ES 2

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298

A1

19 OFICINA ESPAÑOLA DEPATENTES Y MARCAS

ESPAÑA 11

21

Número de publicación: 2 489 298Número de solicitud: 201330081

51 Int. CI.:

C07C 49/637 (2006.01)

A61K 31/122 (2006.01)

12 SOLICITUD DE PATENTE A1

54 Título: USO DE SESQUITERPENOS EREMOFILANOS COMO GARRAPATICIDAS

71 Solicitantes:

CONSEJO SUPERIOR DE INVESTIGACIONESCIENTÍFICAS (CSIC) (70.0%)SERRANO, 11728006 MADRID ES;UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID(20.0%) yUNIVERSIDAD DE SANTIAGO DE CHILE (10.0%)

72 Inventor/es:

GONZÁLEZ COLOMA , Azucena;REINA ARTILES, Matías yOLMEDA GARCÍA, Ángeles Sonia

74 Agente/Representante:

UNGRÍA LÓPEZ, Javier

22 Fecha de presentación:

24.01.2013

43 Fecha de publicación de la solicitud:

01.09.2014

56 Se remite a la solicitud internacional:

PCT/ES2014/070043

57 Resumen:Uso de sesqui terpenos eremof i lanos comogarrapat ic idas.Uso de al menos un sesquiterpeno eremofilano defórmula (I) como garrapaticida, donde R{sup,1} es H oOH; [1] es un enlace simple o doble; X se seleccionadel grupo que consiste en ausente, CH{sub,3}, OH,OOH y junto a Z forma un epóxido de estructura (Z-IV); y Z se selecciona del grupo que consiste en (Z-I),(Z-II), (Z-III) y junto a X forma (Z-IV), preferiblementeel sesquiterpeno (I) es dehidrofukinona, 1 1-hidroxieremofi l -6(7), 9(10)-dien-8-ona, 7-11-epoxieremofi l-9(10)-en-8-ona, o una mezcla.Preferiblemente el sesquiterpeno actúa frente agarrapatas del género Hyalomma spp. y /oRhipicephalus spp. En particular, uso para tratar oprevenir una enfermedad causada por garrapatas enun humano o animal; y uso para prevenir, controlar oeliminar la presencia de garrapatas en el entorno encontacto con un animal o humano. Así como unproducto que comprende dicho sesquiterpeno defórmula (1).

2

DESCRIPCIÓN

Uso de sesquiterpenos eremofilanos como garrapaticidas.

SECTOR DE LA TÉCNICA 5

La presente invención se sitúa dentro del sector ganadero. En particular, proporciona un producto fitosanitario para combatir las garrapatas que afectan especialmente al ganado vacuno, ovino y caprino. Adicionalmente, la presente invención también se sitúa dentro del sector farmacéutico y veterinario, ya que dicho producto fitosanitario, sesquiterpeno 10

eremofilano, también se puede utilizar para tratar o prevenir una enfermedad causada por garrapatas. ESTADO DE LA TÉCNICA 15

La garrapata figura como uno de los ectoparásitos de mayor importancia económica a escala mundial, por la disminución que ocasiona en la producción de ganado bovino, caprino, así como lanar y caballar. Consecuencia directa de la parasitación por garrapatas son la menor cantidad de alimentos ingeridos por el ganado, las pérdidas de peso por toxinas e irritación, las anemias producidas por pérdidas de sangre y transmisión de 20

hemoparásitos (Babesia bigemina, B. bovis, Anaplasma marginale) y la considerable depreciación de las pieles a causa de las perforaciones producidas por las picaduras. Además, estas perforaciones permiten el acceso de bacterias, micosis dermales y larvas de moscas (miasis). Al lesionar la piel para chupar sangre, muchas especies de garrapatas pueden transmitir también los más diversos agentes patógenos como virus, bacterias, 25

riquetsias y protozoos. Esto puede conducir a enfermedades agudas, crónicas o incluso, a la muerte. Desde el punto de vista de los daños y el potencial transmisor de enfermedades, a escala mundial adquieren importancia veterinaria siete géneros de garrapatas Ixodidae 30

(Amblyomma spp., Boophilus spp., Dermacentor spp., Haemaphysalis spp., Hyalomma spp., lxodes spp. y Rhipicephalus spp.) y dos de Argasidae (Ornithodorus spp. y Otobius spp.) Rhipicephalus (Boophilus) microplus es considerado el más importante parásito del ganado, infesta principalmente bovinos, reduciendo la producción ganadera, produce pérdida de 35

peso en los animales y disminuye la producción de leche. Su mayor importancia radica en ser vector de enfermedades limitantes en el trópico como la babesiosis (Babesia bovis, Babesia bigemina) y anaplasmosis (Anaplasma marginale). Las especies de garrapatas de Hyalomma tienen una gran importancia económica en varios 40

países tropicales y subtropicales de África, Asia y Europa. Las especies típicas son Hyalomma anatolicum anatolicum, Hy. marginatum rufipes, Hy. truncatum y Hy. detritum detritum, que se alimentan como adultos en el ganado vacuno, ovejas y cabras. Hyalomma dromedarii está especializada para alimentarse de los dromedarios. Por otro lado, el género Hyalomma puede hacer de vector de transmisión de enfermedades en humanos como la 45

Fiebre hemorrágica de Crimea-Congo. Hyalomma lusitanicum es una especie de distribución estrictamente mediterránea (Estrada et al. Ticks of Domestic Animals in the Mediterranean Region. A guide to Identification of Species. ICTTD. Universidad de Zaragoza) por lo que es poco conocida y estudiada. Sin 50

embargo, en España es la especie de garrapata exófila más abundante en el Centro de la Península Ibérica (86%) (Barandika et al, Differences in Questing Tick Species Distribution Between Atlantic and Continental Climate Regions in Spain, Journal of Medical Entomology,

