentra en la superficie de unobjeto, se la raspará con cuidado, con un objeto per­fectamente limpio y se recoge el polvo que resulte delraspaje en un pequeño vidrio de reloj perfectamentelimpio, pudiéndose ayudar de un pincel bien limpio.

Si la mancha se encuentra comprendida entre lasmallas de un tejido, se corta la porción que contienela mancha y se hace macerar el trozo de tejido en unasolución conveniente, colocada en una pequeña cápsulade vidrio perfectamente limpia o en un vidrio de relojen las mismas condiciones de limpieza.

J.......

-13...

CAPITULO II

Diversos métodospara 1aidentificación delas manchas de sangre

En los capítulos anteriores hemos visto ordenada­mente, los distintos carácteres de la sangre. En algu­nos casos ha sido posible establecer diferencias, entrelos elementos de la sangre humana y la de las distin­tas especies animales; un ejemplo de ello, son la for­ma y dimenciones de los oorpúsculos de la sangre hu­mana y la de-los mismos elementos en la sangre deotras especies animales. Estos hechos tienen su apli­cación y constituyen el método citológico para la ca­caracterización y diferenciación de ias manchas de san­gre.

Al estudiar la composición química de la'sangre,detallamos las diversas sustancias que entran en ella:hemoglobina, oxihemoglobina, sustancias ambas, que a1disolverse en el agua dan soluciones de color rojo; al­búmina y fibrinas que existen en el líquido sanguíneoy que tratadas por los reactivos adecuados, darán susreacciones características; azoe que podrá ser iden­tificado valiéndose de los métodos corrientes en el aná­lisis quimico. Los distintos componentes de la sangre

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constituyen un medio especial _vcaracterístico, quetratado por los diversos reactivos nos permitirá ol)­tener muchas veces coloraciones o reacciones especialesa él.

En uno _votro caso habremos originado un méto­do q_uímico,para las investigaciones que nos propo­nemos.

La hemoglobina, oxihemoglobina y sus derivadosobservados al espectroscopio, nos da'n espectros carac­terísticos en cada caso, y tendremos entonces un mé­todo puramente físico, cuando apliqnemos el espectros­copio para la diagnosis de las manchas de sangre.

7 Ïdentificada una mancha como de sangre, se nospresenta el problema de establecer si ella es de san­gre humana o no. Recurriremos entonces, a la espe­cificidad de los sueros precipitantes que ya hemos es­tudiado, pudiéndonos valer también para ello, del

' método de la desviación del complemento y de la reac­ción anafiláctica. La biología nos ha prestado suauxilio, creando un método biológico.

Respondiendo al plan que nos hemos trazado, deefectuar un, estudio metódico y razonado de la sangra,siempre con la mira de su aplicación en el diagnósticodc las manchas. en la misma forma veremos los diver­sos métodos de que. dispone hoy la ciencia para tal oh­jeto. En el último capítulo concretaremos, en lasconclusiones, el valor decada método.

Espectroscopín de la sangre. — Habiéndonos ocu­pado detalladamente en el capítulo IV de la teoría ymanejo del espectroscopio, pasaremos aquí por altodicho punto. En síntesis, la teoría del método espec­troscópico, es la siguientezn Dada una mancha de san­gre, disuelta ella en un líquido apropiado. e interpues­

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ta entre una fuente luminosa y el espectroscopio, seven aparecer en el espectro, rayas oscuras caracterís­ticas, que constituyen espectros de absorción.

La técnica a seguir es la siguiente:1°. Reglage del espectroscopio;2". Disolución de la mancha 'en un líquido apro­

piado;3°. Observación de la solución de la mancha por

medio del espectroscopio.1'". Dehen ponerse en práctica, para el reglage del

espectroseopio, todas las indicaciones aconsejadas enel capítulo IV, de manera que cuando se observe condicho aparato, no haya necesidad de tocarlo en lo másmínimo.

Disolución de la mancha. — Lo más convenientees disolver la mancha en agua destilada fría; las man­chas frescas se disuelven fácilmente, no cediendo asícon las viejas, que exigen para disolverse, que se lasponga en maceración con agua destilada por un tiem­po más o menos largo, según la edad de la mancha.En amhos casos si es necesario, se filtra la soluciónacuosa de la mancha. i .

Las manchas muy viejas son casi insolubles enel agua, y si la mancha es mu ypequeña la cantidad desustancia que llevará en solución el agua, será insig­nificante. En estos casos se disuelve la mancha, yasea en potasa, soda, ácido acético o .cyanuro de pota­sio, teniendo en cuenta entonces, que esas sustanciastransforman la oxihemoglobina, variando por consi­guiente el espectro de absorción que dará la soluciónde la mancha.

En el caso de la potasa o la soda, el producto detransformación de la oxihemoglobina depende de la

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concentración de la solución de potasa. o soda. Con 'soluciones diluídas al 10 olo se obtiene hematina ycon soluciones al 30 olo, hemocromógeno. El ácidoacético, transforma la oxihemoglobina en hematina. Elcyanuro de potasio en solución concentrada, disuelvelas manchas muy viejas, dando una solución de unbello tinte rojo que vista al espectroscopio dá una ban­da de absorción en el verde. Añadiendo amoniaco, estabanda única se divide en. dos rayas semejantes a lasde la oxihemoglobina pero más cerca del violeta.

Cuando la sangre ha sufrido la'acción de una tem­peratura muy elevada y está casi carbonízada, su ma­teria colorante se ha transformado en parte, en he­matoporfirina. En estos casos se disuelve la manchaen ácido sulfúrico concentrando, y observando al es­pe ctroseopio se. tendrá el espectro de la hematopor­firina.

Obtenida la disolución de la mancha, se tomarántodas las precauciones, para que el líquido que resultesea límpido y en esas condiciones, se observará al es­pectroscopio.

Observación de la solución de sangre. — La solu­ción límpida de la mancha se introduce en un reci

_piente de vidrio, que debe ser interpuesto entre lafuente luminosa y el espectroscopio. Puede emplear­se con tal objeto, un tubo de ensayo pequeño, siendomás práctico y conveniente, utilizar una cuva de Vidriode caras paralelas, con unas dimensiones de 10 por30 milímetros.. Ista-cuva, que presenta dos espesoresdistintos para ser atravezados‘por la luz, los tiene conel objeto de utilizar la sección de menor espesor parasoluciones concentradas y la de mayor espesor para

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—119—

osoluciones diluídas. En los casos en que la cantidad desangre de quese dispone sea muy pequeña, se empleaun tubo de vidrio de 5 milímetros de diámetro por undecímetro de largo. Las dos extremidades del tuboestán cerradas con discos de vidrio; cierre análogo alde los tubos polarimétricos. Con estos tubos se pue­den observar, a través de un espesor grande, cantida­des muy pequeñas de sangre. Cualquiera que sea eldispositivo empleado para contener la solución de lamancha, debe colocarse delante de la hendidura delespectroscopio y a poca distancia de la fuente lumi­mosa, en forma tal, que los rayos due esta última en­vía, atraviesen la solución, antes de penetrar por lahendidura del espectroscopio.

Modificando la concentración de una solución desangre, varían la intensidad y el ancho de las bandasde absorción. (,‘on soluciones muyr concentradas, lasbandas no se distinguen, pues están reunidas en unasola, que absorbe todas las radiaciones a excepción delrojo, rojo anaranjado y parte del amarillo; diluyendoentonces la solución, las bandas comienzan a diferen­ciarse. Las condiciones mejores para la observaciónclara y bien diferenciada de las bandas, dependen dela concentración y espesor de la solución. Con solu­ciones de sangre al 1 o|o y bajo el espesor de un cen­tímetro, se ven las bandas de absorción.

Al anotar la posición de las bandas y referirlas ala numeración de la escala micrométrica, los númerosque se tomen deben corresponder a la cifra de la partemedia de la banda. I

Diversos espectros de absorción que pueden ob­servarse en, una. mancha de sangre. — En el supuestoque una, mancha sea de sangre, el espectro de absor­

— 1:20 —

e

ción que se verá, depende del estado (le la mancha.Manchas frescas. contiene su materia colorante al eS­tado de oxihemog'lobína. pero no todas las manchasson recientes: además han sufrido la acción (le losagentes exteriores, acciones que han modificado la

FIG, 1.";

' 1. — Espectro de 1a oxihemoglobina.2 - > > > emo lo ina.

ti. — > > » carbooxihemoglobina.

materia coiorante. Indicarenios los distintos espec­tros que pueden observarse.

Oríhcmnylnbina. — Dos bandas de absorción si­tuadas entre 'las rayas D y E del espectro (fig. 15);si el espectro ha sido l'eglado, como ya hemos indi­cado, de modo que su raya D, corresponda a 1a di—'Visión 80 del micrómetro, las bandas de absorción de 'la oxihemoglobina tienen las Siguientes característi­

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‘ ’ WMP?

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cas: Banda que corresponde a la raya Duse extien­de de la división 81 a la 87, comienza hacia e] fin delanaranjado, a su parte media le corresponde la divi­sión 84-85 de la escala; Banda que corresponde a ladivisión E, se halla‘ en el medio del verde, se extiennedesde la división 97 a 106 del micrómetro, a su partemedia le corresponde la división 103-104, esta bandaesmas ancha que la anterior.

Pudiera suceder que no se tratase de sangre, apesar de tcner una solución del mismo color; en estecaso la sustancia que nos induce en' error, es el picrocarmín y que dá un espectro análogo al de la oxihe­moglobina. 'l‘ratando entonces la solución de la man­cha por un reductor, en caso de ser sangre, la oxilie­moglobina daría el espectro de. la hemoglobina, encambio el carmin no sufre una reducción análoga, puesno contiene oxihemoglobina.

IIcnmgl-nlrina reduciría. — Supongamos haber exa-.minado al espectroseOpio, la solución de una mancha,y haber observado con un resultado positivo las dosbandas de absorción de la oxihemoglobina. Si el mis­mo recipiente en que se halla la solución de la mancha,y sin moverlo de su posición, le agregamos un reduc­tor cualquiera, por ejemplo, sulfihidrato de amonia­co, la oxihemoglobina pasa al estado de hemoglobinay en lugar de observarse dos bandas de absorción, nota­remos una sola banda, que ocupa el espacio comprendi­do entre las dos bandas anteriores (fig. 15) (2). Labanda de absorción de la hemoglobina, es un poco más

ancha que las anteriores y también menos oscura yse halla situada en la región amarilla del espectro, noes muy visible en las soluciones demasiado diluídasde sangre.

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Las características son: se extiende de la divi­sión 87 a la 97 de la escala micrométrica.con el nombre de banda de Stokes.

