Bm g1 Sg2 Multiplex Pcr y Sus Aplicaciones

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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS ASIGNATURA: BIOLOGÍA MOLECULAR TEMA: MULTIPLEX PCR Y SUS APLICACIONES Profesor: Biol. Saúl Escoar Gr!"o # $ C!ar%o Se&es%re UAYAQUIL - ECUADOR INTEGRANTES: : Sa'() *!ra+'o T. Alliso' ,ra'co C. Mic-ael ,lores C. Ar&a'(o (e la INTEGRANTES: : Sa'() *!ra+'o T. Alliso' ,ra'co C. Mic-ael ,lores C. Ar&a'(o (e la

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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUILFACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

ASIGNATURA:BIOLOGA MOLECULAR TEMA:MULTIPLEX PCR Y SUS APLICACIONESProfesor:Biol. Sal Escobar Grupo 1 Cuarto SemestreGUAYAQUIL - ECUADORINTEGRANTES:: Sandy Durazno T.Allison Franco C.Michael Flores C.Armando de la A R.Jordy Chauca M.Jorge Ganchozo M.

MULTIPLEX PCR(Reaccin en cadena de la polimerasa mltiple) *Deleccin: es un tipo especial deanomala estructural cromosmica que consiste en la prdida de un fragmento deADNde uncromosoma.

Este proceso amplifica genmicas de ADN muestras usando mltiples cebadores y una temperatura mediada por la ADN polimerasa en un ciclador trmico . Multiplex-PCR fue descrito por primera vez en 1988 como un mtodo para detectar deleciones en el distrofina gen. Tambin se ha utilizado con el esteroide sulfatasa gen. En 2008, multiplex-PCR se utiliz para el anlisis de microsatlites.

*Distrofina: es una protena que previene el dao en las memranas de las clulas musculares.

TIPOS DE MULTIPLEX PCRLas reacciones de multiplexacin se pueden dividir en dos grandes categoras:

PARMETROS DE DISEO DE CEBADORES PARA MULTIPLEX PCR

VENTAJAS DE MULTIPLEX PCR

La PCR mltiple persigue amplificar simultneamente en un nico tubo distintas secuencias especficas o secuencias blanco o dianas, lo cual necesariamente implica que los reactivos mezclados y el programa utilizado sean suficiente y adecuados para permitir la deteccin de cada diana y no inhibir la de las dems.Con este fin, algunos parmetros, como la concentracin de magnesio y de primers, y el tipo y la cantidad de ADN polimerasa, pueden ajustarse experimentalmente. Para otros, en cambio, debe realizarse un diseo exhaustivo previo. MULTIPLEX PCR(Ventajas y Dificultades)

En cuanto a la calidad y cantidad de ADN molde, se debe intentar partir de la concentracin menor posible y con ausencia de sustancias inhibidoras que puedan interferir en la reaccin. Para ello, los protocolos de purificacin variarn en funcin del tipo de muestra de partida.La PCR es una tcnica que, por su aparente simplicidad y su alta sensibilidad, es muy susceptible de errores de ejecucin y de contaminaciones, por lo que la introduccin de la PCR mltiple en los laboratorios de microbiologa requiere una formacin especializada previa del personal que ejecute los anlisis.MULTIPLEX PCR(Ventajas y Dificultades)

APLICACIONES DE LA MULTIPLEX PCR

METODOLOGAMATERIAL Y EQUIPO REQUERIDO Juego de amplificacin Taq polimerasa (Taq-DNA-polimerasa recombinante; Fermentas), que se compone de:, MgCl2, amortiguador enzimtico, desoxiribonucletidos (dNTPs), primer forward inlA (o cebador inlA Fw) y primer reverse inlA (cebador inlA Rv), primer forward inlC (o cebador inlC Fw) y primer reverse inlC (cebador inlC Rv), agua grado biologa molecular. Micropipetas (100 -1,000; 10 -100 y 0.5 -10 L) Hielera con hielo frap Microtubo de PCR 200 L Microtubo 1.5 mL Gradilla para microtubos. Cajas con puntas amarillas NUEVAS (200 L) Cajas con puntas azules NUEVAS (1,000 L) Cajas con puntas ultramicro NUEVAS (10 L) 1 recipiente plstico para desechar puntas Termociclador BioRad MyCycler Guantes DNA cromosomal obtenido de la extraccin del alimento enriquecido en el medio caldo para enriquecimiento para Listeria.

Se trabajar con el DNA cromosomal extrado a partir del medio de enriquecimiento de Listeria monocytogenes. PROCEDIMIENTO