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2011, 48(1):13-19). Además de la acción patógena directa derivada de su alimentación, esta especie está considerada vector de Theileria annulata una protozoosis del ganado vacuno endémica en su área de distribución para la que no existe tratamiento curativo comercializado y que produce numerosas pérdidas económicas en nuestra ganadería. Además, en estudios recientes se ha demostrado la presencia en esta especie de garrapata 5

de agentes bacterianos que afectan al hombre, como Anaplasma phagocytophilum, responsable de la anaplasmosis; Borrelia spp (Borrelia burgdorferi ss y B. garinii) agentes de la borreliosis, Francisella tularenisis productor de la tularemia, o Coxiella burnetii el agente de la fiebre Q. (Toledo et al, Tick-Borne Zoonotic Bacteria in Ticks Collected from Central Spain. Am J Trop Med Hyg July 2009 vol. 81 no. 1 67-74; Toledo et al. Detection of Coxiella 10

burnetii in ticks collected from Central Spain. Vector Borne Zoonotic Dis. 2009 Oct;9(5):465-8.). Finalmente, la máxima alarma relativa a esta especie se ha desencadenado cuando el equipo del Dr. Oteo publica el hallazgo de un Hyalomma lusitanicum infectado con el virus 15

productor de la fiebre hemorrágica Crimea Congo en la Rioja (Crimean-Congo Hemorrhagic Fever Virus in Ticks, Southwestern Europe, 2010. Agustín Estrada-Peña, Ana M. Palomar, Paula Santibáñez, Nely Sánchez, Miguel A. Habela, Aránzazu Portillo, Lourdes Romero, and José A. Oteo. Emerg Infect Dis. 2012 January; 18(1): 179–180). Hasta la fecha, ningún producto había sido probado específicamente para esta especie, cuya importancia en 20

veterinaria y salud queda demostrada por lo mencionado anteriormente. Las sustancias activas más empleadas en el mercado como garrapaticidas sintéticos pertenecen principalmente a las siguientes clases químicas: organofosforados, amidinas, piretroides, fenilpirazoles, endectocidas (lactonas macrocíclicas) y benzoilureas. 25

Entre los organofosforados se encuentra clorfenvinfos y cumafós. Actualmente su uso es bastante bajo en ganado. La resistencia de las garrapatas a los organofosforados está muy extendida. 30

Dentro de la clase piretroide se distinguen compuestos tales como cipermetrina, insecticida no sistémico de la familia de los piretroides sintéticos que actúa por contacto e ingestión; flumetrina utilizado en bovinos, ovinos, caprinos, porcinos y aves contra garrapatas, ácaros, sarna, moscas, piojos; deltametrina, garrapaticida de contacto también mosquicida, sarnicida y piojicida. La resistencia a los piretroides está muy extendida y a menudo se 35

comercializan mezcados con organofosforados, fenilpirazoles, neonicotinoides, etc. Amitraz, un triazapentadieno perteneciente a la familia de las amidinas que se utiliza para controlar la araña roja, minadores de hoja, insectos de la escala, pulgones, así como garrapatas, ácaros, piojos y otras plagas de animales. Es un producto de uso muy extendido 40

en países como Méjico. La resistencia está en aumento. Las principales endectocidas (lactonas macrocíclicas) contra garrapatas son: abamectina, doramectina, eprinomectina, ivermectina y moxidectina. El uso de la ivermectina, en países como Méjico, se ha visto aumentado considerablemente en los últimos años. Se ha 45

observado resistencia ante estos principios activos. Fipronil es un principio activo dentro de los fenilpirazoles. Las benzoilureas (o dimiloides) son inhibidores del desarrollo, que impiden que los estadios 50

inmaduros completen su desarrollo. Se distingue el principio activo fluazurón.

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Sin embargo, estos productos sintéticos presentan en muchos casos problemas de toxicidad a nivel ambiental, animal y humano; desarrollo de resistencia; toxicidad de algunos compuestos; y contaminación de la carne y la leche del ganado, por lo que en algunos casos no está autorizado su uso o se necesitan tiempos de espera para el uso de la carne y la leche del ganado tratado. Todo esto hace que no sean adecuados para su utilización en 5

ganadería ecológica. (Brooke W. Bissinger et al. Pesticide Biochemistry and Physiology. Volume 96, Issue 2, February 2010, Pages 63–79). Además, el uso inadecuado e indiscriminado de sustancias de síntesis químicas ha ocasionado múltiples problemas en el control de las garrapatas, ya que desde hace varios 10

años se está desarrollando resistencia a varios de estos productos. (J-F Graft et al. Parasitology, 129(S1), 2004, S427-S442 y J. E. George et al Parasitology, 129(S1), 2004, S353 S366). Tal como se ha comentado anteriormente, el principal problema del uso indiscriminado de 15

antiparasitarios convencionales ha sido la aparición de cepas resistentes. Ese es el motivo por el que actualmente Rhipicephalus (Boophilus) microplus, una de las especies, en teoría, más fáciles de combatir, por cuanto todo su ciclo se completa en el hospedador, es actualmente uno de los principales problemas en la ganadería de países de Latinoamérica y África (Jonsson, N.N., Hope M. 2007. Progress in the epidemiology and diagnosis of amitraz 20

resistance in the cattle tick Boophilus microplus- Vet. Parasitol. 146: 193-198; Miller, R.J., B.D. Ronald and J.E. George. 2007. First Report of Permethrin-Resistant Boophilus microplus (Acari: Ixodidae) Collected within the United States. J. Med. Entomol 44(2): 308-315.). 25