Los reactivos reductores son varios, Stokes re­comienda una solución al 5 o|o de protocloruro de es­taño, adicionada de ácido tártarico, luego neutrali­zada por amoniaco. El hidrosulfito de sodio, la amal­gama de sodio, el oxalato ferroso, han sido recomen­dados .para- producir la reducción de la oxihemoglobi­na, pero el reactivo empleado, es el sulfihidrato deamonio, bastando agregar dos gotas de dicha sustan­

-cia a la sangre diluída y esperar luego 5 minutos pa­ra que la reducción se produzca.

Se conoce

. . . , iMetehcmoglobma.—La sangre en putrefaccion con­

tiene su materia colorante al estado de metehemoglo­bina. La metehemoglobina dá dos espectros distin­tos, según que, la solución en que ella se encuentre, sea.ácida o alcalina.

En solución ácida, dá una banda de absorción enel rojo en la división 68 de la escala micrométrica.En solución alcalina, dá una banda de absorción máspálida en la división 80 de la escala micrométrica. Pe­ro como esta transformación de la oxihemoglobina, enlas manchas viejas no es total, se observa al mismotiempo, las dos bandas de absorción de la oxihemoglo­bina, _notransformada.

Hamatina. — Si el proceso de putrefacción de la ‘mancha es más intenso, su materia colorante ha pasa­do al estado de llematina. La hematina dá dos es­pectros distintos según que se halle en solución alcali­na o ácida‘.

En solución alcalina, la liematina dá una ba'ndasola de absorción en D, división 80, poco visible, que

Hi

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por la adición de un reductor como al sulfibihidrato de' amonio, da dos bandas de‘absorción que corresponden

al hemocromógeno.En solución ácida, da dos bandas pálidas, difí­

ciles de distinguir, cuya situación es muy vecina de lasde la oxillcmoglobina y una banda muy visible en elrojo que' corresponde a la división 58 de la escala micro­métrica.

Hemorromógeno. — El liemocroniógeno da dos_l)andas de absorción, la primera, que corresponde ala división 98 de la escala, y la segunda a la 112.- Elhemocromógeno se obtiene por reducción de la herna­tina alcalina.

Hcmafoporfirina. La liem'atoporfirina se obtie­ne por la acción del ácido sulfúrico concentrado, so­bre la sangre. Como ya hemos dicho, esta sustancia,se encuentra en parte, en las manchas que han sufri­do'la acción del calor y que presentan un principiodc carbonización. l‘ln estos casos conviene tratar lamancha por ácido sulfúrico, por adición de agua pre­cipita la hematoporfirina y disolviéndola entonces enpotasa, se tiene hematoporfirina en solución alcali­

. na. La hematoporfirina en solución alcalina, da cua­tro bandas (le absorción. de las cuales tres son fáci­les a distinguir, las que corresponden a las divisio­nes 92, 108, 135 y a'partir de la división 170 el espec­tro desaparece casi completamente.

La heniatOporfirina en solución ácida, da tres ban­das de absorción que corresponden a las divisiones80, 100 y 118 de la escala inicromótriea.

Método citolóyico. — Al efectuar el estudio eitoló.gico de la sangre, vimos en ella elementos caracterís­

ticos: los glóbulos roájosv los blancos. Indudablemen­

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te que estos elementos deben hallarse en las manchasde sangre y si la mancha es reciente, estarán en ella,con sus caracteres ya bien conocidos. En la inmensamayoria de los casos. las manchas de sangre no sonfrescas, pór el contrario, ellas se presentan secas ylos glóbulos han sufrido alteraciones en su forma ydimensiones. Solo excepcionalmente se tendrán man­chas de sangre frescas. En estos casos, los glóbulosrojos conservan sus caracteres que ya hemos descrip­to. Si se trata de glóbulos rojos de sangre humana,presentarán un diámetro que oscila entre 7 y 8 mí­crones, con un contorno redondo, con una depresiónen el centro, frecuentemente comprimidos los unos con­tra 10s otros y superpuestos en pilas; la adición deácido acético los clecolora y permite ver con claridadlos glóbulos blancos. Glóbulos rojos de forma elíptica,nos haría suponer que se trata de sangre de pesca­

‘(los, reptiles o de pájaros. Los mamíferos (perros, cone­jos) a veces presentan glóbulos rojos con dimensiones

. análogas a los del hombre. Los de buey tienen unamedia de 5, 8 micrones, el carnero 4, 5 micrones. Enestos casos que acabamos de describir, y en que ex­cepcionalmente se trata de manchas de sangre líquida,para observarlas al microscopio, se coloca en una lá­mina porta objeto, una pequeñísima cantidad de san­gre y se calienta muy ligeramente para obtener unarápida desecación. '

Las manchas viejas, están completamente dese­cadas, y los corpúsculos de la misma, alterados en suForma y tamaño. El borde de los glóbulos se halla'llendido, frecuentemente ellos no son visibles porqueencontrándose en gran número y al secarse la mancha,

l

— 12.6 —

se han comprimido, formando una masa compacta. (‘onel objeto de separar los glóbulos _\'facilitar así sn ob­servación microscópica, se emplean varios líquidos.entre los cuales el de Vihert, que tiene la siguientecomposición: Agua, 100; cloruro de sodio, 2; bieloruro de mercurio, O.5.—Roussin: glicerina, 3 partes;ácido sulfúrico, l parte; agua c. s. para obtener la (len­sidad de 1.028.—Ranvier: solución de yoduro (le po­tasio al,2 olo en la que se ha disuelto yodo a satura­ción. En nuestras investigaciones hemos utilizadoel liquido de Roussin. laa técnica a seguir es la si­guiente: en una lámina porta objeto, se deposita unapequeña cantidad (le la mancha sospeclIOsa, se añaden2 gotas del líquido conservador, se recubre con unalámina y se ejerce una pequeña presión, con objetode ablandar la mancha y separar sus elementos ligu­rados. Observando entonces al microscopio, si lamancha no estaba muy alterada, se ven glólnIIOsmás omenos netos, a veces envueltos en redes de fibrina.

(‘uando la mancha se encuentra sobre una tela.y no se puede destacar, se hace macerar con el líquidoconservador un pequeño fragmento de la tela quecontenga la mancha, luego se raspa con un escalpelola tela _\'las gotas de líquido que se recogen en dichoinstrumento, se colocan en una lámina porta objetoy se observa A veces es necesario dilacerar la telacon el líquido conservador por medio de unas agujassobre la lámina de vidrio y examinar líquido y fila­mentos del tejido.

Metodo de. Florence. — El método de Florence,tiene la ventaja de que Permite examinar al micros­copio la mancha, sin modificarla, ni sacarla del obje­

to en que se halla, ' al mismo tiempo obtener una fo­

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tografía, que puede servir de pieza de convicción.El aparato de Florence, (fig. 16). consiste en un mi­croscopio, el que está conectado a un tubo que le es

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Aparato de Florence

perpendicular. Dicho tubo en su parte media tieneuna lente convergente L y en su sección de contac­

_127—

to con el microscopio un prisma E. Una fuente lu­minosa S, envía sus rayos que atraviesan el tubo,pasando por un diafragma iris l), inciden sobre elprisma E que lo atraviesan, siendo reflejados por lacara a, b que los envía atravesando el objetivo, ha­cia la preparación R, la que iluminan por su pa'rtesuperior. En R se ha colocado el objetivo a examinar,una lámina de cuchillo, por ejemplo. Se pone enpunto el microscopio y empleando un objetivo 7 Na­chet, se ven los glóbulos bien claros.

Si se quiere obtener una fotografia, se conectaen la parte superior del microscopio, una cámaranegra vertical sistema Nachet, y se obtiene una foto­micrografía de la preparación, operando como es depráctica en estos casos. '

Métodos químicos. — Los métodos químicos em­pleados para la investigación de las manchas de san­gre, comprenden: ya sea la investigación de las sus­tancias normales de la sangre, o bien las reaccionescoloreadas que da la sangre, al ser tratada por reac­tivos especiales.

Rnacción por el calor y la potasa. — Una pequeñaporción de la mancha se coloca en un tubo de ensayoy se disuelve en agua destilada. El líquido se coloreadóbilmente: cuando la mancha es reciente toma uncolor rojizo y si la mancha es vieja, amarillento. Alser calentado dicho tubo con la solución, ésta se deco­lora y coagula la albúmina, bajo la forma de un coá­gulo gris verdOso, si la solución está saturada y unentm-biamiento solamente, con soluciones diluídas.Añadiendo unas gotas de solución diluída de potasa,el coágulo se disuelve o el enturbamiento desapare­' a

'— 12:5 —

ce y el líquido toma una coloración verde, a la luz re­flejada y rojo por transparencia.

Reacción por el amoniaco. — Las manchas de otrassustancias que la sangre, disueltas en agua, pueden dara ésta una coloración rojiza semejante a la de la san­gre. Pero si se trata la solución de la mancha porunas gotas de amoniaco, la coloración rojiza vira'aotras coloraciones: verde, violeta, escarlata, cuando lamancha es de otras sustancias. En caso de ser de san­gre, la coloración rojiza de la solución de la mancha,persiste después de la adición de amoniaco.

Reacción por el ácido hipocloroso. — Este ácidodecolora las soluciones rojizas de manchas que no sonde sangre, acentuando más la coloración de la soluciónde una mancha de sangre. Al cabo de unos minutos,aun tratándose de una mancha de sangre, el ácido hi­pocloroso decolora la solución de la misma.

Investiqación del azoe. -—Las manchas de sangrecalentadas, desprenden vapores amoniacales, fácilesde reconocer. Este desprendimiento de vapores amo­niacales se facilita por la adición de potasa o soda.

Caracterización de los albuminoides. — La alhú­mina de la sangre se puede reconocer, calentando lasolución acuosa de la mancha, o bien por la acción delácido nítrico, reactivo de Millon, ácido tricloroacético,que coagulan 'los alhuminoideos.

Acción del hipobromito de soda. — De la soluciónacuosa de la mancha, se depositan unas gotas, en unalámina porta objeto, se las recubre con una láminade vidrio y se las coloca en la platina de un microsco­pio, para observarlas con un pequeño aumento. Sise hace penetrar una gota de la solución corriente dehipohromito de soda, cuando ésta llega a ponerse en

—129——

contacto con las gotas de la solución de la mancha,si ésta es de sangre, se observan un número considera­ble de burbujas gaseosas que se desprenden. g

Acción del agua oxigenada. — Zenter, Doew y "otros, han constatado la presencia de un fermento en ¿la sang‘re que tiene la propiedad de descomponer el lagua oxigenada y poner en libertad el oxígeno.

