Post on 26-Aug-2018
Universidad Central Del Ecuador
Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia
Carrera de Medicina Veterinaria y Zootecnia
Determinación de la presencia de anticuerpos de Toxoplasma gondii
en suero de bovinos de la provincia de Pichincha.
Informe final de investigación presentado como requisito para
obtener el título de Médico Veterinario y Zootecnista.
Autor: Jorge Nicolás Salazar Medina
Tutor: Dr. Eduardo Fabián Aragón Vázquez
Quito, Noviembre 2017
ii
Agradecimientos
Especial agradecimiento a:
Laboratorio de Agrocalidad por permitir procesar las muestras de
este estudio y conceder el uso de sus instalaciones.
Lcda. Margoth Barrionuevo por ser parte fundamental en el
procesamiento de las muestras.
Srta. Daniela Toro por colaborar en el procesamiento de las
muestras.
Dr. Eduardo Aragón por ser el tutor de este proyecto.
A la empresa Provetagros por financiar el proyecto.
iii
DERECHOS DE AUTOR
Yo, Jorge Nicolás Salazar Medina, en calidad de autor del trabajo de
investigación: “Determinación de la presencia de anticuerpos de
Toxoplasma gondii en suero de bovinos de la provincia de Pichincha.”,
autorizo a la UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR, hacer uso de
todos los contenidos que me pertenecen o parte de los que contiene esta
obra, con fines estrictamente académicos o de investigación.
Los derechos que como autora me corresponden, con excepción de la
presente autorización, seguirán vigentes a nuestro favor, de conformidad
con lo establecido en los artículos 5, 6, 8, 19 y demás pertinentes de la
Ley Intelectual y su Reglamento.
Así mismo, autorizo a la Universidad Central del Ecuador para que realice
la digitalización y publicación de este trabajo de investigación en el
repositorio virtual, de conformidad a lo dispuesto en el Art. 144 de la Ley
Orgánica de Educación Superior.
_______________________
Jorge Nicolás Salazar Medina
C.I. 1721284527
iv
INFORME APROBACIÓN DEL TUTOR
En mi calidad de Tutor del Trabajo de Grado, presentado por el señor
Jorge Nicolás Salazar Medina, para optar por el Título o Grado de Médico
Veterinario Zootecnista, cuyo título es “Determinación de la presencia de
anticuerpos de Toxoplasma gondi” en suero de bovinos de la provincia de
Pichincha.” Considero que dicho trabajo reúne los requisitos y méritos
suficientes para ser sometido a la presentación pública y evaluación por
parte del jurado examinador que se designe.
En la ciudad de Quito, a los 15 días del mes Noviembre de 2017
__________________________
Dr. Eduardo Fabián Aragón Vázquez
C.I. 170977343-4
v
APROBACIÓN DEL INFORME FINAL/TRIBUNAL
“Determinación de la presencia de anticuerpos de Toxoplasma gondii en
suero de bovinos de la provincia de Pichincha.”
El Tribunal constituido por:
Vocal 1: Dr. Christian Albuja
Vocal 2: Dr. Jorge Mosquera
Vocal 3: Dr. Fernando Pazmiño
Vocal 4: Dr. Dario Pérez
Luego de calificar el Informe Final de Investigación del trabajo de
titulación denominado “Determinación de la presencia de anticuerpos de
Toxoplasma gondii en suero de bovinos de provincia de Pichincha”, previo
a la obtención del título (o grado académico) de Médico Veterinario
Zootecnista presentado por el señor Jorge Nicolás Salazar Medina.
Emite el siguiente veredicto:
Fecha:
Para constancia de lo actuado firman
Nombre y Apellido Calificación
Firma
Vocal 1: Dr. Christian Albuja
Vocal 2: Dr. Jorge Mosquera
Vocal 3: Dr. Fernando Pazmiño
Vocal 4: Dr. Darío Pérez
vi
INDICE GENERAL
Agradecimientos ............................................................................................................... ii
DERECHOS DE AUTOR ............................................................................................... iii
INFORME APROBACIÓN DEL TUTOR .......................................................................iv
APROBACIÓN DEL INFORME FINAL/TRIBUNAL .................................................... v
RESUMEN......................................................................................................................... x
SUMARY ........................................................................................................................... xi
CAPÍTULO I ...................................................................................................................... 1
1. INTRODUCCIÓN ..................................................................................................... 1
CAPÍTULO II ..................................................................................................................... 2
2. OBJETIVOS .............................................................................................................. 2
2.1 Objetivo General ................................................................................................ 2
2.3 Objetivo específico ............................................................................................ 2
CAPÍTULO III .................................................................................................................... 3
3. MARCO TEÓRICO .................................................................................................. 3
3.1 Agente etiológico de la Toxoplasmosis .......................................................... 3
3.2 Historia ................................................................................................................ 3
3.3 Morfología ........................................................................................................... 3
3.4 Ciclo biológico .................................................................................................... 5
3.5 Transmisión ........................................................................................................ 8
3.7 Inmunidad ........................................................................................................... 9
3.8 Toxoplasmosis bovina ...................................................................................... 9
3.9 Toxoplasmosis humana .................................................................................. 10
3.10 Métodos de diagnóstico................................................................................ 11
3.11 Tratamiento .................................................................................................... 12
3.12 Prevención ...................................................................................................... 13
CAPÍTULO IV .................................................................................................................. 14
4. MATERIALES Y MÉTODOS ................................................................................ 14
4.1 Materiales ......................................................................................................... 14
4.2 Equipos ............................................................................................................. 14
4.3Metodología ........................................................................................................... 14
vii
4.3.1 Variables de estudio .................................................................................... 14
4.3.2 Número de individuos analizados ............................................................. 14
4.4 Métodos específicos del manejo del experimento ......................................... 14
4.4.1 Kit ELISA indirecto multi especie para Toxoplasma gondii ................... 14
4.5 Análisis estadístico .............................................................................................. 15
CAPÍTULO V ................................................................................................................... 16
5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN ............................................................................ 16
5.1 Resultados Generales .................................................................................... 16
5.2 Resultados por sexo ....................................................................................... 18
5.3 Resultados por cantones ................................................................................ 19
5.4 Resultados por edad ....................................................................................... 20
5.4 Resultados por predios ................................................................................... 22
CAPÍTULO VI .................................................................................................................. 25
6. CONCLUSIONES .................................................................................................. 25
CAPITULO VII................................................................................................................. 26
7. BIBLIOGRAFÍA ...................................................................................................... 26
CAPÍTULO VIII ............................................................................................................... 31
8. ANEXOS ................................................................................................................. 31
8.1 Tabla de resultados por animal. ........................................................................ 31
8.2 Resultados ELISA ............................................................................................... 38
8.3 Fotos ...................................................................................................................... 39
8.3.1 Kit ELISA. ...................................................................................................... 39
8.3.2 Hoja de Trabajo. ........................................................................................... 39
8.3.2 Distribución de soluciones. ......................................................................... 40
8.3.4 Incubación. .................................................................................................... 40
8.3.5 Equipo de lectura de placas. ...................................................................... 40
8.3.6 Lectura de placas. ........................................................................................ 41
viii
INDICE DE TABLAS
Tabla 1. Resultados Generales de la prueba ELISA para Toxoplasmosis
en sueros bovinos ………………………….………………………………… 16
Tabla 2. Resultados por sexo de la prueba ELISA para Toxoplasmosis en
sueros bovinos ……………………..………………………………………… 18
Tabla 3. Resultados por cantones de la prueba ELISA para
Toxoplasmosis en sueros bovinos ………………………….……………… 19
Tabla 4. Resultados por grupo de edad de la prueba ELISA para
Toxoplasmosis en sueros bovinos ……………………….………………… 21
Tabla 5 Resultados por predios de la prueba ELISA para Toxoplasmosis
en sueros bovinos……………………………….………………………...… 23
ix
INDICE DE FIGURAS
Figura 1. Esporozoito Figura 2. Estructura del
Taquizoito. ......................................................................................................................... 3
Figura 3. Ciclo biológico del T. gondii.. ......................................................................... 5
Figura 4. Ciclo de vida de T. gondii. .............................................................................. 7
Figura 5. Transmisión de T. gondii.. .............................................................................. 8
Figura 6. Resultados generales. .................................................................................. 16
Figura 7. Resultados por sexo de la prueba ELISA para Toxoplasmosis en
sueros bovinos................................................................................................................ 18
Figura 8. Resultados por Cantón. ................................................................................ 19
Figura 9. Resultados por edad. .................................................................................... 21
x
RESUMEN
Determinación de la presencia de anticuerpos de Toxoplasma gondii
en suero de bovinos de la provincia de Pichincha.
