Cómo montar un

laboratorio de Patología

Molecular

ENRIQUE DE ALAVA

UNIVERSIDAD DE SALAMANCA-CSIC

Motivaciones

• Casi 5000 enfermedades tienen una base genética conocida

• Alta sensibilidad y especificidad de la mayoría de tests= utilidad diagnóstica

• Potencialidad para la automatización y la estandarización

• Cada vez hay más técnicas y kits disponibles (infecciosos y cáncer)

• Se combina fácil con la morfología

• Los precios están cayendo

•Papel en el diagnóstico clínico

•Para qué lo queremos (cartera de servicios)

•Diseño

•Gestión económica

•Dos herramientas logísticas de apoyo

•Aspectos legales

•Políticas de calidad

Cómo montar un laboratorio de

Patología Molecular

•Papel en el diagnóstico clínico

•Para qué lo queremos (cartera de servicios)

•Diseño

•Gestión económica

•Dos herramientas logísticas de apoyo

•Aspectos legales

•Políticas de calidad

Cómo montar un laboratorio de

Patología Molecular

Papel en el diagnóstico clínico

Integración

• Diagnóstico

• Cáncer

• Enfermedades infecciosas

• Enfermedades de fuerte base genética

• Inmunología clínica

• Patología Forense

• Investigación

Papel del laboratorio de Patología

Molecular

JANO

Problemática concreta en

PM Diagnóstica

Enf. genéticas

Aspectos éticos

Repercusiones familiares

Requerimiento de CI específico

Datos de carácter personal / familiar

Complejidad en el riesgo / beneficio

Enf. oncológicas

Muchos tipos de entidades

Muchos tipos de muestras

• Parafina, congelado, SP, otros

Integración de disciplinas

Enf. infecciosas

Gran volumen de determinaciones

Plataformas tecnológicas automatizadas

Alto costo de los kits comerciales

Tests de cuantificación

¿Qué hace falta en un laboratorio de

Patología Molecular Diagnóstica?

Integración Experiencia médica, científica y

técnica

Recursos Instalaciones, equipos y personal

Habilidades Organización, administración,

gestión, comunicación

•Papel en el diagnóstico clínico

•Para qué lo queremos (cartera de servicios)

•Diseño

•Gestión económica

•Dos herramientas logísticas de apoyo

•Aspectos legales

•Políticas de calidad

Cómo montar un laboratorio de

Patología Molecular

Cartera de servicios. ¿Cuál?

Necesidad clínica.

Requerimientos institucionales

Competencia del laboratorio:

Capacidad tecnológica

Experiencia

Viabilidad económica: Análisis de costes

Centros de referencia

•Papel en el diagnóstico clínico

•Para qué lo queremos (cartera de servicios)

•Diseño

•Gestión económica

•Dos herramientas logísticas de apoyo

•Aspectos legales

•Políticas de calidad

Cómo montar un laboratorio de

Patología Molecular

Diseño del laboratorio

Instalaciones

Equipamiento

Personal

Mejor integración

Ahorro en fungible (30%), equipos,

espacio y personal

Laboratorio de Patología Molecular

Hospital Patología Microbiología Hematología Microbiología Otros

Cortesía Dr. M. Morente

– Área pre-PCR (Zona limpia o área de preamplificación)

• Recepción de muestras, Extracción de ácidos nucleicos y Preparación de las

reacciones de PCR (cabina + UV)

– Área post-PCR (Zona sucia o área de post-amplificación)

• Amplificación por PCR, Análisis de productos

– El ideal: diferentes habitaciones con:

• Flujo de aire separado (filtros en el área pre-PCR)

• Diferentes presiones ( Positiva en la pre-, negativa en la post-)

• Al menos, separarlas lo más posible y cuidar el trafico de personas.

– Área neutra:

• Preparación de reactivos ( o duplicar para cada área)

• Proceso de datos (también válido en el área post-PCR)

Separación física de las áreas pre-

PCR y post-PCR

Separación física de las áreas pre-

PCR y post-PCR

– Duplicar equipos, pipetas, etc. No pasar de post- a pre-

– Agua destilada estéril para reactivos y soluciones

– Reactivos estériles o esterilizados

• Excepto primers, dNTPs y enzimas.