La técnica de la reacción es la siguiente: se di­suelve la mancha en agua destilada fría si ella está enun objeto, del que se la puede extraer por raspaje;si esto no fuera posible por hallarse la mancha sobreuna tela, se macera un trozo dc la tela en agua desti­lada. La solución de la mancha o su maceración, secoloca en un tubo de ensayo, evitando que por sacudi­miento del tubo se forme espuma. Se deja caer enton­ces a lo largo de la pared del tubo, algunas gotas deagua oxigenada neutra. si la solución era de una man-­cha de sangre, se producen pequeñas burbujas queal llegar a la superficie del líquido, forman una espu­ma, cuya-abundancia depende de la riqueza en sangre.de la solución. I

REACCIONES COLOREAI)AS­

Reacción de Van Deen. — La tintura de guayacode color amarillo pardo, al oxidarse, toma un colora2ul. Si ponemos en presencia agua oxigenada, esen­cia’ de eucaliptus o esencia de terebentina, líquidostodos ellos ozonizadós, y tintura de guayaco, ésta no .cambia de color, porque no es capaz por sí misma,de quitarle el oxígeno a esas sustancias y de fijarlopor consiguiente. Pero si se añade sangre, el azula­miento de la tintura de'guayaco se produce. Esta

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oxidación de la tintura de guayaco, se atribuye a laacción de un fermerito, y como la reacción es. positivacon la hemoglobina, hematina, hemocrómogeno, deri­vados de la hemoglobina que contiene fierro, se. atri­buye que este fermento ,está ligado a la existenciadel fierro en la hemoglobina.

La técnica de la reacción y los.elementos que en­tran en ella, son los siguientes:

'l‘intura de guayaco. — Guayaco, 5 gramos, que sedisuelven en 100 cc. de alcohol a 95°. Se filtra y se ob-­tiene un líquido amarillo pardo. '

La tintura calentada a 50°,no debe azulear, en ca­so contrario, no debe emplearse. En general se acon­seja que la tintura de guayaco sea reciente.

Esencia de terebentína. — Cuanto más vieja, másozonizada estará y más sensible será el reactivo. Pa­ra ozonizarla, se puede dejar .el recipiente abiertodurante varios días. Los reactivos antes de utilizar­se deben ser probados solos, sin sangre, para ver sino se produce la coloración azul en la tintura de gua­yaco. Para obtener la reacción se procede en la for­ma siguiente: Si la mancha se halla en un objeto yse puede destacar con facilidad, se disuelve o se ma­cera una parte de ella,—según que sea reciente o

-vicja la maneha,—en agua destilada. Un centímetrocúbico de la solución obtenida, se coloca en una pe­queña cápsula de porcelana blanca, se añade ] cc. detintura de guayaco, se agita, luego se agregan algu­

.nas gotas de esencia de tercbentina ‘ozonizada; si lamancha contiene sangre, aparece un tinte verde quepasa al azul claro y por último al azul oscuro. Lareacción coloreada, debe producirse algunos segundos

—131-—

después de agregarse los reactivos; en caso de que ellatuviera lugar minutos después, no tiene valor.

Si la mancha-que se supone sea de sangre, se en­cuentra en un objeto del que no puede retirarse, paraefectuar la reacción, hay que proceder en la forma si­'guiente:

Se toma un trozo de papel de filtro‘ (que ha sidoensayado, sin sangre, con tintura de guayaco y tere­bentina y dió reacción negativa) se humedece conagua destilada y húmedo, se lo aplica sobre la manchasospechosa, efectuando ligeras y' prolongadas presio­nes sobre el papel. Al cabo de unos minutos se reti­ra el papel, se vierte en la porción que estuvo en con­tacto con la mancha algunas gotas de tintura de gua­yaco y luego unas gotas de esencia de terebentina.Si la mancha sospechosa era de sangre, aparecenrápidamente manchas azules que reproducen 1a for­ma de la mancha.

’ Reacción con el sulfato de hidrazina. — Se disuel­ven 5 gramos de sulfato de hidrazina en 1000 de unasolución alcohólica de potasa (100 de potasa, 900 deagua y 100 de alcohol a 95°), se filtra la solución. Es­te reactivo, en presencia de una solución de una man­cha d_esangre, da una coloración rosa. La reacciónse efectúa en la siguiente forma: '

Si la mancha se disuelve en agua destilada, semezcla 1 cc. de la solución de la mancha en 10 cc. delreactivo; si la mancha es de sangre, 'se produce unacoloración amarillo verdosa, que pasa al rosa. Agi­tando la mezcla al aire, l'a'coloración desaparece bienpronto. Las manchas viejas no se disuelven en elagua, sino en muy pequeña proporción, pero en cam­bio fácilmente, en una solución de potasa alcohólica.

——13‘2—

En caso (le tratarse de una mancha vieja, se pone és­ta .en contacto con el reactivo, quien, gracias a supotasa alcohólica, la disolvcrá colorcándose en rosa,si se trata de sangre. '

Reacción dc Adler con la. benzidiua. — La henzi­dina en solución alcohólica o acética adicionada deagua oxigenada da con las manchas de sangre unacoloración verde que pasa al azul.

Rcactiz'o. — Solución saturada de henzidina puraen alcohol a 95" acidulada con ácido acético. El reac- ­tivo sc dche preparar en el momento de utilizarse.

Agua oxigenada a 12 volúmenes. La marcha dela reacción es la siguiente:

Si la mancha se disuelve en agua, se toma 1 éc.de la solución acuOsa. se le añade 1 cc. de la solución debenzidina. luego algunas gotas de agua oxigenada.Si la mancha es de sangre, la mezcla toma una colo­ración verde, que pasa al azul. ’

Si la mancha es muy vieja y no se disuelve enagua o se halla sobre una tela, se toma un trozo depapel de filtro, se humedece con el reactivo, se apli­ca sobre la mancha; obtenida la impresión de ellase humedece el papel de filtro con agua oxigenada,y aparecerán en el papel puntos azules que diseñaránla mancha en el caso que la mancha examinada sea desangre.

Reacción (le la parafenildyamina. — Una manchade sangre, disuelta en agua y tratada por el clohidra­to de parafenildya'mina, en presencia del agua oxige­nada da una coloración verde oscura.

El reactivo se prepara clisolviendo un gramo declorhidrato de parafenildyamina en 200 gramos deagua destilada.

——'....

_ 133 —.—

La tecnica (le. la reacción es la siguiente:Se disuelve la mancha o se macera en agua desti­

lada fría, se toman 2 cc. de la solución, se le añaden 4

o 5 gotas del reactivo y luego 3 gotas de agua oxi­genada; si la mancha es de sangre, se produce rápida­mente después de la agitación de la mezcla una colo­ración verde. que pasa al violeta, y por último al vio­leta oscuro. ' ­

Es conveniente disolver la mancha en éter, en lu­gar de agua destilada; según Boas, la reacción.seproduce en mejores condiciones. l

Reacción dc Meyer a la fcuolftalcína. — La fenolf­taleína. en presencia de una solución de potasa, viraal rojo, colorando por consiguiente a la soluciónen rojo: ahora si esta solución se trata por. el hidró­geno naciente, la fenolftaleína, pasa al estado de fe­nolftalina, que no vira al rojo, en presencia de lapotasa, desapareciendo por consiguiente el color roji­zo de la solución. Pero la fenolftalina puede oxidar­se. originando la fenolftaleína, siempre que se pon­ga en contacto con un cuerpo oxigenado como el aguaoxigenada y otra sustancia que le sirva de interme­diaria para el transporte de oxígeno, coloreando denuevo la solución en rojo. La sangre, gracias a unfermento de que ya nos hemos ocupado y que resideprobablemente en la hemoglobina, es la encargada detransportar el oxígeno del agua oxigenada y fijarlo en'la fenolftalina.

El reactivo de Meyer es el siguiente: .

Fenolftaleína . . . . . . . . . . . . 2 gramosPotasa....... 20 ,,Agua destilada . . . . . . . . . . 100 ,,

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...u..r...;

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—134—

Disolver en caliente y añadir lñ'gramos de zincpulverizado _vhervir hasta completa decoloración yluego filtrar. '

La potasa acciona sobre el zinc y desprende hi­drógeno que reduce la fenolftaleína decolorándose hsolución.

l‘lste reactivo debe ser cuidadosamente guardadoevitando la acción oxidante del aire. A pesar de ellocon el tiempo siempre se oxida un poco y toma un 'tin­te color rosa._ Esto se puede evitar poniendo frag­inéntos de zinc en el frasco, que desprenden hidróge­no, o colocar una capa desaceite de vaselina en el lí­quido, el que forma una superficie que lo protege dela acción oxidante del aire.

El agua oxigenada a dos volúmenes es el agenteoxidante empleado. La técnica a seguir es la siguiente:

En un tubo de ensayo se colocan 2 cc. de la solucióno maceración de la mancha y se le agregan 2 cc. delreactivo de Meyer, dejando caer por último 2 o 3 go­tas de agua oxigenada. Si la mancha es de sangre,inmediatamente de la agregación de los reactivos, apa­rece una coloración rojo vivo. Las precauciones quehay que tomar al'efectuar esta reacción son las si­guientes: ‘

El liquido no debe tener una temperatura mayorde 30" ni debe ser ácido. La reacción de coloracióndebe ser inmediata; si ella es lenta, no tiene valor,.pues la acción oxidante del aire es su causa produc­tora.

Reacción con la fluoresceína.

_35_

Reactivo:

F‘luoresceína . . . . . . . . . . . .. 0.25 gramosPotasa anliydra . . . . . . . . . . 20.00 .,Agua destilada . . . . . . . . . .. 100.00 ,.Polvodezinc 10.00,,

Se hirve hasta que el líquido se decolore. se filtray se conserva el reactivo, preservandolo de la acción.de la luz y del aire, en la misma forma que la indí­cada para el reactivo de Meyer.

-La técnica de la reacción es la siguiente:En un tubo de ensayo, se coloca 1 cc. de la solu­

ción o maceración de la mancha con agua destiladafría, se añade l cc. del reactivo, y unas gotas de aguaoxigenada. Si la mancha es (le sangre, el líquido pre­senta una fluorescencia cuya intensidad depende dela riqueza en sangre de la solución.

CRISTA LES DE HEMINA.

La hematina, se combina con los ácidos clorhí­dricos bromihídrico, yoliídrico, dando lugar a las he­minas correspondientes. Estas heininas, o clorllídratosde hematina cristalizan con facilidad y la forma de suscristales es característica, lo que le ha valido su apli­cación para el diagnóstico delas manchas de sangre.

Los cristales de clorhidrato de hematina, tambiénse conocen con el nombre de cristales de Teiclimann,quien fué su descubridor en el año 1853. Los crista­les de yollidrato de lleinatina se conocen con el nom­bre de cristales de Strzyzowski.

Existen también otras clases de cristales, queveremos como terminación de este párrafo, los cris­tales de Leclia Marzo. Estos cristales no son de he­

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—136—

mina, sino simplemente de hemocromógeno, que to­man una forma característica y son visibles y biendiferenciahles por el'microscopio, con la ventaja deque. pueden obtenerse rápidamente y con facilidad.

