Post on 31-Jul-2015
ESTUDIO MICROSCOPICO DE CÉLULAS Y TEJIDOS Las células pueden ser observadas en estado vivo
En cultivos in Vitro
Preparación de cortes histologicos Se realizan rebanadas finisimas (cortes) Técnica a la parafina.-
1.- Obtención del tejido.- biopsia2.- Fijación.- formaldehído al 4 %3.- Deshidratación.- En alcohol4.- Aclaración.- Con Xilol
5.- Inclusión.- Inclusión en parafina6.- Corte.- con microtomo
7.- Tinción y montaje.- se sustituye la parafina por agua
Partes de un microscopio óptico
SISTEMA ÓPTICO
OCULAR
OBJETIVO:
CONDENSADOR
DIAFRAGMA:
FOCO:
SISTEMA MECANICO
SOPORTE
PLATINA
CABEZAL
REVÓLVER
TORNILLOS DE ENFOQUE
MICROSCOPIO ELECTRONICO.- * Uso de haz de electrones * Resolución de 1 nm.
MICROSCOPIO ELECTRONICO POR TRANSMISIÓN
PREPARACIÓN DE CORTES CON ME.Fijación.- con glutaraldeido y post fijación con acido osmico (+A.Tánico)Inclusión.-Usando resinas (Epson, Araldite o Spur) a 60 º C Corte.- 60 a 80 nm de espesorTinción.- con acido osmico, sales de Uranio y Plomo
Microfotográficas electrónicas.- Electrones invisibles pasan por pantalla fluoroscópica que proporciona macrofotografía electrónica.
MICROSCOPIA ELECTRONICA DE BARRIDO.- (tridimencional)
Rastrea la muestra
Generan imagen en televisión llamada microfotografia electronica
PLANOS DE CORTES HISTOLOGICOS.-
– Longitudinal– Transversal– Oblicuo rasante o
tangencial– Imágenes de
tubos (vasos sanguíneos)
– Tabiques o septos (Hepatocitos)
TINCIÓN HISTOLÓGICA.-HematoxilinaEosina
Coloración basófila y acidófilaSustancia basofila afinidad por colorantes basicos o alcalinosSustancia acidofila afinidad por colorantes ácidos
Reacción de ácido periódico de Schiff (PAS).- para teñir polisacaridos Demostrar presencia de glúcogenoColor violeta o magenda.
Colorantes de grasa.- se usa cortes por congelación.Escarlata R. Sudan III o Sudan IV
ARTEFACTOS.- Degeneración post morten
+ Contracción
+ Precipitado
+ Pliegues y arrugas
+ Muescas de la cuchilla
+ Manejo burdo de los tejidos
MICROSCOPIO ELECTRONICO.- * Uso de haz de electrones * Resolución de 1 nm.
MICROSCOPIO ELECTRONICO POR TRANSMISIÓN
PREPARACIÓN DE CORTES CON ME.Fijación.- con glutaraldeido y post fijación con acido osmico (+A.Tánico)Inclusión.-Usando resinas (Epson, Araldite o Spur) a 60 º C Corte.- 60 a 80 nm de espesorTinción.- con acido osmico, sales de Uranio y Plomo
Microscopio comun (o de luz) y sus aplicaciones.Amplifica la imagen
Permite identificar el objeto con mayor detalle (resolución)
Microscopio por contraste de fase.-permite observación de células vivas
Microscópio por fluorosencia.- Señala sitios de localización especifica
Tinción por inmunofluorescencia.- con colorantes fluorescentes (fluoresceína)Tinción inmunoaurica.- con oro coloidal
EMPLEO DEL MICROSCOPIO DE LUZObjetivo de poca potencia (objetivo de rastreo)Objetivo de gran amplificaciónObjetivo de inmersión en aceite.
Necesidad de conservar limpias las lentes.- Suciedad en el cubre objetos Aceite en el objetivoSuciedad en el ocularSuciedad en el condensador.