Cinética Del Cáncer de Mama
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Monitoreo de las características cinéticas-enzimáticas de células periféricas mononucleares en pacientes con cáncer de mama
Banca Erika LizethGranados León DellaniraNambo Arcos Mónica EstherPaniagua Picasso Lilia EritaniaReyes Cisneros AndreaRíos Mireles Francisco
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El cáncer de mama, características básicas
Es un tumor maligno que se origina en las células del seno.
Un tumor maligno es un grupo de células cancerosas que pueden crecer invadiendo los tejidos cercanos o que pueden propagarse (metástasis) a partes distantes del cuerpo.La incidencia es mayor en mujeres pero también los hombres pueden padecerlo.
Monitoreo de las características cinéticas enzimáticas de células periféricas mononucleares en pacientes con cáncer de mama
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Existen dos tipos principales:
Carcinoma ductal (la mayoría son de este tipo )
Carcinoma lobulillar
*En raras ocasiones, el cáncer de mama puede comenzar en otras áreas de la mama.
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• Factores de riesgo• Edad y sexo• Ciclo menstrual• Antecedentes familiares
• Genes (BRCA1 y BRCA2)• Raza y origen étnico• Consumo de alcohol• Parto • Ingesta de DES (dietilestilbestrol)• Hormonoterapia• Obesidad• Radiación• Afecciones benignas de los senos
2015 Características básicas
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Introducción
El estudio del proceso de oncogénesis de cáncer de mama demostró una sucesiva acumulación de
anormalidades:
durante la progresión de la enfermedad antes de la aparición de tumores detectables; por lo que se han
realizado grandes esfuerzos para hacer uso de éstas en la detección temprana del cáncer.
Monitoreo de las características cinéticas enzimáticas de células periféricas mononucleares en pacientes con cáncer de mama
genéticas, bioquímicas e inmunes
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• los métodos de investigación clínica y diagnóstico (en particular, la mamografía de cribado) están limitados en su capacidad de pronóstico debido a importantes tasas de resultados falsos.
• Las condiciones de la membrana y el citoplasma de linfocitos difieren
estructuralmente y funcionalmente entre individuos con y sin tumores malignos.
(Microviscosidad intracelular)2015 Introducción
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Objetivo
• Determinar la posible correlación entre las características básicas (Km y Vmax) de las reacciones enzimáticas bioquímicas en células mononucleares periféricas en pacientes con BC y signos clínico-patológicos comunes en pacientes con BC.
Monitoreo de las características cinéticas enzimáticas de células periféricas mononucleares en pacientes con cáncer de mama
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Metodología del estudio
• Detección de signos de activación temprana de linfocitos basados en el cálculo de la intensidad de fluorescencia de células sanguíneas mononucleares periféricas marcadas con fluoresceína. La estimación de la cinética de este proceso fue conducida vía las constantes de Michaelis-Menten.
Monitoreo de las características cinéticas enzimáticas de células periféricas mononucleares en pacientes con cáncer de mama
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•
Monitoreo de las características cinéticas enzimáticas de células periféricas mononucleares en pacientes con cáncer de mama
Materiales y métodos
28 pacientes con BC
10 pacientes con cáncer de
colon
23 pacientes sanos
• Fueron examinados para el análisis de Km y los valores de su Vmax para células individuales.
• Las muestras de sangre y el tejido tisular fueron obtenidos a partir de departamentos quirúrgicos del centro médico de Assaf Harofeh y el centro médico Rabin.
• Los exámenes del tejido tumoral se realizaron a cargo del departamento de patología de dichos hospitales.
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• Lavadas 2 veces con PBS (pH 7.2) y resuspendidas completamente en RPMI 1640.
• FDA, método para identificación de monocitos sanguíneos mediante la utilización de estereasas inespecíficas.
• Se incubaron por media horaMonitoreo de las características cinéticas enzimáticas de células periféricas
mononucleares en pacientes con cáncer de mama
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Mediciones
• La hidrólisis enzimática de la FDA y la acumulación intracelular de fluoresceína por PBMCs individuales se midieron por el escáner célula individual en una bandeja de la célula.
• El control de la uniformidad celular se llevó a cabo por examen microscópico en la bandeja de la célula desarrollado y patentado por laboratorios.
• Uso de la FDA mide los parámetros cinéticos de la actividad esterasa de PBMCs derivadas de pacientes con cáncer y pacientes sanos.
• Km y Vmax de la reacción bioquímica para las células individuales (max 300 células / paciente) se calcularon después de las mediciones periódicas repetidas de las mismas células, las cuales fueron expuestas a diferentes concentraciones de sustrato (0,6µM, 1,2µM, 2,4 µM y 3,6µM).
• Por cada concentración de sustrato, las células fueron medidas 6 veces en intervalos aprox. de 40 s.
