Instituto Tecnológico Superior de Acayucan

Ingeniería Bioquímica

Cuarto semestre 401-A

Análisis Instrumental

Unidad 1: Principios del análisis instrumental 1.1. Métodos clásicos e instrumentales

Capistran Moreno Ana Silvia De Los Santos Castillo José Esteban

García Canales Rhoscio Martínez Anastasio Marcos Jair

Pascual Contreras Alan Reyes Tolentino José Carlos

Ing. Ma. Marlen Uribe Alvarado

Aplicaciones de la Turbidimetría y Nefelometría

DEFINICIONES

Turbidimetría Es un método en el que se mide la disminución de la

potencia de la radiación transmitida debido a la dispersión. Se mide en un espectrofotómetro UV/Vis.

Para determinar la concentración del analito mediante este método aplicamos:

En donde T es la transmitancia medida, It es la intensidad de la fuente de radiación transmitida, Io es la intensidad de la radiación de la fuente transmitida por un blanco.

La relación entre T y la concentración de las partículas dispersas es similar a la proporcionada por la ley de Beer:

Siendo C la concentración de las partículas dispersantes expresada como masa por unidad de volumen; b es la longitud del camino óptico y k es una constante que depende de varios factores: tamaño, forma de las partículas dispersantes y la longitud de onda.

Nefelometría Es un método para medir la intensidad de una

radiación dispersa en un ángulo de 90 ° con respecto a la fuente. Se mide en un espectrofluorímetro.

Para determinar la concentración de analito en este método aplicamos:

Donde es una constante empírica del sistema, es la intensidad de la fuente de radiación incidente. El valor de depende de una curva de calibración preparada, usando una serie de patrones de concentración conocida.

Aplicaciones

Imunoprecipitación La imunoprecipitación cuantificada por

turbidimetría o nefelometría se emplea hoy en los laboratorios de autoinmunidad para determinar el factor reumátide.

Tanto en los reactivos como en el suero pueden existir partículas que produzcan una dispersión de luz no deseada ej. lipoproteínas, quilomicrones También puede interferir la suciedad. ·

La intensidad de la luz dispersada. Las proteínas suelen tener un pico de absorción en el ultravioleta y los cromógenos del suero entre 400-425nm; por todo ello se suele trabajar a frecuencias que oscilen entre 320-380nm y 500-600nm.

Inmunodifusión radial En este caso se añade un antisuero específico a la

agarosa que, a su vez, se vierte sobre placas. Se forman pozos en el gel y se colocan en ellos estándares de proteínas y problemas (antígenos). El antígeno difunde en el gel durante varias horas y va reaccionando con el Ac. En la zona de equivalencia se produce un anillo de precipitación

Inmunodifusión doble o técnica de Ouchterlony Se forman pozos en el gel de agarosa,

generalmente en patrón de roseta. Se depositan antisueros específicos en los pozos centrales y los estándares de proteínas y los problemas en los pozos circundantes. Al difundir las muestras en el gel, donde el anticuerpo y el antígeno alcanzan la equivalencia, se forman bandas de precipitados insolubles.

La posición y forma de la banda se determinan según la concentración del antígeno y del anticuerpo, y sus tamaños. La distancia de las bandas con respecto al anticuerpo es directamente proporcional a la cantidad de antígeno presente.

REFERENCIAS   L. Hernández, C. González, Introducción al Análisis

Instrumental. Editorial: Ariel Ciencia (2002)   R. Matissek, F.M. Schnepel, G. Steiner, Análisis de los

Alimentos. Editorial Acribia. S.A   McPherson RA, Pincus MR, eds. Henry's Clinical

Diagnosis and Management byLaboratory Methods. 21st ed. Philadelphia, Pa: Saunders Elsevier; 2006.

  http://webs2002.uab.es/ipividori/qca%20analii/T7.pdf