Aislamiento de Thiobacillus
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Aislamiento de Thiobacillus ferroxidans Fase I Preparación del medio 9K liquido, titular mineral e incubar Fase II Preparación del medio 9K solido Preparación para el medio liquido 9K (500 ml) (NH 4 ) 2 SO 4 ……………………… 3.00 g/L para 500 ml 1.5 gr Mg SO 4 . 7H 2 O……………….. 0.5 g/L para 500 ml 0.25 gr K 2 HPO 4 …………………………. 0.5 g/L para 500 ml 0.25 gr FeSO 4 . 7 H 2 O ……………….. 7.50 g/L para 500 ml 3.75 gr H 2 O Destilada……………….. 1 L pH final: 2 bajar con H 2 SO 4 (10N) No es necesario esterilizar Introducir la muestra (calcopirita o pirita) en el medio liquido y dejar actuar diariamente o interdiario removiendo hasta que aparezcan un color anaranjado en el medio, lo que evidencia la presencia de la bacteria, luego preparar el medio solido Preparacion del medio solido 9K (150ml) Solución A (NH 4 ) 2 SO 4 ……………………… 0.5 gr para 75 ml 0.075 gr Mg SO 4 . 7H 2 O…………………. 0.1 gr para 75 ml 0.015 gr KCl ……………………………… 0.75 gr para 75 ml 0.1125 gr H 2 O Destilada………………… 500 ml si: 500 ml 1 Litro (1000 ml) pH final: 4.6 X 150 ml X = 75 ml Bajar con H 2 SO 4 (10N) Se autoclava Solución B Agar……………………………….6 gr. Para 72 ml 0.9 gr H 2 O Destilada……………….. 480 ml si: 480 ml 1 Litro (1000 ml) X 150 ml X = 72 ml Se autoclava Solución C FeSO 4 . 7 H 2 O ……………….. 2 gr. Para 1.5 ml 0.3 gr
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Aislamiento de Thiobacillus ferroxidans
Fase I Preparación del medio 9K liquido, titular mineral e incubarFase II Preparación del medio 9K solido
Preparación para el medio liquido 9K (500 ml)
(NH4)2SO4……………………… 3.00 g/L para 500 ml 1.5 grMg SO4 . 7H2O……………….. 0.5 g/L para 500 ml 0.25 grK2HPO4 …………………………. 0.5 g/L para 500 ml 0.25 grFeSO4 . 7 H2O ……………….. 7.50 g/L para 500 ml 3.75 grH2O Destilada……………….. 1 LpH final: 2
bajar con H2SO4 (10N)No es necesario esterilizar
Introducir la muestra (calcopirita o pirita) en el medio liquido y dejar actuar diariamente o interdiario removiendo hasta que aparezcan un color anaranjado en el medio, lo que evidencia la presencia de la bacteria, luego preparar el medio solido
Preparacion del medio solido 9K (150ml)
Solución A(NH4)2SO4……………………… 0.5 gr para 75 ml 0.075 gr Mg SO4 . 7H2O…………………. 0.1 gr para 75 ml 0.015 grKCl ……………………………… 0.75 gr para 75 ml 0.1125 grH2O Destilada………………… 500 ml si: 500 ml 1 Litro (1000 ml)pH final: 4.6 X 150 ml X = 75 ml
Bajar con H2SO4 (10N) Se autoclava
Solución BAgar……………………………….6 gr. Para 72 ml 0.9 grH2O Destilada……………….. 480 ml si: 480 ml 1 Litro (1000 ml)
X 150 ml X = 72 mlSe autoclava
Solución CFeSO4 . 7 H2O ……………….. 2 gr. Para 1.5 ml 0.3 grH2O Destilada………………… 10 ml si : 10 ml 1 Litro (1000 ml)Bajar con H2SO4 (10N) No se autoclava X 150 ml X = 1.5 ml
Solución DNa2SO3 . 5H2O……………….. 2gr. Para 1.5 ml 0.3 grH2O Destilada………………… 10 ml si : 10 ml 1 Litro (1000 ml)
X 150 ml X = 1.5 mlNo se autoclava
Entonces 75 ml + 72 ml + 1.5 ml + 1.5 ml = 150 ml
Mezclar solución A con la Solucion C a 45 ºC (baño maria)
Mezclar solución B con la Solucion D a 45 ºC (baño maria)
Solución A Solución C
Solución A + C
Solución B Solución D
Solución B + D
Mezclar solución A+C con la Solucion B+D (en baño maria) a 45 ºC
Con un asa de Koll sacar muestra del medio líquido que esta de color anaranjadoSembrar por estrias en las placas con medio solido 9 K, e incubar a 30ºC por 15 días
Solución A + C Solución B + D
Plaquear
Solución (A + C) + (B+D)
Solución (A + C) + (B+D)
