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ACTUALIZACION TOMA DE MUESTRAS VIROLOGICAS

M. Judith Mora R. Jefe Subdepto. Enfermedades Virales ISP

METODOS DE DIAGNOSTICO VIRAL A. DETECCION DE VIRUS O PRODUCTOS VIRALES

•Aislamiento viral en cultivos celulares. Enterovirus •Inoculación en animales de laboratorio: Rabia •Inoculación en huevos embrionados: Influenza

B. DETECCIÓN DIRECTA DE VIRUS O PRODUCTOS VIRALES.

•Inmunofluorescencia (IF).V Respiratorios •Inmunoensayo enzimático (ELISA). Rotavirus

C. DETERMINACION DE ANTICUERPOS /Ag Métodos serológicos (sueros pareados o muestra única)

•Inhibición de la Hemoaglutinación (IHA). Influenza

•Inmunofluorescencia (IF). VIH •ELISA (IgM –IgG) Dengue, Hanta, etc.

D. DETECCION DE MATERIAL GENETICO VIRAL

• Reacción de polimerasa en cadena (PCR)

GENERALIDADES PARA TOMA Y ENVIO DE

MUESTRAS PARA ESTUDIO VIROLOGICO

• PERIODO OPTIMO DE RECOLECCION

– Ej: Aislamiento fase aguda , Ac IgM-IgG

• TIPO DE MUESTRA

– Ej: Sangre c/EDTA, suero

• SITIO DE OBTENCION

– Ej: Deposición

• TECNICA DE OBTENCIÓN DE LA MUESTRA

– ANF – Tórula faríngea

• RECOLECCION DE LAS MUESTRAS

– Envase estéril, cierre hermético, etc

• TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS

– Temperatura, medio transporte, etc

FORMULARIO DE ENVIO

Incluir formularios de datos relativos a la muestra

identificar al remitente y al destinatario.

1º

2º: protege el

embalaje/envase

secundario de los

daños físicos

durante el

transporte.

3º

Tº

Formularios

form.xps

Virus Entéricos • Meningitis Viral

• Vigilancia PFA

• Vigilancia Rotavirus

– Hospitales centinelas (V, VIII, RM) MINSAL-OPS

•

• Vigilancia Gastroenteritis virales (Norovirus, ADV, Astrovirus, Rotavirus): – Centinelas ambulatorios

– Estudio Brotes

Nombre exámen / Prestación

Método Tipo de muestra Requisitos previos

Volumen de muestra

Transporte y conservación

Horario recepción de muestras / cepas

Plazo de respuesta

en días hábiles

Aislamiento de Enterovirus

Aislamiento en cultivos celulares

Deposición: envase estéril, tapa rosca. sin medio de transporte LCR: envase estéril, tapa rosca. Liq.pericárdico: envase estéril tapa rosca

0-5 días de evolución

Deposición: 1 cuch. de té LCR o Líq Pericard: 1 ml ped 2 ml adulto

Congelar (-18º a -20ºC) o refrigerar (2º a 8ºC)

Lunes a viernes de 8:00 a 12:00 hrs.

15

Vigilancia Poliovirus (sospechosos PFA)


Deposición sin medio de transporte en envase esteril tapa rosca

0-14 días de evolución (OMS)

10 grs. (1 cuch. de té)

Congelar (-18º a -20ºC) y enviar en frío 2º a 8ºC. .

15

Vigilancia de Virus Gastroentericos: Adenovirus entéricos, Astrovirus, Norovirus , Rotavirus y otros

Inmunoquímica y RT-PCR

* Deposición sin medio de transporte en envase esteril tapa rosca .

* 0-3 días de evolución en niños menores 5 años (consultorios Centinelas ambulatorios)

10 grs. (1 cuch. de té)


21

(5 a 10 muestras por Brote de diferentes pacientes)

0-3 días de evolución en brotes de gastroenteritis notificados a SEREMIS

10 grms. (1 cuch. de té)


Vigilancia Rotavirus (Centros Centinelas)

Técnicas Serológicas Inmunoenzimáticas y genotipificación

Deposición sin medio de transporte, envase esteril tapa rosca

0-3 días de evolución en niños, hasta 5 años de edad, hospitalizados

10 grms. (1 cuch. de té)


21

• Vigilancia Virus Respiratorios (ADV, VRS, PI)

e Influenza A ,B

– Vigilancia Influenza

– Vigilancia Influenza IRA grave

•

Virus Respiratorios

Nombre exámen / Prestación Método Tipo de muestra Requisitos previos Volumen de muestra


Plazo de respuesta

en días hábiles

Aislamiento de Influenza A y B Aislamiento en cultivos celulares

a) Gargarismo b) Aspirado nasofaríngeo c) Tórula con secreción nasofaríngea d) Biopsia de tejidos

Máximo 3 días de evolución

Con medio de transporte viral Hanks s con 0,5% gelatina mas antibiótico en frío con refrigerantes T 2 – 8 C

