Bacterias cloacales y evaluación física de la herpetofauna...
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CIENCIA UANL / VOL. X, No. 2, ABRIL-JUNIO 2007168
*Laboratorio de Bacteriología, FMVZ-UANL.
**Laboratorio de Herpetología, FCB-UANL.
***Laboratorio de Patología, FMVZ-UANL.
****Laboratorio de Parasitología, FMVZ-UANL.
D. R. AGUILLÓN GUTIÉRREZ*, D. LAZCANO VILLARREAL**, R. RAMÍREZ ROMERO***, A. AGUIRRE RAMOS*,J.J. ZÁRATE RAMOS****, A. WONG GONZÁLEZ
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E n la actualidad, el conocimiento médi-
co en la fauna silvestre es de gran impor-
tancia, debido al interés mundial por la
conservación del hábitat y sus especies.
Por otro lado, es cada vez más común que las
personas elijan mascotas exóticas, las cuales conser-
van en sus hogares. Sin embargo, estos animales, al
igual que los domésticos, pueden ser portadores de
enfermedades que son transmitidas al humano (zo-
onosis).
Existen reportes de salmonelosis en humanos
adquirida a partir del contacto con reptiles y anfi-
bios, esto adquiere importancia para la medicina
veterinaria desde el punto de vista de la salud públi-
ca.1,2
Las bacterias más frecuentemente encontradas a
partir de muestras cloacales en reptiles y anfibios en
el estado de Nuevo León son: Bacillus spp., Escherichia
coli, Pantoea agglomerans, Enterobacter cloacae, E.
gergoviae, Pseudomonas fluorescens, Burkholdeira cepacia,
Citrobacter koseri, C. freundii, Staphylococcus aureus,
Providencia spp., Aeromonas caviae, Serratia marcescens,
Salmonella spp. y Proteus vulgaris.3
Por su piel altamente permeable, lo que facilita
el intercambio entre el organismo y el medio am-
biente, es fácil que los anfibios reflejen la sanidad
de un hábitat, ya que si el medio donde habitan
está contaminado, sus poblaciones se verán afecta-
das. La piel permeable hace que los microorganis-
mos los afecten más fácilmente.4
Un estudio previo sobre los aspectos ecológicos
de la herpetofauna del Parque Ecológico Chipinque
determinó que en éste existen seis especies de anuros,
quince de lacertilios y 22 de serpientes.5
El objetivo general de este trabajo fue establecer
una relación entre el estado físico y la flora bacteriana
cloacal de la herpetofauna y la sanidad ambiental
del Parque Ecológico Chipinque.
Descripción del área de estudio
El Parque Ecológico Chipinque se encuentra en los
municipios de Garza García y Monterrey, Nuevo
León, es una zona montañosa, y forma parte de la
Sierra Madre Oriental. Con una extensión de 1625
hectáreas, cuya mayor elevación está a 2000 msnm.
Es empleado por el público en general para activi-
dades deportivas y observación de flora y fauna.
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MetodologíaCaptura
El estudio se hizo durante 2004 en los diferentes
transectos del parque como “El empalme”, “El
Pinal” y “La Manzanita”, en los cuales se capturaron
manualmente y con guantes de cuero. dogales, pin-
zas y ganchos a los ejemplares observados, los anima-
les fueron identificados por sus señas particulares.
Evaluación del estado físico
Para obtener una adecuada evaluación física, los ejem-
plares fueron medidos en la longitud de su cuerpo,
la longitud del hocico a la base de la cola, la longi-
tud de la cola y la longitud de la parte regenerada de
la cola, en caso de haberla, también fueron pesa-
dos, sexados y revisados para detectar posibles heri-
das y se tomó la temperatura del micro-hábitat.
Procedimientos bacteriológicos
A cada ejemplar se le tomaron dos muestras cloacales
con isopos estériles, con el fin de obtener las bacte-
rias encontradas en éste.
Los isopos se colocaron en un tubo con medio
de Stuart, los cuales se mantuvieron en condicio-
nes de refrigeración.
Para identificar bacterias Gram negativas, uno de
los isopos fue introducido en Caldo Lactosado,
después en Caldo Selenite y, finalmente, en Caldo
Tetrationato. Del Caldo Lactosado se sembró en
Agar MacConkey, del Caldo Selenite a Agar Verde
Brillante y del Caldo Tetrationato a Agar Xilosa
Lisina Desoxicolato.