La toxoplasmosis es una zoonosis mundialmente distribuida, que tiene
importancia principalmente cuando afecta a mujeres en gestación que no
han tenido una previa exposición al parasito y la infección afecta al feto.
También tiene relevancia en personas que padezcan de VIH u otras
patologías donde el sistema inmune se vea afectado.
La toxoplasmosis en los bovinos cursa sin sintomatología o puede ser
leve en animales jóvenes, pero se registran dos abortos donde se logró
aislar el parásito. Los bovinos son hospedadores intermediarios del
parásito y en ellos se encuentran quistes tisulares, por esta razón los
bovinos se consideran una fuente de infección.
En este estudio se procesaron 269 muestras de suero bovino
pertenecientes a la provincia de Pichincha de un total de 25 predios, para
el análisis de las muestras se utilizó un kit ELISA indirecto multiespecie,
que mide la cantidad de IgG que presentan los sueros. Se demostró la
presencia de toxoplasmosis bovina en la provincia de Pichincha
obteniendo un resultado de 23,45% de sueros positivos.
Palabras Clave: Toxoplasma gondii, Bovinos, Anticuerpos, ELISA.
xi
SUMARY
Determination of the presence of Toxoplasma gondii antibodies in
bovine serum from the province of Pichincha.
Toxoplasmosis is a globally distributed zoonosis which is specially
important when it affects women in gestation when they have not had a
previous exposure to the parasite and the infection affects the fetus. It also
has relevance in people suffering from HIV or other pathology where the
immune system is affected.
Toxoplasmosis occurs in bovine animals without signs or may be mild in
young animals. But two abortions have been recorded where the parasite
was isolated. The cattle are one of the intermediate hosts of the parasite
where the tissue cysts are considered a source of infection.
In this study, 269 bovine serum samples from the province of Pichincha
were processed from a total of 25 farms. For the analysis of the samples,
an indirect ELISA kit was used, which measures the amount of IgG
present in the serum. It was demonstrated the presence of bovine
toxoplasmosis in the province of Pichincha obtaining a result of 23,45%
positive serums.
Keywords: Toxoplasma gondii, Bovine, Antibodies, ELISA.
1
CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN
La toxoplasmosis es una enfermedad causada por el parásito intracelular
Toxoplasma gondii, la misma que presenta una distribución mundial y
tiene gran importancia debido a que es una zoonosis. Principalmente,
genera riesgo en humanos inmunodeficientes y fetos congénitamente
infectados, particularmente en estos casos puede ser mortal. Sin embargo
en el resto de la población la enfermedad rara vez tiene presentación
clínica pero afecta al 30% de la población mundial (Bravo, 2005; CFSPH,
2005; Muñiz & Mondragón, 2009; OIE, 2008; Sánchez et al., 2012).
La toxoplasmosis bovina adquiere relevancia ya que en los bovinos se
encuentran los quistes, los que son fuente de infección de la enfermedad
al encontrarse en los tejidos del animal. Humanos y animales, al ingerir
carne cruda o mal cocida conteniendo los quistes tisulares, pueden
infectarse (Almirall, Escobedo, Nuñez & Ginoro, 2006; OIE, 2008; Plata,
2017).
Los felinos, al ingerir carne de bovino con la presencia de los quistes,
permiten que el parásito cumpla su ciclo de vida en su tracto intestinal,
terminando éste con la liberación de los ooquistes al ambiente en las
heces para comenzar un nuevo ciclo (CFSPH, 2005; Plata, 2017).
En los bovinos la enfermedad cursa, normalmente, sin sintomatología. No
obstante, se han reportado dos casos de aborto con la presencia del
parásito en los fetos (Plata, 2017). La presencia o ausencia de la
enfermedad en bovinos en Ecuador no había sido determinada.
En el estudio se utilizó un kit de ELISA para toxoplasmosis y sueros de
bovinos del muestreo realizado por Agrocalidad en la sierra ecuatoriana y
de esta manera se determinó la presencia de la enfermedad en la
provincia de Pichincha.
2
CAPÍTULO II
2. OBJETIVOS
2.1 Objetivo General
Determinar la presencia o ausencia de anticuerpos para Toxoplasma
gondii en suero de bovinos de la provincia de Pichincha.
2.3 Objetivo específico
Determinar la presencia o ausencia de anticuerpos para Toxoplasma
gondii en suero de bovinos de la provincia de Pichincha.
3
CAPÍTULO III
3. MARCO TEÓRICO
3.1 Agente etiológico de la Toxoplasmosis
El Toxoplasma gondii es el agente causal de la toxoplasmosis, es un
parásito protozoario intracelular de distribución mundial, perteneciente al
phylum Apicomplexa, clase esporozoita, subclase coccidia, orden
eimeeriina, familia toxoplasmatidae y especie gondii (Dubey, 2010;
Giraldo, 2008; Luyo, 2015; Uribarren, 2017; Velázquez, 2014)
3.2 Historia
En 1908, Alfonso Splendore en Brasil descubrió este parasito en conejos
de laboratorio; a la par fue observado en el roedor Ctenodactylus gondii
del norte de África por los franceses Charles Nicolle y Louis Manceaux
(Besné, 2011; De Santos, 2016; Dubey, 2010; Esteves, 2011; Giraldo M.,
2008; Luyo, 2015; Raiden, Ángel, & Jeddú, 2013; Sánchez et al., 2012).
En un inicio fue denominado Leishmania gondii pero al tratar de hacer que
creciera en medios de cultivo descrito para Leishmania spp. no se
obtuvieron resultados, por lo que se concluyó que no pertenecían a este
género y fue denominado Toxoplasma (griego toxon: arco) debido a su
forma de arco y gondii por el roedor africano (Dubey, 2010; Esteves,
2011; Giraldo, 2008; Luyo, 2015; Raiden et al., 2013).
3.3 Morfología
Figura 1. Esporozoito Figura 2. Estructura del Taquizoito.
Fuente (Uribarren, 2017). Fuente (Franco, 2015)
4
Los tipos de T. gondii son: I, II, III y son de virulencia variable (Uribarren,
2017). El primer grupo son cepas virulentas, el segundo y el tercer grupo
son cepas menos virulentas (Giraldo, 2008).
T. gondii tiene varias formas durante su ciclo biológico:
3.3.1 Oquistes: son eliminados únicamente por los felinos ya que solo
ellos se produce el ciclo completo; los oquistes se producen por la
reproducción sexual del parásito que se da a cabo en el intestino de los
felinos, tienen una forma ovoide y miden de 10 a 12 µm, contienen dos
esporoquistes dentro de los que se encuentran cuatro esporozoitos en
cada uno (Giraldo, 2008; Uribarren, 2017).
3.3.2 Taquizoitos: es la forma invasiva del parásito la cual puede
prácticamente infectar a cualquier célula nucleada, son observados en la
fase aguda de la enfermedad, se reproducen de manera asexual por
división binaria, presentan una forma ovalada y miden 3 µm x 6 µm
(Giraldo, 2008; Uribarren, 2017). Esta forma es la responsable de la
diseminación de parásito a los tejidos y causa la sintomatología de la
enfermedad (Giraldo, 2008).
3.3.3 Bradizoitos: esta forma se encuentra dentro de los quistes tisulares,
son similares a los taquizoitos y miden 1,5 µm x 7 µm (Uribarren, 2017).
Se diferencian de los taquizoitos principalmente por su resistencia a ser
digeridos una vez que son liberados de los quistes tisulares (Esteves,
2011).
3.3.4 Quistes tisulares: pueden presentar diferentes tamaños de 10 a 200
µm, en promedio miden 70 µm y contienen alrededor de mil bradizoitos
(Giraldo, 2008; Uribarren, 2017). Los quistes se encuentran
principalmente en el cerebro, músculo esquelético y cardíaco, pueden
permanecer en el hospedero por tiempo indefinido (OMS, 2017; Raiden et
al., 2013; Uribarren, 2017). Los quistes pueden estar presentes en los
hospedadores intermediarios y en los definitivos, que al ser ingeridos
5
llegan al intestino delgado donde liberan a los bradizoitos (Esteves, 2011;
Uribarren, 2017).