15

Aislamiento Virus Respiratorio Sincicial , Adenovirus, Parainfluenza

a) Aspirado nasofaríngeo b) Tórula con secreción nasofaríngea c) Biopsia de tejidos (d ADV: Tórula secreción conjuntival )

Hasta 5 días de evolución

Inmunofluorescencia Indirecta para Virus Influenza A, B

Inmunofluorescencia

Frotis fijado Aspirado nasofaríngeo


En frío con refrigerantes. T 2-8 C

3

Inmunofluorescencia Indirecta para VRS, PI, Metapneumovirus


PCR para Influenza A, B PCR

Aspirado nasofaríngeo o tórula secreción nasofaríngea o biopsia pulmón

Hasta 3 días desde inicio de los síntomas

Con medio de transporte viral Hanks s con 0,5% gelatina mas antibiótico en frío con refrigerantes T 2 – 8 C

5

Inhibición de la Hemaglutinación para Virus Influenza A, B

Inhibición de la Hemaglutinación (IHA)

Suero extraído en forma estéril enviar en tubo estéril tapa rosca

Muestras pareadas 1era. fase aguda y 2da. fase convaleciente

1 ml (ped) 2 ml (adul)

En frío con refrigerantes. T 2-8 C

15

• Vigilancia Sarampión-Rubéola

• Otras: CMV, Herpes

Virus Exantemáticos


Método Tipo de muestra

Requisitos previos

Volumen de muestra pediátrica

Volumen de muestra adulto


Horario recepción

Plazo de

respuesta en

días hábile

s

Vigilancia Sarampión Rubeola

ELISA, IF, aislamiento (según algoritmo ISP)

Suero extraído en forma estéril enviar en tubo estéril tapa rosca. Enviar Aspirado Nasofaríngeo (*) u Orina

Enviar muestras con formulario de vigilancia con la totalidad de los antecedentes solicitados

1 ml suero. Aspirado nasofaringeo en medio de transporte viral o 50 ml orina

2 ml suero. Aspirado nasofaringeo en medio de transporte viral o 50 ml orina

Aspirado con medio de transporte viral Hanks s con 0,5% gelatina mas antibiótico. Enviar con unidades refrigerantes Tº 2-8ºC.

4

Estudio Inmunidad Sarampión

Inmunofluorescencia (IF)

Suero extraído en forma estéril enviar en tubo estéril tapa rosca

No tiene 1 ml 2 ml

En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes

5

Vigilancia Síndrome Rubeola Congénita .

ELISA IgM (algoritmo ISP)

Suero en tubo estéril tapa rosca .

Recién nacidos < 1 año

1 ml de suero


10

Serología IgG Rubéola ELISA IgG Suero, en tubo estéril tapa rosca .

1 ml de suero

3 ml suero


10


Método Tipo de muestra

Requisitos previos




Horario recepción

Plazo de

respuesta en

días hábil

es

Serología IgG CITOMEGALOVIRUS

ELISA Suero en tubo estéril tapa rosca .

Estudio transplante

1 ml de suero

3 ml suero


10

Serología IgM Citomegalovirus

ELISA suero, en tubo estéril tapa rosca.

IgM recién nacidos < 3 meses con Síndrome de TORCH

1 ml de suero


10

Aislamiento de Citomegalovirus


Orina,Recolección: segundo chorro. Envase estéril, tapa hermética

24 horas de evolución

3 ml 3 ml Refrigerar sin medio de transporte viral


21

Aislamiento Herpes Simplex


a) LCR en tubo estéril tapa rosca o de goma b) Contenido vesicular (Líquido de lesión) c) Tórula Secreción Vaginal

De 0- 2 días LCR: 1 ml

LCR: 1 ml

Con medio de transporte viral Hanks s con 0,5% gelatina mas antibiótico. Enviar con refrigerantes T 2 – 8 C


7

Aislamiento de Virus Varicela Zoster


Tórula de lesión vesicular

Hasta 3 días



15

VIH / SIDA • Confirmación VIH:

VIH adulto

VIH pediátrico (< 2 años)

• Carga Viral VIH

– CONASIDA- MINSAL para la atención pacientes beneficiarios de Fonasa con el objeto de evaluar efecto de terapia ARV.

Estructura del VIH

Gp12

0

Gp41

p2

4RNA

TR


Método Tipo de muestra /cepa

Requisitos previos





Plazo de

respuesta en

días hábil

es

Confirmación VIH adulto

* Técnicas serológicas (según Algoritmo del ISP: ELISA, IFI, LIA, Ag)

* Suero o plasma

Muestra reactiva al tamizaje de VIH

1 ml

En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes.