Conscientes de que esta situación puede repetirse con otras especies de garrapatas y en otras áreas, la tendencia actual del tratamiento pasa por la búsqueda de nuevas sustancias que permitan la rotación de tratamientos (Thullner, F., Willadsen P., and Kemp, D. 2007. Acaricide Rotation Srategy for Managing Resistance in the Tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Acarina: Ixodidae): Laboratory Experiment with a Field Strain from Costa Rica. J. 30

Med. Entomol. 44(5): 817-821) y, en la medida de lo posible, utilizando productos naturales compatibles con la agricultura y ganadería ecológicas (Olmeda et al, 2008. Toxicity of Oxalic Acid against Adult Hyalomma lusitanicum ticks (Ixodida: Ixodidae) in Laboratory Conditions: LD50, J. Med.Entomol. 45(4): 715-719.) mediante el establecimiento de un plan de control integrado. 35

En el estado de la técnica se conoce la actividad frente a garrapatas Hyalomma spp. y Rhipicephalus (Boophilus) de varios compuestos de origen natural. En particular, Maupin, Gary, O. et al describen la capacidad de los sesquiterpenos eremófilanos como control de garrapatas (PCT/US01/47736), entre los que se nombran valenceno, nootkatol, epinootkatol, 40

y nootkatona. Adicionalmente, Sardá Ribeiro LV et al. describen el uso de un aceite esencial de Drimys brasiliensis Miers frente a larvas de las garrapatas del ganado Rhipicephalus (Boophilus) microplus y garrapatas de perro Rhipicephalus sanguineus (Sardá Ribeiro LV et al., Parasitol. Res., 102, 2008, 531-535). Por otro lado, Dolan M. C. et al. ha descrito la capacidad de nootkatona y carvacrol para suprimir Ixodes scapularis y Amblyomma 45

americanum en la enfermedad de lyme (Dolan MC et al. Journal of Econoic Entomology, 102(6), 2009, 2316-2324). Adicionalmente, Macchioni et al. ha identificado varios sesquiterpenos y su actividad acaricida contra Psoroptes cuniculi como componentes principales de aceites de hojas de Laurus nobilis y L. novocanariensis (Macchioni et al., Journal of Essential Oil Research. Vol 18(1), 2006). También, Sevki Coskun et al. nombra la 50

capacidad garrapaticida del carvacrol del aceite esencial sobre Rhipicephalus turanicus (Sevki Coskun et al Parasitol Res (2008) 103:259–261).

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Con respecto al género Hyalomma, H. Cetin et al. ha descrito la capacidad acaricida del carvacrol procedente del aceite esencial del Satureja thymbra L. sobre Hyalomma marginatum (H. Cetin et al Veterinary Parasitology. Volume 170, Issues 3–4, 24 June 2010, 287–290). 5

Sin embargo, los compuestos denominados sesquiterpenos comprenden una amplia gama de esqueletos distintos, con propiedades y actividades muy diferentes. Así, para un experto en la materia no es evidente que un sesquiterpeno diferente a los descritos en alguno de los documentos citados anteriormente muestre actividad acaricida o garrapaticida. 10

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En un primer aspecto la presente invención se refiere al uso de al menos un sesquiterpeno eremofilano de fórmula (I) como garrapaticida,

O

R 1

CH 3

CH 3

[1]

X

Z

C 7

(I) 15

donde R1 se selecciona del grupo que consiste en H y OH; [1] se selecciona del grupo que consiste en enlace simple y enlace doble; X se selecciona del grupo que consiste en ausente, CH3, OH, OOH y junto a Z forma un

epóxido de estructura (Z-IV); y 20

Z se selecciona del grupo que consiste en (Z-I), (Z-II), (Z-III) y junto a X forma (Z-IV), siempre que

a) cuando [1] es un doble enlace, X está ausente y Z es (Z-I),

C7 R4

R3 R2

(Z-I) 25

donde R2, R3 y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en CH3, OH y OOH;

b) cuando [1] es un enlace simple y X está ausente, Z es (Z-II), 30

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6

R4

R2

C7

(Z-II) donde R2 y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en CH3,

OH y OOH; 5

c) cuando [1] es un enlace simple y X se selecciona del grupo que consiste en CH3, OH y OOH, Z es (Z-III),

R 4

CH 2

C 7

(Z-III) donde R4 se selecciona del grupo que consiste en CH3, OH y OOH; y 10

d) cuando [1] es un enlace simple, X y Z forman un epóxido de fórmula (Z-IV),

C7 R4

R2 O

(Z-IV) 15

donde R2 y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en CH3, OH y OOH.

El sesquiterpeno eremofilano de fórmula (I) tal como se describe en esta solicitud de patente comprende uno cualquiera de sus isómeros o mezclas de estos. Adicionalmente, el 20

sesquiterpeno eremofilano de fórmula (I) también comprende cualquier solvato del mismo, en particular, cualquier hidrato, alcanolato o mezclas. En una realización preferida, la presente invención se refiere al uso como garrapaticida de al menos un sesquiterpeno eremofilano de fórmula (I), donde R1 es hidrógeno, R2 y R4 son 25

metilo, y R3 es OH. En una realización aún más preferida, la presente invención se refiere al uso como garrapaticida de al menos un sesquiterpeno eremofilano de fórmula (I) seleccionado del grupo que consiste en dehidrofukinona (compuesto 1), 11-hidroxieremofil-6(7), 9(10)-dien-8-30

ona (compuesto 4) y 7-11-epoxieremofil-9(10)-en-8-ona (compuesto 8), así como mezclas de isómeros de al menos uno cualquiera de ellos. En una realización especialmente preferible, el sesquiterpeno eremofilano de fórmula (I) es dehidrofukinona ya que presenta una actividad superior al resto de compuestos, siendo ésta 35