3.4 Ciclo biológico
Figura 3. Ciclo biológico del T. gondii. Fuente (CDC, 2017).
Los felinos son los hospedadores definitivos del parásito y los
intermediarios son animales de sangre caliente; la fase sexual solo se da
en los hospedadores definitivos y la fase asexual se puede dar en ambos,
esto hace que los felinos sean los principales reservorios de la
enfermedad; se puede dividir el ciclo biológico en tres fases:
enteroepiterial que se da únicamente en el hospedador definitivo,
extraintestinal que se da tanto en el hospedador definitivo como en los
intermediarios, y por último, la esporogónica que se da en el medio
ambiente (Esteves, 2011; Giraldo, 2008; OMS, 2017; Raiden et al., 2013;
Uribarren, 2017)
6
3.4.1 Fase sexual
Esta fase ocurre únicamente en los felinos y se produce cuando se
infestan por la ingesta de quistes tisulares presentes en tejidos de sus
presas principalmente o por ingesta de ooquistes esporulados; también se
describe la infección por ingesta de taquizoitos, pero su desarrollo se
puede dar en el epitelio de la boca, ya que tienen un nivel bajo de
resistencia a los jugos gástricos y por esta razón no logran llegar al
epitelio del intestino delgado (Raiden et al., 2013; Uribarren, 2017).
Únicamente en el intestino de los felinos se lleva a cabo esta fase; en el
caso que el felino se infeste por ooquistes esporulados, éstos son
digeridos y liberan los esporozoitos; en el caso de quistes tisulares se
liberan bradizoitos, en ambos casos llegan al intestino delgado y penetran
las células del epitelio donde se realiza la fase asexual; la fase sexual
inicia 2 días después en el caso de que le infección sea por quistes
tisulares y de 3 a 15 días en el caso de esporozoitos, la formación de
gametos se produce en los días indicados. (Esteves, 2011; Raiden et al.,
2013).
La formación de gametos se denomina gametogonia; el gameto
masculino se denomina microgameto y el femenino macrogameto; una
vez que se forman los gametos, el microgameto penetra en el
macrogameto formando el cigoto, dando paso a la formación de los
ooquistes. Los ooquistes son liberados al lumen del intestino y salen en
las heces de los felinos; los ooquistes liberados no están esporulados,
una vez que se encuentran en el ambiente se da la fase esporogónica
siempre y cuando se den las condiciones adecuadas para que ésta se
realice, siendo éstas un ambiente húmedo con temperatura cálida; por lo
general, pasarán de 1 a 5 días para que los ooquistes esporulen; éstos
pueden permanecer infectantes durante meses o hasta un año si las
condiciones son favorables ya que son muy resistentes al ambiente; su
viabilidad disminuye rápidamente a temperaturas mayores a 67 °C y
menores a -12°C; los felinos pueden excretar hasta 1 millón de ooquistes
7
no esporulados al día, en un periodo de 3 a 15 días o hasta 21 días; una
vez que el animal adquiere inmunidad cesa la excreción y mientras sea
inmunocompetente no volverá a excretar ooquistes (Esteves, 2011;
Franco, 2015; Giraldo, 2008; Raiden et al., 2013; Uribarren, 2017).
3.4.2 Fase asexual
Esta fase inicia con la ingestión de ooquistes esporulados o por quistes
tisulares, en el caso de los ooquistes llegan al aparato digestivo donde
son destruidos y liberan esporozoitos en células epiteliales del intestino
delgado, los que se diferencian y forman taquizoitos, los taquizoitos
replican rápidamente para luego salir a la circulación invadiendo
principalmente monocitos, se diseminan por vía sanguínea y llegan a los
diferentes tejidos; los taquizoitos se transforman en bradizoitos y se
forman los quistes tisulares. En el caso de ingestión de quistes tisulares al
igual que los ooquistes son destruidos por acción enzimática y liberan los
bradizoitos. Los bradizoitos invaden las células epiteliales del intestino
delgado y se diferencian a taquizoitos y se continúa con el ciclo antes
descrito (Esteves, 2011; Franco, 2015; Giraldo, 2008).
Figura 4. Ciclo de vida de T. gondii. Fuente (Gangneux & Dardé, 2012)
8
3.5 Transmisión
La transmisión se produce por la ingestión de quistes tisulares presentes
en tejidos de hospedadores intermediarios, en el caso de humanos por
ingestión de carne cruda o mal cocida, también puede darse por la
ingestión de ooquistes esporulados presentes en agua o alimentos
contaminados con heces de felinos. En cuanto a los bovinos, la fuente
principal de infección son los ooquistes presentes en las pasturas; en
humanos se describe la transmisión de la enfermedad por transfusión de
sangre, trasplante de órganos e inoculación de del parasito en el
laboratorio; se puede producir la transmisión vertical por vía
transplacentaria (Esteves, 2011; Franco, 2015; Uribarren, 2017).
Figura 5. Transmisión de T. gondii. Fuente (Gangneux & Dardé, 2012).
9
3.6 Patogenia
Al ser un parásito intracelular obligado requiere de mecanismos que le
ayuden a ingresar en las células blanco; este proceso se parece a la
fagocitosis. El parásito presenta organelos que le ayudan a la adhesión e
invasión que se encuentran en la zona apical principalmente el conoide,
además de la conformación de la membrana plasmática formada por una
tricapa lipídica la cual también interviene en la invasión; una vez que el
parasito ingresa en la célula forma una vacuola parasitófora y posterior a
esto inicia la reproducción asexual y se replica hasta producir la lisis
celular para posteriormente salir y los parásitos replicados buscan nuevas
células para continuar con el ciclo (Franco, 2015; Uribarren, 2017).
3.7 Inmunidad
Se produce una reacción tanto celular como humoral; en el inicio de la
infección la respuesta se da principalmente por neutrófilos, macrófagos y
células NK. Los anticuerpos de tipo IgM son los que el parásito estimula
en la fase aguda de la enfermedad, y se encuentran a partir del día 12 y
su pico se presenta alrededor del mes post infección. En la fase crónica
de la infección los del tipo IgG están presentes a partir de los tres meses
post infección, pudiendo permanecer por toda la vida del hospedero. El
mecanismo de defensa del parásito ante la respuesta inmune es la
formación de quistes que permanecen en los tejidos y ante una baja en la
inmunidad del hospedero los bradizoitos pueden generar taquizoitos y dar
lugar nuevamente a la infección aguda (Esteves, 2011; Uribarren, 2017).
3.8 Toxoplasmosis bovina
La toxoplasmosis bovina cursa sin sintomatología, siendo los bovinos un
hospedador intermediario para el parásito; en ellos se encuentran los
quistes tisulares, aunque son difíciles de aislar en infecciones naturales,
se cree que los bovinos tienen cierta resistencia a la infección y logran
eliminar los quistes, aunque experimentalmente se han logrado recuperar
los quistes hasta 267 días post infección. Un estudio realizado en
Colombia en 2015 arrojó 36,7% de prevalencia de T. gondii en carne lo
10
que sugiere que los bovinos podrían ser una fuente de infección para los
humanos (FAO, 2011; Franco, 2015; Jimenez, 2009; Plata, 2017). Pese a
que no se encuentra sintomatología en los bovinos adultos se han
registrado dos abortos en los cuales se logró aislar el parásito, sucedió
uno en Portugal a los 5 meses de gestación y otro en Estados Unidos al
final de la gestación, lo que da una premisa para involucrar al parasito
como posible causante de problemas en la reproducción bovina (Plata,
2017). En bovinos jóvenes especialmente en terneros puede causar
linfoadenopatia, fiebre, inapetencia, signos a nivel respiratorio y del
sistema nervioso (Cabral et al., 2013; Plata, 2017)
3.9 Toxoplasmosis humana
Las toxoplasmosis en el humano principalmente tiene importancia en
grupos determinados como en fetos, recién nacidos, mujeres
embarazadas, personas con toxoplasmosis congénita no diagnosticada o
personas que tengan enfermedades que comprometan el sistema inmune,
ya que normalmente causa sintomatología leve caracterizada por
linfoadenopatia; se pueden presentar más signos en casos de
toxoplasmosis aguda, como son dolor muscular, cefalea, astenia, fiebre,
dolor de garganta, problemas pulmonares y cardiacos en personas
inmunocompetentes. Es de la zoonosis mayormente distribuida a nivel
mundial ya que se cree que afecta a por lo menos a un tercio de la
población y su prevalencia varía de acuerdo a la zona geográfica; en
zonas tropicales la prevalencia aumenta (FAO, 2011; Montealegre,
Valbuena, Cortes, & Flóres, 2009; Montoya & Remington, 2008; Muñiz &
Mondragón, 2009; OMS, 2017; Uribarren, 2017).