14

* Técnicas serológicas y de Biología Molecular (según Algoritmo de confirmación: PCR, RNA)

* Sangre con anticoagulante EDTA

A solicitud de la Sección SIDA

4 ml

Temperatura ambiente (15-25 ºC) no más de 24 hrs. desde la extracción hasta la recepción en el laboratorio

Lunes a jueves de 8:00 a 12:00 hrs.

14

Confirmación de VIH pediátrico

Algoritmo con técnicas serológicas y de Biología molecular

Sangre con anticoagulante EDTA

Menores de 2 años, hijos de madres VIH (+), protocolo diagnóstico de sida pediátrico (Resolución Minsal).

4 ml

Temperatura ambiente (15-25 ºC) no más de 24 horas desde la extracción hasta la recepción en el laboratorio.

Lunes a jueves de 8:00 a 12:00 hrs.

14

Carga viral para VIH

Cuantificacion de RNA viral plasmatico

Sangre con anticoagulante EDTA. Tubo tapa lila sistema de extracción al vacío.

Cuantificación de RNA viral en seguimiento de pacientes que viven con VIH (licitación MINSAL)

3 ml 6 ml



10

Virus Hepáticos

Detección HBsAg, VHC:

Estudio de brotes Hepatitis A


Método Tipo de muestra Requisitos previos Volumen de muestra pediátrica



Plazo de respuesta en días hábiles

Confirmación Antígeno de Superficie Hepatitis B

ELISA, neutralización (según algoritmo ISP)

Suero en tubo estéril tapa rosca o de goma

Muestra con tamizaje doblemente reactivo a HBsAg

1 ml 3 ml


15

Confirmación de Virus Hepatitis C

ELISA, RT-PCR *, Inmunoblot (según Algoritmo)

* Plasma con anticoagulante (EDTA) . En tubo estéril tapa rosca o de goma

Muestra Doblemente reactiva a Ac-VHC.

3 ml de sangre (EDTA) y 1 ml de plasma

5 ml sangre (EDTA) y 3 ml plasma

En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes.

15

Vigilancia brotes de Hepatitis A

ELISA (IgM) Suero en tubo estéril tapa rosca .

0-10 días desde inicio los síntomas

1 ml de suero

3 ml suero


7

• Virus Enf. Emergentes:

• Hantavirus

• Virus Dengue

• Virus Nilo Occidental :







Plazo de

respuesta en

días hábile

s

Vigilancia Infección por Hantavirus

ELISA, RT-PCR (según algoritmo del ISP)

a)Sangre con EDTA (tubo tapa lila) y Sangre sin anticoagulante (tubo tapa roja) b)Tejido de pulmón en tubo estéril tapa rosca, sin presevantes. (punción cardiaca)

Caso sospechoso Inicio sintomas

3 ml de sangre

5 ml sangre


Lunes a domingo las 24 horas

3

Vigilancia Dengue / Fiebre Amarilla

* ELISA *Aislamiento/ PCR (según algoritmo del ISP)

Suero extraído en forma estéril. En tubo estéril tapa rosca .

Con 6 o más días de evolución. IgM Para estudio brote muestra dentro de los 3 primeros días de evolución

2 ml 3 ml En frío con refrigerantes. T 2-8 C

10

Vigilancia Virus del Nilo Occidental

Técnicas Serológicas ELISA

LCR y Suero en tubo estéril tapa rosca .

> a 8 días de evolución.

1 ml suero y 1 ml de LCR

3 ml suero y 2 ml de LCR

En frío de 2 a 8 ºC con unidades refrigerantes

10

Lab. Virus Oncogénicos y otros






Plazo de

respuesta en

días hábile

s

Confirmación HTLV I/II ELISA , IF, PCR (según algoritmo)

Sangre con anticoagulante (EDTA o citrato)

Muestra Doblemente reactiva y en casos de sospecha de Leucemia Linfotrópica y Paraparesia Espástica

3ml 5 ml

En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes. No más de 4 ds. desde la extracción hasta la recepción en el laboratorio

15

Estudio de Brotes de Parotiditis

Serología, PCR

Suero o plasma y Orina en tubo estéril

Sólo estudio de brote según circular MINSAL

1 ml suero y 3 ml de orina

3 ml suero y 3 ml de orina


7

PCR para Virus Papiloma Humano (VPH)

PCR

Tórula de lesión o raspado de zona sospechosa de infección genital con medio de transporte estéril.Biopsias de tejidos o condiloma en tubo estéril tapa rosca con medio de transporte.


10

Factores a revisar:

• Demora en envío de las muestras desde laboratorio

• Cumplir indicaciones de envío (BS, envase, Tº)

• Identificación correcta del paciente

• Formulario indicado y vigente

• Completar antecedentes del formulario: – Fecha obtención muestra

– Inicio síntomas (ds evolución)

– Resultados exámenes solicitados (Ej. Absorbancias)

– Vacunas (Ej: Polio)

– Etc.

• Diferencias entre el código del tubo y del antecedente.

• Volumen de muestra solicitado

Gracias

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