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incluso superior a otros sesquiterpenos eremofilanos como, por ejemplo, nootkatona tal como muestra la tabla 1. El compuesto conocido como dehidrofukinona, (4aR,5S)-4a,5-dimetil-3-(propan-2-ilideno)-4,4a,5,6,7,8-hexahidronaftalen-2(3H)-ona, es un sesquiterpeno eremofilano aislado de S. 5

adenotrichius DC., (Astereceae), planta que puede localizarse en las montañas centrales de Chile, localidad Las Coimas, Putaendo (V Región Chile). La estructura del compuesto activo es conocida y se ha publicado previamente en Eremophil-7(11)-dien-8-one (Dehidrofukinone) Journal Natural Products Vol 54, Nº 1, pp 271-272 1991, Phytochemistry, 1973, Vol. 12, pp. 2931-2933), Liebigs Ann. Chem. 1979, 470-472. Sin embargo, su potente 10

actividad como garrapaticida no se ha descrito hasta la fecha. Los sesquiterpenos eremofilanos de fórmula (I) a los que hace referencia la presente invención pueden aislarse de extractos vegetales, por ejemplo S. adenotrichius DC, por métodos de extracción y, opcionalmente, purificación ampliamente conocidos por el experto 15

en la materia. Por otro lado, los sesquiterpenos eremofilanos de fórmula (I) de la presente invención también pueden obtenerse por síntesis química mediante reacciones convencionales conocidas por un experto en el sector de la química orgánica. Adicionalmente, debe considerarse incluido dentro del ámbito de protección de la presente 20

invención el uso del sesquiterpeno eremofilano de fórmula (I), preferiblemente dehidrofukinona, como componente mayoritario de un extracto vegetal, por ejemplo procedente de S. adenotrichius DC (Asteraceae). La presente invención se refiere al uso como garrapaticida de al menos uno de los 25

sesquiterpenos eremofilanos de fórmula (I) descritos en esta solicitud de patente, entendiéndose como “garrapaticida” un compuesto útil para prevenir, controlar o eliminar garrapatas donde dicho compuesto se aplique. En particular, los sesquiterpenos eremofilanos de la presente invención ocasionan la muerte de las larvas de dichas garrapatas. 30

En otra realización preferida, la presente invención se refiere al uso de al menos uno de los sesquiterpenos eremofilanos de fórmula (I) tal como se describen en esta solicitud de patente, preferiblemente dehidrofukinona, compuesto 4, compuesto 8 o una cualquiera de sus combinaciones, como garrapaticida frente a garrapatas que pertenecen al menos a un 35

género seleccionado del grupo que consiste en Hyalomma spp. y Rhipicephalus spp.. Preferiblemente, de garrapatas Hyalomma lusitanicum o Rhipecephalus sanguineus. En esta solicitud de patente se entiende por “una cualquiera de sus combinaciones” tanto la combinación de más de uno de los compuestos de fórmula (I) a los que se esté haciendo 40

referencia, como la combinación de más de uno de los isómeros de un compuesto de fórmula (I) específico, o una combinación de más de un isómero de varios de los compuestos de fórmula (I) a los que se esté haciendo referencia. Como se ha mencionado anteriormente en el estado de la técnica, las garrapatas del género 45

Hyalomma spp. o Rhipicephalus spp. causan problemas económicos graves en la ganadería, problemas agravados por el desarrollo de resistencias frente a algunos compuestos garrapaticidas disponibles comercialmente. Adicionalmente, ambos géneros pueden ser vector de transmisión de enfermedades. Por lo tanto, la presente invención proporciona nuevos agentes garrapaticidas, los sesquiterpenos de fórmula (I) descritos en 50

esta solicitud de patente y, en particular, la dehidrofukinona, para prevenir, controlar o eliminar garrapatas preferiblemente de los géneros Hyalomma spp. y Rhipicephalus spp.. De esta forma se reducen o evitan las pérdidas económicas mencionadas anteriormente, a la

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vez que la utilización de los sesquiterpenos eremofilanos de fórmula (I), compuestos de origen vegetal o derivados hemi-sintéticos de éstos, permite su utilización en ganadería ecológica. Adicionalmente, el desarrollo de nuevos agentes garrapaticidas facilita la rotación de diferentes tratamientos, dificultando así la aparición de resistencias. 5

En otra realización preferida, la presente invención se refiere al uso de un sesquiterpeno eremofilano de fórmula (I) tal como se describe en esta solicitud de patente, donde la mortalidad de las larvas de garrapatas es como mínimo 60 % cuando se aplica dicho sesquiterpeno de fórmula (I) a una concentración de 5 μg/μl, siendo especialmente preferido que la mortalidad de las larvas sea mínimo 70 % a dicha concentración. 10

En otra realización preferida, la presente invención se refiere al uso de al menos un sesquiterpeno eremofilano de fórmula (I) tal como se describe en esta solicitud de patente para fabricar un medicamento para tratar o prevenir una enfermedad causada por garrapatas en un humano o animal. Preferiblemente, el sesquiterpeno eremofilano de 15

fórmula (I) se selecciona del grupo que consiste en dehidrofukinona (compuesto 1), 11-hidroxieremofil-6(7), 9(10)-dien-8-ona (compuesto 4), 7-11-epoxieremofil-9(10)-en-8-ona (compuesto 8) y una cualquiera de sus combinaciones, siendo especialmente preferible que dicho sesquiterpeno sea dehidrofukinona. 20

En una realización aún más preferida, cuando el medicamento se aplica sobre un animal no humano, éste se selecciona del grupo que consiste en ganado y animal doméstico. Preferiblemente, el ganado se selecciona del grupo que consiste en vacuno, ovino y caprino. Preferiblemente, el animal doméstico se selecciona del grupo que consiste en perro y gato. 25