Una vez que hubo crecimiento bacteriano, se hizo
la observación de colonias, diferenciándolas por el
color, forma y tamaño.
Posteriormente se realizó la identificación
morfológica por tinción de Gram, y se hicieron las
pruebas bioquímicas en Agar Hierro Triple Azúcar,
Agar Hierro Lisina, Agar Citrato de Simmons, Agar
Urea, Agar Motilidad Indol Ornitina y Agar Sulfhí-
drico Indol Motilidad.
Para identificar bacterias Gram positivas, el otro
isopo fue utilizado para la siembra en Agar Chapman
y en Agar Sangre. Luego se procedió a hacer la dife-
renciación de colonias con base en su color, forma
y tamaño. Asimismo, se realizaron las observacio-
nes morfológicas por tinción de Gram. La siembra
en Agar Chapman fue con el fin de que crecieran
Staphylococcus spp., y en el caso de sembrar en Agar
Sangre fue para que crecieran posibles Streptococcus
spp. Luego se realizó la prueba de Catalasa, tanto a
las colonias crecidas en Agar Chapman como en
Agar Sangre y por último se hizo la prueba de
Coagulasa a los Staphylococcus spp.
Uso del sistema de identificación bacteriológica Vitek
Se optó por el uso de este equipo para identificar
algunas cepas Gram negativas, ya que tiene un alto
nivel de confiabilidad al determinar el tipo de bac-
teria inoculada.
La identificación bacteriológica por medio del
sistema automatizado Vitek requiere de la siembra
previa en Agar MacConkey, hacer una tinción Gram,
hacer la prueba de Oxidasa, suspender la bacteria
en solución salina, luego calibrarse la turbidez de la
solución salina inoculada con la bacteria en el
colorímetro de Vitek.
La tarjeta y el tubo se colocan en un portatarjetas,
comunicados por un popotillo por el cual el líqui-
do subirá hacia la tarjeta, eso ocurre dentro de una
cámara de vacío con que cuenta el Vitek.
Estando la tarjeta inoculada, se sella el popotillo,
después se coloca la tarjeta en el lector y el resulta-
do tarda de 4 a 18 horas.
El resultado se expresa en porcentajes de proba-
bilidad, por ejemplo, 99% Pseudomonas aeruginosa,
1% Pseudomonas fluorescens/putida. Las tarjetas cons-
tan de 30 pocillos, 29 contienen pruebas
bioquímicas, y otro más contiene un caldo para
control de crecimiento. El programa informático
del sistema Vitek determina si la reacción en cada
pocillo es positiva o negativa, midiendo la atenua-
ción de luz mediante el sistema óptico.
Resultados
Captura
Se capturaron 54 animales de 14 especies diferentes
D. R. AGUILLÓN GUTIÉRREZ, D. LAZCANO VILLARREAL, R. RAMÍREZ ROMERO, A. AGUIRRE RAMOS, J.J. ZÁRATE RAMOS, A. WONG GONZÁLEZ
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BACTERIAS CLOACALES Y EVALUACIÓN FÍSICA DE LA HERPETOFAUNA DEL PARQUE ECOLÓGICO CHIPINQUE
de reptiles y anfibios:
· 17 Sceloporus serrifer cyanogenys (figura 1)
· 14 Sceloporus olivaceus
· 7 Gerrhonotus liocephalus infernalis (figura 2)
· 3 Sceloporus torquatus binocularis
· 3 Bufo nebulifer
· 2 Eumeces brevirostris pineus
· 1 Aspidocelis gularis
· 1 Scincella silvicola caudaequinae
· 1 Hyla miotympanum
· 1 Tantilla rubra
· 1 Salvadora grahamie lineata
· 1 Sonora semiannulata semiannulata (figura 3)
· 1 Masticophis taeniatus girardi
· 1 Rhadinaea montana
Fig. 1. Sceloporus serrifer cyanogenys.
Fig. 2. Gerrhonotus liocephalus infernalis.