Cristales de hemñla (clorhidrato de hernatina)cristales ¡le Teichmami. — Estos cristales se produ­cen cuando "se.trata la sangre por el ácido acético gla­cial, en presencia de pequeñísimas cantidades de clo­ruro de. sodio. En la técnica a seguir, muchos autoresprefieren no agregar cloruro de sodio,lhasándose enque la sangre ya lo tiene y que una adición un poconotable. de ese cuerpo impediría _y enmaseararía laformación de cristales de hemina. Pero este inconve­niente puede evitarse, agregando una traza dc unasolución de cloruro de sodio al 1 por mil.

Práctica (le Ia reacción. — La mancha sospechosase disuelve en la menor cantidad posible de agua. unasgotas. Es preferible hacer macerar la mancha en 3 o4 gotas de agua durante un tiempo variable, según laedad de la mancha. Si ella se halla sobre una tela,se vierten sobre la mancha 3 0 4 gotas de agua desti­lada _vse deja macerar el tro'zo de tela con el agua.un espacio (le tiempo que varía según la manch'a. Secomprime el trozo de la tela para recoger las gotas deagua que han disuelto parte de la mancha, y se recogesobre una lámina porta objeto. Si por cualquier cau­sa la cantidad de líquido en que está disuelta la manchaes mayor que 3 o 4 gotas, se exprime el trozo de telaen un vidrio de reloj, se concentra a una temperaturamuy baja para evitar la coagulación de los albuminói­deos.

El líquido que resulta, se deposita gota a gota so­bre la lámina por-ta objeto por medio de una pipeta y

—137—

se. le agrega una tlgiza de la solución de cloruro de.sodio al uno por mil. Siempre que se. coloque la solu­(-ióu de la mancha sobre la lámina porta objeto, sehace, depositando una gota. a la vez y calentando sua­vemente sin pasar de 60". Esta precaución es impor­tante para la obtención de los cristales. Para calen­tar la lámina porta objeto se lo hace. colocándalo acierta distancia de una lámpara de alcohol, o emplean­do un dispositivo especial ideado por Ogier. Cuandose han-evaporado las gotas de la solución, queda enla lámina una mancha algo coloreada _vque debe pre­sentar la menor superficie posible. Obtenida la manchase agregan 8 a 10gotas de ácido acético glacial; cada go­ta que cae debe hacerlo en el centro de la mancha, yen seguida dehe calentarse la lámina a cierta distan­cia de la llama de la lámpara o en el dispositivo deOgier. La lámina porta objeto debe calentarse, noen el centro de la mancha, sino alrededor de ella. Ca­da gota (le ácido acético, que se evapora es reempla­zada por otra, repitiendo esta operación entre 8 y 10veces. Efectuazlas todas las operaciones anteriores,se puede recuhrir la lámina con un cubre objeto y exa­ininarla al micmscopio con un aumento de 400 a 500diámetros.

('nrucferes (le los cristales. — Los cristales de he­

mina. tienen la forma de prisinas alargados, a vecesforman maclas con el aspecto de cruces o estrellas.Su color es pardo más o menos oscuro, y cuando sonde dimensiones grandes son translúcidos (ver fig. 17).Respecto a los caracteres de estos cristales, es acon­sejable efectuar muchas preparaciones con sangre pa­ra adquirir entonces así la seguridad de poderlos ca­racterizar bien.

—138—

Cristales (¡e .S'frzic/mu‘skí.——fitrzyzowski ha modi­ficado el procedimiento de Teiclimann. empleando áci­

Fiol 17

Cristales de Hermínu

do yohídrico y obteniendo cristales de yohidrato deliematina, según dicho autor.

El reactivo es el siguiente:

Alcohol . . . . . . . . . . . . . . . . .í. . . 1 cc.

Acido acético glacial . . . . . .. 1 cc.Agua destilada . . . . . . . . . . .. 1 cc.Acido yohídrico . . . . . . . .D 1,5 3 a 4 gotas

Este reactivo como no se conserva debe ser pre­parado en el momento de utilizarse.

La técnica es la siguiente:Sobre una lámina porta objeto, se deposita una

l pequeña cantidad de la mancha, se le recubre con un

—139—

vidrio pequeño, y por los bordes del vidrio, se añadealgunas gotas del reactivo. Se calienta la lámina por­ta objeto a cierta distancia de la llama de una lamparade alcohol o de un pequeño pico de Bunsen. El lí­quido hierve, dejándolo así durante unos diez segun­dos, teniendo la precaución de reemplazar el reactivoa medida que se evapora.

Luego se examina al microscopio con un aumentode 400 a 500 diámetros y se observan, en el caso quese trate de sangre, cristales de yohidrato de hemati­na de una coloración pardo oscura, tirando al negro;su forma característica es la de prismas rómbicos.

Reacción (lc Lceha Marzo. — Se coloca una peque­ña porción de la mancha. sobre la. lamina porta objeto,se le agregan algunas gotas de pyridina que la di­suelven, se calienta ligeramente; luego se añade unagota de solución yodo-yodurada (yodoyoduro de potasio 0,5-alcohol a 96,25 gramos) y seevapora a sequedad. Se añade _entonces una gota depyridina y una gota de sulfiliidrato de amoniaco, serecubre con un cubre objeto y al cabo de algunos se­gundos se producen cristales de hemocromógeno, quese pueden observar al microscopio.

2,5 gramos­

Los cristales de bemocromógeuo. se presentanbajo la forma de. tabletas rectangulares y a veces deagujas de color rojo oscuro.Métodos Biológicos.

I’rceipitinas. — Sintetizando los conocimientosque hemos adquirido sobre los sueros precipitantes:su aplicación en el diagnóstico de las manchas de san­gre, no es nada más que la utilización de la precipi­tación específiea hacia la sangre humana de un suero

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..._.>A,_,...¿-.L7.,­

_140__

(le conejo, preparado con inyecciones (le suero hu­mano. I

Respecto a la forma de obtener un suero precipi­tante específico, para la sangre humana. y conserva­ción del mismo, no nos detendremos por habernosocupado ya. con detalle de dichos puntos.

La técnica a seguir, para una reacción precipitan­te con manchas, es la siguiente:

Tratamiento (¡e la mancha. — En tubos de ensayoperfectamente limpios, lavados con solución de pota­sa al 10 olo (nunca con alcohol y éter), luego con abun­dante cantidad de agua _vpor último esterilizados. sepone a macerar la mancha con suero. fisiológico _\'so­da (l) durante ‘24horas a la heladera; prefirióndosela heladera a la estufa, pues a la temperatura de 37°de esta última, se desarrollan microorganismos quedeterminan un enturbiamiento en la solución, difícil(le eliminar. La operación del lavaje de los tubos tie­ne suma importancia en la práctica de la reacción,pues cualquier sustancia extraña (filamentos de algo­dón, fibras de tejidos, polvos atmosféricos. etc.) quepuedan contener los tubos, obrando por su presencia,provocan enturbiamientos que, simulan precipitacio­nes.

La mancha puede presentarse: ya sea como unacostra desecada en la superficie de un objeto, o bienentre las mallas de un tejido; en el primer caso seraspa con cuidado la mancha y se coloca en el tubo¡le ensayo para macerar-la; si ella se encuentra sobreuna tela, se corta el trozo de tela que contiene lamancha y se pone a macerar 'con la solución mencio­

(l) La solución que se emplea en la mueernelón, tlena la. slgulenm compo­' sición: suero flslológlco al 9,2 por mll lo cc" lejia de soda al 10 o¡o 2 gotas._

.1

—141—

nada. en uno de los tubos de ensayo. En este últimocaso que se macera un tejido que. contiene una man­clla sospechosa, no conviene agitar el tlll)() que loscontiene, por las sustancias extrañas que pueda arras­trar el líquido, de la tela (fibras, apresto de la tela,coloantes, etc.) y que pueden provocar un enturhia­miento del líquido, o que a pesar de-su relativa limpi­dez. las sustancias extrañas al albuminoide (le lamancha, precipiten con el suero, simulando así, unaverdadera reacción preeipitante. Se puede macerarla mancha con solución fisiológica sin soda, pero secorre el peligro de que no se disuelvan los allunninoi­(les de las manchas viejas, por las transformacionesque ell0s puedan haber sufrido.

Efectuada la maceración, que exige un tiempode 94 lloras y a veces más, si se trata de tejidos, sefiltra el líquido a través de papel de. filtro esterilizadoy que lla sido mojado con solución fisiológica. Parala filtración pueden emplearse: bujías, aparatos es­peciales, etc., que permiten filtraciones de muy peque­ñas cantidades de líquido, ope'ando bajo la presión(ver Ulllenliutli und “'eidanz. Anleitung sur Aus­fiillrng.r des liiogisclien Iiweih differenzierungs ver­fallrens. — Año 1906, pág. 46.)

Filtrado el líquido, hay que neutralizar la sodaque contiene, neutralización apreciable al tornasol, quese puede olitener por el ácido acético, o mejor aun,haciendo pasar en el líquido, unua corriente de anhi­drido carbónico. Uhlenliutli aconseja neutralizar con(‘02. Puede acontecer que la neutralización por el anhi­drido carbónico, ocasione un enturhiamiento del líqui­do. enturluamiento que se elimina por filtración, sobrepapel de filtro esterilizado y mojado con solución fi­

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—142—

siológica y que no perjudica la marcha de la reac­ción.' favoreciendo, por el contrario, la limpidez del lí­quido después de filtrado.

Resumiendo las operaciones hechas, tenemos:1°.——Maceraciónde la mancha;

¿"i-Filtración del líquido de maceración;3°.-Neutra1ización del líquido resultante de la

operación anterior por medio del CO2.4°.—Filtraci6n del líquido anterior, si él lo exige;5°.-Flste liquido filtrado debe tener una riqueza

de albuminoides, equivalente al de una solu­ción de sangre al 1 por mil.

La determinación de dicho título se hace en la for­ma siguiente: Se toman 0,3 a 0,5 cc. de la solución, secolocan en un tubo de ensayo. pequeño _vbien limpio,y se agregan 1 a 2 gotas de NOBH al 25 olo y se ol)­serva la turbidez producida. comparándola con la produ­cida cn análogas condiciones por una solución tipo,de uno en mil. Si la turbidez es mayor, se diluye has­ta obtener una turbidez análoga a la de la solucióntipo; si es menor, se busca su titulo aproximado, elque se tendrá en cuenta más adelante. Determinadoel titulo de la solución, que debe ser de 1 en mil, se to­man de ella 0,9 cc. por medio de una pipeta gradua­da en 13100 de cc.‘, ‘que esté limpia y esterilizada, yse colocan en el fondo de un tubo de vidrio, evitandoque el líquido corra por las paredes. Este tubo deberesponder a las siguientes dimensiones: 11 centíme­tros (le largo y 0,9 de diámetro. Hecho lo anterior,con otra pipeta esterilizada se toman 0,1 cc. del sue­ro precipitante, cuyo título será de 1 por 20000 (1) y

(l) L'hlenhuth entiende cr titulo de l por 20000ul de un suero que dé unareacción débil pero posltlva z'I a mcdln hora con unn solución de l de alhilmlnoldepor, 20000 d

Remefiomes QuñmñeasMancha de sangre humana

colocada en

Edad de la

mancha

Estado de ’

conservación I

Reacción de. Van Deen

(impresiones Taylor)

Reacción de Adler

(lmpreuiones' Taylor)Z(en la soluclún de la mancha) (en ln soluclón de la mancha) (en la soluelón de la manclm)i.

