Post on 24-Oct-2015
GATEWAY® PYES-DEST52 VECTOR
DRA. MARTHA GUERRERO OLAZARÁN
DR. MARÍA JOSÉ VIADER SALVADÓ
MC. EDDY LUZ CAB BARRERA
EQUIPO 3:
CINTHIA VIOLETA HERNÁNDEZ PUENTE
LAURA CRISTINA LLANES MELGOZA
ISAAC MISAEL VÁZQUEZ HERNÁNDEZ
• Es una tecnología que toma ventaja de las propiedades de la recombinaciónsitio-específica del bacteriófago lambda (Landy, 1989) para proveer unarápida y eficiente forma de mover el gen de interés en múltiples sistemas devectores. Para expresar el gen de interés usando esta tecnología:
1. Clonar el gen de interés en un vector Gateway .
2. Generar una clona de expresión al realizar una recombinación LR entre elclon de entrada y el vector.
3. Transformar la clona de expresión en Saccharomyces cerevisiae y hacer elensaño para la expresión del gen de interés.
POLYLINKER
EL INSERTO
Debe tener una secuencia consenso para levaduras.
Para inducir la expresión del promotor GAL1, se añade galactosa al medio.
La transcripción de GAL1 se reprime en presencia de glucosa.
Si las células se mantuvieron con glucosa, la proteína puede ser detectada luego de 4 horas de haber inducido con galactosa.
La proteína recombinante puede ser detectada en células que han sido cultivadas con rafinosa por 2 horas antes de la inducción de la galactosa.
PARA DETECTAR LA PROTEÍNA
Anti-His
(c-terminal) por
Invitrogen
Anticuerpos Anti-V5
Ensayo enzimático o
Western blot
VECTOR
APLICACIONES• Vector que se utiliza en clonación, utilizando cepas de E.coli
que no se vean afectadas por el gen CcdB. Cepasrecomendadas por la compañía:
• También se utiliza como vector de expresión enSaccharomyces cerevisiae, el cual utiliza el sistemade recombinación sitio especifica como marcadorde la inserción correcta del fragmento de DNA deinterés.
• Para realizar tanto clonación o expresión, la empresa recomienda el uso del sistema Gateway Technology, para unos mejores resultados.
COSTOS
BIBLIOGRAFÍA
• Invitrogen (2002). pYES-DEST52 Gateway™ Vector. [EN LÍNEA] Disponible en: http://tools.lifetechnologies.com/content/sfs/manuals/pyesdest52_man.pd. [Último acceso 15 Noviembre 2013].