En otra realización aún más preferida, la presente invención se refiere al uso de al menos uno de los sesquiterpenos eremofilanos de fórmula (I), preferiblemente dehidrofukinona, compuesto 4, compuesto 8 o una cualquiera de sus combinaciones, para fabricar un medicamento para tratar o prevenir una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en Anaplasma phagocytophilum, Coxiella burnetii, Borrelia burgdorferi, virus de la fiebre 30

hemorrágica Crimea Congo y Theileria spp. En otra realización aún más preferida, el medicamento al que se hace referencia en esta solicitud de patente es una formulación adecuada para administrar de forma tópica, oral o inyectable. Formulaciones adecuadas para administración por vía tópica pueden ser, por 35

ejemplo, solución, emulsión, gel, suspensión o crema. Por ejemplo, estas formulaciones pueden ser adecuadas para baños de inmersión, baños de aspersión o pour-ons. Por otro lado, formulaciones adecuadas para administración oral pueden ser líquidas, por ejemplo, solución o jarabe; o pueden ser sólidas tal como polvos o comprimidos. Adicionalmente, también se consideran formulaciones adecuadas para administración oral alimentos sólidos 40

o líquidos suplementados con el sesquiterpeno eremofilano de fórmula (I) descrito en esta solicitud de patente. Además, las formulaciones adecuadas para utilizar como medicamento según la presente solicitud de patente también pueden ser soluciones inyectables. En una realización especialmente preferida, el medicamento al que se hace referencia en 45

esta solicitud de patente es una formulación adecuada para administrar de forma tópica. Preferiblemente, el sesquiterpeno eremofilano de fórmula (I) se selecciona del grupo que consiste en dehidrofukinona (compuesto 1), 11-hidroxieremofil-6(7), 9(10)-dien-8-ona (compuesto 4), 7-11-epoxieremofil-9(10)-en-8-ona (compuesto 8) y una cualquiera de sus combinaciones, siendo especialmente preferible que dicho sesquiterpeno sea 50

dehidrofukinona.

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Las formulaciones a las que hace referencia esta invención pueden comprender uno o más excipientes convencionales conocidos por el experto, tal como, por ejemplo, celulosa. Así como pueden obtenerse por técnicas convencionales ampliamente conocidas en el sector veterinario, farmacéutico o en la industria de alimentos suplementados. 5

La presente invención también hace referencia a un sesquiterpeno eremofilano de fórmula (I) tal como se describe en esta solicitud de patente, como medicamento. Preferiblemente, el sesquiterpeno eremofilano de fórmula (I) se selecciona del grupo que consiste en dehidrofukinona (compuesto 1), 11-hidroxieremofil-6(7), 9(10)-dien-8-ona (compuesto 4), 7-11-epoxieremofil-9(10)-en-8-ona (compuesto 8) y una cualquiera de sus combinaciones, 10

siendo especialmente preferible que dicho sesquiterpeno sea dehidrofukinona. Debe entenderse que la presente invención también hace referencia al menos a un sesquiterpeno eremofilano de fórmula (I) tal como se describe en esta solicitud de patente, tanto en su definición más amplia como en las diferentes realizaciones preferidas 15

mencionadas anteriormente, para tratar o prevenir una enfermedad causada por garrapatas en un humano o animal. Preferiblemente, garrapatas de al menos un género seleccionado del grupo que consiste en Hyalomma spp. y Rhipicephalus spp. En una realización preferida, la presente invención también se refiere al menos a un 20

sesquiterpeno eremofilano de fórmula (I) tal como se describe en esta solicitud de patente, tanto en su definición más amplia como en las diferentes realizaciones preferidas mencionadas anteriormente, para tratar o prevenir una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en Anaplasma phagocytophilum, Coxiella burnetii, Borrelia burgdorferi, virus de la fiebre hemorrágica Crimea Congo y Theileria spp. 25

En otra realización preferida, la presente invención describe el sesquiterpeno eremofilano de fórmula (I) para tratar o prevenir una enfermedad causada por garrapatas tal como se describe en esta solicitud de patente, donde dicho tratamiento o prevención tiene lugar por administración tópica del sesquiterpeno de la invención. 30

Adicionalmente, debe entenderse que la presente invención también hace referencia a un método para tratar o prevenir una enfermedad causada por garrapatas en un humano o animal, donde dicho método comprende administrar un sesquiterpeno eremofilano de fórmula (I) tal como se describe en esta solicitud de patente, tanto en su definición más 35

amplia como en las diferentes realizaciones preferidas mencionadas anteriormente. Preferiblemente, para tratar o prevenir una enfermedad causada por garrapatas de al menos a un género seleccionado del grupo que consiste en Hyalomma spp. y Rhipicephalus spp. En una realización preferida, la presente invención se refiere al método para tratar o prevenir 40

una enfermedad tal como se describe en esta solicitud de patente, donde la enfermedad se selecciona del grupo que consiste en Anaplasma phagocytophilum, Coxiella burnetii, Borrelia burgdorferi, virus de la fiebre hemorrágica Crimea Congo y Theileria spp. En otra realización preferida, el método de la presente invención para tratar o prevenir una 45

enfermedad causada por garrapatas tal como se describe en esta solicitud de patente, comprende administrar el sesquiterpeno eremofilano de fórmula (I) de la presente invención de forma tópica. En otra realización preferida, la presente invención describe el uso de al menos un 50

sesquiterpeno eremofilano de fórmula (I) tal como se describe en esta solicitud de patente para prevenir, controlar o eliminar la presencia de garrapatas en el entorno de un animal o humano. Preferiblemente, el sesquiterpeno eremofilano de fórmula (I) se selecciona del

