Post on 15-Oct-2015
Prctica 1:El Microscopio ptico.Observacin Microscpica de los Organismos
Tipos de microscopiosTipos de microscopios
Microscopio ptico
Campo luminoso
Campo oscuro
Contraste de fases
Interferencia
Fluorescencia
Polarizacin
Microscopio electrnico
de Transmisin (TEM)
de Barrido (SEM)
Microscopio de campo luminosoMicroscopio de campo luminoso
! El campo de observacin se encuentra iluminado; los microorganismos aparecen ms oscuros que el fondo debido a que absorben luz.
! Partes del microscopio ptico.
! Poder de resolucin: capacidad de una lente para mostrar dos objetos muy cercanos como distintos, discretos y separados.
! Apertura Numrica (AN): expresin matemtica que describe la forma en que la luz es concentrada por el condensador y captada por el objetivo. AN = n x sen
n = ndice de refraccin del medio entre las lentes y la muestra (1.0 para el aire; 1.56 para el aceite de inmersin).
= ngulo formado por el eje ptico y los rayos de luz ms externos que son captados por el objetivo
! Amplificacin: La amplificacin de un microscopio es el producto de nmero de aumentos del objetivo por los del ocular. Aumentos tiles: x1000 a x2000
Microscopio de campo luminosoMicroscopio de campo luminoso
! Lmite de resolucin (d): distancia ms pequea por la cual dos objetos pueden estar separados y ser todava distinguibles como dos objetos separados." d, depende de la AN y de la longitud de onda de la luz
empleada:
d = / (AN obj + AN cond) = / (2AN)
" Formas de reducir el lmite de resolucin:#Disminuyendo la longitud de onda.#Aumentando la Apertura Numrica.
"El lmite de resolucin mximo que se consigue en los microscopios de campo luminoso se sita en 0.22-0.25 m.
Microscopio de campo luminosoMicroscopio de campo luminoso! rea de campo: dimetro de la parte de la preparacin
que se est viendo al microscopio.! Profundidad de campo: espesor de la preparacin
enfocada en cualquier momento (mayor a pequeos aumentos).
! Distancia focal: es la relacin existente entre la longitud del tubo del microscopio empleado y la amplificacin usada en un momento dado.
DF Longitud del tuboAmplificacion
=
! Distancia de trabajo: espacio existente entre el punto ms bajo del objetivo y el objeto enfocado.
! Caractersticas de los objetivos. Resumen.
Observacin de muestras al microscopio ptico
Epidermis de cebolla Hoja de musgo Pulpa de tomate
Microscopa de campo luminoso
Profase
Anafase
Micrografa de un squash de meristemo apical radical de cebolla teido con orcena mostrando distintas fases de la mitosis.
Metafase
Telofase
Oculares
Portaobjetos cruzado acoplableBrazo
Tubo binocular
Revolver
ObjetivosPlatina portaobjetos
CondensadorMandos movimiento de la platina
Diafragma irisFiltro
Iluminacin por proyeccinBase o pie
Mandos de ajuste fino y grueso
Fotografa del cabezal binocular de un microscopio.
Vista lateral del revolver con los objetivos enroscados
Vista inferior del revolver, pieza donde se enroscan los objetivos de un microscopio.
Fotografa de la platina. Se observan la platina mvil, los tornillos de movimiento de la platina mvil, y los tornillos macro y micromtrico.
Fuente luminosa
Platina mvil
Platina
Tornillos de movimiento de la platina mvil
Tornillos macro y micromtrico
Objetivos
Condensador
Fotografa lateral de la platina. Se observan la platina mvil, los tornillos de movimiento de la platina mvil, y los tornillos macro y micromtrico.
Fuente luminosa
Platina mvil
Platina
Tornillos de movimiento de la platina mvil
Tornillos macro y micromtrico
Condensador
Detalle del condensador y la fuente luminosa.