Reacción de Meyer Reacción con Ia fluoresceina l Reacción con el sulfato de hidrazina i Reacción con la Panfenildyamina

(impresiones Taylor)

hoja (le ¡cuchillo

D D D

mango s n

I D D

vaina u n

y. . »

Claros

r oxídndos

trozos de tela

reboque de paredD D D

tierra

D

parimientoI

15 días

6 mesos

12') días

6 meses

1-5 días

- 6 meses

20 dias

6 meses

1.") días

4 meses

6 meses

20 dias

4 meses l

10 días

2 meses

20 días

4 meses

Bueno

RegularBueno

RegularBueno

RegularBueno

Malo

lluenn

RegularMalo

RegularMallo

RegularMil lo

RegularMalo

francamente positiva

pesitiva

francamente positiva

positiva

francamente ¡ms-¡lira

¡msíliva

fram-amenle positiva

muy ¡lelnil positiva

fruncann-nte positiva

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muy (Ichíl positiva

positiva

muy debil pasitiva

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positiva

muy debil positiva

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positiva

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positiva.

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positiva.

debil positiva

positiva

debil positiva

positivadudosa

positiva

dclril positivadudosa

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positiva

francmncnte positivaD D

positiva

francamente positiva

positiva

francamente positiva

positiva.

francamente positiva

positiva

—143—

se coloca en el tubo que contiene la solución límpiday neutra de la mancha, haciéndolo correr por las pa­redes, muy cerca de la superficie del líquido. y comoel suero precipitante es más denso, irá al fondo deltubo. Si la mancha es de sangre, debe observarsedespués de la adición del antisuero, un principio deenturbiamiento en el fondo del tubo con un máximumde tiempo de 5 minutos: que irá‘ aumentando sucesi­vamente, hasta propagarse a todo el líquido, pararesolverse por último en un precipitado esponjoso,que luego caerá al fondo del tubo.

Al mismo tiempo que se hace la reacción con lamancha sospechosa de sangre, se efectúan una seriede reacciones con tubos testigos, cuyo número varíasegún el material del que se extrajo la mancha y cu­yo detalle es el siguiente:Tubo testigo número 1 que contiene:

0,9 cc. de (suero fisiológico 10 cc. + soda 2 gotas+ corriente de CO2)+ 0,1 cc. de suero precipitan­te A (título 1 por 20000) operando en las mismascondiciones que con el líquido de la mancha.

Tubo testigo número 2 que contiene:0,9 cc. de suero de conejo normal. (1) diluído a]1 por mi] + 0,1 cc. de suero precipitante A.

Tubo testigo número 3:' 0,9 cc. de una solución al 1 p'or mil de suero huma­

no o del animal de que se sospeche o pregunte elorigen de la mancha + 0,1 cc. de suero precipitan­te A.

Tubo testigo número 4:0,9 cc. de suero, de una especie zoológica muy dis-­

(l) Ode la misma especieáque pertenece el animal que proveyó el antlsuero

"i'A'TF‘B’S-má'x'i've“:'-¿EF-f:-‘iFafdii".­

H-¿ymra».aers»:ave-'­

-._¡,r.­

_'144_

tante. de la especie a que pertenece la sangre bus­cada + 0,] cc. de suero precipitante A.

Tubo testigo número 5:0,9 cc. del líquido resultante de la maceración, enlas mismas condiciones en que se maceró la man­cha sospechosa, de trozos del mismo género u ob-_jeto sobre el cual se hallaba la mancha + 0,1 cc.de. suero precipitante A.

'l‘uho número 6:

. Es el tubo con maceración de la mancha sospecho­sa y suero, que ya hemos descripto.

NOTA. — Si al investigar la riqueza en albumínoiédes de líquido resultante de la mancha, se halla un tí­tulo menor al 1 por 1000, se añade una porción mayorde antisuero, en relación a la disminución del titulo.

La reacción es positiva, cuando ella tiene lugarúnicamente en los tubos números 3 y 6.

Reapecto a las diluciones reSpectivas de la solu­ción albuminóidea y de suero precipitante, hay dossistemas: unos operan con soluciones muy concentra­das de albuminoides y sueros de titulo débil (l por500), otros, entre ellos Ulilenhutli, emplean las solu­ciones albuminóideas muy diluidas y los sueros de tí­tulo elevado (1 por 20000.)

Cuando deba practicarse la reacci6n precipitantecon cantidades pequeñas de líquido, se opera en las'mismas condiciones, en tubos capilares,‘ que disminu­yen por consiguiente la proporción de todas las can­tidades.

Para la observación de la reacción precipitante,en el interior de los tubos, conviene suspender éstos

. en el so¡)orte, de manera tal, que el fondodel tubo norepose sobre ninguna superficie y quede en el aire,

—]4Ï)—

siendo posible así. observar lo que pasa en su base.Duranteesta operación conviene tapar los tubos

con un tapón que se puede obtener, cortando el fondode un tubo de vidrio.

Otro dispositivo ventajoso y cómodo para la ob­servneión de la reacción precip'itante, es el ideado porDüreh, que consiste en lo siguiente: se sumergen lostubos en un recipiente de vidrio que contenga aceitede cedro: éste obra, como en el caso de la inmersiónhomogénea, en los microscopios, evitando las pérdidasde luz _\'los rayos refractados, originados por las den­sidades de los distintos medios!

Jlfiíorlo de la (¡variación del complemento. — Lateoría de este metodo. habiendo sido tratada con deta- 'lla. nos limitar-emos aquí a la parte p ‘áctica del mismo.

Poniendo en contacto suero precipitante para lasangre luunana calentado a 56",con una mancha de san­gre humana y con suero nuevo de eobayo, tendremose] siguiente sistema: antígeno (mancha sangre huma­na) + sensibilizatriz específica (suero precipitante­para la sangre humana) + complemento (suero nuevode eobuyo). En este sistema se ha producido la fi­jación del complemento, de manera que si le agrega- 'mos ahora a dicho sistema. suero de conejo calentadoa 56" y hemolítico para los glóbulos de carnero y gló­bulos de earnero, la hemolisis no se produce, por lafalta en el sistema de] complemento que fué desviadoy fijado por los dos primeros elementos del mismo.Para que esta desviación del complemento se produz­ca, es necesario que el antígeno y la sensibilizatriz secorrespondan. dada la especificidad de la reacción. an­tígeno y antíenerpo. En las condiciones en que. opera­mos. esta eorresiiondeneia de antígeno y anticuerpo,

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—14o'—

tiene lugar únicamente 'cuando el_antigeno o manchares de sangre humana; en esas condiciones habrá des-vviaeión del complemento, y posteriormente no se ‘pro­¡lucirá la liemolisis. Luego Iiemolisis no producida,.reaeeión positiva: llemolisis que se produce, reacciónnegativa. .

Los elementos necesarios para la reacción son lossiguientes:

Autigéno. -—Mancha que se investiga si es de san­gre humana.

.S'eusihilizatriz (suero precipitante). — Suero deconejo precipitante para la sangre humana. Este sue-­ro se calienta a 56° para destruir el complemento.

'('mn[)le€n!0. — Suero nuevo de cobayo.(:‘Iólmlos rojos. — Glóbulos rojos de carnero, (pa­

ra su obtención ver sueros liemolíticos.) Se empleanen dilución al 5 olo.

Suero henwlítíco para los glóbulos de carnero. ——_(Ver sueros liemolíticos.) Este suero se calienta a 56°para destruir el complemento.

Obtenidos los elementos anteriores, hay que proce­der a los siguientes titulajes:

’I‘itulaje del poder Immolïtico del suero. — Proce­deremos en la forma ya indicada (ver sueros llemolí­ticos.) '

Supongamos haber hallado que _0,l.cc. de suero"hemolítico son suficientes para liemolisar 1 cc. de gló­hulos (le carnerd .diluídos al 5 olo en presencia de­0,1 oo. de suero de cobayo' diluido al 1|4.

’I'ir'ulaje del poder «¡léxico del suero de cobayor(complemento).— Operación igual a la anterior, va­riando únicamente las cantidades de suero nuevo de.cobayo. Supongamos haber hallado que 0,1 cc. de

“1

—. 147 —

suero nuevo de cobayó diluído al 1|4, es la cantidadde complemento que necesitan 0,1 cc. de suero hemo­

lítico, para llemolisa’r 1 cc. de glóbulos rojos de carne­ro en 1|2 hora.

Titulaje del suero precipitunte. — Para ello secolocan en una serie de tubos de vidrio, el suero pre­cipitante en cantidades variables, luego se a’ñaden acada tubo la misma cantidad de complemento (suerode cobayo diluido al 1|4) y de antígeno (sangre hu­mana normal diluída), se lleva el volúmen a 2 cc. aña­diendo agua fisiológica y se colocan los tubos a la es­tufa a 37°,durante dos horas. Se retiran los tubos dela estufa, y se añade 1 cc. de glóbulos de carncro al5 olo _v0,1 cc de suero llemolítico. El título del sueroprecipitante estará dado, por la cantidad de suero su­ficiente, para no permitir liemolisis en los tubos. Elcuadro siguiente, aclara el punto.

S gin-Thu-¡Suero deco-¡GlóbuloqïigiSuero he­uero . ‘ ' .iTUBOS mana nor Ibayo nuevo: cam r Imohtlco pa HEMOLISIS

H¡.“Wfllflmnwmaldlluidal dlluido ia” orloolm glóbulosallpor1000¡ al lu ¡ ’ p de carnoro

I

N°l 0.1 cc. 1 cc 0.1 cc.- 1 cc. 0.1 cc nula

v2 0.05» | l r 0.1 n 1 n (¡,1 . .s3 0.03» ¡ 1 o ¡0.1 n 1. v 0.1 n rastros»4o.o2»¡1»¡o.1» 1» ¿0.1- muydébil

Luego 0,03 de suero es la cantidad necesaria. pa­ra fijar 0,1 de complemento sobre 1 cc. de sangre hu­

‘mana normal diluida al 1 por 100.Por investigar si una mancha es de sangre llu­

mana, se procede en la forma siguiente:

—148—

A B C D E F

Mancha de san- Suero preci- Suero nue. Snap ho- , ÉTUBOS gro dilulda en pltante pa- vo do coba- m°':":° Glïmumsde' Agua

agua flslologlcn mln sangre yo diluido 'Éulï's sie ‘ - (¿r-nom ¡ fisiológicanl l por 10(1) humana al ll-l carnero l “l u °'° l

N°l 1 cc. 0.3 cc. Z0.1 cc. 0.1 cc. i l oc. 0.5. cc.‘¡2 0.75 n ¡0.3 n '01! 0.1 I I l D 0.75».3 0.50. ¡0.3. 0.1»;01» 1» !1 ­I4 0.25! 0.3»‘01r:0.ln l» ¡1.25!:5 D 0.3 I 01 D D l D 1.4 p

A los distintos tubos se agregan las sustanciasen la forma siguiente: Se agrega A, B y C, se agitay se lleva a la estufa a 37" donde se deja ‘2horas, se¡retira luego y se agrega l), FJy F, se agita y se llevanue 'amente a la estufa por 2 horas, por último seobser 'a: si hay homolisis, la mancha no es de sangrehumana, en caso de que la hemolisis sea negativa, lamancha es de sangre humana.