3.9.1 Toxoplasmosis congénita
Esta se produce cuando la madre durante la gestación se infecta del
parásito y la sintomatología va a variar de acuerdo al día de gestación en
el que se encuentre al momento de ser infectada, siendo el primer tercio
de la gestación el momento en el que el parásito puede causar mayores
daños en el feto; si la madre se infecta en el último tercio de la gestación
11
podría darse un curso asintomático, los signos que se dan son:
encefalomielitis, retinocoroiditis, calcificación intracraneal e hidrocefalia,
también puede ocurrir aborto, parto prematuro, ceguera, estrabismo, entre
otros, relacionados a problemas del sistema nervioso (FAO, 2011;
Uribarren, 2017).
3.9.2 Toxoplasmosis ocular
Por lo general, afecta a pacientes con toxoplasmosis congénita pero
también se registran en casos de toxoplasmosis adquirida, los signos de
la enfermedad son: visión borrosa, fotofobia, dolor y lagrimeo; por lo
general se produce retinocoroiditis (Cordero, Pérez, Calleja, & García Ruiz
De Morales, 2010; Uribarren, 2017).
3.9.3 Toxoplasmosis en inmunocompromiso
Las personas que padecen SIDA o han recibido algún tipo de
quimioterapia se encuentran en este grupo; éstas se encuentran en riesgo
por el problema que presentan en el sistema inmunológico, siendo la
toxoplasmosis una de las causas de muerte de este tipo de pacientes. Los
taquizoitos principalmente afectan órganos como: sistema nervioso
central, ojos, corazón, hígado y pulmones. En pacientes con SIDA se ve
afectado el sistema nervioso central causando encefalitis necrotizante
multifocal (Pino, Salinas, & López, 2009; Ramírez et al., 2014; Uribarren,
2017).
3.10 Métodos de diagnóstico
Para el diagnostico de esta enfermedad se utilizan diferentes pruebas,
tanto serológicas como directas; el diagnóstico presuntivo es difícil de
realizar debido a que la sintomatología puede ser diversa y no es
especifica como para lograr éste. Dentro de las pruebas serológicas
tenemos: ELISA, hemoaglutinación indirecta, prueba de azul de metileno,
prueba de fijación del complemento reacción de inmunofluoresencia
indirecta y Western blot; se pueden utilizar pruebas directas como son el
12
aislamiento del parásito, PCR e histopatología (Besné, 2011; Esteves,
2011; Uribarren, 2017).
La prueba ELISA, se utiliza para identificar la presencia ya sea, de
antígenos o de anticuerpos y se basa en la afinidad y especificidad que
tiene este complejo. Las pruebas ELISA que detectan antígenos son
denominadas directas, y las que detectan anticuerpos se dominan
indirectas. Se utilizan enzimas para marcar el antígeno o el anticuerpo, en
el caso del ELISA directo el anticuerpo estará marcado y en el indirecto el
antígeno, si se la unión del complejo antígeno anticuerpo ésta enzima
reacciona y da un resultado de color, el que puede ser cuantificado
mediante densidad óptica (Calderón, 2007; Guzman, 2004).
3.11 Tratamiento
El tratamiento utilizado en humanos es la combinación de perimetamina
junto con sulfamidas, este tratamiento también se ha descrito en caninos,
felinos y ovinos; esta combinación debe ir suplementada con ácido fólico
debido a que la perimetamina al igual que las sulfamidas interviene en la
síntesis del ácido fólico interrumpiendo la formación de ARN y ADN en el
protozoario, pero debido a las grandes dosis que se deben utilizar
también causa deficiencia en el paciente; debido a que no se puede
utilizar perimetamina ni sulfamidas en el primer tercio de la gestación se
realiza un tratamiento con espiramicina (Montoya & Remington, 2008;
OMS, 2017; Sánchez et al., 2012) Cualquier tipo de tratamiento que se
utilice va dirigido a los taquizoitos, no hay tratamiento para eliminar los
quistes tisulares; en el caso de animales de consumo, específicamente en
los bovinos, no se describe un tratamiento. ya que el uso de antibióticos
es restringido en animales de consumo y se debe preferir la prevención
de la enfermedad (Esteves, 2011; Luyo, 2015).
13
3.12 Prevención
En humanos, las principales recomendaciones para prevenir la
toxoplasmosis son:
Consumir carne bien cocida y productos lácteos pasteurizados (FAO,
2011; Montoya & Remington, 2008).
Consumir vegetales y frutas (FAO, 2011; Montoya & Remington,
2008).
Al manipular heces de felinos utilizar guantes para evitar su contacto
directo (FAO, 2011).
En animales herbívoros se debe tratar de que no consuman ooquistes,
evitando la contaminación de heces de felinos la comida de los animales,
lo que es muy difícil de controlar; en animales carnívoros domésticos se
debe evitar que consuman carne o vísceras crudas, especialmente los
gatos que son los que mantienen el ciclo del parásito (Besné, 2011;
Esteves, 2011).
14
CAPÍTULO IV
4. MATERIALES Y MÉTODOS
4.1 Materiales
Kit ELISA indirecto para múltiples especies IDvet.
Muestras de suero bovino.
Guantes de nitrilo.
Mandil.
Puntas para micropipeta.
4.2 Equipos
Micropipeta multicanal.
Micropipeta.
Fotómetro de microplacas.
Software de lectura de placas IDvet.
4.3Metodología
4.3.1 Variables de estudio
Las variables que se analizaron en el estudio son: presencia o ausencia
de anticuerpos contra Toxoplasma gondii, estas variables son de tipo
nominales ya que los resultados posibles son presencia o ausencia.
4.3.2 Número de individuos analizados
Debido a que en el muestreo realizado por Agrocalidad existen 269
muestras de suero bovino, se realizó el análisis en todos estos sueros
pertenecientes a la provincia de Pichincha los que fueron tomados de
varios cantones de dicha provincia.
4.4 Métodos específicos del manejo del experimento
4.4.1 Kit ELISA indirecto multi especie para Toxoplasma gondii
Se utilizó un kit ELISA indirecto para detectar anticuerpos contra
Toxoplasma gondii en el suero de bovinos, el kit ELISA contiene el
15
antígeno P30 de Toxoplasma gondii y cuenta con 2 placas para 92
muestras cada una (IDvet, 2017).
El procedimiento que se utilizó para analizar las muestras recomendado
por (IDvet, 2017) es el siguiente:
Realizar una hoja de trabajo ubicando la identificación de la
muestra en cada pocillo.
Dejar el kit a temperatura ambiente por 30 minutos, exceptuando
los controles y el conjugado, que deben estar refrigerado.
Colocar 90 µl de diluyente por pocillo.
Colocar 10 µl de suero por pocillo de cada muestra a analizar.
Colocar 10 µl de control negativo y positivo.
Incubar la placa por 45 minutos.
Realizar 3 lavados por pocillo con 300 µl de solución de lavado
20x.
Preparar el conjugado 10x con el diluyente número 3.
Distribuir el conjugado 100 µl por pocillo.
Incubar por 30 minutos.
Realizar 3 lavados por pocillo con 300 µl de solución de lavado
20x.
Distribuir el sustrato 100 µl por pocillo.
Incubar durante 15 minutos en la oscuridad.
Distribuir el stop 100 µl por pocillo.
Leer la placa con el fotómetro, utilizando el software IDvet.
Los resultados se interpretaron como: ≥50 positivo, ≤40 negativo,
>40 y <50 dudoso.
4.5 Análisis estadístico
Para los resultados de la prueba ELISA se utilizó estadística descriptiva
con tablas y gráficos de frecuencia (Gorgas.; Cardiel ; Zamorano, 2011).