• Bajo la exposición secuencial FDA, la pendiente de la intensidad fluorescente entre las concentraciones sucesivas era casi cero, lo que significa que Vo se dejó caer a cero
Monitoreo de las características cinéticas enzimáticas de células periféricas mononucleares en pacientes con cáncer de mama
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ResultadosTabla 2. Características enzimáticas generales de las PBMCs en pacientes con cáncer
y en donadores sanos
Parámetros Donadores sanos (n=23)
P. Con cáncer de mama (n=28)
P. Con cáncer de colon (n=10)
Km (µM)
Sin tratamiento 1.73±0.18 1.93±0.24 2.02±0.2
PHA 2.41±0.21 2.52±0.25b 3.22±0.4b
Tejido tumoral 1.56±0.12 2.95±0.47b 3.45±0.72b
Vmax
Sin tratamiento 633.8±87.9 476.7±99.2 338.9±80.1
PHA 1995±360.3b 1094.5±131.8b 513.6±94.8
Tejido tumoral 612.5±112.6 722.9±269.1 422.1±96.3
Nota- b: P<0-05, representa la diferencia significativa entre células sin tratamiento y células incubadas con PHA o tejido tumoral
Monitoreo de las características cinéticas enzimáticas de células periféricas mononucleares en pacientes con cáncer de mama
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Valores promedio en grupos con distintos grados histopatológicos tumorales
10
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
4
Km µ
M
Células sin tratar células tratadas de tejido tumo-ral
Se encontró diferencia significativa en los valores de Km de las células no tratadas (se encontró entre los pacientes con cáncer de mama con alta (grado 1, y) y grado 2
El aumento de Los valores de Km después de la incubación con el tejido del tumor es estadísticamente significativa en pacientes con cáncer de mama conmoderadamente diferenciado ( grado 2), en comparación con el donante sanocélulas
En los pacientes con baja diferenciación de tumor ( ) el aumento del valor promedio de Km después de la exposición del tejido tumoral no fue estadísticamente significativa.
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Tabla 3. Los cambios de la Vmax (au) en varios grupos de pacientes con cáncer de mama dependiendo del grado histopatológico del tumor
Células sin tratamiento
Células tratadas con tejido tumoral
Células tratadas con fitohemaglutininas
Tumores bien diferenciados
224.9±64.8 254.9±93.7 1071.8±316.9a
Tumores moderadamente diferenciados
648.6±186.3 1111.7±479.8 1124.8±193.9
Tumores poco diferenciados
321.5±106.0 303.5±123.7 1109.2±254.9a
a P< 0.02 representa la diferencia significativa entre las células sin tratamiento y las células incubadas con fitohemaglutininas.
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Tabla 4 Características bioquímicas de los varios grupos de pacientes con cáncer de mama de acuerdo a los factores de riesgo
Factores de riesgo
Significado de los valores de Km (µM)
Positivo Negativo
Células sin tratamiento
Tejido tumoral
P a Células sin tratamiento
Tejido tumoral
P a
Metástasis 1.74±0.16 1.81±0.37 <0.85 1.68±0.016 3.7±0.67 <0.009
Sobreexpresión de la proteína Her-2/neu
1.41±0.27 2.43±0.7 <0.20 1.9±0.18 3.37±0.67 <0.04
Estrógenos Rc
1.85±0.16 2.94±0.47 <0.04 1.31±0.24 5.28±2.01 <0.09
Progesterona Rc
2.0±0.17 3.2±0.57 <0.04 1.2±0.21 4.21±1-27 <0.09
a P representa la diferencia significativa entre las células sin tratamiento y las células incubadas con tejido tumoral
172013
A) La reacción enzimática intracelular tal como se comprueba por la intensidad fluorescentede fluoresceína acumulada (la ordenada) en la sangre periférica individuo.
células mononucleares en uno de los pacientes de cáncer de mama . A, las células no tratadas; B, las células se incubaron con tejido tumoral autólogo. Cada grupo se define por las seis mediciones de intensidad de fluorescencia tomadas a seis puntos de tiempo por las mismas células individuales
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Discusión y conclusiones
• En primer lugar, en la exposición al tejido tumoral, las reacciones enzimáticas de células periféricas sanguíneas en pacientes con cáncer de mama fueron marcadamente distintas a las reacciones enzimáticas en los pacientes sanos, basados en los signos clásicos de Km y Vmax.
Monitoreo de las características cinéticas enzimáticas de células periféricas mononucleares en pacientes con cáncer de mama
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• En segundo lugar, valores más altos de Km en tejido tumoral activado de PBMCs fueron asociados a un mejor pronóstico de pacientes con cáncer de mama.
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• Finalmente, las características básicas, Km y Vmax, de las reacciones enzimáticas de glóbulos blancos mononucleares periféricos vivos puede servir como un criterio adicional para el monitoreo y pronóstico de cáncer de mama.
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• Se desarrolló una nueva metodología para la detección temprana de la activación de linfocitos basados en mediciones en estado estacionario de la intensidad de fluorescencia de células mononucleares de sangre periférica marcados con fluoresceína.
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