Es necesario preparar 4 tubos testigos con los si­guientes elementos:

ler. tuho-(‘on todos los elementos anteriores me­nos antisuero.

:2." id-Con todos los elementos anteriores me­nos manchas a examinar.

3er. id-Con todos los elementos anteriores, enI lugar de la solución de la mancha, so­

lución de sangre humana..4.“ id-Con todos los elementos anteriores, en

lugar de la solución de la mancha, so­lución de sangre de especie animal muydistante.

CONCLUSION ES

Para la realización del fin propuesto en este tra­bajo: identificación (le las manchas de sangre, fuémenecesario ante todo efectuar un estudio detallado deesta. conocimiento previo reclamado por los diversos'componentes del elemento sanguíneo y para el desa­rrollo (le los variados métodos de investigación.

Los diversos metodos para la. identificación de lasmanchas (le sangre, exigieron una larga práctica delos mismos, que fue beelio, primero con materiales c0­nocidos (l(\'.sangi-e, para poder llevar luego las inves­tigaciones á otro terreno. l

Las reacciones (¡ue efectuó con los sueros preci­pitantes, obligo la preparación previa (le los mismos,ya que el comercio no los libra á la venta, _vsobretodoque esta clase de investigaciones, exige que ellos seanpreparadOs personalmente por el perito químico. Laobtención del suero precipitante fué tarea difícil derealizar. Unas veees por la dificultad en conseguirsangre humana, otra porque 10s animales morían enel transcurso (lc la preparación _\'hasta llegó á produ­cirse el caso de que terminado el período (le inyeeionesá un animal, el suero del mismo no tenía propiedadesprecipitnntes. _'

Insistiendo, observando y teniendo en cuenta los '

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errores cometidos en cada operación, pude llegar áobtener suero procipitante con 3 animales después dehaberlo intentado con varios. Los animales fueron tra­tados en la forma ya indicada en el capítulo V, lamarcha del animal en lo referente á su peso, la canti­dad de liquido inyectado y la cantidad de suero reco­gido, fué la siguiente:

Conejo negro A, peso 1800 gramos. Inyección in­. I

trapex-¡toneal de suero humano.f. . CANTIDAD DE LiQUlnoj

FECHA m: LA INYECCION ¡"Humo l PESO DEL ANIMAL

Mayo 4 1912 4 cc. g 1.800 gramosD 11 D 4 b 1.750 )t 18 n 5 n 1.720 p. 25 . 5 . I 1.7¡0 .

Junio 1 . 5 . .1_7oo .

Sacrificado el animal el 9 de Junio, pesa 1680 gra­mos y produjo 45 gramos de suero precipitante.

Conejo negro B, peso 1.970 gramos, inyección in­traperitoneal de suero humano.

FECHA DE LA INYECCIÓN' CANTllïtïcPrÏDIgQUIDO PESO Dlsl. ANIMAL

Mayo 4 1912 4 cc. 1.970 gramos‘ r 11 » 4 n 1.925 r

. 13 . 5 . 1.880 ­

) 25 9 í 5 s 1.%5 D

Junio i » I 5 . 1.850 .

Sacrificado el animal el 9 de Junio, pesaba 1840gramos y produjo 38 gramos de suero precipitante.

——151—

('onojo negro C, peso 2.250 gramos. Inyección in­trapel'itoneal (le suero humano.

FECHADE LA unccróm CAST'?;\ÏL(:’TZÉ¿QUD0 PESO mu. axiuu.

Julio 6 - 1912 4 cc._ i 2.250 gramos- 13 » ¡ 4 - ¿ 2.210 »

. 20 . y 4 . g 2 175 ­D 27 D ¡ 5 h g 2.160 D

Agosto 4 > I 5 » ‘¡ 2.140 r

Sacrificado el animal el día 12 de Agosto, pesaba2100 gramos ‘y produjo 50 gramos de suero precipi­tante.

Creo oportuno hacer notar, que con ant erioridadá la obtención del suero precipitante, es convenienteobtener ‘suero hemolítico, efectuar las reacciones he­molíticas, así como el titulaje del suero hemolítico,complemento, etc., para familiariáarse de ese modo conlas reacciones biológicas. Con_el suero preeipitanteobtenido, efectué las siguientes investigaciones:

Determinación. del poder precipitante del suero delos animales .1. B. y C. — Para esta determinaciónprocedí en la forma que indic'o al tratar de los suerosprecipitantes. La reacción la efectué en tubos de ensa­yo operando como indico en el Capítulo II (II parte).Las cantidades de dilución de sangre y suero precipi­tante empleados, eran de 0.9 ec. y 0.1 cc., respectiva­mente. La solución de sangre en suero fisiológico, al9.2 por mil respondía á un título de 1 en mi], título adap­tado en general y empleado por Uhlenhuth. No obs­

.l,.

¿sí‘fic-v"-"'.'-.­ —152—

tante lie comprobado el título límite de los 3 sueroscon el siguiente resultado:

'()l.l,'(' os : .‘(m . -’sueno PRECIPITANTE 5 I m SA? F TlEMPOlH-ILammcmón

, . EN SURRÍ) Fhlnlmulu-u ,

solución al l por 1000: 10'Suero del (‘nnejn AD D D ' B i n p J; D 6.

l - D D C p I I I 9.5-)

sol. 'eióx : .' .\' . ­SUERÜ PREFIPI'I‘ASTH l m “.cm‘ TIEMPO DELA REDACCIÓNEx sumo risiomcn-o

Suero del conejo A [Solución l ¡or 54000l horasr y . B¡ p 1 r 14000, 24 horaso I o U ' ) 1 D lfllml 24 horas

Especifieirlad del suero precipitante. — Para esteobjetivo ¡n'oeedí á efectuar la reacción precipitante consangre de diferentes especies animales. Estas investi­gaciones fueron hechas eon sangre fresca, dado quela naturaleza de elias, no me exigían otra clase de ma­terial, desapareciendo por consiguiente en este caso,las operaciones previas que son necesarias cuando setrata de manchas de sangre.

La solución de sangre en suero fisiológico al9.2100. fue llevada á un título de 1 de sangre por 1000de suero. En la solución límpida de la misma, practi­quó.la reacción preeipitante en la forma y con las pre­cauciones, indicadas anteriormente. eon el siguiente re­siiltado:

‘

isonuvión ,u. l pon uu. es sumo FISIOLÓGICODE SANGREDE:sueno l 1

precl- I I l Io ' o a - o g s

'3 | g 5 3 <3 5': '

i Z l i

¡Reacción " ' i" " ' _“ ' " " Rencolón Reacción2m al]! l'nogatlva“ l, o ima“: .... o ' v ' negatlvn negatlva

. . c; . l . . . . j . ; .. i .

Reacciones con manchas preparadas. — Prévia­mente y con objeto de familiarizarme con la técnicade la reacción precipitante, hice varias reacciones consangre fresca. Las reacciones precipitantes que efecÁtué con diversas manchas de sangre humana, colocadasen"distintos objetos, fueron practicadas en la formaque indico en el Capítulo II (II parte). El detalle­de las mismas es el siguiente:

I lll’llllkln'll’lllkllt ¡nl-kmMANCHAor. i mmh .nsnnol ) l N l (num «Ier al sun' i DE l u UCIÓ AI l POR mcl’lluu "Mill-ll mrlllulu

sANum:“un”; nz LA a g .‘ aCONSER': MIL DE LA MAN-CHA EN:' . A B ' C

Cl)l.0C¡\DAEN MANCHAVACIUN mcuou. |“m°¡.¡ ¡muu+

hoja de cuchillo 15 dim VBuono suero ñsiologiro 9. 2|oo (i los 20' 13' 8’. p . 6 ¡nosea‘l'logulm1 v u n '

- V : lizoraunmito nlvnllniudo, I ml Nu (UH) . 30' 16' 12'

mango n 'lz') dias Hut-no isllel'll fisinlnglco al 9. 2100 o 18’ 10' 6’v > > ,6 mescwkeguluri- n

'lgn-runmnto ulcnllnizadol I 'n . ' 12' 7’

valua» n ,lï) dias "umm suero fli-iolúfllcn al 9. 2|oo v 16' 9' Iu > > "lilnnHOSi‘HEgulur:

v : ligeramente ulmlinludo1 ; ’con .‘n o 21' 10' lo'

Clavos ‘20 dins 'Buelm ‘suoro fisiológico al 9 2100 > 16' 7'oxidadoslfi mososlhlnlo > u

Llígerunwuto nlcnlínlzadol I (- n ] > 80' 20' 16'

Trozos de tela '16 dias Bueno 9“an fisiologlco al 9 2100 > 12' 7' 4’> > > 4 mesos‘il'tegular. n > u >

A llzornmomo ulcnliuizndoI . con Na ¡om - 13- 10' a'

. . . 'a ' . . . . . 25' 12’ 3'pavlmento .20 dins r-¡zulnr . . . . u 15' 10' 5'

> Í monos laln . . . . . 23’ 13' 'reboqno pnred ‘20 días '1 ogulur, u u - . > 20' 15' l' '

> v 4 mesospmlo : v p . . > 60' 25' 20'dorm no dins 2 egulnr > u > > > 25' 15' 13'

nlo n n > > ú 1 hora 40' ' 20., -‘.’mascari

"'11".1.‘Hï..‘1”",

'."¡'\_I'

_-1:¡?_a-':

—154—

Al practicar las reacciones precipitantes con man­chas de sangre que detallo en el cuadro anterior, efec­tué las siguientes reacciones de control:

¡ANCHA ¡un on ¿anne Eolwcn'mAL! "HANENW 0°“ su“

DEsua“ n m: 1 Pon ¡ooo PRECIPITAKTEmu. comuo

. oossnnm- l 'nz. ¡uan cm" sx A i B | c

suero flsi - Ilógico al 9.2 _ '

Caballo nm bueno por 1000 R. nogauva¡R. negativam. negativaI

Vaca p . . > I v .Buey v r p r _ p ,

¿ .