16
CAPÍTULO V
5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
5.1 Resultados Generales
A continuación se detallan los resultados de la prueba ELISA realizada a
los sueros bovinos procedentes de la provincia de Pichincha, se detalla
además el sexo, edad y la procedencia del animal.
Tabla 1. Resultados generales de la prueba ELISA para Toxoplasmosis
en sueros bovinos.
Positivos Negativos Dudosos Total
63 189 17 269
23,42% 70,26% 6,32% 100,00%
Figura 6. Resultados generales.
Los resultados demuestran que existe la presencia de toxoplasmosis
bovina en la provincia de Pichincha. Como se muestra en la tabla 1 el
porcentaje de positivos es de 23,42% (63/269), negativos 70,26%
(189/269) y 6,32% (17/269) de dudosos.
Cabe recalcar que el porcentaje de positivos no indica que los animales
se encuentren enfermos. Las muestras fueron analizadas con un ELISA
0,00%
10,00%
20,00%
30,00%
40,00%
50,00%
60,00%
70,00%
80,00%
Positivos Negativos Dudosos
Series1
17
indirecto el que mide anticuerpos de tipo IgG, los que indican un estado
crónico, demostrando que los animales estuvieron expuestos al parásito.
No se puede descartar la presencia de quistes tisulares porque, como se
mencionó, pueden sobrevivir durante toda la vida del hospedero
intermediario; en bovinos, aislar los quistes es difícil de lograr, solo se ha
realizado en infecciones experimentales (IDvet, 2017; Plata, 2017).
Este porcentaje de bovinos positivos indica una presencia moderada del
parásito, comparado con países vecinos como Colombia en el que existe
una prevalencia de 36,7%(Franco, 2015) y en Perú 17%(Esteves, 2011),
lo que indica que la provincia de Pichincha tiene un porcentaje de
positivos promedio dentro de ambos países.
En otros países donde se han realizados estudios similares se han
obtenido los siguientes resultados: Estonia 18,62% (Jokelainen, Tagel,
Motus, Viltrop, & Lassen, 2017), Estados Unidos 25% (Esteves, 2011),
Brasil 11% (Franco, 2015), por citar algunos ejemplos de prevalencia de
Toxoplasmosis bovina.
En el estudio se presentó un porcentaje de 6,30% de dudosos, lo que se
puede atribuir a que la cantidad de anticuerpos presentes en las muestras
cuyo resultado fue dudoso no es suficiente para que sean positivos. La
causa es que los animales aún no se encontraban en estado crónico de la
enfermedad, en el que se encuentra mayor cantidad de anticuerpos de
tipo IgG, los que son los que mide el kit utilizado en este estudio (IDvet,
2017).
18
5.2 Resultados por sexo
Tabla 2. Resultados por sexo de la prueba ELISA para Toxoplasmosis en
sueros bovinos.
Figura 7. Resultados por sexo de la prueba ELISA para Toxoplasmosis en sueros bovinos.
En la tabla 2 se muestran los resultados obtenidos por sexo, del total de
hembras el 24,5% (60/244) presentó anticuerpos para T. gondii, un 6,56%
(16/244) de dudosos y 68,85% 168 (244) de negativos. En el caso de los
machos de los machos los resultados fueron: 12% (3/25) tuvieron un
resultado positivo, 4% (1/25) de dudosos y 84% (21/25) negativos.
24,59%
68,85%
6,56%
12,00%
84,00%
4,00%
0,00%
10,00%
20,00%
30,00%
40,00%
50,00%
60,00%
70,00%
80,00%
90,00%
Positivos% Negativos% Dudosos%
Hembras
Machos
Sexo Positivos Positivos% Negativos Negativos% Dudosos Dudosos% Total
Hembras 60 24,59% 168 68,85% 16 6,56% 244
Machos 3 12,00% 21 84,00% 1 4,00% 25
19
5.3 Resultados por cantones
Tabla 3. Resultados por Cantones de la prueba ELISA para
Toxoplasmosis en sueros bovinos.
Figura 8. Resultados por Cantón.
Cantón Positivo Positivo % Negativo Negativo
%
Dudoso Dudoso
%
Total
Cayambe 6 22,22% 20 74,07% 1 3,70% 27
Mejía 6 12,77% 37 78,72% 4 8,51% 47
P. V. Maldonado 8 88,89% 0 0,00% 1 11,11% 9
Puerto Quito 2 9,52% 18 85,71% 1 4,76% 21
Quito 38 24,36% 109 69,87% 9 5,77% 156
Rumiñahui 2 28,57% 5 71,43% 0 0,00% 7
San Miguel de los
Bancos
1 50,00% 0 0,00% 1 50,00% 2
269
22,22%
12,77%
88,89%
9,52%
24,36% 28,57%
50,00%
3,70% 8,51%
11,11%
4,76% 5,77%
0,00%
50,00%
0,00%
10,00%
20,00%
30,00%
40,00%
50,00%
60,00%
70,00%
80,00%
90,00%
100,00%
Cayambe Mejía P. V.Maldonado
PuertoQuito
Quito Rumiñahui San Miguelde los
Bancos
Positivo %
Dudoso %
20
En la tabla 3 se muestran los resultados analizados por cantones, el
porcentaje de más alto de positivos se fue el del Pedro Vicente
Maldonado 88,89% (8/9), donde de nueve muestras tomadas ocho fueron
positivas.
5.4 Resultados por edad
Tabla 4. Resultados por grupo de edad de la prueba ELISA para
Toxoplasmosis en sueros bovinos.
Edad Positivos Positivo % Negativos Negativo
%
Dudosos Dudoso % Total
0,5 -3 Años 22 19,82% 85 76,58% 4 3,60% 111
3,1 - 6 Años 28 28,00% 64 64,00% 8 8,00% 100
6,1 -10 Años 13 22,41% 40 68,97% 5 8,62% 58
269
21
Figura 9. Resultados por edad.
En la tabla 4 se muestran los resultados por edad, para esto se dividió en
tres grupos de edad de 0,5 años a 3 años el primer grupo, de 3,1 a 6 años
el segundo y de 6,1 años a 10 años en el tercero. El grupo de 3,1 a 6
años el que presenta mayor número de positivos 28% (28/100).
19,82%
76,58%
3,60%
28,00%
64,00%
8,00%
22,41%
68,97%
8,62%
0,00%
10,00%
20,00%
30,00%
40,00%
50,00%
60,00%
70,00%
80,00%
90,00%
Positvo % Negativo % Dudoso %
0,5 -3 Años
3,1 - 6 Años
6,1 -10 Años
22
5.4 Resultados por predios
Tabla 5. Resultados por predios de la prueba ELISA para Toxoplasmosis
en sueros bovinos.