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grupo que consiste en dehidrofukinona (compuesto 1), 11-hidroxieremofil-6(7), 9(10)-dien-8-ona (compuesto 4), 7-11-epoxieremofil-9(10)-en-8-ona (compuesto 8) y una cualquiera de sus combinaciones, siendo especialmente preferible que dicho sesquiterpeno sea dehidrofukinona. 5

Por “entorno” se entiende en esta solicitud de patente, cualquier superficie en contacto con el animal o humano susceptible de albergar garrapatas, como por ejemplo, pasto, maleza, establo, corral, jardín, parque, etc. En un segundo aspecto, la presente invención proporciona un producto garrapaticida que 10

comprende al menos un sesquiterpeno eremofilano de fórmula (I) tal como se describe en el primer aspecto de esta solicitud de patente. Preferiblemente, el producto garrapaticida comprende al menos un sesquiterpeno eremofilano seleccionado del grupo que consiste en dehidrofukinona, 11-hidroxieremofil-6(7), 9(10)-dien-8-ona y 7-11-epoxieremofil-9(10)-en-8-ona, así como mezclas de isómeros de al menos uno cualquiera de ellos. 15

En una realización aún más preferida, la presente invención proporciona un producto garrapaticida que comprende dehidrofukinona. En otra realización preferida, el producto garrapaticida objeto de esta invención puede 20

comprender otros compuestos activos, preferiblemente otros compuestos de origen vegetal con actividad garrapaticida. Por ejemplo, nootkatona o un derivado de éste. En otra realización preferida, el producto garrapaticida que comprende al menos sesquiterpeno eremofilano de fórmula (I) tal como se describe en esta solicitud de patente 25

es un medicamento. En particular un medicamento para tratar o prevenir una enfermedad causada por garrapatas en un humano o animal tal como se describe en el primer aspecto de esta invención. El medicamento de la presente invención puede administrarse por cualquier vía de 30

administración habitual en la industria farmacéutica o veterinaria. Preferiblemente, este medicamento puede administrarse de forma tópica, oral o inyectable. Las formulaciones adecuadas en ambos casos pueden ser las mismas descritas anteriormente en el primer aspecto de esta invención. 35

En una realización aún más preferida, el producto garrapaticida tal como se describe en esta solicitud de patente es adecuado para administración tópica sobre un humano o animal. En otra realización preferida, el producto garrapaticida que comprende al menos sesquiterpeno eremofilano de fórmula (I) tal como se describe en esta solicitud de patente 40

es un producto adecuado para aplicar en el entorno de un humano o animal. En particular, este producto puede ser una solución líquida ya que estas son fáciles de aplicar por aspersión o baño de inmersión. EJEMPLOS 45

EJEMPLO 1: Extracción etanólica a partir de S. adenotrichius DC (Asteraceae) y purificación cromatográfica del extracto obtenido Las plantas se secaron, pulverizaron (1,185 kg) y se extrajeron con etanol a temperatura 50

ambiente durante 72 horas. Posteriormente se filtraron y el solvente se eliminó por concentración a vacío. El extracto etanólico (102 g, 8,6 % rendimiento respecto al peso de la planta seca) se cromatografió en una columna de silica gel (Si gel) de cromatografía de

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11

columna flash (FCC según sus siglas en inglés), utilizando un gradiente de hexano-acetato de etilo (100:0-0:100) y metanol (100%), obteniendo seis fracciones principales (identificadas de 0 a 6). Una parte (15,0 g) de la fracción 1 (1,27 % rend) se purificó mediante columna de silica gel 5

de cromatografía de columna flash (hexano-AcOEt 90:10) y se cromatografió a través de Sephadex LH-20 (hexano-CH2Cl2-MeOH 3:1:1) para obtener las fracciones 5-6 (2,80 g), 8-13 (76,7 mg), 14-18 (761,6 mg), 19-24 (944,1 mg) y 30-49 (698,1 mg). Todas las fracciones fueron cromatografiadas mediante silica gel, de las fracciones 5-6 se 10

obtuvo 1,5 g del compuesto 1 (126,6 x 10-3 % rend). Los compuestos se separaron por HPLC semi-preparativa de fase normal sobre columna de silica a un flujo de 3ml /min y una mezcla isocrática de hexano-AcOEt. De las fracciones 8-13 se obtuvo 6,0 mg del compuesto 4 (5,1 x 10-4 % rend), de las fracciones 19-24 se obtuvo 1,8 mg del compuesto 5 (1,5 x 10-4 % rend). 15

O1

4

5

6

7

8

10

11

12

13

14

15 Compuesto 1 = Dehidrofukinona (Eremofil-7(11), 9(10)-dien-8-ona) Compuesto mayoritario HREIMS [M+] 218.1671 calculado para C15H22O. 20

O

OH Compuesto 4 = 11-Hidroxieremophil-6(7), 9(10)-dien-8-

ona HREIMS [M+] 234.1620 calculado para C15H22O2.

25

O

OOH Compuesto 5 = 11-Hidroperoxieremofil-6(7), 9(10)-dien-

8-ona HREIMS [M+-O]= 234.1620 calc. for C15H22O2

EJEMPLO 2: Obtención del compuesto 8 por epoxidación de dehidrofukinona 30

Una mezcla del compuesto 1 (500 mg, 1,798 mmol), CHCl3 (10 ml) y ácido meta-cloroperoxibenzoico (465,2 mg, 2,696 mmol) se agitó durante 5 horas a temperatura ambiente. Posteriormente, la mezcla se extrajo a pH 10 con CH2Cl2 obteniendo un extracto crudo (503,2 mg, rendimiento 95 %). Se purificó dicho extracto por columna cromatográfica de SiO2 35

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12

(hexano/AcOEt 80:20) obteniendo el compuesto 8 como una mezcla de enantiómeros (374,9 mg, rendimiento 71 %).