Carnero n . . . ‘ . g _­

Conejo > > . . . I .O

Gallina > . y . . .

Paloma > u . . . .

OBJETO EN QUE SB

HALLABA LA MANCHA

DB SANGRE HUMANA

mnucxóx AL l Pou. Ill.

BN

TRATA I l BNTO CON SUZRO

PBEIPITANTB DHL CONLIO

Raspndures de un tro-izo limpio del mangodei cuchillo que con­teníanngre humana'

Trozo de tele limpio,de la tela quo conte­nía enngre humana

Raspeduras de un trozolimpio de la vainaque contenía sangre:humana

Id. id. del pavimento ‘

Suero fisiológico alcali­nizado con Nu (OH)y neutralizado con

. CO2

Suero fisiológico alcali­nizudo con Na (OH) yneutralime con 002

Suero fisiológico alca­iinizado con Ne (OH)y neutralizado con002

Suero fisiológico

> "alcali­

nizado con Na (OH) yueutraiizado cen 002

R. R. R.

negativa negativa negativa

p v

v p

p D

y v v. \' Trozo limpio en este caso y los siguientes se refiere á que ó] no contiene

mencina' de sangre.

s — 155—

c

El espectroscopio, aparato que nos es más fami­lïu', no presentó mayores dificultades en su empleo.Las observaciones espectroscópicas las verifiqué enmanchas preparadas Isobre diversos objetos, manchascuya edad y estado de conservación eran distintos. Lamarcha seguida en-estas observaciones, es la que indi­có en el capítulo (II II parte). El resultado de las mis­mas queda indicado en el cuadro siguiente:

l

. mninn” ' m h mo DI“¡un na OOI- 30mm: nzu gm . " ' . .ll u ' fi ‘ Ausonólcomunn 55"" num u ' w . h q .

¡uuu cm, a OBBIIVADO

|1an decuchulo 16 am Bueno agua dosulada llue- 1 c. alml. ¡por 100 oxlhemogloblnn“monto a calinluda co

a v > 6 meses Regular - u p -. .' hematim

vnlnn v - 16 dlu Bueno '> p . . o onhemogloblm

mango D > 6 mesos‘negulnr - > > . . hemntlnn

¡rom dohlerro a) dins Bueno . > _ > u . u oflhemogloblnn

v ‘> ' t o mesos lalo sana . dd. homnto rnrlm(mandos) ' po

mas lala ¡lidia Buenoaguadmlladallgo-V . ¡[al ¡palm oxlhomogloblnn:ramonlo nlcgllillgludI n '

> ' - ¡mana ¡lecho!y ¡aldo u un. u “¡un| i unida) .> D ' ' 6mm Ido roban. previotn- o un]. homwporflrlm

¡ tamiento por

‘ 504 H2litúme D dba ¡Regular‘lguadestlladall‘o- . . l poer odhemogloblm

l ¡mmeuua nlcnllnlu­da con NH3

roboque pued 20 dias Regular solución do K (OH) y . > meuhomogloblnn­al 1 por 10.

> ' ¿mesos Malo . . p . a homaum'l

“en. I D D y p p lD I>_> 12meses Ido . . . . . . .

humode tell lomonos: “o |- nena". a. mg. . . > homoaomocono‘ ‘ ver .

Mi. ¿cuchillo emujnagnlu Pyrldlm y tng. . . homtoporflrlna1 miento sulfúrico | .

I Banano ¡o mula. Vo: "Reacciónpor el Sulfatode marnan". Caplmlo.lI (II parto).

¿ntff1?"5- ‘W';;T‘-I.m;:ï‘wLuar".

—156—

A] microscopio observó los elementos de sangrefresca, y los de manchas frescas y viejas, para notarla alteración de los mismos y poder de ese modo pre­

_oisar la aplicación práctica del .microsc0pio á lá iden­tificación de las manchás de sangre. El resu_ltado delexámen microscópico de las manchasmana preparadas es el siglúente:

de sangre hu­

rM“an EDADv! ¡sim le Tan/¡meno

I

¿ DE LA :COISII’VICIÓI ¿ DE LA

COLOCADA 3“ ix A N CHA_ le la Inch m A x c n A

RESU LTAD0

V I

U

Hoja de cuchilloZlñ días zBueno ;R. Virchow'I | J

. : i

i 6 mesesiRegular ' n .í

Vaina v 315días TBueno 1. V'ibert

a _ .

Mango I I 6 nleseszegular n n

. í , a _Trozosdelnerro20 dms Bueno z n Banner

. n n “mae 6 meses¡Malo . y Rousin

Trozos de tele 15 días ¡Bueno finsmollsldüicoí

n s o _ 4 meses Regular I > r

Pavimento días ¡Regular IR. Vin-how

Reboq.d_epared-20 días :Regular n RanvierTierra :10 días ¿Regular i . Virchow

V .

n I 2 meses 'Malo «Ian IlsulnlcuI

I

' Soluclón de K (OH) a! 3010.

Glóbulos rojos de­formados.

No se observan glo- \bulos rojos.

qubulos rojos de­formados.

o se observanglobulos rojos.

Globulos rojos muydeformados.

No se observanglobul0s rojos.

Glóbulos rojos muydefonnados.

No se observanglobulos rojos.

b D

‘ I

l L

D I

__ 157.­

Cristales (le Hemina, Sh‘zizu'oski' y Lecha .Mar­zo. — Operando sobre manchas de sangre humana, dedistinta edad y estado de conservación, siguiendo latécnica anteriormente indicada, obtuve los siguientesresultados:

IDAD DBLA BTADO DI CNSTALB CRISTAL” CRISTALES

[ANCHA COLOCADA BN ¡ANCHA CONSERVA- DE DI DB

' Í CIÓN TIICHIANN ‘flMIZOWBKl LDCHAMARZO

Hoja de cuchillo 15 días Bueno. Positivo Positivo Positivo

,, ,, ,, 6 meses Regular ,, ,, Negativo

Vaina ,, ,, 15 días Bueno ,, ,, 'Positivo

Trozos de hierro 20 dias Bueno ,, ,, ,,íd. id. (oxidado) 6 meses Malo Negativo ,, Negativo

Trozos de tela 16 dias Bueno Positivo ',, Positivo

, ,, ,, 4 meses Regular ., n n

,, ,, ,, 6 meses Malo Negativo ,. Negativo

,, ,, ,, 6 meses Melo .. ,, ,,

Beboque de pared 20 dias Regular ,, ,, ,,

,, ,. ,, 4 meses Malo ,, ,, ,,

Tierra 10 días Regular Positivo ,, ,,

,. 2 meses Malo Negativo l ,, ,,Pavimento 20 dias Regular Positivo ,, ,,

—158—

Las reacciones anteriores, que nos ofrecen los di­versos métodos de investigación, fueron practicadossobre manchas de sangre de distinta edad y estado deconservación. Del mismo modo efectué esas reaccio­nes con el objeto de precisar el límite de ellas, así co­mo su sensibilidad _vespecificidad, variando entoncesdentro del tiempo disponible y en lo posible el sujetosometido á las mismas reacciones pudiendo llegar, ála siguiente concisa crítica de los diversos métodos:

Aplicación del espectroscopio. — El inconvenien­'te grande de este método, es que él exige gran canti­dad de sangre, lo que no siempre se puede realizar.Además la precisión y rapidez que el presenta, cuando,se trata de manchas grandes,‘recientes, abundantes yen buen estado de conservación, desaparece en presen­cia de pequeñas manchas, aisladas y mal conservadas,Si bien es cierto, que la materia colorante de la san­gre, se transforma con el envejecimiento de ella, y que

también tratada la mancha por c'gertos reactivos, sepuede llevar su materia colorante á formas químicasdefinidas; la precisión del exámen espectroscópico enestos casos, no tiene el valor que 'cuando se trata desangre, cuya materia colorante se halla al estado deoxihenioglobina.4' Ea‘úmen citológico. — En el caso de manchas de

sangre, frescas y bien conservadas, es decir, que ellasno hayan sufrido comprensiones, ni modificaciones,causas que alteran los. elementos sanguíneos, estos seencontrarán en las manchas, con sus caracteres morfo­lógicos y dimensiones análogas, á las que poseen enla sangre recién extraída. La circunstancia anterior.favorable para el exámen microscópico de las manchas,

cs mu)" difícil de realizar en la práctica, sucediendo

frecuentemente} que el exámen debe practicarse en.manchas viejas, mal consei-Vadas, cuando no se presen­ta cl caso. que ellas están casi totalmente destruidas.En estas condiciones los elementos figurados de la san­gre, han sufrido modificaciones y no vuelven á su es­tado primitivo, á pesar de los tratamientos por solu­ciones especiales. (Ï‘omo vemos, la aplicación prác­tica del método citqlógico, es muy reducida. '

Á Cristales dc Hemina..— La reacción de Teicllmanntiene mucho valor en el diagnóstico de las manchas de

' sangre, ella puede ser efectuada con un resultado posi­_ti\'o, cop cantidades muy pequeñas de sangre _vconmanchas viejas“ Esta reacción, rápida y sensilla, exi­ge cierta prácticaen el operador.

Entre las causas que pueden inducir en error cuan­do se practica la reacción de Teicliamann hallamoslas siguientes: los cristales de murexina, que se ha­llan en la sangre, tienen una forma análoga á los deIlemina, la materia colo 'ante, de. ciertas telas azules;el indigo, da al practicarse la reacción de Teichmann,cristales análogos á los de Hemina. Para diferenciarlos cristales de Hemina. de otras formas cristalinasanálogas, se aprovecha la propiedad, que presentan losde Hcmina, al ser observados á la luz polarizada; enestas condiciones son anisótropos. No pudiendo efec­tuar la comprobación anterior, debe comprobarse lasolubilidad en agua y alcohol de 10s cristales. Los deIlcmina son insolubles.

Crismles de Strzyzou'ski. ——Este método tienetodas las ventajas del anterior, uniéndose á ellas el.

' bcclio de que es más rápido y sensible. Además la técni­

¡W‘r‘ rvp-v_,:—rr—w-—vg.für fix

—1GO-—

ca para su obtención es más sencilla y segura que la se­guida para los de. ’l‘eichmann. El único inconvenientees la alterahilidad del reactivo. que exige, sea prepa­rado en el momento de utilizarse.

chccíoncs químicas. — Las reacciones por la po­tasa, llipobromito de sodio, amoniaco, é investigaciónde allmmina y azoe, cuyo valor de especificidad estábasado en el hecho de caracterizar ciertas sustanciasque entran en la composición de la sangre, tienen unvalor muy relativo. En efecto, las smstancias comola albumina, 11rea,.etc., no son propias de la san­gre, sino que son comunes á otros líquidos orgánicos.los virajcs de coloración también son frecuentementeobservados en líquidos cuya composición química escompleja. Por esas razones, estas reacciones, debenser abandonadas en la investigación de las manchasde sangre.