Condensador
Fuente luminosa
Platina
Diafragma iris
Tornillos de movimiento de la platina mvil
Amplificacin en un sistema de dos lentes
Condensador
Objetivo
Ocular
Ojo Muestra
Imagen realformada porel objetivo(invertida)
Imagenvirtual
Re
f
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a
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-
1
Lente objetivo
Condensador
PortaobjetosAireAceite
Eje ptico
Rayos de luz refractados
Re
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-
2
Lente objetivo
CondensadorPortaobjetos
Cubreobjetossobre la muestra
Eje ptico
Rayos de luz refractados
Aire Aceite
Lente frontal del objetivo
La apertura numrica
Eje ptico
= ngulo que formanel rayo de luz msexterno captado porel objetivo y el ejeptico del mismo.
Fuente de luz
Porta de vidrio
Objetivo delmicroscopio
Lente frontal del objetivo
Determinacin de la apertura numrica
AN = n x sen Ejemplos:Objetivo seco:AN = 1.00 x sen 40AN = 0.64 (1)
Aire, n = 1Aire, n = 1
n = 1.52
= 40 = 58
Aceite, n = 1.52
Porta de vidrio n = 1.52
Aire, n = 1
Poder de resolucin El ojo humano puede separar puntos distantes 0.25 mm 0.25 mm
El microscopio ptico puede separarpuntos de 0.25 m de separacn
0.25 m
El microscopio electrnico puede sepa-rar puntos de una distancia inferior a 5unidades Angstrom.
5 A
Profundidad de campo
10x 1 m
P.c.
7 m 40x 1 m
P.c.
1.3 m
100x 1 m
P.c.
0.5 m
rea de campo
Aspecto del rea de campo de una muestra. Observarcomo a medida que la amplificacin aumenta, el objetotambin lo hace, pero el rea del campo disminuye.
x4
3.5 mm
x10
1,5 mm
x40
0.35 mm
Los objetivos
Aumentos: x 5, x10, x20, x45, x100Apertura Numrica: 0.12, 0.17, 0.54,
0.65, 1.3Longitud del tubo: 160 mmGrosor del cubreobjetos: 0.18 mm
Caractersticas tpicas de los objetivos
ObjetivosSeco de pocos
aumentos(10 x)
Seco de muchosaumentos
(40 x)De inmersin
(100 x)Amplificacin
(con un ocular de 10 x) 100 aumentos 400 aumentos 1000 aumentosDistancia focal 16 mm 4 mm 1.8 mm
Distancia de trabajo 4 - 8 mm 0.2 - 0.6 mm 0.11 - 0.16 mmApertura Numrica 0.25 0.85 1.25
Lmite de resolucin 1.10 m 0.32 m 0.22 mProfundidad de campo 7.0 m 1.3 m 0.5 m
rea de campo 1.5 mm 0.35 mm 0.17 mm
Imagen 1
Portaobjetos
Imagen 2
Gota de agua
Imagen 3
Epidermis
Imagen 4
Epidermis
Imagen 5
Cubreobjetos
Imagen 6
Presionar el cubreobjetos
Clulas epidrmicas de cebolla (Allium sp)
Ncleos
Pared celular
Observacin al microscopio (x40)
Imagen 7
Colorantes
Imagen 8
Verter una gota de colorante en el borde del cubreobjetos
Imagen 9
Con ayuda de una tira de papel de filtro hacer pasarel colorante a travs de la muestra por capilaridad
Imagen 10
Musgo
Gota de agua
Imagen 11
Coger una hojita con las pinzas
Gota de agua
Imagen 12
Colocar la hojita encima de la gota
Imagen 13
Colocar un cubreobjetos y aadir msagua si es necesario
Imagen 14
Pulpa del tomate
Gota de agua
Imagen 15
Pulpa de tomate
Imagen 16
Poner un cubre y presionar ligeramente
Imagen 18
Aadir una gota de colorante
Adsorber con una tira de papel