Evaluación del estado físico
Sólo doce ejemplares resultaron con algún daño
corporal: siete con cola regenerada: cuatro S. serrifer
cyanogenys, un S. torquatus binocularis y dos G.
liocephalus infernalis. Dos con cola cortada: S. silvicola
caudaequinae y S. olivaceus. Uno con un dedo ampu-
tado: S. serrifer cyanogenys. Uno con dos dedos
amputados: S. serrifer cyanogenys. Uno con herida en
maxilar: G. liocephalus infernais.
La tabla I muestra los datos biológicos de los
ejemplares muestreados.
Identificación bacteriológica
Se aislaron e identificaron 33 especies de microor-
ganismos, siendo un total de 450 cepas
bacteriológicas, 293 Gram negativas y 157 Gram
positivas.
Las tablas II y III muestran los resultados de los
aislamientos bacteriológicos.
En 44% de los ejemplares fue aislada la
Salmonella. A esta bacteria resultó positiva 20% de
las serpientes y 46.6% de las lagartijas.
Después de la Salmonella, el microorganismo más
encontrado en este trabajo fue la Pseudomonas
aeruginosa, encontrada en 11.7% de los animales.
Fig. 3. Sonora semiannulata semiannulata.
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Cola reg.= Cola regenerada. C cort.= Cola cortada.
H max= Herida en maxilar. 1 d. amp.=1 dedo amputado
2 d. amp.= 2 dedos amputados.
En cuanto a bacterias no reportadas en herpeto-
fauna, se identificó una Cedecea lapagei (0.22%) y
cuatro Citrobacter brakii (0.88%)
Discusión
Sin duda, la bacteria de más importancia desde el
punto de vista de salud pública aislada de herpeto-
fauna es la Salmonella, ya que se han reportado, en
muchas ocasiones, casos de humanos infectados con
este microorganismo a partir del contacto con un
reptil o anfibio.
En 23 (44%) de los animales fue encontrada la
Salmonella, no coincidiendo con DeHamel, que re-
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BACTERIAS CLOACALES Y EVALUACIÓN FÍSICA DE LA HERPETOFAUNA DEL PARQUE ECOLÓGICO CHIPINQUE
porta que de 83.6 a 93.7% de los reptiles portan
esta bacteria.6
En el caso de las serpientes, en una (20%) fue
aislada la Salmonella; en cuanto a las lagartijas, 20
(46.6%) portaban esta bacteria. En ambos casos se
coincide con DeHamel. 6
De una (20%) de las serpientes se aisló Salmonella
a diferencia de 51% que reporta Onderka.7
La Rhadinaea montana fue la serpiente en la que
se encontraron dos S. choleraesuis, subespecie
Arizonae, estando de acuerdo con Onderka que men-
ciona que hasta un 78.8% de las Salmonellas aisladas
de serpientes son S. choleraesuis sub. Arizonae.7
De 20 (46.6%) de las lagartijas fue aislada la
Salmonella, siendo está una cifra muy cercana a 48%
encontrado por Onderka.7
Arredondo coincide con este trabajo al reportar
las siguientes bacterias de la cloaca de reptiles y anfi-
bios de Nuevo León: C. koseri, C. freundii, E. coli, P.
agglomerans, E. cloacae, P. vulgaris, Providencia,
Salmonella spp., S. marcescens y S. aureus.3
De serpientes, se aislaron: C. freundii, E. amnigenus
biogrupo 1, E. coli inactiva, K. pneumoniae sub.
ozaenae, P. mirabilis, P. vulgaris, P. rettgeri, P. aeruginosa,
Salmonella choleraesuis sub. arizonae, S. aereus,
Staphylococcus coagulasa negativa y Streptococcus spp.8
La P. aeruginosa fue la segunda bacteria más aisla-
da hasta en un 11.7% (53 cepas), lo que concuerda
con Boyer, que afirma que es de las bacterias más
aislada de reptiles. También fue encontrada S.
choleraesuis sub. arizonae y E. coli, que Boyer reporta
como más comunes en serpientes, lagartijas y en
anfibios que habitan en lugares donde hay presen-
cia humana.l En este trabajo fueron aisladas dos S.
choleraesuis sub. arizonae y una E. coli del Sapo
Temporalero (Bufo nebulifer). Boyer también aísla de
serpientes y lagartijas: A. hydrophila, E. cloacae, K.
