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7/24/2019 Cromatografa Mgter Murillo
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CromatografaMgter. Valentn Murillo Torres
Reg 1418
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Mikhail Tswett, 1906
Separacin de pigmentos vegetales usando una
columna de carbonato clcico.
ORIGEN
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La cromatografa es un mtodo de separacin en el
que se aprovechan las diferencias en el
comportamiento de particin entre una fase mvil y
una fase estacionaria para separar los componentes
de una mezcla.
CROMATOGRAFA
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Cromatografa gas-liquido (CGL) que es una!romatografa de "arti!i#n.
Cromatografa gas-s#lido (CG$) que es una!romatografa de adsor!i#n.
$i es un %uido su"er!rti!o(C&$) "uede ser
de "arti!i#n o de adsor!i#n
Si es Gas:
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La CLM es un 'ariedad de !romatografalquida en fase in'ersa que !ontienemi!elas generalmente de dode!il sulfatos#di!o que a!tan !omo modi!adores dela fase m#'il * un sol'ente org+ni!o oal!o,ol de !adena !orta
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FASE ESTACIONARIA: (matriz soportecromatogrfico! componente esttico de la
cromatografa.
FASE MVIL: (eluyente! solvente que arrastra atravs de la columna los componentes de la mezcla
a analizar.
TERMINOLOGA de IMPORTANCIA
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ELUCIN: paso de fase mvil a travs de unacolumna hasta lograr la salida de los solutos.
ELUIDO: fase mvil que se recoge a la salida de una
columna
CROMATOGRAMA: "erfil cromatogrfico perfil deelucin. #epresentacin grfica de la cuantificacin
de solutos en el eludo de una columna.
TERMINOLOGA
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VOLUMEN DE ELUCIN: volumen de fase mvil que
pasa a travs de la columna hasta que sale cada soluto.
VOLUMEN MUERTO: volumen de elucin de unamolcula que via$a a travs de la columna con la
velocidad de la fase mvil que no e%perimenta ning&n
retraso. 'ambin se llama volumen de e%clusin.
TERMINOLOGA
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e "a"eln !a"a nae gases
e e/!lusi#n mole!ular 0nter!amio i#ni!o2arti!i#n3nidad2LC
MTODOS CROMATOGRFICOS
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CROMATOGRAFA EN PAPEL
La cromatografa en papel es una tcnica ampliamente
utilizada en el laboratorio debido a su ba$o costo y a la
rapidez del anlisis.
Se realiza colocando el pimento sobre una ho$a de
papel filtro y posteriormente ste se coloca en un
disolvente (generalmente un disolvente fcil de
evaporar!.
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CROMATOGRAFA DE CAPA FINA
La cromatografa en capa fina se basa en la
preparacin de una capa uniforme de un adsorbente
mantenido sobre una placa de vidrio u otro soporte.
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Cromatografa en !a"a na (TLC) ofre!e unm5todo r+"ido arato * re"rodu!ile "arala dete!!i#n de materiales de "lantasmedi!inales.
Tal material 'egetal sigue desem"e6andoun "a"el en la identi!a!i#n de los
!om"uestos de "lomo "ara la industriafarma!5uti!a.
ventajas
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CROMATOGRAFA DE EXCLUSINMOLECULAR
PRINCIPIO Separacin en funcin del tama)o.
TIPOS DE MATRIZ "olmeros entrecruzados conporos de un tama)o determinado. *e%tranos entrecruzados+garosa "oliacrilamida
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CROMATOGRAFA DE EXCLUSINMOLECULAR
Las molculas grandes fluyen
ms rpido que las peque)as.
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VENTAJAS: ,le%ibilidad en cuanto a solvente. -ondiciones poco agresivas. "roporciona informacin estructural.
DESVENTAJAS: "oco resolutiva debido a difusin.
La muestra se diluye. s necesario aplicar vol&menes muy peque)os. tapas finales de protocolos de purificacin.
CROMATOGRAFA DE EXCLUSINMOLECULAR
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APLICACIONES:"ara la determinacin y purificacin de protenas.
"ara separacin de molculas de peso molecular
desde algunos cientos hasta varios millones.
"ermite estimar el peso molecular de polmeros degran tama)o o de productos naturales.
CROMATOGRAFA DE EXCLUSINMOLECULAR
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CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIOINICO
s un mtodo que permite la separacin de
molculas basada en sus propiedades de carga
elctrica. "uede ser usada en casi cualquier tipo de
molcula cargada incluyendo grandes protenas
peque)os nucletidos y aminocidos.
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CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIOINICO
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Inte!"#$%"d&e' %(n%!&':
/ntercambio aninico.
/ntercambio catinico.
CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIOINICO
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VENTAJAS:+lta resolucin.-on una misma columna se puede utilizar a
diferentes p0 y obtener diversos perfiles de elucin.
DESVENTAJAS:Las muestras deben estar desalinizadas antes de
ser aplicadas a este tipo de cromatografa.
CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIOINICO
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l modo de separacin de la columna de afinidades diferente de otros modos de separacin que se
e%plicaron anteriormente. l gel de relleno es
modificado con ligandos 1 similares a los grupos
funcionales.
Se basa en una interaccin especfica
nzima 1 sustrato.
+nticuerpo 1 antgeno. #eceptor1 ligando especfico.
CROMATOGRAFA DE AFINIDAD
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APLICACIONES:
"urificar y concentrar una sustancia a partir de
una mezcla en una solucin tampn.
#educir la cantidad de una sustancia en una
mezcla.
*iscernir qu compuestos biolgicos se unen a
una sustancia en particular.
"urificar y concentrar una solucin de enzima.
CROMATOGRAFA DE AFINIDAD
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CROMATOGRAFA DE GASES
La cromatografa gaseosa es una tcnica de
separacin y anlisis de mezclas de sustancias
voltiles basado en la distribucin de los
componentes de una mezcla entre dos fases
inmiscibles una estacionaria y otra mvil.
La fase mvil es un gas inerte.
La fase estacionaria generalmente est constituidapor una columna de metil polisilo%ano o derivados
de ste.
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F)n!%&n"#%ent&
CROMATOGRAFA DE GASES
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T%*&' de !"t&+",-" de +"'e':
-romatografa gas1lquido (2L-!
sta es la que se utiliza ms ampliamente y que se
puede llamar simplemente cromatografa de gases(2-!.
-romatografa gas1slido (2S-!
ste tipo de cromatografa es de aplicacin limitada. Su&nica aplicacin es la separacin de especies
gaseosas de ba$o peso molecular.
CROMATOGRAFA DE GASES
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Diagrama de un equipo de cromatografa
de gases3. 2as de arrastre o
portador.
4. "uerto de inyeccin.
5. 6na columna.7. 6n registrador o
cualquier otro
dispositivo de salida
para medir la se)al del
detector.
8. 6n detector.
9. -romatogramas.
CROMATOGRAFA DE GASES
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+lta resolucin. :elocidad.
Sensibilidad. Sencillez. ;uy buenos resultados
cuantitativos.
V7T33$
CROMATOGRAFIA DE GASES
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Solo muestras voltiles. s difcil tratar
compuestos inicos
compuestos de elevada
polaridad y compuestos
de peso molecularsuperior a 9
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APLICACIONES:
-ontrol de calidad de materia prima.
;onitoreo y optimizacin de procesos qumicos.+nlisis forense. -ontrol ambiental. *eterminacin de pureza. ;edicina fotoqumica.
CROMATOGRAFIA DE GASES
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CROMATOGRAFA DE
PARTICIN
F)nd"#ent&:
Separacin debida a la diferenciade solubilidades entre ambas
fases. Similar al fenmeno de
e%traccin.
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%isten 4 tipos
CROMATOGRAFA DE
PARTICIN
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.PLC
La cromatografa de lquidos de alta resolucin es
un modo de cromatografa en la cual el proceso
de separacin y transferencia de masa es entre la
fase estacionaria y la fase mvil y una temperatura
dada.
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9:
C*&nente' *%n!%*"/e':
Solvente
?omba de alta presin /nyector -olumna *etector
2raficador
.PLC
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Diagrama Bsico de un sistema de HPLC
.PLC
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9;
C/"'%,%!"!%(n de /&' e0)%*&':
/ntegrados -ada una de sus partes estn reunidas en
un gabinete y su intercambio o cone%in con otros
componentes es difcil.
;odulares Los mdulos son instrumentos individuales
que permiten no solo armar el equipo seg&n las
necesidades sino aumentar su comple$idad seg&n esa
necesidad vare.
.PLC
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B"'e' de /" 'e*""!%(n:
-uando la fase mvil y la muestra son forzadas a
atravesar la fase estacionaria se presentandiferentes tipos de interacciones hidrofbicas
puentes de 0idrgeno interacciones dipolares y
electrostticas stas son responsables de la mayor
o menor afinidad de cada uno de los componentes
de la muestra por alguna de las fases.
.PLC
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C""!te-'t%!"' en /" e/e!!%(n de/ '&/1ente:
*isponible comercialmente
"recio "ureza y stabilidad. n la actualidad contamos conproductos de calidad de pureza cromatogrfica. ?a$ocontenido de impurezas.
*isolver la muestra
;iscible con otros solventes para formar mezclas&tiles
.PLC
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VENTAJAS: 'odo el proceso slo toma unos pocos minutos. Los resultados obtenidos son de una alta resolucin
y son fciles de leer.
DESVENTAJAS+lto costo del equipo. ,uncionamiento muy comple$o. *ebido a la velocidad del proceso el equipo tiene
una ba$a sensibilidad a algunos compuestos.
.PLC
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GRACIAS POR SA!"#CI$#%