– Alicuotar reactivos

– Controles negativos y negativos

– Extremar las medidas de precaución en el manejo de la muestra

primaria.

– Guantes, cuchillas desechables, etc.

– Pipetear adecuadamente

– LIMPIEZA (Alcohol, …)

Sentido común

Equipamiento

• Depende de la cartera de servicios

• A menudo está diseñado o fabricado para

investigación

• Necesita un plan de mantenimiento

• Asegurarse del servicio post-venta

Equipamiento

El equipamiento pequeño es

tan importante como los

grandes equipos

Por ejemplo: calibración de

pipetas, etc.

Ojo a los

detalles

Equipamiento

Extracción de ác. nucleicos

PCR

Post PCR

Hibridación

Equipamiento

Extracción de ác. nucleicos

PCR

Post PCR

Hibridación

Manual

Termociclador

Electroforesis

Placa caliente

Equipamiento

Manual

Termociclador

Electroforesis

Placa caliente

Plataformas informáticas:

– Software de gestión

– Software de producción (licencias)

– Base de datos con datos personales... LOPD

Equipamiento

• Seleccionar al personal

• Capacitar al personal

– Legal

– Funcional

– Calidad

• Fidelizar al personal

Cómo poner a punto un nuevo

método diagnóstico

1. Antes de comenzar

• Considerar la necesidad clínica, el coste, la facilidad y los beneficios esperables de la prueba antes de invertir el tiempo necesario para diseñarla

• Seleccionar la técnica más adecuada

• Volumen de casos

• ¿Realizarla o derivarla?

2. Diseñar el método

• Seleccionar muestras referencia

(controles) positivos y negativos

• Reactivos que hace falta reconstituir o

adquirir

• Calibrar o programar los aparatos

• Formar al personal

3. Validar el método

• A través de un grupo de muestras de

características conocidas respecto al

parámetro que se va a medir.

• Calcular sensibilidad /especificidad

4. Ya se puede usar…

• Debe haber protocolo escrito para el

personal implicado

• Debe haber un formulario para la

realización de informes

• Explicar indicaciones de la prueba a los

clínicos que las van a solicitar (‘usuarios’)

5. Métodos diagnósticos ya

validados

• Sistemas para monitorizar variaciones entre lotes de un mismo reactivo.

• Establecer en qué tiempo debe quedar informada una prueba.

• Sistema para evaluar resultados discordantes con parámetros clínicos relevantes.

•Papel en el diagnóstico clínico

•Para qué lo queremos (cartera de servicios)

•Diseño

•Gestión económica

•Dos herramientas logísticas de apoyo

•Aspectos legales

•Políticas de calidad

Cómo montar un laboratorio de

Patología Molecular

•Papel en el diagnóstico clínico

•Para qué lo queremos (cartera de servicios)

•Diseño

•Gestión económica

•Dos herramientas logísticas de apoyo

•Aspectos legales

•Políticas de calidad

Cómo montar un laboratorio de

Patología Molecular

Dos herramientas logísticas

de apoyo

Para el diagnóstico

Y la investigación

Análisis de imagen

(=confianza en los números)

BIOBANK

-An establishment that manages

-A collection of biological samples-

-Plus clinical information

-Organized as a service

-With a clear design, and quality ethical criteria

-For biomedical research.

BIOBANK

-An establishment that manages

-A collection of biological samples-

-Plus clinical information

-Organized as a service

-With a clear design, and quality ethical criteria

-For biomedical research

-and diagnosis.

Clinical/image data

Biopsy/excision/cytology

Gross examination

Paraffin

-embedded

tissue

Diagnosis Banking

Frozen

tissue/cells

RT-PCR

FISH

EM H&E,

IHC FISH

cell culture

Take for

EM or

Metaphase

cytogenetics

-omics

Cell suspensions

1. From liquid tumors

2. From solid tumors

Cell Preservation

Slow freezing and

Quick unfreezing

Current situation (October 2007)

• Regional:

– Castilla y León

– Cataluña

– Andalucía

– Asturias

• CNIO:

– 24 Centers in 9 CCAA.