oxytoca, K. pneumoniae, P. mirabilis, P. vulgaris, y S.
liquefaciens, sólo ésta última no coincide con las
encontradas en este trabajo.9
Williams aísla del intestino de anfibios: A. hydro-
phila, Citrobacte spp., Proteus spp y Salmonella spp.10
En este trabajo se encontraron dos especies de
bacterias no reportadas en herpetofauna: Cedecea
lapagei y Citrobacter braakii, identificadas por el siste-
ma Vitek. En el caso de C. lapagei se encontró una
(0.22%), en un Sceloporus olivaceus, y en el caso de C.
brakii fueron encontradas cuatro (0.88%), dos en
Sceloporus serrifer cyanogenys, una en Sceloporus olivaceus
y una en Gerrhonotus liocephalus infernalis.
Las especies muestreadas en este trabajo de la
herpetofauna del Parque Ecológico Chipinque ya
habían sido reportadas anteriormente por Banda.5
Con los métodos de captura utilizados para la
evaluación del estado físico de la herpetofauna no
se causó daño a los ejemplares.
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Conclusiones
Se muestrearon 54 ejemplares de catorce especies
diferentes para evaluarlos físicamente y tomarles
muestras cloacales para aislar bacterias. Sólo doce
resultaron con algún daño corporal, por lo que se
concluye que en general la herpetofauna del Parque
Ecológico Chipinque está en buen estado físico.
En total se aislaron 450 cepas bacteriológicas,
293 Gram negativas y 157 Gram positivas.
Se aislaron algunas bacterias reportadas como
posibles patógenos para humanos, principalmente
la Salmonella que aunque fue 9.3% de los microor-
ganismos localizados (42 cepas), se encuentra en un
rango muy inferior al reportado en herpetofauna
mantenida en cautiverio.
Por lo tanto, se deduce que a pesar de que el
Parque Ecológico Chipinque recibe diariamente vi-
sitantes, el impacto de éstos sobre el ambiente es
mínimo al menos desde el punto de vista de la uti-
lización de la herpetofauna como herramienta diag-
nóstica para este efecto.
En general, la sanidad del hábitat es adecuada,
puesto que los reptiles y anfibios están en buen es-
tado corporal y existe poco riesgo de que sean po-
tenciales transmisores de enfermedades zoonóticas
bacterianas.
Resumen
En este trabajo se evaluó el estado físico y se toma-
ron muestras cloacales para aislamiento e identifica-
ción bacteriológica de la herpetofauna del Parque
Ecológico Chipinque. Se muestrearon 54 ejempla-
res de 14 especies diferentes. El aislamiento e iden-
tificación bacteriológica se realizó mediante la siem-
bra en diferentes medios de cultivo y por el sistema
automatizado de identificación microbiológica
Vitek. Se aislaron e identificaron 33 especies dife-
rentes de bacterias, siendo en total 450 cepas. A
partir de la evaluación del estado físico y del análisis
de las bacterias cloacales de la herpetofauna se esta-
bleció la sanidad del hábitat, la cual consideramos
es adecuada y no ha sufrido mayor impacto ambien-
tal como consecuencia de la presencia humana.
Palabras clave: Bacterias, Cloaca, Herpetofauna,
Vitek, Zoonosis.
Abstract
In this work we evaluated the physical state and took
samples of cloaca for the isolation and identifica-
tion of the bacterial flora of the herpetofauna of
the Ecological Park of Chipinque. We sampled 54
specimens of 14 different species. Isolation and iden-
tification of the bacteriological flora was made by
inoculation in different bacteriological mediums and
by the Vitek. We isolated and identified 33 differ-
ent bacterial species that totaled 450 strains. From
the evaluation of the physical state and the analysis
of the cloacal bacterias from Chipinque´s Ecologi-
cal Park herpetofauna, we established the habitat’s
environmental status, which we consider to be ad-
equate and has not suffered sufficient environmen-
tal impact by anthropogenic activities.
Keywords: Bacterias, Cloaca, Herpetofauna, Vitek,
Zoonosis.
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Recibido: 10 de octubre de 2006
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BACTERIAS CLOACALES Y EVALUACIÓN FÍSICA DE LA HERPETOFAUNA DEL PARQUE ECOLÓGICO CHIPINQUE