Células de Mamíferos( CHO, BHK, COS)

Aplicaciones

Ensayos funcionales in vivo

Interaccion entre proteinas

Generacion de anticuerpos

Líneas celulares

CHO ( ovario de hamster chino)COS (BHK ( riñón de hamster bebe)

• En domesticación desarrollaron enfermedades degenerativas, debido a su estrecho parentesco entre si.

• Bajo número de cromosomas (2n=22)

• Dr. Theodore T. Puck ( aisló ovario y estableció una nueva línea celular)

CHO ( chinese hamster ovary)

Vectores utilizados

• Vectores de DNA viral.

• Plásmidos con secuencias de DNA viral.

Entre los DNA virales escogidos:SV40

, adenovirus, papilomavirus.

VECTOR VIRAL

Estrategia para el desarrollo línea de células CHO

Estrategia para el desarrollo línea de células CHO

COS ( green monkey kidney)

• Las células COS son células de simio derivada de la línea celular CV-1 de la que manifiesta en cultivo permanentemente, transformadas en proteínas SV40 defectivo en el origen de replicación.

• Estas proteínas de SV40 promueve la replicación reiterada del vector.

• Las células COS transfectada mueren al cabo de 3-4 días posiblemente por una sobrecarga de DNA vector epidemico que resulta toxico.

• Son monocapas de fibroblastos de riñón de hámster .

• La línea original se derivó de los riñones de cinco hámster de sexo no determinado, en 1961.

• Características beneficiosas: rápido crecimiento, pases limitados y alta eficiencia.

• Es susceptibles a los virus de la rabia, herpes simple, rubeola, estomatitis vesicular, fiebre aftosa.

BHK ( baby hamster kidney)

Ventajas

• Generar proteínas con un plegado correcto y con modificaciones post traduccionales (MPT) idénticas a las proteínas endógenas.

• Este sistema es también perfectamente adecuado para la producción de anticuerpos, proteínas para su uso como estándar en el ELISA o la espectrometría de masas.

Desventajas

• Rendimiento de producción más bajo que otros sistemaseucariotas, una tasa de crecimiento lento y un coste másalto, debido a la necesidad de medios de cultivo complejos.

• Aun cuando la capacidad de la células CHO para expresarglicoproteínas es alta, estas células carecen de enzimas quepermiten la glicosilación terminal de proteínas humanas.

• Esta líneas celulares ( tumorales ) pueden contenerretrovirus.

• Son vulnerables a la contaminación viral, proveniente delmedio suero fetal bovino. Actualmente algunos nocontienen el suero fetal.

Gracias