O

O

Compuesto 8 = 7-11-epoxieremofil-9(10)-en-8-ona (ambos epóxidos 5

y su enantiomero Bioensayos: 10

1. Mantenimiento de Hyalomma lusitanicum en el laboratorio Hembras grávidas de H. lusitanicum fueron capturadas en la finca “La Garganta” , localizada en el sur de la provincia de Ciudad Real a 37º24’78’’N 42º59’101’’E a 669 metros sobre el nivel del mar. Existen dos procedimientos para la obtención de los ejemplares. Por un lado, 15

su captura directamente del suelo o la vegetación empleando la técnica de arrastre o de la bandera (Sonenshine DE. 1993. Biology of ticks, Vols II. New York (USA): Oxford University Press), aplicada durante un tiempo de 30 minutos en cada punto de muestreo anotando temperatura, humedad ambiental y humedad el suelo, altura de la vegetación, estado del suelo, climatología y presencia o no de animales en la zona. Por otra parte, la obtención de 20

ejemplares directamente del hospedador (ciervo, jabalí y conejo) recogiéndose manualmente. Para la identificación de las garrapatas se usaron las claves específicas de Gil-Collado (1979) (Gil-Collado J, Guillén JL, Zapatero LM. 1979. Claves para la identificación de los ixodoidea españoles (adultos). Revista Ibérica de Pasaritología, 39:107-111); y Estrada et al. (2004) (Estrada Peña A, Bouattour A, Camicas JL, Walker AR. 2004. 25

Ticks of Domestic Animals in the Mediterranean Region: A Guide to Identification of Species. Universidad de Zaragoza). Una vez identificadas las garrapatas se separaron a las hembras grávidas del resto y se colocaron en tubos de ensayo de vidrio con un trozo de papel de filtro cortado en zig-zag en el interior y un tapón de algodón. Los tubos se incubaron a 26 ºC con una HR superior al 70% hasta que tuvo lugar la ovoposición. Una vez producida la 30

ovoposición se dejaron alrededor de 23-24 días para que diese tiempo a que los huevos eclosionaran y las larvas maduraran. Las larvas de H. lusitanicum requieren de 15-16 días para completar la quitinización, es decir, para madurar (Ouhelli H, Pandey VS. 1984. Development of Hyalomma lusitanicum under Laboratory Conditions. Veterinary Parasitology, 15:57-66). 35

2. Ensayos de toxicidad frente a Hyalomma lusitanicum Para evaluar la actividad garrapaticida de los compuestos 1, 4, 5 y 8 se prepararon tres 40

tubos eppendorf por cada sesquiterpeno eremofilano a ensayar con 25 mg de celulosa. Sobre la celulosa se depositaron 50 µl de la solución stock a la concentración deseada (ver tabla 1) y por otro lado se realizó lo mismo con el disolvente empleado. En este ensayo se usó el disolvente acetona como control negativo y acibelte (0,5 % cipermetrina) como control positivo. A continuación se dejó secar la celulosa con los productos a vacío y temperatura 45

ambiente.

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13

A continuación se prepararon en tubos de ensayo de vidrio lotes de 20 larvas de H. lusitanicum. Para ello, mediante el uso de un pincel se depositaron las larvas en agua y se fueron colocando pequeños grupos de larvas sobre papel de filtro y finalmente se depositaron una a una en el tubo de ensayo. Por último se vertió la celulosa con el producto a ensayar en el tubo con las larvas, se tapó este con algodón y colocó bocabajo. 5

Se dejaron los tubos incubando durante 24 horas a 26 ºC con una HR superior al 70 % y transcurrido ese tiempo se procedió a la observación, anotando el número de larvas vivas y muertas de cada tubo de ensayo. 10

Posteriormente se calculó el porcentaje de mortalidad con la siguiente ecuación:

% Mortalidad= (% T - % C / 100 - %C) x 100 %T: Porcentaje de mortalidad en el tratamiento. 15

%C: Porcentaje de mortalidad en el control. 3. Ensayos de toxicidad frente a R. sanguineus Para realizar este bioensayo se utilizaron las condiciones descritas anteriormente respecto 20

al bioensayo 2. Se analizó la actividad de los compuestos 1, 4 y 5 a una concentración de 5µg/µl (ver resultados en tabla 1).

Tabla 1: Resultados obtenidos frente a garrapatas H. lusitanicum y R. sanguineus 25

Concentración Producto H. lusitanicum

R. sanguineus

5µg/µl

O1

4

5

6

7

8

10

11

12

13

14

15 (Comp. 1)

88 72

5µg/µl O

OH

(Comp. 4)

74 29

5µg/µl

O

OOH

(Comp. 5)

14 41

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14

10µg/µl

O

O

(Comp. 8) 72

-

5µg/µl

64

-

2µg/µl

17

-

10µg/µl

Nootkatona

83.3 -

Como ejemplo comparativo, también se evaluó la actividad garrapaticida de nootkatona (Sigma-Aldrich) frente a H. lusitanium en las condiciones descritas en el bioensayo 2 (ver resultados en la tabla 1).