Predio Positivos Positivos
%
Negativos Negativos
%
Dudosos Dudosos
%
Total
Chausipanta 6 26,09% 14 60,87% 3 13,04% 23
Chontillas 1 4,76% 19 90,48% 1 4,76% 21
El buen Vivir 11 57,89% 7 36,84% 1 5,26% 19
El Caputlí 3 37,50% 5 62,50% 0 0,00% 8
El Carmen 1 25,00% 3 75,00% 0 0,00% 4
Greenwood 1 50,00% 0 0,00% 1 50,00% 2
La Esperanza 2 9,52% 18 85,71% 1 4,76% 21
Larcachaca 1 33,33% 2 66,67% 0 0,00% 3
Los Dragos 6 46,15% 7 53,85% 0 0,00% 13
Lote 04 1 33,33% 2 66,67% 0 0,00% 3
Piganta Agícola 1 20,00% 4 80,00% 0 0,00% 5
S/N La Moya 0 0,00% 7 87,50% 1 12,50% 8
S/N Pisambilla 0 0,00% 4 100,00% 0 0,00% 4
S/N, Chachil 1 9,09% 10 90,91% 0 0,00% 11
S/N, El Pedregal 0 0,00% 5 100,00% 0 0,00% 5
S/N, Las Tolas 6 35,29% 9 52,94% 2 11,76% 17
S/N, Musua 0 0,00% 12 92,31% 1 7,69% 13
S/N, Retiro Bajo 6 28,57% 13 61,90% 2 9,52% 21
S/N, Simón
Bolívar
2 9,52% 18 85,71% 1 4,76% 21
S/N, Turochico
Alto
1 14,29% 6 85,71% 0 0,00% 7
S/N, Turochico
Bajo
2 40,00% 3 60,00% 0 0,00% 5
San Fermando 8 88,89% 0 0,00% 1 11,11% 9
Santa Martha 1 5,56% 16 88,89% 1 5,56% 18
Suhi Potrero 2 25,00% 5 62,50% 1 12,50% 8
23
Figura 10. Resultados por predio
26
,09
%
4,7
6%
57
,89
%
37
,50
%
25
,00
%
50
,00
%
9,5
2%
33
,33
%
46
,15
%
33
,33
%
20
,00
%
0,0
0%
0,0
0%
9,0
9%
0,0
0%
35
,29
%
0,0
0%
28
,57
%
9,5
2%
14
,29
%
40
,00
%
88
,89
%
5,5
6%
25
,00
%
60
,87
%
90
,48
%
36
,84
%
62
,50
%
75
,00
%
0,0
0%
85
,71
%
66
,67
%
53
,85
%
66
,67
%
80
,00
%
87
,50
%
10
0,0
0%
90
,91
% 10
0,0
0%
52
,94
%
92
,31
%
61
,90
%
85
,71
%
85
,71
%
60
,00
%
0,0
0%
88
,89
%
62
,50
%
13
,04
%
4,7
6%
5,2
6%
0,0
0%
0,0
0%
50
,00
%
4,7
6%
0,0
0%
0,0
0%
0,0
0%
0,0
0%
12
,50
%
0,0
0%
0,0
0%
0,0
0%
11
,76
%
7,6
9%
9,5
2%
4,7
6%
0,0
0%
0,0
0%
11
,11
%
5,5
6%
12
,50
%
Positivos % Negativos Dudosos %
24
En la tabla 5 se muestran los resultados por predios, San Fernando
presentó el porcentaje más elevado 88,89% (8/9) de positivos.
25
CAPÍTULO VI
6. CONCLUSIONES
Se demostró la presencia de Toxoplasmosis bovina en la provincia
de Pichincha, presentando un porcentaje de positivos de 23,45%,
pese a que los bovinos no son un buen hospedero intermediario
para el T. gondii es discutible que al comer carne mal cocida o
cruda con presencia de quistes, tanto humanos como el resto de
animales carnívoros podrían contraer Toxoplasmosis. Además, por
la variabilidad del muestreo se debe continuar con los estudios
para mayor confiabilidad.
26
CAPITULO VII
7. BIBLIOGRAFÍA
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CONSTANTINO.pdf?sequence=1
31
CAPÍTULO VIII
8. ANEXOS
8.1 Tabla de resultados por animal.
Nº de muestra
Sexo Edad Años
Parroquia Cantón Predio Resultado
1 Hembra 3 Gualea Cantón Quito Los Dragos POSITIVO
2 Hembra 3 Gualea Cantón Quito Los Dragos POSITIVO
3 Hembra 8 Gualea Cantón Quito Los Dragos POSITIVO
4 Hembra 7 Gualea Cantón Quito Los Dragos Negativo
5 Hembra 6 Gualea Cantón Quito Los Dragos Negativo
6 Hembra 6 Gualea Cantón Quito Los Dragos POSITIVO
7 Hembra 7 Gualea Cantón Quito Los Dragos Negativo
8 Hembra 9 Gualea Cantón Quito Los Dragos POSITIVO
9 Hembra 5 Gualea Cantón Quito Los Dragos Negativo
10 Hembra 3 Gualea Cantón Quito Los Dragos Negativo
11 Hembra 1 Gualea Cantón Quito Los Dragos POSITIVO
12 Hembra 1 Gualea Cantón Quito Los Dragos Negativo
13 Hembra 0,66 Gualea Cantón Quito Los Dragos Negativo
14 Macho 0,5 Atahualpa Cantón Quito Piganta Agrícola Negativo
15 Macho 5 Atahualpa Cantón Quito Piganta Agrícola Negativo
16 Hembra 5 Atahualpa Cantón Quito Piganta Agrícola POSITIVO
17 Macho 4 Atahualpa Cantón Quito Piganta Agrícola Negativo
18 Hembra 1,6 Atahualpa Cantón Quito Piganta Agrícola Negativo
19 Hembra 3 Aloasi Cantón Mejía No Informa, La Moya Negativo
20 Hembra 10 Aloasi Cantón Mejía No Informa, La Moya Negativo
21 Hembra 3 Aloasi Cantón Mejía No Informa, La Moya Negativo
22 Hembra 3 Aloasi Cantón Mejía No Informa, La Moya Negativo
23 Hembra 3 Aloasi Cantón Mejía No Informa, La Moya Dudoso
24 Hembra 3 Aloasi Cantón Mejía No Informa, La Moya Negativo
25 Hembra 3 Aloasi Cantón Mejía No Informa, La Moya Negativo
26 Hembra 3 Aloasi Cantón Mejía No Informa, La Moya Negativo
27 Hembra 3 Nono Cantón Quito Santa Martha Negativo
28 Hembra 4 Nono Cantón Quito Santa Martha Negativo
29 Hembra 5 Nono Cantón Quito Santa Martha Negativo
30 Hembra 3 Nono Cantón Quito Santa Martha Negativo
31 Hembra 3 Nono Cantón Quito Santa Martha Negativo
32 Hembra 4 Nono Cantón Quito Santa Martha Negativo
33 Macho 2 Nono Cantón Quito Santa Martha Negativo
32
34 Hembra 3 Nono Cantón Quito Santa Martha Negativo
35 Hembra 2 Nono Cantón Quito Santa Martha Negativo
36 Hembra 1,5 Nono Cantón Quito Santa Martha Negativo
37 Hembra 3 Nono Cantón Quito Santa Martha Negativo
38 Macho 1,6 Nono Cantón Quito Santa Martha Negativo
39 Hembra 6 Nono Cantón Quito Santa Martha Negativo
40 Hembra 3 Nono Cantón Quito Santa Martha POSITIVO
41 Hembra 6 Nono Cantón Quito Santa Martha Negativo
42 Hembra 3 Nono Cantón Quito Santa Martha Negativo
43 Macho 1,5 Nono Cantón Quito Santa Martha Negativo
44 Hembra 9 Nono Cantón Quito Santa Martha Dudoso
45 Hembra 10 Machachi Cantón Mejía S/N, El Pedregal Negativo
46 Hembra 4 Machachi Cantón Mejía S/N, El Pedregal Negativo
47 Hembra 6 Machachi Cantón Mejía S/N, El Pedregal Negativo
48 Hembra 8 Machachi Cantón Mejía S/N, El Pedregal Negativo
49 Hembra 3 Machachi Cantón Mejía S/N, El Pedregal Negativo
50 Hembra 5 Machachi Cantón Mejía S/N,Retiro Bajo Negativo
51 Hembra 8 Machachi Cantón Mejía S/N,Retiro Bajo POSITIVO
52 Hembra 5 Machachi Cantón Mejía S/N,Retiro Bajo Negativo
53 Hembra 7 Machachi Cantón Mejía S/N,Retiro Bajo Negativo
54 Hembra 5 Machachi Cantón Mejía S/N,Retiro Bajo Negativo
55 Hembra 4 Machachi Cantón Mejía S/N,Retiro Bajo Negativo
56 Hembra 5 Machachi Cantón Mejía S/N,Retiro Bajo Negativo
57 Hembra 6 Machachi Cantón Mejía S/N,Retiro Bajo POSITIVO
58 Hembra 7 Machachi Cantón Mejía S/N,Retiro Bajo POSITIVO
59 Hembra 8 Machachi Cantón Mejía S/N,Retiro Bajo Dudoso
60 Hembra 7 Machachi Cantón Mejía S/N,Retiro Bajo Negativo
61 Hembra 5 Machachi Cantón Mejía S/N,Retiro Bajo POSITIVO
62 Hembra 5 Machachi Cantón Mejía S/N,Retiro Bajo Negativo
