-Genotipado de proteínas lácteas -Sexaje de embriones APLICACIÓN DE LA PCR A LA TIPIFICACIÓN DE...
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-Genotipado de proteínas lácteas
-Sexaje de embriones
APLICACIÓN DE LA PCR A LA TIPIFICACIÓN DE GENES DE INTERÉS EN PRODUCCIÓN ANIMAL
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Universidad de Zaragoza
PRODUCCIÓN LÁCTEA:
- Existían grandes desequilibrios en la producción.
- Incapacidad de absorber los excedentes.
- Necesidad de derivar la producción hacia derivados lácteos.
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Universidad de Zaragoza
- Genotipado de proteínas lácteas con influenciaen producción (calidad y cantidad) láctea.
- Elección del sexo en embriones antes de transferencia.
-Tipado de sexo y proteínas lácteas en embriones.
- Detección de hembras Free-Martin
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CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DEPROTEÍNAS LÁCTEAS
BB Kappa Casein
Universidad de Zaragoza
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P.C.R.P.C.R.
CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DEPROTEÍNAS LÁCTEAS
PROTEÍNAS DEL CUAJO
- CASK
- CASB
-CASA1
-CASA2
PROTEÍNAS DEL LACTOSUERO
- LGBB- LAA
Universidad de Zaragoza
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CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DEPROTEÍNAS LÁCTEAS (CASK)
Amplificación por PCR Alelo Específico (A.S.O.)
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Universidad de Zaragoza
CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DEPROTEÍNAS LÁCTEAS (CASA2)
Exón VIIIIntrón VIIIIntrón VII
Oli 31 Oli 32
Ser Ser Glu CASA2A TGT ACT GAG GTAAG
CASA2D TGT ACT GAT GTAAG
Mnl-1
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Universidad de Zaragoza
396 bpPCR
396 bpCASA2A
396 bpCASA2B
Mnl-I
272 bp 124 bp
Ser Ser Glu CASA2A TGT ACT GAG GTAAG
CASA2D TGT ACT GAT GTAAG
Mnl-1
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-
+
DD AA AD
CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DEPROTEÍNAS LÁCTEAS (CASA2)Universidad
de Zaragoza
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CASKB/CASBB/LGBB
1 . CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DEPROTEÍNAS LÁCTEASUniversidad
de Zaragoza
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DETECCIÓN DE PROTEÍNASLÁCTEAS
SEXAJE DE EMBRIONES
PROGRAMAS DE TRANSFERENCIA EMBRIONARIA
ELECCIÓN DELSEXO
DETECCIÓN DE GENES DE INTERÉS
TIPIFICACION DE EMBRIONESUniversidad de Zaragoza
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““Sistema XY”Sistema XY”XX -XX - XY - XY -
““Sistema ZW”Sistema ZW”
ZW -ZW - ZZ -ZZ -
X - X - ““Sistema X: A”Sistema X: A”XX -XX -
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Universidad de Zaragoza
SELECCIÓN ARTIFICIAL DEL SEXO
Sexaje de embriones antes de la implantación.
- Citómetro de flujo
- Cromatografía
Separación de espermatozoides X e Y
- Métodos No invasivos- Enzimas ligadas al cromosma X (Toxicidad)- Detección Ag HY (Falsos positivos)
- Métodos invasivos: Biopsia embrionaria
(basado en la diferente masa, movilidad, contenido DNA, carga y antígenos de superficie)
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Separación de espermatozoides X e Y
- Por diferencias de masa: el cromosoma Y tiene un peso menor en un 4,2% que el cromosoma X en bovino por lo que tienen distinta velocidad de sedimentación
- Por diferencias de movimiento: los espermatozoides Y se mueven a mayor velocidad que los espermatozoides X
- Por diferencias en el contenido de DNA mediante citometría de flujo. Se tiñe el DNA del espermatozoide con fluorocromos
- Por diferencias en antígenos de superficie: se basa en la detección del Antígeno Y de histocompatibilidad. Solo lo tienen los espermatozoides Y
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Manipulación de embriones
Métodos invasivos : - obtención de una biopsia en estado de blastocisto (en bovino a los 7 días).- la cantidad de DNA obtenido a partir de una biopsia equivale a aproximadamente a 10 células (aprox. 100 pg)
Análisis de cariotipoAnálisis de regiones de DNAdel cromosoma Y
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XY
XX
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ZONAS DE COPIA ÚNICA
ZONAS REPETIDAS
+ -
SEXAJE DE EMBRIONES(Análisis de zonas de DNA del Cr Y)
AMPLIFICADOEN Y
MENOR SENSIBILIDAD
SÓLO AMPLIFICADO
EN
MAYOR SENSIBILIDAD
Universidad de Zaragoza
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ZONAS DE COPIA ÚNICA
ZONAS REPETIDAS
+ -
2. SEXAJE DE EMBRIONES
ZFX/ZFY
BRY4a
Universidad de Zaragoza
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SEXAJE DE EMBRIONES
ZFX
ZFXZFXZFY
ZONAS DE COPIA ÚNICA
100%
75%
50%
25%
250 ng 250 pg 80 pg 20 pg
Pst-1
Universidad de Zaragoza
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Universidad de Zaragoza
Sexaje y genotipado de proteínas lácteas en el
embrión
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SEXO/CASK
ABAA BB
AA
TIPAJE DE EMBRIONES(Zona BRY 4a)
SEXO/CASB
ABAA AA AA
Universidad de Zaragoza
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DETECCIÓN DE ANIMALES FREE-MARTIN
FREEMARTINISMO: Originado por la fusión de loscoriones de dos embriones (macho y hembra) que lleva consigo un quimerismo XX/XY y afecta negativamentea las caracteristicas reproductivas de las hembras.
ZFY/ZFXZFY/ZFX
BRY4a/CASKBRY4a/CASK
Diluciones detectadas
l / 20
l / 50
Universidad de Zaragoza