5

Referencias adicionales: -Barandika Iza JF. 2010. Las garrapatas exófilas como vectores de agentes zoonóticos: estudio sobre la abundancia y actividad de las garrapatas en la vegetación e investigación de la presencia de agentes patógenos en garrapatas y micromamíferos. Tesis Doctoral. 10

Universidad de León, Facultad de Veterinaria, Departamento de Sanidad Animal. -González-Coloma A. 2009. Ensayos con insectos: diseño experimental. In: Burillo J, González-Coloma A (Eds.) Insecticidas y repelentes de origen natural. Centro de Investigación y Tecnología Alimentaria, Zaragoza. 15

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15

REIVINDICACIONES 1. Uso de al menos un sesquiterpeno eremofilano de fórmula (I) como garrapaticida,

O

R 1

CH 3

CH 3

[1]

X

Z

C 7

(I) 5

donde R1 se selecciona del grupo que consiste en H y OH; [1] se selecciona del grupo que consiste en enlace simple y enlace doble; X se selecciona del grupo que consiste en ausente, CH3, OH, OOH y junto a Z forma un 10

epóxido de estructura (Z-IV); y Z se selecciona del grupo que consiste en (Z-I), (Z-II), (Z-III) y junto a X forma (Z-IV),

siempre que a) cuando [1] es un doble enlace, X está ausente y Z es (Z-I), 15

C7 R4

R3 R2

(Z-I)

donde R2, R3 y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en CH3, OH y OOH;

20

b) cuando [1] es un enlace simple y X está ausente, Z es (Z-II),

R4

R2

C7

(Z-II) donde R2 y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en CH3,

OH y OOH; 25

c) cuando [1] es un enlace simple y X se selecciona del grupo que consiste en CH3, OH y

OOH, Z es (Z-III),

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16

R 4

CH 2

C 7

(Z-III) donde R4 se selecciona del grupo que consiste en CH3, OH y OOH; y

d) cuando [1] es un enlace simple, X y Z forman un epóxido de fórmula (Z-IV), 5

C7 R4

R2 O

(Z-IV)

donde R2 y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en CH3, OH y OOH. 10

2. Uso de al menos un sesquiterpeno eremofilano según la reivindicación 1, donde R1 es hidrógeno, R2 y R4 son metilo, y R3 es OH. 3. Uso de al menos un sesquiterpeno eremofilano según la reivindicación 2, donde el 15

sesquiterpeno eremofilano se selecciona del grupo que consiste en dehidrofukinona, 11-hidroxieremofil-6(7), 9(10)-dien-8-ona y 7-11-epoxieremofil-9(10)-en-8-ona, o una mezcla de isómeros de al menos uno cualquiera de ellos. 4. Uso de al menos un sesquiterpeno eremofilano según una cualquiera de las 20

reivindicaciones 1 a 3, frente a garrapatas que pertenecen al menos a un género seleccionado del grupo que consiste en Hyalomma spp. y Rhipicephalus spp. 5. Uso de un sesquiterpeno eremofilano según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde la mortalidad de las larvas de garrapatas es como mínimo 60 % al aplicar el 25

compuesto de fórmula (I) a una concentración de 5 μg/μl. 6. Uso de al menos un sesquiterpeno eremofilano según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para fabricar un medicamento para tratar o prevenir una enfermedad causada por garrapatas en un humano o animal. 30

7. Uso de al menos un sesquiterpeno eremofilano según la reivindicación 6, donde la enfermedad se selecciona del grupo que consiste en Anaplasma phagocytophilum, Coxiella burnetii, Borrelia burgdorferi, virus de la fiebre hemorrágica Crimea Congo y Theileria spp. 35

8. Uso de al menos un sesquiterpeno eremofilano según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 7, donde el medicamento se administra de forma tópica. 9. Uso de al menos un sesquiterpeno eremofilano según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para prevenir, controlar o eliminar la presencia de garrapatas en el 40

entorno en contacto con un animal o humano.

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17

10. Producto garrapaticida que comprende al menos un sesquiterpeno eremofilano de fórmula (I)

O

R 1

CH 3

CH 3

[1]

X

Z

C 7

(I) donde 5

R1 se selecciona del grupo que consiste en H y OH; [1] se selecciona del grupo que consiste en enlace simple y enlace doble; X se selecciona del grupo que consiste en ausente, CH3, OH, OOH y junto a Z forma un

epóxido de estructura (Z-IV); y Z se selecciona del grupo que consiste en (Z-I), (Z-II), (Z-III) y junto a X forma (Z-IV), 10

siempre que a) cuando [1] es un doble enlace, X está ausente y Z es (Z-I),

C7 R4

R3 R2

(Z-I) 15

donde R2, R3 y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en CH3, OH y OOH;

b) cuando [1] es un enlace simple y X está ausente, Z es (Z-II),

R4

R2

C7

(Z-II) 20

donde R2 y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en CH3,

OH y OOH;

c) cuando [1] es un enlace simple y X se selecciona del grupo que consiste en CH3, OH y 25

OOH, Z es (Z-III),

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18

R4

CH2

C7

(Z-III) donde R4 se selecciona del grupo que consiste en CH3, OH y OOH; y

d) cuando [1] es un enlace simple, X y Z forman un epóxido de fórmula (Z-IV), 5

C7 R4

R2 O

(Z-IV) donde R2 y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en CH3,

OH y OOH. 10

11. Producto según la reivindicación 10, que comprende al menos un sesquiterpeno eremofilano seleccionado del grupo que consiste en dehidrofukinona, 11-hidroxieremofil-6(7), 9(10)-dien-8-ona y 7-11-epoxieremofil-9(10)-en-8-ona, o una mezcla de isómeros de al menos uno cualquiera de ellos. 15

12. Producto según la reivindicación 11, que comprende dehidrofukinona. 13. Producto según una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12, donde dicho producto es un medicamento. 20

14. Producto según la reivindicación 13, donde el medicamento es adecuado para administración tópica sobre un humano o animal. 15. Producto según una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12, donde dicho producto es 25

adecuado para aplicar en el entorno de un humano o animal.

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