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Histofisiologia Animal
Aula 2 – Técnicas Histológicas
Prof. Leandro Parussolo
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Técnicas Histológicas
Para análise em microscopia óptica de
luz é necessária a preparação de
lâminas com corte de tecidos muito finos.
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Passos para confecção de lâminas
1. Coleta do Material
— Partes de órgãos são retiradas com auxílio de um bisturi, pinça ou lâmina de barbear;
— Não é indicada a extração de porções grandes (já que o objetivo é obter uma camada fina para ser analisada em microscópio óptico)
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2. Fixação do Material
— Consiste na utilização de procedimentos físicos ou químicos para imobilizar as substâncias constituintes das cells e tecidos (fornecendo maior resistência para suportar as demais etapas);
— Os agentes fixadores mais utilizados são o formol tampando e o líquido de Bouin (ambos fixam as proteínas, evitando sua degradação).
Passos para confecção de lâminas
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3. Inclusão
— Consiste na impregnação do tecido com uma substância firma que permita, posteriormente, seccioná-la em camadas delgadas;
— A parafina é a mais utilizada nesse procedimento.
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1ª etapa:
Material álcool 70% (desidratação) Xilol (diafanização) Parafina (impregnação)
— Consiste na impregnação do tecido com uma substância firma que permita, posteriormente, seccioná-la em camadas delgadas;
— A parafina é a mais utilizada nesse procedimento.
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4. Microtomia
— Consiste em utilizar um micrótomo para obter cortes sucessivos, delgados e uniformes, a partir de blocos de parafina com peças incluídas.
— Esse aparelho é formado por lâmina (fixa ou descartável) de aço, afiada, em um braço ao qual se prende o bloco e que se desloca verticalmente.
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5. Montagem da lâmina histológica
— As fitas obtidas a partir do micrótomo são transferidas para um banho-maria, como o auxílio de uma pinça, para serem distendidas;
— A água deve estar entre 3 a 8ºC abaixo do ponto de fusão da parafina utilizada;
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— Os cortes são separados individualmente em lâminas de vidro;
— As lâminas são colocadas em estufa a 60ºC para secagem (1 a 24 hrs);
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6. Coloração
— A maioria dos preparados histológicos observados nas aulas práticas são corados com uma combinação de 2 corantes: Hematoxilina & Eosina (H.E.);
— A hematoxilina se comporta como um corante básico e, assim, cora constituintes celulares e intercelulares ácidos em cor roxo-azulado;
— A eosina se comporta como corante ácido e, assim, cora as estruturas acidófilas (ex: colágeno) em rósea-avermelhado
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— Geralmente utilizada em casos específicos (ex: cortes urgentes – exames patológicos);
__ Aparelho utilizado : Micrótomo de Congelamento ou Criostatos;
__ Criostato – cortes são mais finos
Técnica de Criomicrotomia (Microtomia por Congelamento)
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Tricrômico de Masson
cora núcleo de azul escuro;
citoplasma, queratina e músculo – vermelho;
Mucigênio e colágeno – azul claro.
Corantes utilizados na rotina de
laboratórios
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Orceína
cora fibras eláticas de marrom
Artéria aorta
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Weigert
cora fibras eláticas de azul
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Prata
Cora fibras reticulares de preto
astrócitos
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Hematoxilina férrica
Cora as estriações dos músculos, os núcleos e os eritrócitos de preto.
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Wright e Giemsa
especializado em cells sanguíneas
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VÍDEO