– Madrid

– Canarias

– Galicia

• Other networks.

Blood is an

excellent

source of DNA

National DNA Bank

Biobanks: Research and Diagnosis

PATIENT

SAMPLE BIOBANK MOLECULAR

ANALYSIS

LABORATORY

EXPERIMENTAL

RESULTS

DIAGNOSTIC &

THERAPEUTICS

MARKERS

TRANSLATIONAL

RESEARCH

MOLECULAR

PROFILING

•Papel en el diagnóstico clínico

•Para qué lo queremos (cartera de servicios)

•Diseño

•Gestión económica

•Dos herramientas logísticas de apoyo

•Aspectos legales

•Políticas de calidad

Cómo montar un laboratorio de

Patología Molecular

Legislación de referencia

Dx Genético

Dx Patológico Ley 14/2007 de Investigación

Biomédica

Ley 41/2002 de Autonomía del

paciente

Ley Orgánica 15/1999 de

Protección de datos de carácter

personal -LOPD

Desarrollos autonómicos

Bioseguridad, instalaciones, transporte de muestras, laboral

Legislación de referencia

Ley 14/2007 de Investigación

Biomédica

Dx Genético

Dx Patológico

Artículos 44 - 57 … Análisis genéticos

“Análisis genético”: procedimiento destinado a

detectar la presencia, ausencia o variantes de

uno o varios segmentos de material genético, lo

cual incluye las pruebas indirectas para detectar

un producto génico o un metabolito específico

que sea indicativo ante todo de un cambio

genético determinado. (Artículo 3)

•Papel en el diagnóstico clínico

•Para qué lo queremos (cartera de servicios)

•Diseño

•Gestión económica

•Dos herramientas logísticas de apoyo

•Aspectos legales

•Políticas de calidad

Cómo montar un laboratorio de

Patología Molecular

POBRE BUENA EXCELENTE

“Grado en el que un conjunto de características

inherentes de un producto, proceso o sistema CUMPLE

con los requisitos”

1. CALIDAD Calidad. Definiciones

“SISTEMA DE GESTIÓN para dirigir y

controlar una organización con respecto a

la CALIDAD”

“Parte del Sistema General de Gestión de una organización

que pretende garantizar la CALIDAD de los productos y/o

servicios suministrados”

2. SISTEMA GESTIÓN CALIDAD Gestión de calidad. Definiciones

Objetivo de calidad en PM

• Ofrecer diagnósticos reproducibles y

fiables

• Mejora continua de las actividades del

laboratorio

• No necesariamente la certificación

– Personal cualificado

– Normativa de calidad

Mejora de la calidad

• Conjunto de procedimientos para mejorar

la fiabilidad

– Evaluación de la calidad de los resultados

– Comunicación óptima de los resultados

– Capacitación y formación del personal

– Resolución de problemas

Para tener en cuenta al implantar

un sistema de gestión de calidad

• Una herramienta para mejorar nuestra gestión

• Nuestra labor es que la herramienta funcione y que la gestión mejore

• Un sistema mal diseñado generalmente entorpece la labor diaria, especialmente cuando sólo se busca la certificación.

Dos preguntas

• ¿Qué razones nos llevan a implantar un

sistema de gestión de calidad?

• ¿Qué referencias, o modelo de gestión,

necesitamos para lograr nuestros

objetivos?

Gestión de la información

• Almacenamiento en el sistema informático

• Alimentación ininterrumpida

• Volcado de información a sistemas

nuevos

• Sistema integral de información del

laboratorio (Instrumentos, aplicación de

gestión de AP, idem del BT, etc.)

Ley Orgánica de protección de

datos de carácter personal (LOPD)

• Seguridad de los datos (Art. 9)

• Deber de secreto (Art.10)

• Acceso de los datos por cuenta de terceros (Art. 12)

• Derechos de las personas: acceso, rectificación,

cancelación y oposición (Arts. 15 y 16)

• Creación, modificación o supresión de ficheros.

Notificación e inscripción registral (Arts. 20, 25 y 26)

Cumplir la LOPD puede significar

• redacción de documentos de seguridad

• funciones y obligaciones del personal

• registros de incidencias,

• control de acceso, identificación y autenticación,

• gestión de soportes, gestión de copias de

respaldo

• medidas para el control de acceso físico al

laboratorio, etc.