63 Hembra 6 Machachi Cantón Mejía S/N,Retiro Bajo Negativo
64 Hembra 5 Machachi Cantón Mejía S/N,Retiro Bajo POSITIVO
65 Hembra 6 Machachi Cantón Mejía S/N,Retiro Bajo Negativo
66 Hembra 8 Machachi Cantón Mejía S/N,Retiro Bajo Negativo
67 Hembra 4 Machachi Cantón Mejía S/N,Retiro Bajo Negativo
68 Hembra 5 Machachi Cantón Mejía S/N,Retiro Bajo Negativo
69 Hembra 6 Machachi Cantón Mejía S/N,Retiro Bajo POSITIVO
70 Hembra 4 Machachi Cantón Mejía S/N,Retiro Bajo Dudoso
71 Hembra 6 Aloag Cantón Mejía S/N, Musua Negativo
72 Hembra 5 Aloag Cantón Mejía S/N, Musua Negativo
73 Hembra 7 Aloag Cantón Mejía S/N, Musua Dudoso
33
74 Hembra 5 Aloag Cantón Mejía S/N, Musua Negativo
75 Hembra 4 Aloag Cantón Mejía S/N, Musua Negativo
76 Hembra 7 Aloag Cantón Mejía S/N, Musua Negativo
77 Hembra 5 Aloag Cantón Mejía S/N, Musua Negativo
78 Hembra 6 Aloag Cantón Mejía S/N, Musua Negativo
79 Hembra 6 Aloag Cantón Mejía S/N, Musua Negativo
80 Hembra 5 Aloag Cantón Mejía S/N, Musua Negativo
81 Hembra 5 Aloag Cantón Mejía S/N, Musua Negativo
82 Hembra 3 Aloag Cantón Mejía S/N, Musua Negativo
83 Macho 1,5 Aloag Cantón Mejía S/N, Musua Negativo
84 Hembra 7 Pintag Cantón Quito S/N, Chachil Negativo
85 Macho 3 Pintag Cantón Quito S/N, Chachil Negativo
86 Hembra 5 Pintag Cantón Quito S/N, Chachil Negativo
87 Hembra 3 Pintag Cantón Quito S/N, Chachil Negativo
88 Hembra 2 Pintag Cantón Quito S/N, Chachil Negativo
89 Hembra 2 Pintag Cantón Quito S/N, Chachil Negativo
90 Hembra 2 Pintag Cantón Quito S/N, Chachil Negativo
91 Macho 1 Pintag Cantón Quito S/N, Chachil POSITIVO
92 Hembra 3 Pintag Cantón Quito S/N, Chachil Negativo
93 Hembra 2 Pintag Cantón Quito S/N, Chachil Negativo
94 Hembra 2 Pintag Cantón Quito S/N, Chachil Negativo
95 Hembra 4 Pintag Cantón Quito El Capulí Negativo
96 Hembra 3 Pintag Cantón Quito El Capulí Negativo
97 Hembra 2 Pintag Cantón Quito El Capulí POSITIVO
98 Hembra 4 Pintag Cantón Quito El Capulí POSITIVO
99 Hembra 3 Pintag Cantón Quito El Capulí Negativo
100 Macho 3 Pintag Cantón Quito El Capulí POSITIVO
101 Macho 2 Pintag Cantón Quito El Capulí Negativo
102 Hembra 7 Pintag Cantón Quito El Capulí Negativo
103 Hembra 4 Pintag Cantón Quito Chaupisanta Dudoso
104 Hembra 2 Pintag Cantón Quito Chaupisanta Negativo
105 Hembra 8 Pintag Cantón Quito Chaupisanta Negativo
106 Hembra 6 Pintag Cantón Quito Chaupisanta POSITIVO
107 Hembra 6 Pintag Cantón Quito Chaupisanta Negativo
108 Hembra 5 Pintag Cantón Quito Chaupisanta Negativo
109 Hembra 2 Pintag Cantón Quito Chaupisanta Negativo
110 Hembra 2 Pintag Cantón Quito Chaupisanta POSITIVO
111 Hembra 2 Pintag Cantón Quito Chaupisanta Negativo
112 Hembra 2 Pintag Cantón Quito Chaupisanta Negativo
113 Hembra 2 Pintag Cantón Quito Chaupisanta Negativo
34
114 Hembra 5 Pintag Cantón Quito Chaupisanta POSITIVO
115 Hembra 7 Pintag Cantón Quito Chaupisanta POSITIVO
116 Hembra 2 Pintag Cantón Quito Chaupisanta Negativo
117 Hembra 5 Pintag Cantón Quito Chaupisanta Negativo
118 Hembra 7 Pintag Cantón Quito Chaupisanta Negativo
119 Hembra 4 Pintag Cantón Quito Chaupisanta Dudoso
120 Hembra 6 Pintag Cantón Quito Chaupisanta Dudoso
121 Hembra 3 Pintag Cantón Quito Chaupisanta POSITIVO
122 Hembra 3 Pintag Cantón Quito Chaupisanta Negativo
123 Hembra 3 Pintag Cantón Quito Chaupisanta Negativo
124 Hembra 2 Pintag Cantón Quito Chaupisanta POSITIVO
125 Macho 2 Pintag Cantón Quito Chaupisanta Negativo
126 Hembra 2 Sangolquí Cantón Rumiñahui El Carmen Negativo
127 Hembra 3 Sangolquí Cantón Rumiñahui El Carmen POSITIVO
128 Hembra 4 Sangolquí Cantón Rumiñahui El Carmen Negativo
129 Hembra 3 Sangolquí Cantón Rumiñahui El Carmen Negativo
130 Hembra 3 P. V. Maldonado Cantón P. V. Maldonado San Fernando POSITIVO
131 Hembra 3 P. V. Maldonado Cantón P. V. Maldonado San Fernando POSITIVO
132 Macho 3,5 P. V. Maldonado Cantón P. V. Maldonado San Fernando POSITIVO
133 Hembra 3 P. V. Maldonado Cantón P. V. Maldonado San Fernando POSITIVO
134 Hembra 4 P. V. Maldonado Cantón P. V. Maldonado San Fernando POSITIVO
135 Hembra 3,5 P. V. Maldonado Cantón P. V. Maldonado San Fernando POSITIVO
136 Hembra 3,5 P. V. Maldonado Cantón P. V. Maldonado San Fernando Dudoso
137 Hembra 3,5 P. V. Maldonado Cantón P. V. Maldonado San Fernando POSITIVO
138 Hembra 3,5 P. V. Maldonado Cantón P. V. Maldonado San Fernando POSITIVO
139 Hembra 1,5 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Negativo
140 Hembra 4 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Negativo
141 Macho 1,5 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Negativo
142 Hembra 0,83 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Negativo
143 Macho 1,25 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Dudoso
144 Hembra 6 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Negativo
145 Hembra 4 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Negativo
146 Hembra 4 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Negativo
147 Macho 0,6 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Negativo
148 Hembra 2 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Negativo
149 Macho 0,83 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Negativo
150 Macho 0,83 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Negativo
151 Hembra 7 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar POSITIVO
152 Hembra 5 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Negativo
153 Hembra 6 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar POSITIVO
35
154 Macho 1 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Negativo
155 Hembra 7 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Negativo
156 Macho 1,5 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Negativo
157 Hembra 7 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Negativo
158 Macho 1 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Negativo
159 Macho 1,5 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Negativo
160 Hembra 7 Gualea Cantón Quito S/N, Las Tolas POSITIVO
161 Hembra 7 Gualea Cantón Quito S/N, Las Tolas POSITIVO
162 Hembra 6 Gualea Cantón Quito S/N, Las Tolas Negativo