Reacción ul agua (¡Tlf-[I'HIIIHL— El desprendimien­to de oxígeno, en esta reacción, es ocasionado por unfermento, que no está probado sea característico de lasangre. Por otra parte, numerosos fermentos que seliallan en los líquidos del organismo humano, tambiénprovocan este desprendimiento de oxígeno, y en el ca­so de practicar la reacción que nos ocupa, con un lí­quido del. organismo que pOsea esos fermentos. tendre­mos una reacción positiva. Además los metales enpolvo‘ ó estado coloidal, ciertos óxidos como el de hie­rro. provocan el desprendimiento de oxigeno, dandopor consiguiente una reacción positiva. Como vemos,el valor de esta reacción es muy pequeño y relativo.

L Reacción de Van Dcen. —-La reacción de Van Deenes sensible con soluciones muy diluídas de sangre.

—161—

La sensibilidad de la reacción disminuye con el enve­jecimiento de la mancha, además presenta los siguien­tes inconvenientes: el óxido de hierro, las sales dehierro, peróxido de manganeso, peróxido de plomo,mung de platino, hipoclorito de sodio, las sales demercurio, etc., etc., dan al ser tratados por el reacti­vo de Van Deen, una reacción positiva. Entre las sus­tancias orgánicas que dan esta reacción, tenemos: laharina, gluten, caseina, lechc 'no hervida, goma ará­biga, fécula de papas, hongos, cuero, pus, esperma,sudor, etc. La sangre que ha sufrido la acción d-eunatemperatura elevada, no da la reacción de Van Decn.l‘lnconclusión, es una reacción bastante sensible y quepuede ser utilizada como reacción de orientación.

Reacción por el Sulfato de Hidrazina. — La colo­ración rosa que produce esta reacción, en presencia desangre, en ciertos casos, es difícil de apreciar con segu­ridad, pues una solución extendida de sangre posee depor sí, esta coloración rosa. Numerosas sustanciaspor otra parte dan la reacción al sulfato de hidrazina.La ventaja que tiene, es que p'ermite, en la manchatratada por el reactivo de Riegler, el exámen espectros­cópico del hemocromogeno formado, en el caso de serpositiva la reacción y tratarse por consiguiente (lesangre. Esta reacción, dando resultado positivo, enla observación espectroscópica, es una buena reacción(lo,comprobación.

7L Reacción (le Adler. — Reacción muy sensible, pro­(‘luciéndose, aún, en presencia de rastros de sangre.l‘lspositiva con manchas viejas y con manchas que hansufrido la acción del calor. Los líquidos orgánicosque en los casos anteriores dan reacción positiva, no

’r-rfiw‘fl —wyvñ www Wv’w u “ ‘W’W

—162—

dan la reacción del Adler. En cambio, ciertos jugosvegetales, los líquidos coloidales, sales de hierro, etc.,

-dan la reacción de Adler.Como reacción de orientación, es más específica y

sensible que la de Van Deen. lReacción á la parafenildiamina. — Poco específi­

ca pues dada la gran alterabilidad del reactivo al con­tacto del aire, no permite hacer diferenciaciones pre­cisas. '

4 Reacción de Meyer. — Esta reacción posee unagran sensibilidad y presenta los siguientes inconve­nientes: el reactivo solo, calentado á 30° da reacciónpositiva, en presencia de sangre y un líquido ácido nose produce, los fermentos dan la reacción de Meyer,lo mismo que las sales de cobre, hierro, etc.

,LReacción por la fluoresceina. — Presenta los mis­-mos inconvenientes que la anterior, con el agregado quela fluorescencia que ella produce, es mucho menos apre­ciable que la coloración en la reacción de Meyer.

aLSueros precipitantes. — La reacción por los sue­ros precipitantes, es específica y muy sensible.

Cuando efectuadas en una mancha de sangre lasreacciones que nos ofrecen los diversos métodos, ellasnos han llevado á la conclusión que se trata de una man­cha de sangre, el método de los sueros precipitantesnos permite aclarar el punto de su origen. Si unsuero precipitante es específicopara la albúmina huma­na, y si una mancha ha dado con dicho suero unareacción positiva, habiendo sido también positivas lamayor parte de las reacciones físicas, químicas, cito­lógicas v microscópicas, efectuadas con ella, el pun­d

to queda aclarado. La reacción de grupo de los sue­

¡Í v._ hdr“

—163—

ros precipitantes queda ¡muy disminuida, pues eneste caso solo los monos superiores, dan con su. san­gre reacción precipitante.

74 Método (le la desviación del complemento. — Mé­todo sensible, cuya sensibilidad es mayor aun que. la(le los sueros precipitantes. ’l‘iene el inconvenienteque él exige una larga serie de preparaciones previas,titulajes, etc., de los elementos que entran en él. Ull­lenllutli _\'Weidanz lo recomiendan, agregando que sir­ve de control al de las precipitinas.

RESUMEN

De las exmriencias que he practicado, aconsejola siguiente marcha, para la investigación sistemáti­ca, de la presencia _\'origen de la sangre en manchassospechosas remitidas al químico legista para su exá­men:

1°. Tratamiento de la mancha.

a) Con suero fisiológico al 9.2|00; y examinar almicroscópico la existencia de eritrocitos.

II) Si el tratamiento anterior no dió resultado,tratar con el reactivo de Vircllow (K (O H) al 30 olo).

c) Con agua destilada primero, y con agua desti­lada ligeramente alcalinizada con N H3.

(1) Con alcohol + ácido acético, y en el caso deque por los tratamientos anteriores no se obtuviera ladisolución de los pigmentos sanguíneos. Este trata­miento conviene utilizarlo en un principio para allo­l-rar tiempo, cuando las manchas se encuentran sobreobjetos metálicos, en especial hierroy muy oxidado.

. L '- J ,fi , , . f ‘-- _"W N. \ .5 12‘ L‘ï‘."Al¡Te MMMme\¿5.

.v‘mv".- '

— ,164 —

e) Como último recurso, para obtener la solubilización de la mancha, se puede emplear con un resul­ltado muy satisfactorio el reactivo de Riegler, queademás de presentar una coloración cromática ca­racterística permite el exámen espectroscópico (he­mocromógeno) de la solución de la mancha, ya seadirectamente, ó efectuando la extracción con pyridinadel hemocromógeno.

f) Obtenida la. solubilizaeión con agua destiladaó ligeramente alcalinizada con N 1-13, se utiliza estasolución para el exámen espectroscópico (oxihemoglo­bina y hemoglobina) y para todas las demás reaccio-­nes (cristales de 'l‘eichmann, Strzyzowski, etc).

g) Si- la solubi-lización solo se ha obtenido porel alcohol y ácido acético, la disolución se examina alespectrOscopio (heinatina en solución ácida) y es muyadaptable para la obtención de. los cristales de Teich­mann y Strzyzowski.

h) Para la diferenciación de las manchas, es muyconveniente efectuar sobre las impresiones Taylor delas mismas, las siguientes reacciones, en el_órden queindico y que responde aproximadamente á su valordiferencial:

1“. Reacción de Van Deen.

2°. ,, Adler3°. ,, ,,‘ Meyer

De estas tres reacciones la mas sensible es la deAdler y la más característica la de Meyer.

i) Eí'ectuado el tratamiento de la mancha como aca-Ibo de indicar, para su exámen de órden físico y quí­mico, se procederá á los siguientes ensayos, en el ór­

VN

.

4g;,

—.165 —

den que indico y que responden al mismo tiempo á suvalor, diremos diagnóstico para caracterizar la pre­sencia de sangre.

1°. Constatar la existencia de eritrocitos y sus di­mensiones.

2". Exámen 'espectroscópico.3°. (‘ristales de 'I‘eiclimann.4". ("nristales de Strzyzowski.(Jon un resultado positivo en estos cuatro ensa­

yOs, se puede afirmar la presencia de sangre en lamancha analizada. Uomo complemento y únicamente¡í titulo de comprobación, se pueden efectuar las si­guientes reacciones, teniendo en cuenta que un resul­tado negativo ó dudoso de algunas de ellas, no modifi­cará en nada las conclusiones obtenidas por las ante­riores reacciones; pues aparte de no ser muy caracte­rísticas, su sensibilidad es inferior á las 4 fundamen­tales.

j) En el caso de que la mancha hubiera experi­i‘nentadouna elevada temperatura, aun mismo un prin­(-ipio de carbonización, el único recurso para constatarla ppsibilidad de la presencia de sangre, consiste enefectuar el tratamiento sulfúrico, y observar en estecaso'el espectro de la llematoporfirina. Su valor esrelativo, y solo tendría fuerza probativa, en el casodc que se excluyera la posibilidad de existir produc­tos vegetales en la mancha. '

/.-) Constatada la presencia de la sangre en unamancha, se procederá á su caracterización biológica,es decir, su orígen. Los procedimientos utilizados coneste fin se reducen á tres:

A ¡aww wr ‘,_ '- v- 'vr‘“

.__166_.

1°. Reacción de Uhlenhuth2°. ,, ,, anafiláctica.3°. ,, Desviación del complemento.

La solubilización de la mancha para practicar es­tas reacciones. debe efectuarse con suero fisiológicoal 9.2|00 puro ó ligeramente alcalinizado con Na (OH),cn este último caso se debe neutralizar exactamentela alcalinidad por medio del C 02. Como segundomedio disolvente aconsejo el cianuro de potasio.

l) Es preferible utilizar antisuero á título elevadoy utilizar solución diluída de albuminoides, no infe­rior á 1|00.

m) La práctica de Uhlenhuth es la más aconseja­ble.

n) La reacción de Ulilenhutli, con sus respectivoscontroles, es la más_concluyente de las que se conocenhasta hoy, para determinar el orígen de la sangre.

o) Como complemento á la reacción de Uhlen­llutll, se pueden efectuar la anafiláctica y la de la_des­viación del complemento.

p) La individualización del orígen de la sangre,no es posible por el momento efectuarla con seguri­dad, por ninguna de las tres reacciones biológicas me­neinadas.

Buonos Altea. Noviembre 15 do 1919 .

Pase ú la comisión examinadoxja, N°. 22, para quese sirva estudiar la presente tesis.

SABHY.DIGAIO

PEDRO J. CONI.¡"(MAIN _

__..-__.____ _._ .. _.M‘__.__,V_

Buenos Aires. Diciembre 10 de 19l2

Los miembros de la comisión examinadora, N°. 22,que suscriben aconsejan se acepte la presente tesis.

E. Heri-¿ro Ducloux, Francisco P. Lavalle, G.F. Schaefer, J. T. Raffo, Julio J. Gatti, F.Gándara.

, Iii ¡“IQAMJMJ

..¿,.

’hmluw

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