¿Consentimiento informado?

• Para cualquier análisis genético

• Consentimiento explícito y escrito

• Consentimiento para determinaciones

concretas

• Anteproyecto de Ley sobre pruebas

genéticas y biobancos

Control de riesgos laborales

• Bioseguridad muestras recibidas

• No exposición a agentes infecciosos (no comer, beber o almacenar comida)

• No pipetear con la boca

• Protección (guantes, bata, mascarillas).

• Campanas de extracción adecuadas,

• …

Auditoría interna de los resultados

Dos preguntas

• ¿Qué razones nos llevan a implantar un

sistema de gestión de calidad?

• ¿Qué referencias, o modelo de gestión,

necesitamos para lograr nuestros

objetivos?

LABORATORIO DE PATOLOGÍA MOLECULAR

SISTEMA DE GESTIÓN DE LA CALIDAD

NORMA ISO 9001:2000

Ha decidido implantar …

Según los requisitos …

Y pretende lograr la … CALIDAD TOTAL

CERTIFICACIÓN/ACREDITACIÓN DEL

LABORATORIO

P

C D

A CICLO DE DEMING

•Plan

•Do

•Check

•Act

2. SISTEMA GESTIÓN CALIDAD

Mejora Continua

Gestión de calidad

NORMA ISO 9001:2000

¿Qué no es y qué es ISO 9001:2000?

No es un texto de ley.

No es un texto que imponga los medios aplicables para

el cumplimiento de sus requisitos.

No es un texto que exija la implantación de un

sistema documental complejo y difícil de gestionar.

Es un instrumento de adhesión voluntaria.

Es un texto aplicable a cualquier tipo de organización

independientemente de cual sea su tamaño y su grado

de implantación en el mundo.

Es un texto que exige compromisos.

La norma ISO 9001:2000

• Es de aplicación a cualquier tipo de organización.

• Proporciona un modelo de gestión de calidad. Su implantación es un medio para demostrar que se proporcionan de forma coherente productos que satisfacen los requisitos del cliente y los reglamentarios aplicables.

• El reconocimiento a este modelo de gestión es la certificación, que se obtendrá por parte de las empresas registradoras (certificadoras) que son autorizadas por ENAC para llevar a cabo esta actividad.

La norma UNE-EN-ISO/IEC 17025

• Es de aplicación a los laboratorios de ensayo y calibración (químicos, generalmente no clínicos).

• Basada en el esquema de la norma ISO 9001, es el medio para garantizar la competencia técnica de las actividades de ensayo y/o calibración.

• El cumplimiento de los requisitos de esta norma implica el cumplimiento de los requisitos de la norma ISO 9001, pero no viceversa. Da por tanto un paso más que la anterior para el caso de los laboratorios.

• El reconocimiento a esta norma es la acreditación, que se obtiene por parte de ENAC.

La norma UNE-EN-ISO 15189

• Es de aplicación a los laboratorios diagnósticos (p.ej. de análisis clínicos)

• Proporciona los requisitos particulares relativos a la competencia técnica y calidad de los análisis que proporcionan información para el diagnóstico, prevención, o tratamiento de enfermedades en los seres humanos.

• Este sistema implica el cumplimiento del modelo ISO 9001 (pero no al revés)

• El sistema implantado según esta norma es acreditado por ENAC.

•Papel en el diagnóstico clínico

•Para qué lo queremos (cartera de servicios)

•Diseño

•Gestión económica

•Dos herramientas logísticas de apoyo

•Aspectos legales

•Políticas de calidad

Cómo montar un laboratorio de

Patología Molecular

Lab. PMD-BT

Teresa Hernández

Verónica Iglesias

Montse Arroyo

Susana Fraile

NEO-BNADN

Juan Manuel Sánchez

Lab. PMS

Ana Pastora Otero

Ana Sofía Martins

Carlos Mackintosh

Daniel Osuna

David Herrero

Gemma Caballero

José Luis Ordóñez

Juan Madoz

Victoria Sevillano

Universidad de Salamanca