163 Hembra 6 Gualea Cantón Quito S/N, Las Tolas POSITIVO
164 Hembra 5 Gualea Cantón Quito S/N, Las Tolas Negativo
165 Hembra 9 Gualea Cantón Quito S/N, Las Tolas Negativo
166 Hembra 5 Gualea Cantón Quito S/N, Las Tolas Negativo
167 Hembra 6 Gualea Cantón Quito S/N, Las Tolas Dudoso
168 Hembra 7 Gualea Cantón Quito S/N, Las Tolas Negativo
169 Hembra 3 Gualea Cantón Quito S/N, Las Tolas Negativo
170 Hembra 8 Gualea Cantón Quito S/N, Las Tolas POSITIVO
171 Hembra 8 Gualea Cantón Quito S/N, Las Tolas Negativo
172 Hembra 7 Gualea Cantón Quito S/N, Las Tolas Negativo
173 Hembra 6 Gualea Cantón Quito S/N, Las Tolas POSITIVO
174 Hembra 4 Gualea Cantón Quito S/N, Las Tolas POSITIVO
175 Hembra 0,6 Gualea Cantón Quito S/N, Las Tolas Negativo
176 Hembra 0,75 Gualea Cantón Quito S/N, Las Tolas Dudoso
177 Hembra 4 Nanegal Cantón Quito El Buen Vivir POSITIVO
178 Hembra 6,5 Nanegal Cantón Quito El Buen Vivir POSITIVO
179 Hembra 7,5 Nanegal Cantón Quito El Buen Vivir Dudoso
180 Hembra 6 Nanegal Cantón Quito El Buen Vivir POSITIVO
181 Hembra 7,5 Nanegal Cantón Quito El Buen Vivir Negativo
182 Hembra 7 Nanegal Cantón Quito El Buen Vivir POSITIVO
183 Hembra 2 Nanegal Cantón Quito El Buen Vivir POSITIVO
184 Hembra 3,5 Nanegal Cantón Quito El Buen Vivir POSITIVO
185 Hembra 5 Nanegal Cantón Quito El Buen Vivir Negativo
186 Hembra 4 Nanegal Cantón Quito El Buen Vivir POSITIVO
187 Hembra 5 Nanegal Cantón Quito El Buen Vivir Negativo
188 Hembra 1 Nanegal Cantón Quito El Buen Vivir Negativo
189 Hembra 1 Nanegal Cantón Quito El Buen Vivir POSITIVO
190 Hembra 1 Nanegal Cantón Quito El Buen Vivir Negativo
191 Hembra 1 Nanegal Cantón Quito El Buen Vivir Negativo
192 Hembra 0,75 Nanegal Cantón Quito El Buen Vivir POSITIVO
193 Hembra 4 Nanegal Cantón Quito El Buen Vivir POSITIVO
36
194 Hembra 2 Nanegal Cantón Quito El Buen Vivir POSITIVO
195 Hembra 2 Nanegal Cantón Quito El Buen Vivir Negativo
196 Hembra 1,5 Pacto Cantón Quito Chontillas Negativo
197 Hembra 1,5 Pacto Cantón Quito Chontillas Negativo
198 Hembra 1,5 Pacto Cantón Quito Chontillas Dudoso
199 Hembra 1,5 Pacto Cantón Quito Chontillas Negativo
200 Hembra 1,5 Pacto Cantón Quito Chontillas Negativo
201 Hembra 1 Pacto Cantón Quito Chontillas Negativo
202 Hembra 1 Pacto Cantón Quito Chontillas Negativo
203 Hembra 1,5 Pacto Cantón Quito Chontillas POSITIVO
204 Hembra 1 Pacto Cantón Quito Chontillas Negativo
205 Hembra 1,5 Pacto Cantón Quito Chontillas Negativo
206 Hembra 1,5 Pacto Cantón Quito Chontillas Negativo
207 Hembra 5 Pacto Cantón Quito Chontillas Negativo
208 Hembra 9 Pacto Cantón Quito Chontillas Negativo
209 Hembra 7 Pacto Cantón Quito Chontillas Negativo
210 Hembra 7 Pacto Cantón Quito Chontillas Negativo
211 Hembra 5 Pacto Cantón Quito Chontillas Negativo
212 Hembra 7 Pacto Cantón Quito Chontillas Negativo
213 Hembra 4 Pacto Cantón Quito Chontillas Negativo
214 Hembra 7 Pacto Cantón Quito Chontillas Negativo
215 Hembra 9 Pacto Cantón Quito Chontillas Negativo
216 Hembra 8 Pacto Cantón Quito Chontillas Negativo
217 Hembra 4 Los Bancos Cantón San M. de B. Greenwood Dudoso
218 Hembra 4 Los Bancos Cantón San M. de B. Greenwood POSITIVO
219 Hembra 5 Sangolquí Cantón Rumiñahui Lote 04 Negativo
220 Hembra 4 Sangolquí Cantón Rumiñahui Lote 04 POSITIVO
221 Hembra 0,91 Sangolquí Cantón Rumiñahui Lote 04 Negativo
222 Hembra 4 Nono Cantón Quito La Esperanza Negativo
223 Hembra 7 Nono Cantón Quito La Esperanza Negativo
224 Hembra 7 Nono Cantón Quito La Esperanza Negativo
225 Hembra 7 Nono Cantón Quito La Esperanza POSITIVO
226 Hembra 6 Nono Cantón Quito La Esperanza Negativo
227 Hembra 4 Nono Cantón Quito La Esperanza POSITIVO
228 Hembra 4 Nono Cantón Quito La Esperanza Negativo
229 Hembra 7 Nono Cantón Quito La Esperanza Negativo
230 Hembra 4 Nono Cantón Quito La Esperanza Negativo
231 Hembra 4 Nono Cantón Quito La Esperanza Negativo
232 Hembra 7 Nono Cantón Quito La Esperanza Negativo
233 Hembra 4 Nono Cantón Quito La Esperanza Negativo
37
234 Macho 3 Nono Cantón Quito La Esperanza Negativo
235 Hembra 7 Nono Cantón Quito La Esperanza Negativo
236 Hembra 7 Nono Cantón Quito La Esperanza Negativo
237 Hembra 7 Nono Cantón Quito La Esperanza Dudoso
238 Hembra 7 Nono Cantón Quito La Esperanza Negativo
239 Hembra 7 Nono Cantón Quito La Esperanza Negativo
240 Hembra 5 Nono Cantón Quito La Esperanza Negativo
241 Hembra 4 Nono Cantón Quito La Esperanza Negativo
242 Hembra 4 Nono Cantón Quito La Esperanza Negativo
243 Hembra 3 Cangahua Cantón Cayambe Sushi Potrero Negativo
244 Hembra 3 Cangahua Cantón Cayambe Sushi Potrero Negativo
245 Hembra 6 Cangahua Cantón Cayambe Sushi Potrero POSITIVO
246 Hembra 2 Cangahua Cantón Cayambe Sushi Potrero POSITIVO
247 Hembra 4 Cangahua Cantón Cayambe Sushi Potrero Negativo
248 Hembra 6 Cangahua Cantón Cayambe Sushi Potrero Negativo
249 Hembra 4 Cangahua Cantón Cayambe Sushi Potrero Dudoso
250 Hembra 6 Cangahua Cantón Cayambe Sushi Potrero Negativo
251 Hembra 4 Olmedo Cantón Cayambe S/N, Turochico Bajo Negativo
252 Hembra 3 Olmedo Cantón Cayambe S/N, Turochico Bajo POSITIVO
253 Hembra 2 Olmedo Cantón Cayambe S/N, Turochico Bajo Negativo
254 Hembra 7 Olmedo Cantón Cayambe S/N, Turochico Bajo POSITIVO
255 Hembra 10 Olmedo Cantón Cayambe S/N, Turochico Bajo Negativo
256 Hembra 10 Cangahua Cantón Cayambe S/N Pisambillla Negativo
257 Hembra 1 Cangahua Cantón Cayambe S/N Pisambillla Negativo
258 Hembra 1 Cangahua Cantón Cayambe S/N Pisambillla Negativo
259 Hembra 9 Cangahua Cantón Cayambe S/N Pisambillla Negativo
260 Hembra 3 Cangahua Cantón Cayambe Larcachaca Negativo
261 Hembra 7 Cangahua Cantón Cayambe Larcachaca Negativo
262 Hembra 3 Cangahua Cantón Cayambe Larcachaca POSITIVO
263 Hembra 2 Olmedo Cantón Cayambe S/N, Turochico Alto Negativo
264 Hembra 7 Olmedo Cantón Cayambe S/N, Turochico Alto Negativo
265 Hembra 2 Olmedo Cantón Cayambe S/N, Turochico Alto Negativo
266 Hembra 1 Olmedo Cantón Cayambe S/N, Turochico Alto Negativo
267 Macho 5 Olmedo Cantón Cayambe S/N, Turochico Alto Negativo
268 Macho 1 Olmedo Cantón Cayambe S/N, Turochico Alto Negativo
269 Hembra 4 Olmedo Cantón Cayambe S/N, Turochico Alto POSITIVO